nÃo hà / O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro e in situ os efeitos de um agente de limpeza cavitÃria a base de digluconato de clorexidina a 2% (CHX) na desinfecÃÃo de dentina cariada, bem como determinar a susceptibilidade de diferentes espÃcies a este agente antimicrobiano. Setenta blocos de dentina humana foram distribuÃdos de forma aleatÃria e submetidos a desafio cariogÃnico por um mÃtodo microbiolÃgico in vitro (n=15), bem como um in situ (n=20). No estudo in vitro, 30 blocos de dentina foram imersos por 5 dias, em caldo BHI inoculado com Streptococcus mutans, para induÃÃo de cÃrie. No estudo in situ, 20 voluntÃrios usaram dispositivos palatinos contendo dois blocos de dentina, que foram gotejados com soluÃÃo de sacarose 40%, 10 vezes ao dia, durante 14 dias. Ao final de cada perÃodo experimental, os blocos de dentina foram divididos aleatoriamente em dois grupos: Controle (soluÃÃo de NaCl a 0,9%) e CHX. Amostras de dentina infectada foram coletadas antes e 5 min apÃs cada tratamento, em seguida, as bactÃrias foram cultivadas e os microorganismos contados. Foram avaliados os seguintes microorganismos: estreptococos mutans in vitro e in situ, estreptococos totais, microorganismos viÃveis totais e lactobacilos, in situ. A reduÃÃo microbiana promovida por cada tratamento foi calculada e comparada entre os grupos pelo teste t, a susceptibilidade dos microorganismos isolados in situ foi comparada pela anÃlise de variÃncia ANOVA (= 5%). A reduÃÃo microbiana promovida pela CHX foi significativamente maior quando comparada ao grupo controle para todos os microorganismos avaliados tanto in vitro quanto in situ. No entanto, nÃo houve diferenÃa na susceptibilidade dos vÃrios microorganismos avaliados. Desta forma, a CHX foi capaz de reduzir a populaÃÃo microbiana em dentina infectada, sugerindo que esta abordagem pode ser uma ferramenta auxiliar para desinfecÃÃo de dentina cariada residual suprimindo o crescimento de microorganismos associados ao desenvolvimento de cÃrie.

O surgimento de resistência bacteriana aos tratamentos convencionais tem proporcionado o desenvolvimento de novas modalidades terapêuticas para o tratamento e/ou controle da cárie dentária. Nesse contexto, a utilização da terapia fotodinâmica (TFD) é sugerida como alternativa para a inativação de microrganismos patogênicos envolvidos na gênese da cárie. O objetivo do presente estudo foi avaliar in vitro o efeito antimicrobiano da terapia fotodinâmica (TFD) sobre três culturas de S. mutans: uma cepa padrão de S. mutans (ATCC 25175) e dois isolados clínicos (43513 e 47513) oriundos da saliva de crianças. O corante (C) azul de orto-toluidina (TBO) foi utilizado associado à iluminação com LEDs (L) no comprimento de onda vermelho. Estas suspensões foram transferidas para placas de 96 orifícios, tratadas com quatro concentrações de TBO (0,25; 2,5; 25 e 250 µg/mL) e expostas a quatro dosimetrias (12; 24; 36 e 48 J/cm2) constituindo o grupo C+L+ (TFD). Suspensões adicionais foram tratadas somente com as quatro concentrações de TBO (C+L-) ou apenas com as quatro dosimetrias (C-L+). Amostras não submetidas ao tratamento com a fonte de luz nem ao corante, constituíram a condição C-L- (controle positivo). Alíquotas de 100 µL de cada orifício foram transferidas para tubos de ensaio para se verificar a presença ou ausência de crescimento microbiológico. Adicionalmente, alíquotas de 25 µL do grupo correspondente a TFD (C+L+) foram semeadas em placas de Petri, as quais foram incubadas a 370C por 48 horas para posterior visualização de halos de inibição e/ou crescimento microbiológico correspondente a efetividade ou ineficiência da TFD, respectivamente. Com o intuito de confirmar os achados, essas mesmas amostras foram submetidas à análise pela microscopia confocal a laser. Os resultados demonstraram que a TFD, em determinadas condições experimentais, foi efetiva no controle do crescimento microbiológico das espécies de S. mutans