Thesis (doctoral)--Lund University, 1997. / Added t.p. with thesis statement inserted.

Thesis (doctoral)--Lund University, 1997. / Added t.p. with thesis statement inserted.

MACIEL, Andressa Aby Farraj Linhares. 2007. 239 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza-CE, 2007. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-06T12:42:11Z No. of bitstreams: 1 2007_dis_aaflmaciel.pdf: 2299610 bytes, checksum: bceaa8035134fba48769a88634d35908 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-03-07T11:37:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_dis_aaflmaciel.pdf: 2299610 bytes, checksum: bceaa8035134fba48769a88634d35908 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-07T11:37:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_dis_aaflmaciel.pdf: 2299610 bytes, checksum: bceaa8035134fba48769a88634d35908 (MD5) Previous issue date: 2007 / Vitamin A (retinol) is an essential nutrient that is necessary in small amounts for normal functioning of the visual system, immune function and reproduction. Our group has investigated the effect of oral dosis of vitamin A on the early childhood diarrhea in our prospective community-based studies in high endemic areas in the Northeast of Brazil and has found a benefit of retinol therapy in reducing the mean duration but not the incidence of diarrheal episodes. In this study, we have explored the role of retinol supplementation in intestinal cell lines, following Clostridium difficile toxin A (TxA) cytotoxic challenge. C. difficile is the most common anaerobic pathogen that causes antibiotic-associated diarrhea and pseudomembranous colitis. We have focused on changes in transepithelial electrical resistance (TER) in Caco-2, a more differentiated intestinal cell line, and on models of proliferation, migration and cell death in IEC-6 cells, an undifferentiated crypt cell line, following or not by TxA-induced cell injury. The results showed retinol alone increased the TER, cell migration and proliferation, and also promoved significant reduction of apoptosis and necrosis, however this effect was not observed at the cell proliferation. To study the retinol effect on the TxA-induced loss of TER, cells were exposed during 24h to 0,1μg/mL TxA. Retinol improved TER (% of initial value) at the concentrations of 0,1nM and 0,3nM at 3h (59,3±1,3; 69,8±0,6 vs 59,3±1,3Ωcm2, respectively), and at 4h (36,1± 0,02; 33,5± 1,8 vs 27,3±0,2Ωcm2, respectively) in relation to the untreated control challenged with TxA. During this time there was no influence of the cell proliferation in the Caco-2 cells. Retinol increased cell proliferation after TxA-induced cell damage (0,1μg/mL) at a rate of 14,2%, 23,8%, 59,8%; 8,4%; 30,2%; 44,1% after 24h (doses of 0,01; 0,03; 0,1; 1,0; 10; 100nM of retinol, respectively), compared to controls only with TxA. After 24h of TxA exposure (0,01μg/ml), following plate scraping, the retinol supplementation improved significantly IEC-6 migration at the concentrations of 0,1-100nM in rate of 30-80% and 60-100%, in 12h and 24h, respectively. Retinol reduced TxA-induced apoptosis and necrosis at the concentration of 0,03: 0,1; 1; 10 and 100nM, p<0.05, in comparison to the control with TxA. These results suggest that retinol has a critical role in reducing apoptosis, improving cell migration and proliferation and preventing the reduction in TER, following TxA challenge, suggesting that vitamin A is an essential nutrient to protect the intestinal epithelial barrier function. / A vitamina A (retinol) é um nutriente essencial necessário em pequenas quantidades para o funcionamento normal do sistema visual, função imune e reprodução. Nosso grupo de pesquisa investigou o efeito de altas doses por via oral em crianças com diarréia em estudos prospectivos em comunidade em áreas endêmicas no Nordeste do Brasil e encontrou benefícios terapêuticos com a utilização do retinol na redução da média de duração da diarréia, porém não houve diminuição da incidência de episódios diarréicos. Esse estudo explorou o papel da suplementação do retinol em linhas de células intestinais frente ao dano citotóxico da Toxina A do C. difficile (TxA). O C. difficile é principal patógeno causador da diarréia associada ao uso de antibióticos e da colite pseudomembranosa. Investigou-se alterações da resistência elétrica transepitelial (TER) em células Caco-2, e nos modelos de proliferação, migração e morte celular em IEC-6, após a injúria induzida pela TxA. Os resultados mostraram que a suplementação do retinol, principalmente no meio sem glutamina, aumentou a TER, migração celular, como também promoveu uma redução significativa da apoptose e necrose, porém este efeito não foi visto no modelo de proliferação celular. Para estudar a modulação do retinol na diminuição da TER induzida pela TxA, as células foram expostas a TxA (0,1μg/mL) durante 24h. O retinol aumentou