Introdução: Independente do método de mensuração, os níveis do antígeno carcinoembriônico no lavado peritonial (CEAlp) têm sido demonstrados como possível fator prognóstico de recidiva e mortalidade em pacientes com câncer gástrico. Objetivos: Determinar os níveis de CEAlp durante a cirurgia de pacientes com câncer gástrico e relacionar estes níveis de CEAlp com a mortalidade, recorrência peritonial, todas as formas de recidiva, estadiamento tumoral e estadiamento clínico. Pacientes e Métodos: Foram estudados 30 pacientes (22 homens, 8 mulheres e mediana de idade de 66 anos) com câncer gástrico, a maioria em estadiamento clínico III e IV. Níveis de CEAlp dosados por radioimunoensaio e com valores ≥ 210 ng/g de proteína foram considerados elevados ou positivos. Resultados: Houve 10 casos (33,3%) com níveis de CEAlp positivos que foram fator de risco para mortalidade em 6 meses OR: 8,5 (p= 0,011), mortalidade geral RR: 2,1 (p= 0,018), mortalidade devido a doença OR: 12,0 (p= 0,004), recorrência peritonial OR: 9,0 (p= 0,015), e recidiva ou progressão da doença OR: 27,0 (p= 0,001). Conclusões: Nível elevado de CEAlp é fator de risco para mortalidade, recorrência peritonial, recidiva tumoral e progressão da doença podendo ser utilizado como fator preditivo de risco e auxiliar na definição de tratamento cirúrgico e adjuvante em pacientes com câncer gástrico. / Background: Despite controversies over the method used for assessment, carcinoembryonic antigen level in peritoneal lavage (plCEA) has been showing to be a relevant prognostic factor in gastric cancer. Aim: To determine plCEA level in gastric cancer patients and to identify any association between plCEA with mortality, peritoneal recurrence, tumor relapse, tumoral stage and clinical stage. Patients and Methods: It was studied 30 patients (22 men, 8 women; median age 66 yrs) with resectable gastric cancer (mainly stage III and IV). CEA peritoneal levels were detected at operation by immunocytochemical method and a level over 210 ng/g of protein was considered as positive. Results: It was detected 10 positive cases (33.3%) of plCEA levels. These levels were associated with mortality, RR: 2.1 (p= 0.018); peritoneal recurrence, OR: 9.0 (p= 0.015); and relapse or gastric cancer progression, OR: 27.0 (p= 0.001). Overall mortality was 63% and those cases with elevated plCEA levels had significant higher mortality (100% vs. 45%), higher overall relapse or gastric cancer progression (90% vs. 25%) and higher peritoneal recurrence (50% vs. 10%). Conclusion: This study, demonstrated that increased levels of plCEA fairly predicts mortality, peritoneal recurrence, tumor relapse or cancer progression and should be used as a predictive factor helping to decide on surgical approach as well as adjuvant therapy in patients with gastric cancer.

Introdução: Independente do método de mensuração, os níveis do antígeno carcinoembriônico no lavado peritonial (CEAlp) têm sido demonstrados como possível fator prognóstico de recidiva e mortalidade em pacientes com câncer gástrico. Objetivos: Determinar os níveis de CEAlp durante a cirurgia de pacientes com câncer gástrico e relacionar estes níveis de CEAlp com a mortalidade, recorrência peritonial, todas as formas de recidiva, estadiamento tumoral e estadiamento clínico. Pacientes e Métodos: Foram estudados 30 pacientes (22 homens, 8 mulheres e mediana de idade de 66 anos) com câncer gástrico, a maioria em estadiamento clínico III e IV. Níveis de CEAlp dosados por radioimunoensaio e com valores ≥ 210 ng/g de proteína foram considerados elevados ou positivos. Resultados: Houve 10 casos (33,3%) com níveis de CEAlp positivos que foram fator de risco para mortalidade em 6 meses OR: 8,5 (p= 0,011), mortalidade geral RR: 2,1 (p= 0,018), mortalidade devido a doença OR: 12,0 (p= 0,004), recorrência peritonial OR: 9,0 (p= 0,015), e recidiva ou progressão da doença OR: 27,0 (p= 0,001). Conclusões: Nível elevado de CEAlp é fator de risco para mortalidade, recorrência peritonial, recidiva tumoral e progressão da doença podendo ser utilizado como fator preditivo de risco e auxiliar na definição de tratamento cirúrgico e adjuvante em pacientes com câncer gástrico. / Background: Despite controversies over the method used for assessment, carcinoembryonic antigen level in peritoneal lavage (plCEA) has been showing to be a relevant prognostic factor in gastric cancer. Aim: To determine plCEA level in gastric cancer patients and to identify any association between plCEA with mortality, peritoneal recurrence, tumor relapse, tumoral stage and clinical stage. Patients and Methods: It was studied 30 patients (22 men, 8 women; median age 66 yrs) with resectable gastric cancer (mainly stage III and IV). CEA peritoneal levels were detected at operation by immunocytochemical method and a level over 210 ng/g of protein was considered as positive. Results: It was detected 10 positive cases (33.3%) of plCEA levels. These levels were associated with mortality, RR: 2.1 (p= 0.018); peritoneal recurrence, OR: 9.0 (p= 0.015); and relapse or gastric cancer progression, OR: 27.0 (p= 0.001). Overall mortality was 63% and those cases with elevated plCEA levels had significant higher mortality (100% vs. 45%), higher overall relapse or gastric cancer progression (90% vs. 25%) and higher peritoneal recurrence (50% vs. 10%). Conclusion: This study, demonstrated that increased levels of plCEA fairly predicts mortality, peritoneal recurrence, tumor relapse or cancer progression and should be used as a predictive factor helping to decide on surgical approach as well as adjuvant therapy in patients with gastric cancer.