usadas neste estudo. A concentração mínima de TBO necessária para a inativação in vitro das três culturas de S. mutans foi de 2,5 µg/mL associada à dosimetria mínima de 24 J/cm2 da fonte de luz LED utilizada no estudo. / The increase of bacterias resistance to conventional treatment resulted in the development of new therapeutic modalities for dental caries treatment and/or prevention. In this field, the use of photodynamic therapy (PDT) is suggested as an alternative for inactivation of patogenic microrganisms involved in the etiology of tooth decay. The aim of this study was to evaluate in vitro the antimicrobian effect of the photodynamic therapy (PDT) on bacteria suspensions of S. mutans (ATCC 25175) and two suspensions (43513 and 47513) from infants saliva. Toluidine blue O (TBO) (D) and a red light-emmiting diodes (LEDs) (L) were used in association. Samples were inserted into 96 well-plate and treated with four TBO concentrations (0.25; 2.5; 25 e 250 µg/mL) and exposed to four dosimetries (12; 24; 36 e 48 J/cm2) defining the D+L+ group (PDT). Additional samples were treated only with TBO (D+L-) or only with red LEDs (D-L+). The treatment without dye and none red LED constituted the D-L- condition (positive control). Aliquots from D+L+ (TFD group) were inserted in Petri dishes, which were incubated at 370C for 48 hours. Posterior analysis of microbiologic growth, corresponding to PDT effectivity, was conducted. These samples were also submitted to laser confocal microscopy analysis for microbiologic data confirmation. The results showed PDT effectiveness for S. mutans inactivation in particular conditions. It was demonstrated that PDT was efficient to kill S. mutans species in the presence of the TBO at 2.5 µg/mL (minimum concentration) associated to 24 J/cm2 dosimetry.

O presente estudo foi dividido em quatro etapas distintas. A primeira etapa teve por objetivo avaliar a liberação de xilitol na saliva de humanos ao longo do tempo após aplicação de verniz controle e contendo 10% e 20% de xilitol. Um estudo cruzado foi realizado pela aplicação de 32 mg de cada verniz sobre as superfícies vestibulares de todos os incisivos centrais de 10 voluntários. Amostras salivares foram coletadas no baseline e após 5 min, 10 min, 15 min, 30 min, 1 h, 1 h 30 min, 2 h, 4 h e 8 h da aplicação dos vernizes para posterior análise da concentração de xilitol na saliva. Um estudo clínico foi realizado na segunda etapa com o objetivo de verificar a influência do verniz contendo xilitol a 20% sobre a contagem de estreptococos do grupo mutans provenientes de biofilme dentário. Semanalmente, 32 mg de verniz controle (grupo G1) ou verniz contendo xilitol a 20% (grupo G2) foram aleatoriamente aplicados sobre as superfícies vestibulares dos incisivos centrais de 67 crianças. Após quatro semanas de procedimento, amostras de biofilme dentário foram coletadas do terço cervical de todos os dentes presentes na cavidade bucal e a contagem relativa e absoluta dos microrganismos foi determinada. A terceira etapa objetivou analisar a influência do xilitol sobre a ultra-estrutura de Streptococcus mutans ATCC 33478 e Streptococcus sobrinus ATCC 25175. Além disso, a capacidade do xilitol e do flúor em promover estresse celular em S. mutans UA 159 geneticamente modificados (deleção do gene vicK) foi determinada na quarta etapa. As concentrações de xilitol na saliva (F=5,228, p=0,024) em diferentes tempos de coleta (F=18,24, p<0,0001) foram estatisticamente diferentes após aplicação dos vernizes contendo 10% e 20% do açúcar (etapa 1). Na etapa 2, contagens absolutas inicial e final de estreptococos do grupo mutans (Teste-t, p=0,4192) e de estreptococos totais (Teste-t, p=0,3506) não foram significativamente diferentes nos indivíduos pertencentes ao grupo G2. No entanto, uma redução significativa na porcentagem relativa inicial e final de estreptococos do grupo mutans em relação aos estreptococos totais foi observada (Teste-t, p= 