a TER (% do valor inIcial) nas concentrações de 0,1 e 0,3nM às 3h (59,3±1,3; 69,8±0,6vs 59,3±1,3Ωcm2,respectivamente), e às 4h (36,1±0,02; 33,5±1,8 vs 27,3±0,2Ωcm2,respectivamente) em relação ao controle sem retinol e com TxA. Nesses intervalos de tempo não houve influência da proliferação celular nas células Caco-2. O retinol aumentou a proliferação celular na lesão induzida pela TxA (0,1μg/mL) em 14,2; 23,8; 59,8; 8,4; 30,2; 44,1% (0,01; 0,03; 0,1; 1,0; 10; 100nM de retinol, respectivamente), após 24h comparado com controle com TxA. Depois de 12 e 24h de exposição a TxA (0,01μg/mL), seguido do arranhão na monocamada da células IEC-6, a suplementação do retinol aumentou significantemente a migração nas concentrações de 0,1-100nM em uma taxa de 30-80% e 60-100%, nas 12h e 24h, respectivamente. O retinol reduziu a apoptose e a necrose induzida pela TxA nas concentrações de 0,03-100nM, em comparação com controle com a TxA. Os resultados sugerem que o retinol exerce um importante papel na redução da apoptose, em aumentar a migração e proliferação e em prevenir a redução da TER, na lesão pela TxA, sugerindo que a vitamina A é um nutriente essencial na proteção na barreira funcional epitelial.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2009-10-22T16:32:56Z No. of bitstreams: 1 2006_Acimar Gonçalves da Cunha Júnior.pdf: 2341652 bytes, checksum: 1d9b73db560a35411b11b57fe7423694 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-07-26T18:02:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Acimar Gonçalves da Cunha Júnior.pdf: 2341652 bytes, checksum: 1d9b73db560a35411b11b57fe7423694 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-07-26T18:02:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Acimar Gonçalves da Cunha Júnior.pdf: 2341652 bytes, checksum: 1d9b73db560a35411b11b57fe7423694 (MD5) Previous issue date: 2006 / Objetivo: Há desenvolvimento e crescimento de nova mucosa intestinal sobre diferentes superfícies de apoio. Os biomateriais, principalmente as matrizes acelulares, constituem estruturas ricas em proteínas de sustentação, como o colágeno, e permitem o desenvolvimento de neomucosa do intestino delgado. O objetivo do presente estudo foi analisar a morfologia de neomucosa do intestino delgado formada sobre retalho de matriz tecidual acelular. Métodos: Vinte e oito ratos machos Wistar foram utilizados no estudo. Três animais forneceram o intestino delgado para a obtenção da matriz acelular. Aleatoriamente, os outros 25 animais foram distribuídos em três grupos: eutanásia com duas semanas – cinco ratos; eutanásia com quatro semanas – dez ratos; e eutanásia com oito semanas pós-operatórias – dez ratos. A matriz acelular foi obtida do tratamento detergente-enzimático de segmentos de intestino delgado, com deoxicolato de sódio 4% e deoxirribonuclease. Os retalhos de matriz acelular foram interpostos na parede antimesentérica do íleo terminal. Foram analisados os dados morfométricos da mucosa adjacente normal do íleo e da nova mucosa em desenvolvimento. Resultados: Com oito semanas de período pós-operatório, todo o retalho estava preenchido por nova mucosa. A neomucosa apresentou valores morfométricos estatisticamente maiores que a mucosa adjacente. Conclusão: A neomucosa intestinal formada sobre matriz acelular obtida pelo tratamento detergente-enzimático do intestino delgado de ratos é semelhante à mucosa normal adjacente. ___________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Background / Purpose: New intestinal mucosa can grow and be developed at different scaffolds. The acellular matrix is made off rich sustain protein and it allows the development of small bowel neomucosa. The purpose of this study was to analyze the morphology of the small bowel neomucosa at the acellular matrix tissue graft. Methods: Twenty-eight Wistar male rats were enrolled in the study. The small bowel of three animals was used to obtain the acellular matrix. Twenty five other animals were randomly assigned in three groups according to the time of post-operative euthanasia. In five rats the euthanasia happened at two weeks, in ten rats at four weeks and in ten rats at eight weeks. The acellular matrix was extracted from a detergent-enzymatic process at small bowel segments with sodium deoxycholate at 4% and deoxyribonuclease. The acellular matrix grafts were interposed at the terminal ileum antimesenteric wall. The morphometric characteristics of adjacent normal ileum mucosa and the developmental neomucosa were analyzed. Results: After eight weeks post operatory, all grafts were filled with new mucosa. The neomucosa showed morphometric values statistically bigger than the adjacent mucosa. Conclusion: The intestinal neomucosa developed under acellular matrix, which is obtained by a detergent-enzymatic process of the small bowel in rats, is quite normal as the adjacent intestinal neomucosa.

