Apesar da incidência relativamente baixa, as neoplasias de glândulas salivares (NGSs) constituem um grupo de doenças caracterizado pela notável heterogeneidade em sua apresentação clínica, histológica e comportamento biológico, abrigando um fator de extrema relevância a despeito de seu prognóstico: a ocorrência de metástases, considerada a principal intercorrência relacionada à mortalidade em pacientes oncológicos. Neste estudo, analisamos as características clínicas e histopatológicas de pacientes diagnosticados com metástases à distância de carcinomas de glândulas salivares tratados no A.C. Camargo Cancer Center, São Paulo, no período de 1970 a 2010. Investigamos alterações fenotípicas entre os tumores primários e tumores metastáticos de glândulas salivares, a partir do estudo da caracterização do padrão de expressão de citoqueratinas, procurando identificar a associação entre a expressão destes antígenos a fatores de risco, ou não, ao potencial metastático à distância e sua importância prognóstica. A casuística total compreendeu 43 pacientes diagnosticados com metástase à distância, com a média de idade de 42.5 anos sendo a glândula parótida o órgão primário mais acometido, e os pulmões o sítio metastático mais incidente. O tipo histológico mais comumente relacionado à metástase foi o carcinoma adenoide cístico. A análise imunoistoquímica da expressão de citoqueratinas fora realizada em 10 neoplasias primárias e 10 metastáticas, as quais revelaram um padrão fenotípico similar no tumor primário e no tumor metastático, apresentando a evidenciação majoritária de células luminais de estruturas ductais. A perda de expressão dos marcadores em áreas tumorais periféricas, adjacentes ao parênquima pulmonar, corrobora a predição de alteração do citoesqueleto das células neoplásicas, possivelmente promovendo uma maior capacidade de migração das células neoplásicas. / Salivary gland neoplasms consist of a notorious group of malignancies best known for its clinical features, biological behavior and histological heterogeneity. An important facto related to prognosis is distant metastasis (uncommon in salivary gland tumors). Cytokeratins (CK) are important differentiation markers frequently used for diagnosis processes. Its employment may be useful to identify metastatic disease. In this study, a retrospective evaluation was performed on patients undergoing treatment for metastatic salivary glands tumors between 1970 and 2010, from A.C. Camargo Cancer Center, São Paulo, Brazil. Demographic data and histopathological specimens were obtained from the medical records. Investigation of the expression of cytokeratins in primary and metastatic salivary gland neoplasms was performed and correlated with their phenotypical patterns. Forty three eligible patients were obtained from the database. Parotid gland represented the primary tumor site most frequently related to metastasis. Lung was the most common metastatic site. Adenoid cystic carcinoma was the histological type more frequently associated to metastatic disease. Immunohistochemistry analysis was performed in 10 primary salivary gland tumors and 10 metastatic salivary gland neoplasms. CK expression patterns were similar in both primary and metastatic neoplams, except for the tumor periphery in close contact with lung parenchyma. Cytokeratins were absent in the invasive front of metastatic lesions, and this may be related to an increased capacity of tumor cells migration and proliferation.