0,0095). Xilitol a 20% promoveu alterações na morfologia de S. mutans ATCC 33478 e S. sobrinus, ATCC 25175, resultando em paredes celulares mais difusas e menos definidas, cápsulas 24 polissacarídicas mais dispersas e irregulares em relação ao grupo controle (etapa 3). Os tratamentos envolvendo xilitol a 1,25% e 2,5% mostraram-se capazes de produzir maior estresse celular à S. mutans geneticamente modificados quando comparados aos tratamentos com NaF a 22,5 mM e 45 mM em todos os tempos analisados (ANOVA a um critério, Teste de Tukey, p<0,05). Portanto, o verniz contendo xilitol pode ser considerado um interessante veículo para a administração do açúcar, uma vez que demonstrou propiciar uma liberação mais lenta do poliol na cavidade bucal. Além disso, a significativa redução da contagem relativa de estreptococos do grupo mutans em relação aos estreptococos totais pode auxiliar na prevenção de cárie dentária. Este estudo também demonstrou a habilidade do xilitol em produzir alterações ultra-estruturais de S. mutans ATCC 33478 e S. sobrinus, ATCC 25175, além de ser capaz de produzir estresse celular em S. mutans UA159 com deleção do gene vicK. / This study was divided in four distinct stages. The first one aimed to assess the xylitol release in human saliva along time after application of control, 10% or 20% xylitol varnishes. A cross-over design study was performed by application of 32 mg of each varnish on buccal surfaces of all incisors of 10 volunteers. Salivary samples were collected to analyze the xylitol concentration in baseline and after 5 min, 10 min, 15 min, 30 min, 1 h, 1 h 30 min, 2 h, 4 h and 8 h from varnishes application. A clinical study was executed in the second stage aiming observe the influence of 20% xylitol varnish on mutans streptococci counts from dental plaque. Weekly, 32 mg of control varnish (group G1) or 20% xylitol varnish (group G2) were randomly applied on buccal surfaces of central incisors of 67 children. After 4 weeks of procedures, dental plaque samples were collected from cervical of all teeth and relative and absolute counts of microorganisms were determined. The third stage aimed to analyze the effect of xylitol on the ultrastructure of Streptococcus mutans ATCC 33478 and Streptococcus sobrinus ATCC 25175. Moreover, the capacity of xylitol and fluoride to promote cellular stress in S. mutans UA 159 knockout vick gene was determined in the fourth stage. Salivary xylitol concentrations (F=5,228, p=0,024) in different collection times (F=18,24, p<0,0001) were statistically different after 10% and 20% varnishes application (stage 1). In stage 2, initial and final absolute mutans streptococci (Teste-t, p=0,4192) and total streptococci counts (Teste-t, p=0,3506) did not differ significantly in volunteers from group G2. However, a significant reduction of initial and final relative mutans streptococci counts was observed in relation to total streptococci (Teste-t, p= 0,0095). 20% xylitol promoted alterations in morphology of S. mutans ATCC 33478 and S. sobrinus, ATCC 25175, resulting in more diffuse and less defined cellular wall, more dispersive and irregular polysaccharidic capsules in comparison to control group (stage 3). 1.25% and 2.5% xylitol treatments were able to produce higher cellular stress to genetically modified S. mutans when compared to 22.5 mM and 45 mM NaF treatments throughout the time (ANOVA, Tukeys test, p<0.05). Therefore, xylitol varnish can be regarded as interesting vehicle to administer the polyol because it achieved a slower xylitol release into the oral cavity. Furthermore, a significant reduction of relative mutans streptococci counts in relation to total streptococci can aid in prevention of dental caries. The present study also demonstrated the ability of xylitol in producing ultrastructural alterations in S. mutans ATCC 33478 and S. sobrinus, ATCC 25175, besides generating cellular stress to S. mutans UA159 knockout vicK gene.