Made available in DSpace on 2012-05-07T14:40:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000015.pdf: 28187182 bytes, checksum: 7c5d1bdc37db0b9acc0900ca0cd85dce (MD5) Previous issue date: 2008 / O Bacillus sphaericus (Bsp) é uma bactéria entomopatógena eficiente para o controle de Culex quinquefasciatus, um importante vetor da filariose e arboviroses. O fator larvicida do Bsp é a toxina binária (Bin) e a sua ação em C. quinquefasciatus depende da ligação ao receptor Cqm1. A ausência deste receptor no epitélio intestinal é o principal mecanismo de resistência à toxina Bin. Larvas resistentes a esta toxina, são susceptíveis ao Bsp IAB59 que, além da Bin, produz as toxinas Cry48Aa e Cry49Aa. O principal objetivo deste estudo foi caracterizar os efeitos de toxinas do Bsp nas células do epitélio intestinal de C. quinquefasciatus, utilizando como modelos larvas de uma colônia susceptível a todas as toxinas estudadas (S), de uma colônia resistente à toxina Bin (R2362) e de uma colônia resistente à Bin e Cry48Aa/Cry49Aa (RIAB59). Na primeira etapa, larvas não tratadas das colônias S e R2362 disseccionadas 30 min, 4, 6 e 48 h após a muda para o 4° estádio foram fixadas e processadas para microscopia eletrônica de transmissão (MET). A avaliação morfológica do epitélio intestinal mostrou que células de larvas R2362, ao final do 4° estádio, são caracterizadas por um intenso acúmulo de inclusões lipídicas, sugerindo que a ausência da a-glicosidase Cqm1 pode estar envolvida com alterações no metabolismo. Para caracterizar os efeitos causados pelas toxinas no epitélio intestinal, as larvas foram disseccionadas 1 e 6 h após o tratamento e processadas para MET. A avaliação ultra-estrutural da ação da toxina Bin nas células do epitélio intestinal mostrou que os principais efeitos em larvas S foram a vacuolização citoplasmática e destruição de microvilosidades. Estes foram observados exclusivamente em células que possuem o receptor Cqm1, demonstrando que esta molécula é essencial para mediar a ação da toxina Bin. Em células de larvas das colônias S e R2362, susceptíveis à Cry48Aa/Cry49Aa, o principal efeito destas toxinas foi a vacuolização mitocondrial, e este parece estar associado à Cry48Aa que possui estrutura de 3 domínios típica de toxinas da família Cry. Efeitos similares aos da toxina Bin também foram observados e parecem resultantes da ação da Cry49Aa que possui homologia com toxinas do tipo binária. Os dados mostram que a Cry48Aa/Cry49Aa possui uma ação complexa nas células e seu sítio de ligação é diferente do Cqm1. Combinações da toxina Bin com as toxinas Cry11Aa e Cyt1Aa do Bti também provocaram alterações em células de larvas R2362, desprovidas do receptor Cqm1. A combinação Bin/Cry11Aa causou efeitos similares aos induzidos pela toxina Cry48Aa/Cry49Aa, e sugerem que as toxinas de 3 domínios, Cry11Aa e Cry48Aa, podem mediar os efeitos das toxinas Bin e Cry49Aa, respectivamente, nos modelos estudados. A combinação Bin/Cyt1Aa provocou efeitos drásticos como a perda precoce de microvilosidades e a lise celular, característica da toxina Cyt1Aa que apresenta ação citolítica. Os resultados deste trabalho contribuem para o entendimento do modo de ação de toxinas do Bsp, bem como do efeito sinergístico de suas toxinas com aquelas do Bti

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-01Bitstream added on 2014-06-13T21:02:21Z : No. of bitstreams: 1 gomes_mos_dr_jabo.pdf: 698875 bytes, checksum: afd518bba945181192347fd290a0c60e (MD5) / As possíveis diferenças que acometem cães de diferentes idades ainda são pouco estudadas e descritas para esta espécie. O presente estudo avaliou e comparou a composição da microbiota nas fezes e seus produtos de fermentação, aspectos histológicos da mucosa intestinal e a imunidade de cães filhotes, adultos e velhos. Para tal, 30 cães beagle foram divididos igualmente em três grupos: o grupo filhotes (GF), composto por filhotes do desmame aos 10 meses de idade; o grupo adultos (GA), composto por cães adultos entre cinco e seis anos e o grupo velhos (GV), composto por cães velhos entre 10 e 13 anos. Os animais receberam a mesma dieta e nenhum outro tipo de intervenção por 30 dias e após este período amostras de fezes frescas foram colhidas para a mensuração de: pH, determinação da concentração de lactato, ácidos graxos de cadeia curta e ramificada, amônia, indol, fenol, aminas, imunoglobulina A e composição da microbiota. Também foi adquirida amostra de sangue periférico para quantificação das populações