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / El Cáncer Gástrico es la segunda causa más común de muerte por cáncer en todo el mundo. Las células citolíticas, como las células natural killer (NK) y linfocitos T, desempeñan un papel importante en la defensa inmune del huésped contra las células transformadas. Estas células expresan el receptor de activación NKG2D, cuyos ligandos, expresados en la superficie celular, pertenecen a las familias MIC (MICA y MICB) y ULBP/RAET (ULBP-1-6). Aunque está bien establecido que estos ligandos son generalmente sobreexpresados en las células tumorales, los tumores son capaces de crecer en huéspedes inmunocompetentes debido a mecanismos de escape del tumor a la inmunovigilancia mediada por el receptor NKG2D. Una de estas estrategias de inmunoevasión es el corte proteolítico de MICA desde la superficie de células tumorales; como consecuencia, el aumento en los niveles séricos de MICA soluble disminuiría la reactividad antitumoral de los linfocitos citotóxicos que expresan el receptor NKG2D. El objetivo de este trabajo se enmarca en I&D de un nuevo anticuerpo completamente humano anti-MICA con fines terapéuticos y consistió en la expresión y caracterización biológica de un fragmento de este anticuerpo (scFv-MICA), además de la expresión del antígeno (MICA) en células HEK293T. La expresión de MICA se realizó a través de un proceso de transfección, entre el vector que porta el gen de la proteína y Polietilenimina Los niveles de concentración de MICA, en el sobrenadante de cultivo celular, fueron medidos por ELISA. Se realizó, además, una co-transfección con XBP1s, observándose un rendimiento 4 veces superior en comparación a una transfección simple. La expresión del scFv anti-MICA se realizó en bacterias E. coli (cepa HB2151), encontrándose principalmente en la fracción insoluble del lisado, con su consecuente purificación mediante la técnica de FPLC. La caracterización biológica del scFv anti-MICA consistió en demostrar, por ELISA, su unión específica a MICA recombinante, además de su unión, por citometría de flujo, a MICA nativa presente en dos líneas celulares de Cáncer Gástrico (AGS y MKN-45). Sin embargo, no se pudo revertir los niveles de expresión del receptor NKG2D en células citolíticas (provenientes de PBMC) tratadas con 400 ng/mL de MICA recombinante en presencia del anticuerpo. Estos últimos resultados fueron probablemente provocados por acción del Imidazol, el cual generó más de un 50% de muerte celular. Sin embargo, consideramos que, en base a los resultados obtenidos durante este estudio, se podrían visualizar nuevas perspectivas en la metodología tanto de la expresión como purificación de scFv-MICA para futuros ensayos funcionales / Gastric Cancer is the second most common cause of cancer death worldwide. Cytolytic cells, such as natural killer (NK) cells and T lymphocytes, play an important role in the immune defense of the host against transformed cells. These cells express the activating receptor NKG2D, whose ligands, expressed on the cell surface of transformed cells, belong to the MIC (MICA and MICB) and ULBP/RAET (ULBP1-6) families. Although it is well established that these ligands are generally overexpressed in tumor cells, tumors can grow in immunocompetent hosts due to mechanisms of tumor escape from NKG2D-mediaed immunosurveillance. One of these immune evasion strategies is the proteolytic shedding of MICA from the surface of cancer cells; as a consequence, the increase in the serum levels of soluble MICA would compromise the anti-tumor reactivity mediated by NKG2D-bearing cytotoxic lymphocytes. The aim of this work was part of a R&D of a new and completely human antibody against MICA with therapeutic purposes and consisted in the expression and biological characterization of a fragment of this antibody (scFv-MICA). In addition, we also expressed MICA in HEK293T cells. The expression of MICA was performed by transfection between the vector carrying the gene of the protein and Poly(ethylenimine). Levels of concentration of MICA in the culture supernatant were measured by ELISA. Was also performed a co-transfection with XBP1s, and observed 4 times higher performance compared to a simple transfection. The expression of the anti-MICA scFv was carried out in E. coli (strain HB2151). ScFv-MICA was found mainly in the insoluble fraction of the lysate, and its subsequent purification was performed by FPLC. The biological characterization of anti-MICA scFv was demonstrated by ELISA, as it bound specifically to recombinant MICA. Binding of the antibody was also observed, by flow cytometry, to native MICA present in two human gastric adenocarcinoma cell lines (AGS and MKN-45). However, it was not possible to reverse the expression levels of NKG2D receptor on cytolytic cells (present in PBMC) treated with 400 ng/mL of recombinant MICA in the presence of the antibody. These latter results may have possibly been caused by the action of imidazole, which generated more than 50% cell death. Nevertheless, based on all the results presented herein, it is possible to visualize new insights into the development of better strategies to express and purify anti-MICA scFv for future functional assays / Fondef. Fondecyt