Orientadores: Pedro Luiz Rosalen, Cínthia Pereira Machado Tabchoury / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-26T11:28:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paula-Eduardo_LailaFacinde_M.pdf: 1396217 bytes, checksum: ee32ae3fccb5fc73fe047b8152a78b6e (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Os produtos naturais, comprovadamente, têm sido uma fonte promissora para descoberta de novos compostos bioativos. Dentre eles, a própolis coletada por abelhas Apis mellifera possui atividades biológicas descritas na literatura como anticárie, antibacteriana, anti-inflamatória, entre outras. Entretanto, a maioria dos estudos sobre própolis se refere àquelas coletadas por A. mellifera e pouco se tem conhecimento de outras, como a geoprópolis, produzida por abelhas sem ferrão do gênero Melipona. Em estudos recentes, a geoprópolis apresentou promissoras atividades antimicrobiana e anti-inflamatória, porém estas pesquisas ainda não evidenciaram quais as substâncias responsáveis por tais ações biológicas, especialmente contra o biofilme oral cariogênico. Portanto, o objetivo desse trabalho foi isolar e identificar o composto ativo da geoprópolis de Melipona scutellaris com atividade contra biofilme formado por Streptococcus mutans. Este objetivo foi alcançado por meio das seguintes metodologias: 1- fracionamento bioguiado do extrato etanólico da geoprópolis (EEGP); 2- isolamento e identificação do composto ativo; 3- avaliação do potencial anticárie do composto ativo utilizando modelo in vitro de inibição de biofilme oral monoespécie. Como resultado do fracionamento bioguiado foi isolado e identificado o composto nemorosona (C33H42O4, MM= 502 g/mol), uma benzofenona prenilada. A concentração inibitória mínima da nemorosona foi de 6,25 ¿ 12,5 ?g/mL e na concentração de 100 ?g/mL foi capaz de inibir em 95% a aderência do S. mutans em biofilme formado em microplacas de fundo côncavo. Em biofilme formado em discos de hidroxiapatita, a nemorosona na concentração 250 ?g/mL (0,50 mM) reduziu 65 % do peso seco, mais de 70% dos polissacarídeos e 48% da quantidade proteica além de diminuir a viabilidade bacteriana, quando comparada com o controle negativo (veículo, p<0,05). Estes resultados não diferiram estatisticamente da clorexidina a 0,12% (1,33 mM) (p>0,05). Portanto, concluímos que a nemorosona é um composto ativo isolado e identificado da geoprópolis com atividade antibiofilme de S. mutans com capacidade de alterar a composição bioquímica da matriz do biofilme de S. mutans, o que torna este composto promissor agente químico para o controle do biofilme oral / Abstract: Natural products have been demonstrated a promising source to discover new bioactive compounds. Among then, the propolis collected by Apis mellifera bees has biological activity described in the literature as anticairies, antimicrobial, anti-inflammatory, besides other activities. However, most of the studies on propolis refer to those collected by A. mellifera and little is known about others as geopropolis, which is collected by stingless bees of the genus Melipona. In recent studies, geopropolis presented promising antimicrobial and anti-inflammatory activities, but these studies have not revealed which is (are) the substance(s) responsible(s) for such biological activities, especially against the cariogenic oral biofilms. Therefore, the objective of this study was to isolate and identify the active compound from Melipona scutellaris geopropolis, which has activity against the biofilm formation by Streptococcus mutans. This goal was achieved by the following methodologies: 1- bioassay-guided fractionation of the goeporpolis ethanolic extract (EEGP); 2- isolation and identification of the active compound; 3- anticarie potential assessment of the active compound using an in vitro model of inhibition of the oral mono-species biofilm. As result of the bioassay-guided fractionation, the poliprenil benzophenone compound named nemorosone (C33H42O4, MW=502 g/mol) was isolated and identified. The nemorosone¿s minimum inhibitory concentration (MIC) was 6.25 ¿ 12.5 ?g/mL and the concentration of 100 ?g/mL was capable to inhibit by 95% the adherence of S. mutans¿s biofilm formed in U-bottom microtiter plates. In biofilm formed in hydroxyapatite disks, the nemorosone concentration of 250 ?g/mL (0.5 mM) reduced 65% of the dry weight, more than 70% of the polysaccharides and 48% of the protein content. In addition, it reduced the bacterial viability when compared to negative control (vehicle, p<0.05). These results did not differ statistically from chlorhexidine 0.12% (1.33 mM) (p> 0.05). Therefore, the conclusion is that nemorosone is the active compound isolated and identified from geopropolis with antibiofilm activity that is able to alter the biochemical composition of the S. mutans biofilm matrix, it makes this chemical compound promising to oral biofilm control / Mestrado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Mestra em Odontologia