linfocitárias CD4+CD5+, CD5+, CD8+CD5+, e CD21+ por citometria de fluxo, sendo esta analisada em cinco idades (45, 66, 87, 105 e 300 dias) do GF e a média destas avaliações comparada com GA e GV. Após esta análise, foi realizado teste de hipersensibilidade cutânea tardia e ao final destes, os animais foram anestesiados e submetidos a procedimento endoscópico para coleta de fragmentos do estômago e intestinos delgado e grosso para análise histológica dos mesmos. Considerou-se como significativos valores de P≤0,05 e como tendência valores de P<0,1. Observou-se que o GF apresentou maior número de Bifidobacterium spp. e Cluster IV. GV apresentou indicativo de menor atividade sacarolítica bacteriana observada pela menor concentração de acetato, propionato, butirato e ácidos graxos voláteis totais o que... / Possible differences that may occur in dogs of different ages have been little studied and described in this specie. The aim of this study was to evaluate and compare the composition of microbiota and some fermentation products in the feces, histological aspects of intestinal mucosa and immunity of puppies, adults and senior dogs. To perform this, 30 beagle dogs were divided into three groups: Puppy group (GF), composed of puppies from weaning to 10 months old, Adult group (GA), composed of adult dogs between five and six years and Old group (GV), composed of old dogs between 10 and 13 years. Animals received the same diet and no other intervention for 30 days, and after this period, fresh fecal samples were collected for measurement of pH, determining the concentration of lactate, short and branched chain fatty acids, ammonia, indol, phenols, amines, immunoglobulin A and composition of the microbiota. It was also acquired a peripheral blood sample for quantification of lymphocyte populations CD4+CD5+, CD5+, CD8+CD5+, and CD21+ by flow cytometry, which was analyzed in five ages of GF (45, 66, 87, 105 and 300 days) and the average of these evaluations compared with GA and GV. After this analysis was performed the delayed type hypersensitivity test and by the end of this, animals were anesthetized and submitted to an endoscopic procedure for collecting fragments of stomach and small and large intestines for histological analysis. P values ≤0.05 was considered significant and P values <0.1 as a trend. GF showed greater number of Bifidobacterium spp. and Cluster IV. GV presented an indication of reduced bacterial saccharolytic activity observed by the lower concentration of acetate, propionate, butyrate, and total volatile fatty acids which resulted in higher pH in the feces of this group. GF showed... (Complete abstract click electronic access below)

COSTA, Tie Bezerra. Efeito da privação da glutamina sobre as células secretoras do epitélio intestinal em um modelo in vitro de enteroide. 2014. 73 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-02-13T11:59:15Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_tbcosta.pdf: 1905458 bytes, checksum: 3bfbf27d06a97ecac348168074140446 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-02-13T12:00:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_tbcosta.pdf: 1905458 bytes, checksum: 3bfbf27d06a97ecac348168074140446 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-13T12:00:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_tbcosta.pdf: 1905458 bytes, checksum: 3bfbf27d06a97ecac348168074140446 (MD5) Previous issue date: 2012 / The intestinal epithelium is formed and sustained by a population of stem cells capable of generating different cell lines while maintaining pluripotent and self-renewal capacity. Glutamine is a conditional essential amino acid important for the maintenance of the intestinal epithelium. However, few studies to date have explored the role of glutamine in the fine regulation of the intestinal crypt cell turnover. In order to evaluate the role of glutamine in the crypt cell turnover, an in vitro enteroid model was used, where stem cells are capable of generating an epithelium containing the main intestinal secretory cell lines (Paneth, goblet, and enteroendocrine cells) and absorptive enterocytes as well, while forming a villus-crypt like structure. This model was used to test the effect of 24h of glutamine deprivation (standard media with 2mM glutamine vs glutamine-free media) on epithelial turnover by counting EdU- labeled cells/total number per section and cell apoptosis by counting cleavage-caspase 3- labeled cells/total number per section. In