GONÇALVES, M. H. R. B. Análise da associação dos marcadores cagT, LEC e oipA funcional e não funcional do Helicobacter pylori em afecções gástricas. 2015. 65 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-02-16T15:22:57Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_mhrbgoncalves.pdf: 2117891 bytes, checksum: 5e06f32a5a690624261d19c255b29315 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-02-16T15:23:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_mhrbgoncalves.pdf: 2117891 bytes, checksum: 5e06f32a5a690624261d19c255b29315 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-16T15:23:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_mhrbgoncalves.pdf: 2117891 bytes, checksum: 5e06f32a5a690624261d19c255b29315 (MD5) Previous issue date: 2015-12-15 / The Helicobacter pylori is a bacterium that colonizes the gastric mucosa of human beings. The chronic infection caused by this pathogen is strongly associated with an increased risk for gastric illnesses different, ranging from chronic gastritis and peptic ulcer for two types of gastric cancer, adenocarcinoma and lymphoma of the lymphoid tissue associated to mucosa. The aim of this study was to evaluate the association of cagT markers, LEC, functional and nonfunctional oipA in patients with disorders of gastritis, ulcers and stomach cancer. Genotyping of the strains was performed by PCR. Were evaluated 181 patients attended at the University Hospital Walter Cantídio, 87 (48.1%) men, 94 (51.9%) women, with ages ranging from 18-90 years, mean age of 53 + 17.8 years, with a positive diagnosis for H. pylori infection, these 48 carriers of gastric cancer, 69 patients with peptic ulcer and 64 with gastritis. The prevalence of the genotypes studied was: 145/181 (80.1%) cagT, 83/181 (45.9%) LEC 81/181 (44.7%) oipA and oipA"on"34/81.In the group of patients with gastric cancer was observed that the most frequent genotype was the cagT 43/48 (89,5%), followed by the oipA gene "on" 10/18 (55.6%) and LEC 17/48 (35.4%). In the group of patients with peptic ulcer genotype was the most frequent cagT 62/69 (89.8%), followed by gene LEC, 34/69 (49.3%) and the oipA"on" 13/31 (41.9%). In the group of patients with the most frequent genotype gastritis was cagT 40/64 (62.5%), followed by gene LEC 32/64 (50.0%) and the oipA "on" 11/32 (34.4%). Furthermore, by the presented data there is no association of H. pylori and gender and or age of the patients.The genetic study of the markers of H. pylori infection and its relationship with the gastric disorders is essential to establish the profile of virulence of strains and thus elucidate the clinical outcomes variables involved with this infection. / O Helicobacter pylori é uma bactéria que coloniza a mucosa gástrica de seres humanos. A infecção crônica causada por este patógeno está fortemente associada a um risco aumentado de doenças gástricas diferentes, variando de gastrite crônica e úlcera péptica para dois tipos de câncer gástrico, adenocarcinoma e linfoma do tecido linfóide associado à mucosa. O objetivo do presente estudo foi avaliar a associação dos marcadores cagT, LEC e oipA funcional e não funcional em pacientes portadores das afecções gastrite, úlcera e câncer gástrico.Foi realizada a genotipagem das cepas por meio da técnica de PCR. Foram avaliados 181 pacientes, atendidos no Hospital Universitário Walter Cantídio, sendo 87(48,1%) homens, 94(51,9%) mulheres, com idade variando de 18-90 anos, com média de 53 + 17,8 anos, com diagnóstico positivo para a infecção por H. pylori. Destes, 48 portadores de câncer gástrico, 69 pacientes com ‘úlcera péptica e 64 com gastrite. A prevalência dos genótipos estudados foi: 145/181 (80,1%) cagT, 83/181 (45,9%) LEC, 81/181 (44,7%) oipA, e oipA“on”34/81 (41,9%).No grupo dos pacientes com câncer gástrico observou-se que o genótipo mais frequente foi o cagT 43/48 (89,6%), seguido do gene oipA “on” 10/18 (55,6%) e LEC 17/48 (35,4%). No grupo dos pacientes com úlcera péptica o genótipo mais frequente foi o cagT 62/69 (89,8%), seguido do gene LEC; 34/69 (49,3%) e oipA”on” 13/31 (41,9%). No grupo dos pacientes com gastrite o genótipo mais frequente foi cagT 40/64 (62,5%), seguido do gene LEC 32/64 (50,0%) e oipA “on” 11/32 (34,4%). Não houve associação significativa dos genótipos do H. pylori com gênero, nem com faixa etária dos pacientes. O estudo genético dos marcadores de H. pylori e sua relação com as afecções gástricas é fundamental para se estabelecer o perfil de virulência das cepas e assim elucidar os variáveis desfechos clínicos envolvidos com essa infecção.