Orientador: Luiz Gonzaga Gandini Junior / Resumo: Aparelhos ortodônticos fixos criam áreas de estagnação para biofilmes dentários e dificultam a limpeza dos dentes; portanto, existe o risco de desenvolver lesões incipientes de cárie durante o tratamento ortodôntico. O objetivo deste estudo é verificar se a aplicação de luz azul antes da clorexidina 0,12% no esmalte, bráquete e elástico ortodôntico reduziria ou inibiria os biofilmes maduros de Streptococcus mutans e seu crescimento nesses substratos 24 horas após a aplicação dos tratamentos; e se esse tratamento interfere na adesão do bráquete ao esmalte. Biofilmes de S. mutans UA159 foram formados por 5 dias sobre amostras compostas por esmalte bovino, bráquete ortodôntico e elástico ortodôntico. Em seguida, as amostras foram tratadas com NaCl 0,89% por 1 minuto (NaCl), luz azul por 12 minutos (BL), clorexidina 0,12% por 1 minuto (CHX) e luz azul por 12 minutos seguido da aplicação de clorexidina 0,12% por 1 minuto (BL+CHX). O acúmulo de biofilme imediatamente após os tratamentos e 24 horas após os tratamentos foram avaliados por unidades formadoras de colônias (CFU) e peso seco (DW). O pH do meio foi medido no quinto dia e sexto dia. A formação de biofilme nas amostras após os tratamentos (Imediato) e no recrescimento (Regrowth) foi avaliada visualmente por microscopia confocal de varredura a laser (CLSM). O teste de adesão (SBS) entre o bráquete e o esmalte foi feito após as amostras serem termocicladas por 500 ciclos (5°C e 55°C), tratadas e termocicladas novamente nas me... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Fixed orthodontic appliances create areas of stagnation for dental biofilms and make it difficult to clean the teeth; therefore, there is a risk of developing incipient lesions of caries during the orthodontic treatment. The objective of this study is to verify if the application of blue light prior to 0.12% chlorhexidine (CHX) on enamel, orthodontic brackets and elastics would reduce or inhibit mature Streptococcus mutans biofilms and their regrowth on these substrates 24 h after the application of the treatment; and if this treatment would interfere with bracket adhesion to the enamel. Biofilms of S. mutans UA159 were formed for 5-days over samples composed by a bovine enamel, an orthodontic bracket and an orthodontic elastic. Then, the samples were treated with 0.89% NaCl for 1 minute (NaCl), blue light for 12 minutes (BL), 0.12% chlorhexidine for 1 minute (CHX) and BL for 12 min + 0.12% CHX for 1 min (BL+CHX). Biofilm accumulation immediately after treatments and 24-h after treatments (regrowth) were evaluated by colonies forming units (CFU) and dry weight (DW). The pH of the spent media was measured on the 5th and 6th day. Biofilm formation on the samples after the treatments and on the regrowth was visually evaluated by confocal laser scanning microscopy (CLSM). Shear bond strength (SBS) between bracket and enamel was evaluated after specimens were thermocycled for 500 cycles (5° and 55 °C), treated and thermocycled again in the same conditions. Shear forces (N/mm2 ) we... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Indiana University-Purdue University Indianapolis (IUPUI) / Tooth decay is a complex dieto-bacterial disease with an association of social, behavioral and biological factors. Streptococcus mutans plays a major role in tooth decay. This endogenous oral microorganism adheres to tooth surfaces and grows and develops into micro-communities that mature and form dental biofilm. Development of cariogenic biofilm is one of the major factors associated with the tooth decay process. The use of tobacco is considered a great risk factor for oral diseases. Several studies demonstrated the association of tooth decay and the use of tobacco as effects of first-hand or second- hand smoking. Nicotine has been reported to increase the biofilm growth and metabolism of S. mutans in a dose-dependent manner up to 16 mg/ml of nicotine. However, its effects on biofilm formation of S. mutans strains isolated from smokers are not known and should be investigated. Therefore, we proposed the use of an in-vitro model to better understand the effects of nicotine on biofilm formation of strains of S. mutans isolates from smokers versus non-smoking subjects. Objectives: To investigate the effects of nicotine on biofilm formation of S. mutans isolates from oral