Apesar da incidência relativamente baixa, as neoplasias de glândulas salivares (NGSs) constituem um grupo de doenças caracterizado pela notável heterogeneidade em sua apresentação clínica, histológica e comportamento biológico, abrigando um fator de extrema relevância a despeito de seu prognóstico: a ocorrência de metástases, considerada a principal intercorrência relacionada à mortalidade em pacientes oncológicos. Neste estudo, analisamos as características clínicas e histopatológicas de pacientes diagnosticados com metástases à distância de carcinomas de glândulas salivares tratados no A.C. Camargo Cancer Center, São Paulo, no período de 1970 a 2010. Investigamos alterações fenotípicas entre os tumores primários e tumores metastáticos de glândulas salivares, a partir do estudo da caracterização do padrão de expressão de citoqueratinas, procurando identificar a associação entre a expressão destes antígenos a fatores de risco, ou não, ao potencial metastático à distância e sua importância prognóstica. A casuística total compreendeu 43 pacientes diagnosticados com metástase à distância, com a média de idade de 42.5 anos sendo a glândula parótida o órgão primário mais acometido, e os pulmões o sítio metastático mais incidente. O tipo histológico mais comumente relacionado à metástase foi o carcinoma adenoide cístico. A análise imunoistoquímica da expressão de citoqueratinas fora realizada em 10 neoplasias primárias e 10 metastáticas, as quais revelaram um padrão fenotípico similar no tumor primário e no tumor metastático, apresentando a evidenciação majoritária de células luminais de estruturas ductais. A perda de expressão dos marcadores em áreas tumorais periféricas, adjacentes ao parênquima pulmonar, corrobora a predição de alteração do citoesqueleto das células neoplásicas, possivelmente promovendo uma maior capacidade de migração das células neoplásicas. / Salivary gland neoplasms consist of a notorious group of malignancies best known for its clinical features, biological behavior and histological heterogeneity. An important facto related to prognosis is distant metastasis (uncommon in salivary gland tumors). Cytokeratins (CK) are important differentiation markers frequently used for diagnosis processes. Its employment may be useful to identify metastatic disease. In this study, a retrospective evaluation was performed on patients undergoing treatment for metastatic salivary glands tumors between 1970 and 2010, from A.C. Camargo Cancer Center, São Paulo, Brazil. Demographic data and histopathological specimens were obtained from the medical records. Investigation of the expression of cytokeratins in primary and metastatic salivary gland neoplasms was performed and correlated with their phenotypical patterns. Forty three eligible patients were obtained from the database. Parotid gland represented the primary tumor site most frequently related to metastasis. Lung was the most common metastatic site. Adenoid cystic carcinoma was the histological type more frequently associated to metastatic disease. Immunohistochemistry analysis was performed in 10 primary salivary gland tumors and 10 metastatic salivary gland neoplasms. CK expression patterns were similar in both primary and metastatic neoplams, except for the tumor periphery in close contact with lung parenchyma. Cytokeratins were absent in the invasive front of metastatic lesions, and this may be related to an increased capacity of tumor cells migration and proliferation.

Avaliamos a capacidade de indução de migração, invasão e secreção de protease pelo peptídeo derivado da laminina, C16 (KAFDITYVRLKF, cadeia g1) em linhagem celular (CAC2) de carcinoma adenóide cístico humano. Laminina g1 foi imunolocalizada no carcinoma adenóide in vivo e in vitro. Ensaio de ferida, em câmara bipartite e em vídeo microscopia (time-lapse) mostraram que C16 estimula migração em células CAC2. C16 também estimulou invasão em ensaio com câmaras bipartites cobertas com Matrigel. Invasão depende de atividade de protease. Zimografia mostrou que C16 aumentou secreção de MMPs 2 e 9. Diferentes vias de sinalização podem estar relacionadas com os efeitos de C16. Immunoblot revelou que C16 aumentou a fosforilação de AKT e ERK. Para o estudo de possíveis receptores do peptídeo, preparações de membrana foram passadas em colunas de afinidade com C16 acoplado. Banda de 40kDa foi eluída e analisada por espectrometria de massa (LC-MS/MS) que identificou a cadeia a1 do colágeno. O fragmento de colágeno eluído poderia ser parte de um complexo protéico envolvendo C16. Integrinas são receptores de colágeno e candidatas a fazerem parte desse complexo. Células CAC2 expressaram as integrinas av, a5, b3 and b1. Silenciamento dessas integrinas promoveu redução da migração e secreção de protease induzidas por C16. Sugerimos que C16 estimularia migração, invasão e secreção de protease em células de carcinoma adenóide cístico através de integrinas a5b1 e avb3. O sinal gerado por C16 seria transduzido pelas vias AKT e ERK1/2. / We studied induction of migration, invasion and protease activity by laminin-derived peptide C16 (KAFDITYVRLKF, g1 chain) in a cell line (CAC2) from adenoid cystic carcinoma. Laminin g1 was immunolocalized in adenoid cystic carcinoma in vivo and in vitro. C16 increased migratory activity of CAC2 cells, as shown by monolayer wound assay, Transwell migration assay and time-lapse video microscopy. This peptide also stimulated cell invasion in Transwell chambers coated with Matrigel. Invasion depends on protease activity. Zymograms showed that C16 increased secretion of MMPs 2 and 9. Different signaling pathways could be related to C16 regulation in CAC2 cells. Immunoblot showed that C16 increased phosphorylation of both AKT and ERK compared to controls. To study putative receptors of this peptide we used affinity chromatography. Membrane preparations were run through C16-affinity columns. A 40kDa band was eluted and analyzed by mass spectrometry (LC-MS/MS) identifying a collagen a1 chain. The collagen fragment eluted could be part of a protein complex involving C16. This protein complex may include integrins, which are collagen receptors. CAC2 cells exhibited av, a5, b3 and b1 integrins. siRNA knockdown of these integrins inhibited both C16-induced migration and protease activity. We propose that C16 increases migration, invasion and protease activity of a human salivary gland adenoid cystic carcinoma cell line through a5b1 and avb3 integrins. The signal generated by C16 is transduced by AKT and ERK1/2 signaling pathways.