order to assess crypt secretory function, Paneth and goblet crypt cell ratios (target secretory cell/total cell number per crypt) were measured. The number of Paneth and goblet cells was measured with the aid of confocal microscopy and lysozyme and mucin-2 immunostainning. In addition, Paneth and globet cell product transcripts (lysozyme and mucin, respectively) were measured using quantitative Real-time PCR. In order to assess the potential immunomodulatory role of glutamine, innate immune element transcripts, Toll like receptor and their accessory protein MD-2, and cytokines, as follows: TNF-α, IL-1β and CXCL-1, were measured. Glutamine deprivation reduced the number of EdU positive cell ratio as compared with the enteroid under the standard media (p=0.006). No significant differences regarding Paneth and goblet cell ratios were seen between groups following glutamine deprivation. Glutamine deprivation significantly decreased lysozyme transcripts as compared with the enteroid under the standard media (p=0.007), but not for mucin-2 transcripts, related to goblet cell function. Decreased TNF-α and MD-2 transcription (p=0.005 and p=0.016, respectively) were found following glutamine deprivation. Altogether, our findings reinforce the glutamine positive role on the intestinal epithelial turnover and furthermore suggest an important glutamine regulatory effect over Paneth cells and the innate immune system. The enteroid model provides an important tool the dissect the mechanisms of glutamine protection and shed light for future studies. / O epitélio intestinal é formado e mantido por uma população de células-tronco capaz de gerar diferentes linhagens celulares, mantendo a pluripotência e a capacidade de auto-renovação. A glutamina é um aminoácido essencial condicional importante para a manutenção do epitélio do intestino. No entanto, poucos estudos têm explorado o papel da glutamina na regulação fina do turnover celular da cripta intestinal. Com o propósito de avaliar o papel da glutamina n o turnover de células da cripta, foi utilizado um modelo in vitro de enteroide, onde as células-tronco são capazes de gerar um epitélio contendo as principais linhagens de células secretoras intestinais (célula de Paneth, célula caliciforme e célula enteroendócrina), além dos enterócitos absortivos, com a formação de uma estrutura tipo vilosidade-cripta. Este modelo foi usado para testar o efeito de 24 horas de privação de glutamina (meio padrão com glutamina a 2 mM vs meio livre de glutamina) no turnover epitelial através da contagem de células marcadas por Edu/número total por secção e ainda na apoptose celular, através da contagem de células marcadas para caspase 3-clivada/número total por secção. A fim de avaliar a função secretora das criptas, as razões das células de Paneth e caliciformes por cripta (célula alvo/número total de células secretoras por cripta) foram medidas. O número de células de Paneth e caliciformes foi obtido com o auxílio da microscopia confocal e imunomarcação para lisozima e mucina-2. Além disso, os transcritos dos produtos das células de Paneth e caliciformes (lisozima e mucina, respectivamente) foram analisados utilizando o método de PCR quantitativo em tempo real. Com intuito de avaliar o potencial papel imunomodulador da glutamina, transcritos de elementos da imunidade inata, receptor de tipo Toll e sua proteína acessória MD-2, e citocinas, a saber: TNF-α, IL-1β e CXCL-1, foram medidos. A privação de glutamina reduziu o número de células Edu positivas, em comparação com o enteroide sob meio padrão (p=0,006). Não houve diferença significativa em relação às razões das células de Paneth e células caliciformes entre os grupos após privação de glutamina. A privação da glutamina diminuiu significativamente os transcritos de lisozima, em comparação com o enteroide sob meio padrão (p = 0,007), mas não para mucina-2, transcrição relacionada com a função das células caliciformes. Uma transcrição reduzida para TNF- α e MD-2 (p=0,005 e p=0,016, respectivamente) foi observada após a privação de glutamina. Ao todo, nossos achados reforçam o papel positivo da glutamina sobre o turnover do epitélio intestinal e, além disso, sugerem um importante efeito regulador da glutamina sobre as células de Paneth e resposta imune inata. O modelo enteroide fornece uma ferramenta importante para dissecar os mecanismos de proteção pela glutamina e guiar estudos futuros.