washes of smoker and non-smoker human subjects. Materials and Methods: This study was conducted using three S. mutans isolates collected from oral washes of 10 smoking subjects and 10 non-smoking subjects. The oral wash samples were stored at -80oC before S. mutans isolation. S. mutans isolates were obtained by plating on Mitis Salivarius Sucrose Bacitracin plates and species identity confirmed by carbohydrate fermentation assays. Nicotine from Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) was used. Biofilm was formed by overnight culturing of each S. mutans strain (10 μl) in 190 μl of tryptic soy broth (TSB) supplemented with 1.0-percent sucrose (TSBS) containing 0 mg/ml, 0.25 mg/ml, 0.5 mg/ml, 1.0 mg/ml, 2.0 mg/ml, 4.0 mg/ml, 8.0 mg/ml, 16.0 mg/ml, and 32.0 mg/ml of nicotine for 24 hours in 5.0-percent CO2 at 37oC in sterile (8 x 12) 96-well microtiter plates (Fisher Scientific, Newark, DE, USA). The absorbance values of biofilm were measured at 490 nm in a microplate spectrophotometer (SpectraMax 190; Molecular Devices, SunnyVale, CA, USA) after crystal violet staining. Null Hypotheses: 1) Nicotine will not increase biofilm formation in both smoker and non-smoker S. mutans isolates. 2) An increase in nicotine concentrations will not increase biofilm formation in both smoker and non-smoker S. mutans isolates in a dose-dependent manner. 3) Nicotine will not produce significant differences in biofilm formation between smoker and non-smoker S. mutans isolates. Alternative Hypotheses: 1) Nicotine increases the growth of biofilm formation in both smoker and non-smoker S. mutans isolates. 2) An increase in nicotine concentrations increase biofilm formation of both smoker and non-smoker S. mutans isolates in a dose-dependent manner. 3) However, nicotine increases biofilm formation of smoker S. mutans strains more than non-smoker S. mutans isolates. The rationale for this hypothesis is that our preliminary data indicated that S. mutans can become resistant to increased nicotine concentrations and that this resistance appears to be stable and may allow the smoker isolates to be able to respond more vigorously to higher nicotine concentrations than the non-smoker isolates. Results: There was a significant effect (p < 0.05) of both nicotine concentrations and smoking on the growth of biofilm, planktonic cells, and total absorbance, for all strains of S. mutans (p < 0.0001). Isolates from smokers had significantly more biofilm at 0 mg/ml to 16 mg/ml of nicotine compared with those from non-smokers (p-value < 0.0001). Conclusion: S. mutans smoker isolates are more affected by high nicotine concentrations than non-smoker isolates.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / INTRODUCCIÓN: En el biofilm dental se encuentran diversas bacterias, de las cuales Streptococcus mutans (S. mutans) es considerada como una de las de mayor potencial cariogénico. Existen diversos métodos para el control del biofilm, entre los que se encuentran los métodos químicos. Estos métodos se basan en el uso de sustancias antisépticas y/o antibióticas que son utilizados como colutorios orales y que permiten disminuir o retardar la formación de la placa bacteriana. En la actualidad no existe un agente químico antimicrobiano ideal. Es por esto que constantemente se están realizando cambios a los agentes terapéuticos actualmente conocidos, ya sea mejorando sus propiedades antimicrobianas, sus propiedades de adhesión (sustantividad) o disminuyendo sus efectos adversos. Es aquí donde la Nanotecnología y el desarrollo de nanomateriales han adquirido especial importancia debido a la posibilidad de sintetizar materiales con propiedades antimicrobianas. Es sabido que nanopartículas de quitosano (QuitNP) y nanopartículas de cobre (CuNP) presentan propiedades antimicrobianas frente a diversas bacterias, tanto Gram negativas como Gram positivas. Sin embargo no se ha probado la efectividad de las CuNP sobre S. mutans. Por otra parte estudios demuestran que nanopartículas metálicas, como el cobre, soportadas en una matriz de quitosano, presentarían mejoras en sus propiedades de adhesión. El objetivo de este trabajo de tesis es la síntesis de nanopatículas de cobre y quitosano, y evaluar sus propiedades antimicrobianas frente a S. mutans. MATERIAL Y METODOS: Se sintetizaron CuNP c/a utilizando almidón como agente reductor y estabilizante, CuNP s/a sin utilizar almidón, QuitNP y una nanopartícula hibrida (CuNP/QuitNP). Para esto se usaron reactivos biocompatibles, que permitieron la reducción a nanopartículas metálicas, y la gelificación iónica de nanopartículas poliméricas. Las muestras fueron caracterizadas mediante espectrofotometría de absorción molecular, microscopia electrónica de barrido (SEM), difracción de rayos X (DRX), espectroscopia infrarroja de reflectancia total atenuada (FTIR-ART) y análisis termogravimétricos (TGA). Se realizaron ensayos de actividad bactericida, para lo cual se determinó la concentración inhibitoria mínima (CIM) utilizando el método de incubación de medio de cultivo líquido, y la concentración bactericida mínima (CBM) realizando el recuento de unidades formadoras de colonias (UFC) en placas de agar BHI, para las nanopartículas sintetizadas. Además se realizaron pruebas de actividad bactericida sobre un biofilm formado en superficies dentarias. Para esto se utilizaron fragmentos de terceros molares, con un biofilm formado, los que fueron tratados con distintas soluciones antimicrobianas y suspensiones de nanopartículas. RESULTADOS: Utilizando el concepto de “química verde”, se sintetizaron y caracterizaron las partículas de carácter nanométrico; CuNP c/a, QuitNP y CuNP/QuitNP. Por otro lado, las partículas CuNP s/a presentaron dimensiones micrométricas. En los ensayos de actividad bactericida, las CuNP c/a fueron las que presentaron la menor CIM (20 µg/ml) y CBM (30 µg/ml) en comparación a las otras suspensiones. En los ensayos sobre un biofilm formado sobre una superficie dentaria, aquellas nanopartículas que tenían quitosano como parte de su composición fueron las que presentaron mejores resultados, siendo la nanopartícula hibrida (CuNP/QuitNP), que al probarla frente a S. mutans, se obtuvo el menor recuento de UFC. CONCLUSIÓN: El método estudiado en este trabajo, utilizando reactivos biocompatibles permitió la formación de nanopartículas de cobre y quitosano de manera satisfactoria y con características compatibles para futuros estudios en control de biofilm. La incorporación de CuNP c/a durante el proceso de formación de las QuitNP, permitió la síntesis de una nanopartícula hibrida cobre-quitosano (CuNP/QuitNP). Tanto las nanopartículas de cobre, de quitosano y sus combinaciones presentaron actividad antimicrobiana frente al patógeno Streptococcus mutans. Por otra parte, todas las suspensiones de nanopartículas presentaron un efecto antibacteriano al tratar un biofilm de S. mutans previamente formado sobre una superficie dental.

Orientador: Osmir Batista de Oliveira Junior / Banca:Rosane de Fatima Zanirato Lizarelli / Banca: Sergio Luiz de Souza Salvador / Banca: Rita de Cassia Loiola Cordeiro / Banca: Marcelo Ferrarezi de Andrade / Resumo: O uso indiscriminado dos antibióticos e seu mecanismo de ação levaram ao desenvolvimento de cepas bacterianas altamente resistentes e de maior virulência. Estas cepas causam doenças muito mais agressivas e de difícil tratamento, constituindo-se um dos principais desafios enfrentados por profissionais da área da saúde. Como a terapia fotodinâmica antimicrobiana (TFDA) baseia seu mecanismo de ação em reações oxidativas não especificas, esta passou a ser uma alternativa interessante para o tratamento de todas as doenças de origem microbiana, uma vez que, nem bactérias, nem vírus ou fungos tem capacidade de desenvolver resistência a TFDA. Considerando que a carie dental é uma doença de origem bacteriana especifica e que a eficácia da TFDA depende do tipo e dose de energia luminosa utilizada, do fotossensibilizador e da taxa de oxigênio nos tecidos a serem tratados, decidimos investigar a viabilidade da TFDA para prevenção e tratamento da cárie dental. Para tal, foram realizados 3 estudos: 1) Revisão critica da literatura sobre fotossensibilizadores utilizados para controle antimicrobianos de Streptococcus mutans. 2) Avaliação do efeito antibacteriano de três fotossensibilizadores (curcumina, hipericina e hematoporfirina) sobre Streptococcus mutans em suspensões planctônicas e 3) Avaliação do efeito antibacteriano de três fotossensibilizadores (curcumina, hipericina e photogem®) Esteban Florez FL. Terapia Fotodinâmica em microrganismos cariogênicos - Estudo in vitro. [Tese de doutorado]. Araraquara: sobre biofilme maduro formado a partir de cepa de Streptococcus mutans. Dos fotossensibilizadores utilizados a hipericina foi a que apresentou maior efeito antimicrobiano sobre suspensão planctônica. Foi comprovado que a eficácia da TFDA esta diretamente relacionada com o tipo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The indiscriminate use of antibiotics and its mechanisms of action led to the development of highly resistant bacterial strains and more virulent ones. This strains can cause diseases much more aggressive and difficult to treat, and in that way they consist in one of the major challenges to the health care professionals. As the antimicrobial photodynamic therapy (APDT) it is based on non-specific oxidative reaction, this is now considered as an interesting alternative to treat all diseases from bacterial origins, once that, neither bacterias, neither viruses nor fungi can develop acquired resistance from the therapy. Taking into consideration that dental caries is a specific bacterial disease and that the APDT's efficiency is directed related to factors as, wavelength, energy dose, photosensitizer used, and with the oxygen present in the target tissue, we have decided to investigate the APDT to prevent and treat dental decay. To accomplish that, it was realized three studies: 1) Critical Literature revision about photosensitizers used to control S.mutans. 2) Evaluation of the antimicrobial effect of three different photosensitizers (Curcumin, Hypericin and Hematoporfirin) over Streptococcus mutans in planktonic cultures and 3) Evaluation of the antimicrobial effect of three photosensitizers (Curcumin, Hypericin and Hematoporfirin) over mature biofilms obtained from Streptococcus mutans strains. From the photosensitizers used Hypericin was the one that showed the most antibacterial observed effect on the planktonic cultures. It was demonstrated by our data that the APDT efficacy is directly related to the time of irradiation of the samples, with the kind of photosensitizer used, its concentration and with the energy dose delivered. None of the proposed protocols were able to show any significant effect over the microorganisms when in biofilm... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción: La caries es una de las enfermedades más prevalentes a nivel mundial. Se caracteriza por la pérdida de minerales a causa de subproductos ácidos liberados por bacterias presentes en la biopelícula adherida a las superficies de los dientes. Esta produce lesiones que pueden culminar en la pérdida de la estructura dentaria, junto con todas las repercusiones que esto genera en la calidad de vida y salud de las personas. Los agentes remineralizantes a base de flúor son productos utilizados para revertir la pérdida de minerales en las etapas iniciales de esta enfermedad. La finalidad de esta investigación radicó en evaluar la capacidad remineralizante de BlueRemin®, un nuevo agente remineralizante a base de flúor y grafeno, con el objetivo de iniciar una línea de investigación que permita evaluar sus propiedades y futuras aplicaciones clínicas. Objetivos: Establecer diferencias en la dureza superficial en especímenes de esmalte desmineralizados mediante un modelo de caries microbiológico y luego de ser sometidos a un protocolo de remineralización con BlueRemin®. Metodología: Se utilizó el modelo de caries descrito por Ccahuana y Cury (2010), que consiste en la simulación de un ambiente cariogénico mediante la exposición de bloques de esmalte a sacarosa, previa formación de una biopelícula monoespecie de Streptococcus mutans, lo cual permitió obtener una zona de desmineralización compatible con una lesión de caries no cavitada que luego fue remineralizada con el agente remineralizador experimental BlueRemin®. Los bloques de esmalte fueron evaluados por microdureza de Vickers antes de la exposición a sacarosa, después de la desmineralización y una vez aplicado el agente remineralizador. Resultados: Las microdurezas de los especímenes de esmalte expuestos al modelo de caries experimentaron un aumento estadísticamente significativo (p < 0.05) luego de ser tratados con el agente remineralizador BlueRemin®. Conclusiones: Debido a que la aplicación de BlueRemin® generó un aumento de la dureza superficial estadísticamente significativo (p < 0.05) de todas las muestras de esmalte, se sugiere que posee capacidad remineralizante. / Adscrito a Proyecto Open Beaucheff "Remineralizador cariostático basado en flúor y grafeno"

Determinar el efecto antibacteriano de la miel de abeja en diferentes concentraciones sobre el Estreptococos mutans. Estudio experimental en 50 placas petri con Estreptococo mutans a las que se les aplicó miel de abeja en concentraciones de 5%, 10%, 20%, 30% y 100%. Se dejó incubar por 24 horas a 37ºC para luego observar el efecto antibacteriano midiendo el halo de inhibición (mm). El análisis estadístico se llevó acabo en el programa SPSS v15.0, incluyó la prueba estadística Anova / To determine the antibacterial effect of honey in different concentrations on Streptococo mutans. Experimental study in 50 petri dishes with Streptococo mutans to wich we applied honey al concentrations of 5%, 10%, 20%, 30% and 100%. Allowed to incubate for 24 hours al 37ºC then observe wether there was an antibacterial effect by measuring the inhibition halo (mm). Statical snalysis was carried out in SPSS v.15.0. Anova test was included.