GONÇALVES, M. H. R. B. Análise da associação dos marcadores cagT, LEC e oipA funcional e não funcional do Helicobacter pylori em afecções gástricas. 2015. 65 f. Tese (Doutorado em Cirurgia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-02-23T13:16:41Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_mhrbgoncalves.pdf: 2117891 bytes, checksum: 5e06f32a5a690624261d19c255b29315 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-02-23T13:16:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_mhrbgoncalves.pdf: 2117891 bytes, checksum: 5e06f32a5a690624261d19c255b29315 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-23T13:16:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_mhrbgoncalves.pdf: 2117891 bytes, checksum: 5e06f32a5a690624261d19c255b29315 (MD5) Previous issue date: 2015-12-15 / The Helicobacter pylori is a bacterium that colonizes the gastric mucosa of human beings. The chronic infection caused by this pathogen is strongly associated with an increased risk for gastric illnesses different, ranging from chronic gastritis and peptic ulcer for two types of gastric cancer, adenocarcinoma and lymphoma of the lymphoid tissue associated to mucosa. The aim of this study was to evaluate the association of cagT markers, LEC, functional and nonfunctional oipA in patients with disorders of gastritis, ulcers and stomach cancer. Genotyping of the strains was performed by PCR. Were evaluated 181 patients attended at the University Hospital Walter Cantídio, 87 (48.1%) men, 94 (51.9%) women, with ages ranging from 18-90 years, mean age of 53 + 17.8 years, with a positive diagnosis for H. pylori infection, these 48 carriers of gastric cancer, 69 patients with peptic ulcer and 64 with gastritis. The prevalence of the genotypes studied was: 145/181 (80.1%) cagT, 83/181 (45.9%) LEC 81/181 (44.7%) oipA and oipA"on"34/81.In the group of patients with gastric cancer was observed that the most frequent genotype was the cagT 43/48 (89,5%), followed by the oipA gene "on" 10/18 (55.6%) and LEC 17/48 (35.4%). In the group of patients with peptic ulcer genotype was the most frequent cagT 62/69 (89.8%), followed by gene LEC, 34/69 (49.3%) and the oipA"on" 13/31 (41.9%). In the group of patients with the most frequent genotype gastritis was cagT 40/64 (62.5%), followed by gene LEC 32/64 (50.0%) and the oipA "on" 11/32 (34.4%). Furthermore, by the presented data there is no association of H. pylori and gender and or age of the patients.The genetic study of the markers of H. pylori infection and its relationship with the gastric disorders is essential to establish the profile of virulence of strains and thus elucidate the clinical outcomes variables involved with this infection. / O Helicobacter pylori é uma bactéria que coloniza a mucosa gástrica de seres humanos. A infecção crônica causada por este patógeno está fortemente associada a um risco aumentado de doenças gástricas diferentes, variando de gastrite crônica e úlcera péptica para dois tipos de câncer gástrico, adenocarcinoma e linfoma do tecido linfóide associado à mucosa. O objetivo do presente estudo foi avaliar a associação dos marcadores cagT, LEC e oipA funcional e não funcional em pacientes portadores das afecções gastrite, úlcera e câncer gástrico.Foi realizada a genotipagem das cepas por meio da técnica de PCR. Foram avaliados 181 pacientes, atendidos no Hospital Universitário Walter Cantídio, sendo 87(48,1%) homens, 94(51,9%) mulheres, com idade variando de 18-90 anos, com média de 53 + 17,8 anos, com diagnóstico positivo para a infecção por H. pylori. Destes, 48 portadores de câncer gástrico, 69 pacientes com ‘úlcera péptica e 64 com gastrite. A prevalência dos genótipos estudados foi: 145/181 (80,1%) cagT, 83/181 (45,9%) LEC, 81/181 (44,7%) oipA, e oipA“on”34/81 (41,9%).No grupo dos pacientes com câncer gástrico observou-se que o genótipo mais frequente foi o cagT 43/48 (89,6%), seguido do gene oipA “on” 10/18 (55,6%) e LEC 17/48 (35,4%). No grupo dos pacientes com úlcera péptica o genótipo mais frequente foi o cagT 62/69 (89,8%), seguido do gene LEC; 34/69 (49,3%) e oipA”on” 13/31 (41,9%). No grupo dos pacientes com gastrite o genótipo mais frequente foi cagT 40/64 (62,5%), seguido do gene LEC 32/64 (50,0%) e oipA “on” 11/32 (34,4%). Não houve associação significativa dos genótipos do H. pylori com gênero, nem com faixa etária dos pacientes. O estudo genético dos marcadores de H. pylori e sua relação com as afecções gástricas é fundamental para se estabelecer o perfil de virulência das cepas e assim elucidar os variáveis desfechos clínicos envolvidos com essa infecção.