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-03-10T13:36:15Z No. of bitstreams: 1 2013_LuizGuilhermeCintraVidalReys.pdf: 60108942 bytes, checksum: 802c726698db8fefb240b51893c019eb (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-03-10T14:18:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_LuizGuilhermeCintraVidalReys.pdf: 60108942 bytes, checksum: 802c726698db8fefb240b51893c019eb (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-10T14:18:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_LuizGuilhermeCintraVidalReys.pdf: 60108942 bytes, checksum: 802c726698db8fefb240b51893c019eb (MD5) / Introdução: A ativação do receptor Toll-símile 4 ou ?Toll-Like Receptor-4 (TLR4)??após lesão estéril leva à disfunção de órgãos em locais distantes. Tem sido demostrado anteriormente que a ruptura da barreira intestinal e alteração em proteínas das junções apertadas segue-se ao choque trauma/choque hemorrágico (T/HS), no entanto, o papel de TLR4, este processo permanece obscuro. Foi postulado que o aumento da permeabilidade e a ruptura da barreira intestinal após T/HS é um processo TLR4 dependente, portanto, silenciar o gene TLR4 teria um efeito protetor sobre a disfunção intestinal induzida por T/HS. Método: Camundongos machos C57BL/6J (TLR4+/+ do tipo selvagem ou “wild-type” [WT]) e C57BL/10ScN (TLR4-/- transgênico ou “knockout” [K0]) foram distribuídos aleatoriamente e submetidos a T/HS (laparotomia mediana + choque hemorrágico com pressão arterial média mantida em 35mmHg por 60 minutos) ou submetidos a operação simulada. Após 4h, a permeabilidade ao isotiocianato de fluoresceína (FITC)-dextrano administrado intraluminalmente foi avaliada por quantificação da fluorescência do plasma. Amostras intestinais foram analisadas para a presença das proteínas das juncoes apertadas, ocludina e ZO-1, por imunohistoquímica. Resultados: As concentrações séricas de FITC-dextran 4kDa estavam diminuídas no grupo TLR4-/-[K0] em comparação com camundongos TLR4+/+[WT] quando submetidos ao modelo de T/HS (38,96 vs 164,26 ?g/ml, respectivamente, p<0,05). Não foram observadas diferenças na permeabilidade intestinal entre os camundongos TLR4-/-[K0] e os animais do grupo simulação TLR4+/+[WT]. Os camundongos K0 tiveram preservação das concentrações de ocludina e ZO-1 após a lesão T/HS em ensaios de imunohistoquímica, mas as concentrações estavam reduzidas em animais WT. Conclusão: Camundongos com TLR4-/-[K0] demonstraram menor permeabilidade intestinal ao FITC-dextrano do que camundongos WT após lesão por T/HS resultantes de alterações nas proteínas das junções apertadas, ocludina e ZO-1. Estes achados sugerem que a maior permeabilidade e a ruptura da barreira intestinal após lesão por T/HS é um processo TLR4-dependente. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Objective: Toll-like receptor 4 (TLR4) activation after sterile injury leads to organ dysfunction at distant sites. Has been shown previously that intestinal barrier breakdown and alteration of tight junction proteins follows trauma/hemorrhagic shock (T/HS); however, the role of TLR4 in this process remains unclear. Was postulated that increased intestinal permeability and barrier breakdown after T/HS is a TLR4 dependent process; hence, knocking down the TLR4 gene would have a protective effect on T/HSinduced intestinal dysfunction. Method: Male C57BL/6J (TLR4 wild type [WT]) and C57BL/10ScN (TLR4 knockout [K0]) mice were assigned randomly to either T/HS (femoral catheterization + laparotomy + hemorrhagic shock) or sham injury. At 4h, permeability to intraluminally administered fluorescein isothiocyanate (FITC)-dextran was assessed by measuring the fluorescence of the serum. Intestinal samples were analyzed for the presence of the tight junction proteins, occludin and ZO-1, by immunohistochemistry. Results: Serum concentrations of FITC-dextran were decreased in K0 mice compared with WT mice after T/HS injury (38,96 ?g/ml and 164,26 ?g /ml, respectively; p<0,05). After injury, no difference in intestinal permeability was observed between the K0 mice and the WT shamtreated mice. The K0 mice had preservation of occluding and ZO-1 concentrations after T/HS injury in immunohistochemistry assays, but concentrations were decreased in WT animals. Conclusions: Mice with TLR4K0 have less intestinal permeability to FITC-dextran than WT mice after T/HS injury as a result of alterations in the tight junction proteins occludin and ZO-1. These findings suggest that the greater intestinal permeability and barrier breakdown after T/HS injury is a TLR4-dependent process.