Avaliamos a capacidade de indução de migração, invasão e secreção de protease pelo peptídeo derivado da laminina, C16 (KAFDITYVRLKF, cadeia g1) em linhagem celular (CAC2) de carcinoma adenóide cístico humano. Laminina g1 foi imunolocalizada no carcinoma adenóide in vivo e in vitro. Ensaio de ferida, em câmara bipartite e em vídeo microscopia (time-lapse) mostraram que C16 estimula migração em células CAC2. C16 também estimulou invasão em ensaio com câmaras bipartites cobertas com Matrigel. Invasão depende de atividade de protease. Zimografia mostrou que C16 aumentou secreção de MMPs 2 e 9. Diferentes vias de sinalização podem estar relacionadas com os efeitos de C16. Immunoblot revelou que C16 aumentou a fosforilação de AKT e ERK. Para o estudo de possíveis receptores do peptídeo, preparações de membrana foram passadas em colunas de afinidade com C16 acoplado. Banda de 40kDa foi eluída e analisada por espectrometria de massa (LC-MS/MS) que identificou a cadeia a1 do colágeno. O fragmento de colágeno eluído poderia ser parte de um complexo protéico envolvendo C16. Integrinas são receptores de colágeno e candidatas a fazerem parte desse complexo. Células CAC2 expressaram as integrinas av, a5, b3 and b1. Silenciamento dessas integrinas promoveu redução da migração e secreção de protease induzidas por C16. Sugerimos que C16 estimularia migração, invasão e secreção de protease em células de carcinoma adenóide cístico através de integrinas a5b1 e avb3. O sinal gerado por C16 seria transduzido pelas vias AKT e ERK1/2. / We studied induction of migration, invasion and protease activity by laminin-derived peptide C16 (KAFDITYVRLKF, g1 chain) in a cell line (CAC2) from adenoid cystic carcinoma. Laminin g1 was immunolocalized in adenoid cystic carcinoma in vivo and in vitro. C16 increased migratory activity of CAC2 cells, as shown by monolayer wound assay, Transwell migration assay and time-lapse video microscopy. This peptide also stimulated cell invasion in Transwell chambers coated with Matrigel. Invasion depends on protease activity. Zymograms showed that C16 increased secretion of MMPs 2 and 9. Different signaling pathways could be related to C16 regulation in CAC2 cells. Immunoblot showed that C16 increased phosphorylation of both AKT and ERK compared to controls. To study putative receptors of this peptide we used affinity chromatography. Membrane preparations were run through C16-affinity columns. A 40kDa band was eluted and analyzed by mass spectrometry (LC-MS/MS) identifying a collagen a1 chain. The collagen fragment eluted could be part of a protein complex involving C16. This protein complex may include integrins, which are collagen receptors. CAC2 cells exhibited av, a5, b3 and b1 integrins. siRNA knockdown of these integrins inhibited both C16-induced migration and protease activity. We propose that C16 increases migration, invasion and protease activity of a human salivary gland adenoid cystic carcinoma cell line through a5b1 and avb3 integrins. The signal generated by C16 is transduced by AKT and ERK1/2 signaling pathways.