MOTTA, Cícero Roberto Araújo. Prevalência de lesões precursoras do câncer gástrico e do Helicobacter pylori em familiares de pacientes com câncer gástrico. 2004. 133 f. Dissertação (Mestrado em Medicina Clínica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina,Fortaleza, 2004. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-10-26T16:43:19Z No. of bitstreams: 1 2004_dis_cramotta.pdf: 541883 bytes, checksum: 2b645a627f115924691ab6f7cbca784d (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2011-10-31T17:24:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2004_dis_cramotta.pdf: 541883 bytes, checksum: 2b645a627f115924691ab6f7cbca784d (MD5) / Made available in DSpace on 2011-10-31T17:24:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2004_dis_cramotta.pdf: 541883 bytes, checksum: 2b645a627f115924691ab6f7cbca784d (MD5) Previous issue date: 2004 / Infection by Helicobacter pylori, a bacterial species classified by WHO as being carcinogenic (group I) affects more than half the world population. First-degree relatives to patients with gastric cancer are at increased risk of developing gastric cancer. The present study evaluated the prevalence of precursor lesions of gastric cancer and infection by Helicobacter pylori in first-degree relatives to patients with gastric cancer as compared to controls with no family history of gastric cancer. One hundred four first-degree relatives to 40 patients with noncardiac gastric cancer were enrolled in the study and compared to 108 controls. The groups were statistically homogenous in terms of age. All patients were submitted to endoscopic evaluation and biopsy as described in the Sydney protocol. The histopathological analysis was carried out by a single, experienced pathologist blinded to the origin of the samples. Although the prevalence of atrophy and intestinal metaplasia was similar for the two groups, association with these lesions was more common among relatives than controls (p=0.021). Incomplete intestinal metaplasia was also more significant among relatives (p=0.001), as was displasia (p=0.025). The group of relatives presented a pattern of pangastritis associated with lymphoid follicles characteristic of increased risk for gastric carcinogenesis. There was no statistically significant difference between the groups with regard to the prevalence of H. pylori, though infection involving body and antrum was more prevalent among relatives (p=0.001). Our findings suggest that relatives to patients with gastric cancer present a greater prevalence of histopathological changes associated with the presence of H. pylori / A infecção pelo Helicobacter pylori acomete mais da metade da população mundial, sendo esta bactéria reconhecida como carcinógeno do grupo I pela Organização Mundial de Saúde-OMS. Familiares em primeiro grau de pacientes com câncer gástrico têm um maior risco de desenvolver câncer gástrico. Avaliamos a prevalência de lesões precursoras do câncer gástrico e do Helicobacter pylori nos familiares em primeiro grau de pacientes com câncer gástrico, quando comparado a controles sem história familiar. Cento e quatro familiares foram recrutados à partir de 40 casos de câncer gástrico tipo não-cárdia e foram comparados com cento e dezoito controles, não havendo diferenças estatisticamente significantes entre os dois grupos com relação a idade, sexo, tabagismo, etilismo e condições socioeconômicas garantindo a homogeneidade da amostra. Todos os pacientes foram submetidos a avaliação endoscópica e biópsias seguindo o protocolo de Sydney. A análise histopatológica foi realizada pôr um único patologista experiente e mascarado quanto a origem das amostras. Ainda que a prevalência da atrofia e da metaplasia intestinal tenha ocorrida de forma similar nos dois grupos, a associação destas lesões foi mais encontrada nos familiares que nos controles (p=0,021). A metaplasia intestinal tipo incompleta foi mais significante nos familiares (p=0,001), assim como a displasia (p=0,025). O padrão de gastrite encontrado nos familiares foi o de pangastrite associada a presença de folículos linfóides, padrão este já definido como o de fenotípico de maior risco para a carcinogênese gástrica. Não houve diferença estatisticamente significante entre os dois grupos com relação a prevalência do H. pylori , porém a topografia da infecção envolvendo antro e corpo foi maior nos familiares (p=0,001). De acordo com os resultados obtidos neste estudo, encontramos que familiares de pacientes com câncer gástrico têm uma maior prevalência de alterações histopatológicas, estando estas alterações confinadas a presença do Helicobacter pylori

PEREIRA, Eliane dos Santos. Helicobacter pylori : importância dos genes da ilha e de adesão no câncer gástrico (Intestinal e Difuso) e em estudos de risco. 2015. 109 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-11-19T12:51:50Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_espereira.pdf: 9283891 bytes, checksum: a93370ba6b307228f91e2634a170e1b5 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-11-19T13:05:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_espereira.pdf: 9283891 bytes, checksum: a93370ba6b307228f91e2634a170e1b5 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-19T13:05:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_espereira.pdf: 9283891 bytes, checksum: a93370ba6b307228f91e2634a170e1b5 (MD5) Previous issue date: 2015 / Gastric cancer (GC) is the third cause of cancer death worldwide. The etiology of gastric cancer is multifactorial and it i s being well established an association with infection by Helicobacter pylori . The genetic susceptibility to GC is postulated by exposure of a large proportion of the population to risk factors, but only part of this people develops the neoplasia. Furtherm ore, the H. pylori pathogenic character is given by the presence