Thesis (Ph. D.)--University of Virginia, 2008. / Title from title page. Includes bibliographical references. Also available online through Digital Dissertations.

Orientador: Daniela Cardoso Umbelini Cavallini / Orientador no exterior: Bruce A. Vallance / Coorientador: Caetano Martha Antunes / Banca: Bruce Vallance / Banca: Carla Fontana / Banca: Xiaonan Lu / Banca: Ligia Sassaki / Resumo: O trato gastrointestinal abriga a maior população de microrganismos no corpo humano, onde eles desempenham um papel importante na promoção da saúde do hospedeiro. A alteração na composição da microbiota pode levar à disbiose intestinal, que consequentemente desencadeia ou agrava doenças intestinais e extra-intestinais. Microrganismos benéficos também conhecidos como probióticos são constantemente investigados como uma terapia complementar nas doenças relacionadas à disbiose. No entanto, sua eficácia no tratamento de condições severas, como por exemplos as doenças inflamatórias intestinais (DII), é bastante variável e apresenta resultados controversos. Para abordar a importância de uma abordagem probiótica personalizada para tratar a inflamação intestinal, primeiro examinamos o efeito de bactérias personalizadas usando um modelo de colite induzida por produtos químicos. Os animais que receberam comensais isolados de suas próprias fezes foram mais protegidos contra a inflamação, pois mostraram sinais reduzidos de colite, menor dano histológico e menores níveis de marcadores inflamatórios, quando comparados aos ratos que receberam uma cepa probiótica comercial. Em seguida, o papel da mucina intestinal Muc2 e da enzima Core-1 que glicosilam foram explorados usando o modelo de colite infecciosa Citrobacter rodentium. A camada de muco intestinal é a primeira linha de defesa no intestino e é composta em grande parte pela mucina Muc2. Uma vez que quase todas as bactérias entéricas de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The intestinal tract harbours the largest population of microbes in the human body where they play an important role in promoting the health of their host. If the composition of these microbes is altered, this may lead to dysbiosis that triggers or exacerbates intestinal and extra-intestinal diseases. Probiotics have been investigated as a complementary therapy in dysbiosis-related diseases. However, their effectiveness in treating severe conditions such as Inflammatory Bowel Disease (IBD) is quite variable and have shown controversial results. To address the importance of a personalized probiotic approach to treat intestinal inflammation, we first examined the effect of personalized bacteria using a model of chemical induced colitis. The animals that received commensals isolated from their own feces were more protected against inflammation as they showed reduced signs of colitis, less histological damage and lower levels of inflammatory markers as compared to mice given a commercial probiotic strain. Next, the role of the intestinal mucin Muc2 and the Core-1 enzyme that glycosylates it were explored using the Citrobacter rodentium model of infectious colitis. The intestinal mucus layer is the first line of defense in the intestine and is largely composed of the secreted mucin Muc2. Since almost all enteric bacteria must cross the overlying mucus layer to infect the host, the mucus-enteric bacterial interactions provide fundamental knowledge about infectious diseases as well as inflammatory conditions linked to dysbiosis... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor