Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-17T19:43:52Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Giovana Bergheme Franciscon.pdf: 3239549 bytes, checksum: d4cc72276fd2113b602703dc9ee6e1a0 (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barroso(pbarroso@ufba.br) on 2013-09-18T17:43:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Giovana Bergheme Franciscon.pdf: 3239549 bytes, checksum: d4cc72276fd2113b602703dc9ee6e1a0 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-18T17:43:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Giovana Bergheme Franciscon.pdf: 3239549 bytes, checksum: d4cc72276fd2113b602703dc9ee6e1a0 (MD5) / INCT – DT (Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia – Doença Tropical) Processo Nº 573839/2008-5; CAPES. / INTRODUÇÃO: A hanseníase é uma doença de caráter granulomatoso e crônico causada pelo Mycobacterium leprae, o qual tem tropismo por nervos periféricos e pele. Apresenta-se de forma espectral e polarizada. Enquanto pacientes com a forma multibacilar (MB) da doença não montam uma resposta Th1 facilitando assim a multiplicação do Mycobacterium, indivíduos com a forma paucibacilar (PB) produzem IFN-gama em resposta a antígenos de M. leprae. Os monócitos são tipos celulares circulantes derivados da medula óssea que se diferenciam em macrófagos e células dendríticas no tecido. Recentemente, os monócitos circulantes foram classificados em clássicos (CD14++CD16-), intermediários (CD14++CD16+) e nãoclássicos (CD14+CD16++). O grau de ativação dessas células está associado à intensidade da resposta de linfócitos T. Objetivo: Determinar o grau de ativação das sub-populações de monócitos em pacientes com hanseníase antes e durante o tratamento e identificar o perfil do grau de incapacidade funcional apresentado pelos pacientes incluídos no estudo. Metodologia: Foram coletados 20 ml de sangue heparinizado de pacientes PB (n=22) e MB (n=12) e realizada a separação de células mononucleares e a caracterização e o grau de ativação dos monócitos foi determinado por citometria de fluxo através da marcação de CD14, CD16, MHC II, CD80, CD86 e CD40. Resultados: Os pacientes com a forma multibacilar apresentaram a frequência de monócitos não-clássicos aumentada. Não houve diferença na expressão de CD80 e MHC II entre monócitos de pacientes com a forma paucibacilar e multibacilar da hanseníase. No entanto, monócitos de pacientes com a forma paucibacilar apresentaram uma baixa expressão de CD86 antes de iniciar o tratamento, a qual foi restaurada durante o tratamento. A maioria dos pacientes apresentaram grau zero de incapacidade funcional. Conclusão: Pacientes com a forma paucibacilar da hanseníase apresentam uma diminuição do grau de expressão da molécula co-estimulatória CD86 a qual é restaurada durante o tratamento com a PQT. Todos os pacientes não apresentaram alteração no grau de incapacidade funcional devido à hanseníase. / Salvador

Orientador: Valéria Marçal Felix de Lima / Resumo: PD-1 ligado a PD-L1 ou PD-L2, desencadeia sinais incapacitantes às células T, podendo estar envolvidos na supressão das respostas imunes na LVC. Investigamos a expressão de PD-1 e seus ligantes no baço na LVC, e sua correlação com a carga parasitária. Para confirmar o seu papel regulador na leishmaniose, estes receptores foram avaliados após infecção in vitro por L. infantum. Em cães infectados, foi avaliado o bloqueio destes receptores na produção de citocinas e seus efeitos no sobrenadante da cultura, de linfoproliferação com antígeno solúvel (AtgS) de L. infantum. Foram selecionados 23 cães saudáveis e 54 com LV. PD-1 e seus ligantes foram determinados por imunohistoquímica em tecidos esplênicos. A carga parasitária de cães infectados foi avaliada por PCR em tempo real. As citocinas nos sobrenadantes de cultura foram determinados por ELISA de captura e o NO por Griess. A Linfoproliferação das células do linfonodo e expressão de PD-1 e seus ligantes após infecção in vitro por L. infantum foram avaliadas por citometria de fluxo. Observou-se que a infecção por L. infantum, aumenta a expressão de PD1 e seus ligantes. Uma correlação positiva foi observada entre a expressão de PD-1 e PD-L1 em linfócitos B e o aumento da carga parasitária. O bloqueio destes receptores restaura a proliferação de linfócitos, aumenta a produção de NO e diminui a IL-4 e IL-10. L. infantum modula a expressão de PD-1 e seus ligantes na LVC, suprimi a linfoproliferação, alterando a produção de citocinas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: PD-1 when bound to PD-L1 or PD-L2, triggers signals disabling T cells, and they may be involved in the suppression of cellular immune responses in CVL. We investigated the expression of PD-1 and its ligands in spleen in CVL, and its correlation with parasite burden in this tissue, to confirm its regulatory role in leishmaniasis. These receptors were evaluated after in vitro infection by L. infantum. In infected dogs, we evaluated the blocking of these receptors in the production of cytokines in the effects of supernatant of cultured cells, and antigen specific lymphoproliferation. We selected 23 healthy dogs and 54 with VL. PD-1 and its ligands were determined by immunohistochemistry in splenic tissues. Parasitic load of infected dogs was evaluated by RT-PCR. Cytokines in culture supernatants were determined by capture ELISA and NO by Griess. Lymphoproliferation lymph nodes and expression of PD-1 and its ligand after in vitro infection by L. infantum was evaluated by flow cytometry. We observed that L. infantum infection increases expression of PD-1 and its ligands. A positive correlation was observed between the expression of PD-1 and PD-L1 B lymphocytes and an increase in parasite load. Blockade these receptors restores lymphocyte proliferation, increases the production of NO and decreases IL-4 and IL-10. In conclusion, L. infantum modulates expression of PD-1 and its ligands in CVL, suppressing lymphoproliferative response and altering cytokine production, which in turn ca... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-03-08T20:18:55Z No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-03-08T20:23:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-03-08T20:24:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-08T20:24:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2012-06-01 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Leprosy is a chronic infectious disease caused by Mycobacterium leprae that is influenced by host genetic. The poles of the leprosy are occupied by spectrum immunological opposite of the tuberculoid one hand, predominantly of the Th1 immune response and the other by the lepromatous, with predominant Th2 immune response. During the development of immune response, beyond antigen-specific signal is necessary a second signal for activation of T lymphocytes, termed costimulation. This signal can be delivered by costimulatory molecules CD80 and CD86 present on cell surfaces of antigen presented. The binding of these molecules to the receptors CD28 and CTLA-4 T lymphocytes present in the leads to the activation or inhibition of immune response, respectively. The down-regulation of CD80 and CD28 in patients with lepromatous leprosy, and lepromatous borderline can be responsible for defective signaling T cell specific for the antigens of M. leprae through CD80/CD28. This can lead to clonal inactivation of T cells reactive to antigens of M. leprae, and consequently, the bacillus grows without restraint in macrophages. In this work we investigated the possible relationship between this polymorphism in the CD80 and CD86 genes with susceptibility to leprosy and/or clinical forms of the disease. Genotyping of polymorphisms was performed by direct sequencing. CD80 were analyzed six gene SNPs located in the gene promoter region (-454 C/A, -387 T/C, -232 G/A, -79 C/G,-7 T/C and +5 C/A) and Polymorphism insertion/deletion (-557_-561 CATGA) and the CD86 gene was analyzed a SNP in exon 8, position +1057 G/A. For the CD86 gene was observed a similar genotype distribution among leprosy patients and control subjects, and the genotypes G/G and G/A the most prevalent in both populations. There were also no significant differences between the allelic and genotypic frequencies among leprosy patients and healthy controls regarding the polymorphisms of the CD80 gene. Although CD80 and CD86 have important functions in the immune response data obtained in this study demonstrate that the analyzed polymorphisms do not influence the susceptibility to leprosy and/or different clinical forms of leprosy. / A hanseníase é uma doença infecciosa crônica causada pelo Mycobacterium leprae que é influenciada por aspectos genéticos do hospedeiro. Os pólos da hanseníase são ocupados por espectros imunológicos opostos, de um lado pela forma tuberculoide, com predominante resposta imunológica Th1 e do outro pela forma virchowiana, com predominante resposta Th2. Durante o desenvolvimento da resposta imune, além do sinal antígeno-específico é necessário um segundo sinal para ativação dos linfócitos T, denominado coestimulação. Este sinal pode ser fornecido pelas moléculas CD80 e CD86 presentes nas superfícies das células apresentadoras de antígenos. A ligação destas moléculas aos receptores CD28 e CTLA-4 presentes nos linfócitos T conduz à ativação ou à inibição da resposta imune, respectivamente. A baixa regulação de CD80 e CD28 em pacientes com hanseníase borderline virchowiana ou virchowiana pode ser responsável pela defeituosa sinalização de células T específicas para os antígenos de M. leprae pela via CD80/CD28. Isto pode levar à inativação clonal de células T reativas aos antígenos de M. leprae e, consequentemente, o bacilo cresceria sem restrição nos macrófagos. No presente trabalho foi investigada a possível relação entre polimorfismos presentes nos genes CD80 e CD86 com a susceptibilidade à hanseníase e/ou às formas clínicas da doença. A genotipagem dos polimorfismos foi realizada pelo método de sequenciamento direto. Foram analisados no gene CD80 seis SNP localizados na região promotora (-454 C/A, -387 T/C, -232 G/A, -79 C/G, -7T/C e +5C/A) e um polimorfismo de inserção/deleção (-557_-561 CATGA) e no gene CD86 foi analisado um SNP no éxon 8, posição +1057G/A. Quanto ao gene CD86 foi observada distribuição genotípica semelhante entre os pacientes e indivíduos controles, sendo os genótipos G/G e G/A os mais prevalentes em ambas as populações. Também não foram observadas diferenças significativas entre as frequências alélicas e genotípicas entre os pacientes com hanseníase e indivíduos controles referentes aos polimorfismos do gene CD80. Embora CD80 e CD86 tenham funções importantes na resposta imune os dados obtidos neste estudo demonstram que os polimorfismos analisados não têm influência na susceptibilidade à hanseníase e/ou diferentes formas clínicas da hanseníase.

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4594.pdf: 3287424 bytes, checksum: 45ec60b0a38c4b296ddba2d66d8cd69c (MD5) Previous issue date: 2011-10-27 / Universidade Federal de Minas Gerais / Schistosomiasis mansoni is a major problem affecting public health, according to World Health Organization (WHO), 210 million individuals worldwide. In the infected host, the disease is characterized by the presence of granuloma, immunopathological outcome of the cellular infiltrate and in many cases a consequence of tissue fibrosis. Thus, the host-parasite relationship may lead to morbidity from the disease result in hepatosplenomegaly, hepatic fibrosis and ascites. The granulomatous process in schistosomiasis is dependent on CD4 + and requires recruitment and accumulation of inflammatory cells at the site of deposition of eggs. Schistosomal fibrosis is the result of granulomatous reaction that develops in response to antigens released by eggs of Schistosoma mansoni retained in the portal veins of smaller caliber. A host of disease caused by S. mansoni is mediated by the immune response by T cells through the dissemination of eggs that are housed in the liver and intestine. Manipulation of the interaction between B7 molecules of antigen presenting cells (APC) and T cell receptors CD28/CTLA4 modulate, and in some circumstances block the immunological response in vivo. The CTLA4 is structurally homologous to CD28 but is expressed in CD4 + and CD8 + newly activated, and its function is to inhibit T cell activation by inhibiting the signals released by CD28. Thus, CTLA4 is involved in the completion of T cell responses The way in which the two receptors release opposite signs and recognize the same molecule B7 of APC is an intriguing question and a matter of research. Coestimulatory these signals may have different roles in various types of immune response. Thus the treatment strategy of using monoclonal antibodies (mAb) anti-CTLA4, anti-CD28 in murine schistosomiasis was to evaluate the modulation of inflammatory response and parasite-induced S. mansoni as CTLA4 and CD28 were blocked. Our results showed that treatment with (mAb) anti CD28 and CTLA4 molecules coestimulatory favored changes in the number of leukocytes, modulations in the levels of circulating antibodies, cytokines, and the response profile of T helper (Th) and change in the parasitic activity. Our data showed that the reduction of parasite burden was 21.3% in the group treated with anti-CTLA4 mAb and 46.2% in the group treated with anti-CD28. Suggesting that these treatments should be considered interesting candidates for immunotherapy and for further investigation, since it is necessary to better understand the response of these molecules in schistosomiasis mansoni that when blocked or did not show the hypothetical anti-parasitic and anti-inflammatory activity in this model. / A esquistossomose mansônica representa um dos grandes problemas de Saúde Pública acometendo, segundo a Organização Mundial de Saúde (OMS), 210 milhões de indivíduos no mundo todo. No hospedeiro infectado, a doença é caracterizada pela presença de granuloma, resultado imunopatológico do infiltrado celular e em muitos casos consequência de fibrose tecidual. Dessa forma, a relação parasito-hospedeiro pode levar a morbidade devido à doença resultar em hepatoesplenomegalia, fibrose hepática e ascite. O processo granulomatoso na esquistossomose é dependente de linfócitos T CD4+ e requer recrutamento e acumulo de células inflamatórias no sítio de deposição dos ovos. A fibrose esquistossomótica é resultado da reação granulomatosa que se desenvolve em resposta a antígenos liberados pelos ovos do Schistosoma mansoni retidos nas veias portais de menor calibre. A patologia causada em hospedeiros com S. mansoni é mediada pela resposta imune, por células T através da disseminação dos ovos que são alojados no fígado e intestino. Manipulações para a interação entre moléculas B7 de células apresentadoras de antígenos (APC) e receptores CD28/CTLA4 de células T modulam, e em algumas circunstâncias, bloqueiam a resposta imunopatológica in vivo. O CTLA4 é estruturalmente homólogo ao CD28, mas é expresso nas células T CD4+ e CD8+ recém ativadas, e sua função é inibir a ativação de células T pela inibição dos sinais liberados pelo CD28. Assim, o CTLA4 está envolvido na finalização das respostas das células T. A maneira pelos quais os dois receptores liberam sinais opostos e reconhecem a mesma molécula B7 das APC é uma intrigante questão e motivo de pesquisa. Esses sinais coestimulatórios podem ter diferentes papéis nos vários tipos de resposta imune. Dessa forma a estratégia de utilizar o tratamento com anticorpos monoclonais (mAb) anti-CTLA4 e anti-CD28 na esquistossomose mansônica murina foi de avaliar a modulação da resposta inflamatória e parasitária induzida pelo S. mansoni quando CTLA4 e CD28 fossem bloqueados. Nossos resultados mostraram que o tratamento com (mAb) anti moléculas coestimulatórias CTLA4 e CD28 favoreceram alterações no número de leucócitos, modulações nos níveis de anticorpos circulantes, citocinas, e do perfil da resposta T helper (Th) e alteração na atividade parasitária. Nossos dados demonstraram que, a redução da carga parasitária foi de 21,3% no grupo tratado com mAb anti- CTLA4 e 46,2% no grupo tratado com anti-CD28. Sugerindo que, estes tratamentos devem ser considerados interessantes candidatos para imunoterapia e para maiores investigações, uma vez que se faz necessário conhecer melhor a resposta destas moléculas na esquistossomose mansônica que quando bloqueadas ou não apresentaram a hipotética atividade antiparasitária e antiinflamatória nesse modelo.