of cag - PAI pathogenicity island (cytotoxin associated gene pathogenicity island - cagPAI ) as well as allelic variation vacA s1m1 . About the host, genetic polymorphisms have been associated wi th the risk of GC, indicating these changes are potential genetic susceptibility markers in these tumors, however, few repair enzymes SNPs are studied. In the context of gastric carcinogenesis, it is necessary to consider the differences about histopatholo gy, age and gender. So, the aim of this study is to investigate the association of SNPs in DNA repair genes, APE1 2197 (T> G) and MLH1 - 93 (G>A), added to CDH1 - 160 (C>A) and - 347 (G>GA) SNPs. The CDH1 protein is associated with hereditary diffuse cancer an d genetic susceptibility. The histological subtypes, age and sex were importante data considered to the analyses. H. pylori genotype was determined by the presence of genes. cagA , cagE, cagG, cagT, virB11, vacA, oipA and hopQII. The H. pylori genotypes con sidered at risk study and individualized in the latest study. For this, it were included 285 patients with gastric cancer and 391 healthy controls matched for age and sex (1: 1 or 1: 2) from two different regions in Brazil: Ceará and Pará. The positivity f or H. pylori was observed in 87.71% of cases. In a risk study was observed a protection for intestinal tumors and it was associated with the G allele of APE1 (T> G) in women <55 years and GA allele CDH1 - 347 (G>GA) for men aged ≥ 55 years. In diffuse tumors, the group aged <55, the A allele of MLH1 - 93 (G>A) was associated with protection and the G allele of APE1 (T>G) was associated with risk in men in this age group. The G allele of APE1 (T>G) was also associated with the absence of distant metastases and the A allele of MLH1 (G>A) with absence of lymph nodes commitment. In the intestinal subtype, carriers patients G allele of APE1 (T>G were infected with significantly less virulent strains. In the stu dy with H. pylori strains, most cases had the full island regardless of histologic subtype. The cagA and cagE genes were present in most strains. According to the classification tree method analysis, some genes as cagG and cagE (in vacAs1 strains) proved f undamental in the separation of GC histological subtypes. The presence of cagG and cagE genes concomitantly or absence of cagG in H. pylori looks like classifies the intestinal tumor. While the presence of the cagG gene associated with the cagE absence cla ssifies the diffuse tumors. The cagM (+) cagG (+) genotype with the presence of the cagE gene classifies the intestinal tumor, since in the absence of cagE the tumors are classified by diffuse type. Regarding adhesion genes, there was a greater frequency o f oipA gene, followed by hopQI and hopQII . In summary, these data indicate that H. pylori genotype, histological subtype tumors, age and gender are important factors to be considered in polymorphisms analyzes. Despite the complexity to explain what are the factors that contribute to the separation of strains in intestinal and diffuse subtypes, it is clear that there are different pathways associated with these strains. And these genes may be potential markers of different histological subtypes. / O câncer gástrico (CG) é a terceira causa de morte por câncer no mundo. A etiologia do CG é multifatorial sendo bem estabelecida a associação com a infecção por Helicobacter pylori. A susceptibilidade genética ao CG é postulado pela exposição de uma grande proporção da população a fatores de risco, mas somente um grupo desenvolve essa neoplasia. Por outro lado, o caráter patogênico de H. pylori é dado pela presença da ilha de patogenicidade cag-PAI (cytotoxin associated gene pathogenicity island - cagPAI) bem como a variação alélica vacA s1m1. Pelo lado do hospedeiro, polimorfismos genéticos têm sido relacionados com o risco de CG, indicando que estas alterações são marcadores potenciais de susceptibilidade genética nestes tumores, entretanto, poucos SNPs de enzimas de reparo são estudadas. No contexto da carcinogenêse gástrica, há ainda que se considerar as diferenças com respeito a histopatologia, idade e gênero. Assim o objetivo deste trabalho é verificar a associação dos SNPs em genes de reparo do DNA, APE1 2197(T>G) e MLH1 -93(G>A), adicionadas aos SNPs de CDH1 -160 (C>A) e -347 (G>GA) por ser uma proteína associada ao câncer difuso hereditário, com a susceptibilidade genética. Os subtipos histológicos, idade e sexo foram dados importantes considerados para as análises. O genótipo de H. pylori, foi determinado pela presença dos genes cagA, cagE, cagG, cagT, virB11, vacA, oipA e hopQII sendo os genótipos de H. pylori considerado no estudo de risco e individualizada no último estudo. Para isso, foram incluídos 285 pacientes com câncer gástrico e 391 controles saudáveis pareados por idade e sexo (1:1ou 1:2) de duas regiões diferentes do Brasil: Ceará e Pará. Positividade para H. pylori em 87,71% dos casos. Foi observado no estudo de risco uma proteção para os tumores intestinais foi associado ao alelo G de APE1 (T>G) em mulheres com <55 anos e o alelo GA de CDH1 -347 (G>GA) para homens com ≥ 55 anos de idade. Nos tumores difusos, o grupo com < 55 anos, o alelo A de MLH1 -93 (G>A) foi associado à proteção e o alelo G de APE1 (T>G) foi associado com o risco em homens neste grupo de idade. O alelo G de APE1 (T>G) também foi associado à ausência de metástase a distância e o alelo A de MLH1 (G>A) com ausência de metástase em linfonodos regionais. No subtipo intestinal, pacientes portadores do alelo G de APE1(T>G) foram significativamente infectados por cepas menos virulentas. No estudo com as cepas de H. pylori a maioria dos casos possuiu a ilha completa independente do subtipo histológico. Os genes cagA e cagE estavam presentes na maioria das cepas. Segundo as análises através do método da árvore de classificação, alguns genes como cagG e cagE (em cepas vacAs1) se mostraram fundamentais na separação dos subtipos histológicos de CG. A presença dos genes cagG e cagE concomitantemente, ou ausência de cagG in H. pylori parece classificar o tumor em intestinal. Enquanto que a presença do gene cagG associado a ausência de cagE classifica os tumores em difusos. O genótipo cagM (+) cagG (+) com a presença do gene cagE classifica o tumor em intestinal , já na ausência de cagE, classifica os tumores em difusos. Em relação aos genes de adesão houve uma maior frequência do gene oipA, seguido de hopQI e hopQII. Em resumo, estes dados indicam que o genótipo de H. pylori , subtipo histológico, idade e gênero são importantes fatores a serem considerados em análises com polimorfismos. E apesar da complexidade de explicar quais são os fatores que contribuem para a separação das cepas nos subtipos intestinal e difuso, é notório que existem vias diferentes associadas a essas cepas. E que estes genes podem ser potenciais marcadores de diferentes subtipos histológicos.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-22 / Objetivos: O processo de envelhecimento e a maioria das neoplasias podem ser regulados por alterações epigenéticas, dentre elas a metilação do DNA. Este estudo tem como objetivos: a) analisar a frequência de metilação dos promotores dos genes SIRT1; SIRT3, hTERT, SMARCA5, CDH1, IGFBP3, CAV-1 no envelhecimento e no adenocarcinoma gástrico; b) avaliar a expressão das proteínas codificadas desses genes em tecidos gástricos tumoral e normal; c) associar resultados com dados clinicopatológicos da amostra. Métodos: A frequência de metilação desses genes foi analisada por PCR metilação-específica (MS-PCR) em amostras de linfócitos de jovens e idosos, bem como em adenocarcinoma gástrico e margens normais. A análise da expressão protéica foi realizada por imunoistoquímica. Resultados: Os promotores dos genes SIRT1 e IGFBP-3 apresentaram maior metilação em idosos, quando comparado ao grupo jovem. Além disso, dentre os sete genes estudados, cerca de 85% dos idosos apresentaram quatro ou mais desses genes hipermetilados, enquanto que entre jovens mais de 50% apresentou até três genes metilados (p=0,001). A proteína SIRT1 apresentou uma expressão seis vezes maior em tumores do que em tecido não neoplásico (p=0,0003), já SIRT3 apresentou maior expressão em tecido não neoplásico do que em tumoral (OR=0,313; p=0,005). SIRT3 encontrou-se mais frequentemente hipermetilado quando não havia expressão de sua proteína (p=0,0019). O gene hTERT apresentou-se mais frequentemente hipermetilado em amostras tumorais (p=0,0002) e sua expressão protéica foi observada somente em tumores (p<0,0001). SMARCA5 apresentou maior expressão no tecido neoplásico quando comparado com a margem do tecido gástrico (p<0,001) e a expressão de sua proteína estava associada à ausência de metilação do promotor gênico (p=0,0104). Caveolina-1 também foi mais frequentemente observada em tumores quando comparada ao não neoplásico (p<0,0001), principalmente no tipo intestinal (P=0,0008). A metilação do promotor do gene CAV1 foi associada à ausência de expressão em amostras tumorais (p=0,0001). Para IGFBP-3, foi observado ainda maior expressão em tumores do que em tecido não neoplásico (p<0,0001). CDH1 estava presente em 100% das amostras de tecido não neoplásico, diferindo do tumoral (p<0,0001). Conclusões: No processo do envelhecimento natural, ocorre um aumento da metilação em promotores de genes específicos com a idade, que pode influenciar a expressão gênica. Além disso, no câncer gástrico, as proteínas SIRT1, hTERT, SMARCA5, CDH1, IGFBP-3 e CAV1 apresentaram uma maior expressão, podendo configurar bons biomarcadores e possíveis alvos terapêuticos. SIRT3 foi a única proteína com função protetora contra esse tipo tumoral. A regulação epigenética pela metilação do DNA parece ocorrer em tecido gástrico somente para os genes SIRT3, SMARCA5 e CAV1, porém a análise da metilação dos genes hTERT e CDH1 também pode servir como marcador para a neoplasia estudada. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

SILVA, Cicero Igor Simoes Moura. Genótipos cagA , vacA e alelos e sítios de fosfolilação de tirosina da proteína caga do h. pylori em pacientes com e sem história familiar de câncer gástrico. 2009. 73 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-02-18T14:08:21Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_cismsilva.pdf: 858659 bytes, checksum: d9ead253a62bca88b77a42f2664ed067 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-02-18T14:09:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_cismsilva.pdf: 858659 bytes, checksum: d9ead253a62bca88b77a42f2664ed067 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-18T14:09:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_cismsilva.pdf: 858659 bytes, checksum: d9ead253a62bca88b77a42f2664ed067 (MD5) Previous issue date: 2009 / The H. Pylori strains demonstrate a high level of phenotypic and genotypic diversity, the expression of various genes, which confer greater pathogenicity to the bacteria. Relatives of patients with gastric cancer have a higher risk of developing gastric diseases, especially if they are infected with more virulent strains of H. pylori. The objective was to characterize the strains of H. pylori, the presence of genes vacA, cagA, and sites of tyrosine phosphorylation of CagA protein - EPIYA in patients with and without family history of gastric cancer, and correlate the presence of the cagA gene to the level of activity and inflammation chronic gastritis. The genotyping of strains of H. pylori was performed by PCR and sequencing of the phosphorylation sites EPIYA. We evaluated 94 biopsy samples of gastric mucosa from dyspeptic patients H. pylori positive, 55 with a family history of gastric cancer and 39 without family history. All genotyped strains were vacA positive, and 45.7% with the vacA allele s1m1; s1m2 vacA 26.6%, 4.3% were vacA s2m1; 10.6% vacA s2m2; 3 hybrid strains and 9 (9.6 %) showed only the allele sequence signal (s). Of the 94 strains genotyped 87.2% were cagA positive, with no statistical difference between groups of familiar and unfamiliar (92.7% vs 82.0%, p = 0.058). The cagA gene was present in most patients with gastritis, with statistical significance in the group of relatives of cancer (p = 0.004). The degree of activity and inflammation of gastritis, was more significant in the group of patients with cagA positive strains, with pangastritis Corpal and gastritis. In the antrum, there were significant only in relation to the activity of gastritis. The studed strains, 93.9% showed EPIYA phosphorylation sites, with 59.2% of these had only one site, 38.2% with two sites and 2.6% with three sites. There was no statistical difference in the number of sites EPIYA between the groups. It is important to genetically characterize the strains of H. pylori to establish clearly its role in different clinical conditions related to it. Keywords: H. pylori. / Cepas de H. pylori demonstram um alto nível de diversidade fenotípica e genotípica, pela expressão de vários genes, que conferem maior patogenicidade à bactéria. Familiares de pacientes com câncer gástrico têm maior risco de desenvolver doenças gástricas, principalmente se forem infectados por cepas mais virulentas de H. pylori. O objetivo foi caracterizar as cepas de H. pylori, quanto à presença dos genes vacA, cagA e dos sítios de fosforilação de tirosina da proteína CagA – EPIYA, em pacientes com e sem história familiar de câncer gástrico, e correlacionar a presença do gene cagA com o grau de atividade e de inflamação da gastrite crônica. A genotipagem das cepas de H. pylori foi realizada através da técnica de PCR e do sequenciamento dos sítios de fosforilação EPIYA. Foram avaliados 94 fragmentos de biópsia de mucosa gástrica provenientes de pacientes dispépticos H. pylori positivo, 55 com história familiar de câncer gástrico e 39 sem historia familiar. Todas as cepas genotipadas foram vacA positivas, sendo 45,7% com o alelo vacA s1m1; 26,6% vacA s1m2; 4,3% eram vacA s2m1; 10,6% vacA s2m2; 3 cepas híbridas e 9 (9,6%) apresentaram somente o alelo da sequência sinal(s). Das 94 cepas genotipadas 87,2% foram cagA positivas, não havendo diferença estatística entre os grupos de familiares e não familiares (92,7% vs 82,0%; p= 0.058). O gene cagA estava presente na maioria dos pacientes portadores de gastrite, havendo significância estatística no grupo dos familiares de câncer (p= 0,004). O grau de atividade e inflamação da gastrite, foi mais significante no grupo de pacientes com cepas cagA positivo, com pangastrite e gastrite corpal. No antro, somente houve significância com relação à atividade da gastrite. Das cepas estudadas, 93,9% apresentaram sítios de fosforilação EPIYA, sendo que 59,2% destas apresentaram somente um sitio, 38,2% com dois sítios e 2,6% com três sítios. Não houve diferença estatística com relação ao número de sítios EPIYA, entre os grupos estudados. É importante a caracterização genética das cepas de H. pylori para se estabelecer com clareza o seu papel nos diversos quadros clínicos a ele relacionado.

TORRES DE MELO, José Ricardo de Moura. Modelo experimental em caninos para pesquisa de linfonodo sentinela do estômago. 2010. 85 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2010. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-02-28T13:36:18Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_jrmtmelo.pdf: 3150985 bytes, checksum: e82108ac4b5e2237bf49af353c910cc9 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-02-28T13:36:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_jrmtmelo.pdf: 3150985 bytes, checksum: e82108ac4b5e2237bf49af353c910cc9 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-28T13:36:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_jrmtmelo.pdf: 3150985 bytes, checksum: e82108ac4b5e2237bf49af353c910cc9 (MD5) Previous issue date: 2010 / The gastrectomy with extensive lymphadenectomy still is the gold standard for the dressing treatment of the gastric cancer (GC), even so these procedures can take high index of morbidity or mortality, mainly in the patients who do not present lymphatic dissemination of the illness. The research of sentinel lymph node (SLN), already consecrated in the initial tumors of breast and the melanomas, presents each time more frequent for upper gastrointestinal cancers, specially in GC with encouraging results. Studies initiated in the middles of 2000 portray increasing and sufficiently prosperous search for clarification of this question. The objective of this work is to elaborate an experimental model that can demonstrate technically, in laboratory, the research viability of SLN in gastric antrum of the dog. 25 female dogs had been studied with approach weight of 11 kg and age of 01/02 years, without definite race (WDR), healthful clinically, proceeding from the Control Center of Zoonosis of Fortaleza City with programming for euthanasia. With random choice, these animals had been studied individually and weekly. It was used, separately, radioisotopic 99mtechnetium labeled phytate and patent blue dye (V Guerbert 2.5%) injected at 01 cm above the piloro, on the small bending in the antrum gastric of the dog and analyzed in the times zero, 05, 10, 15 and 20 minutes. After this period, the injection place of the markers and gastric lymph nodes were appraised “in vivo” (in the animal) and the gastric lymph nodes “ex vivo” (out of the animal). For the study with the 99mtechnetium it was used the device Gamma Probe model Nuclearlab DGC-II (radioguiada surgery with sounding lead of irradiation connected to unit of counting and sonorous tracking) and for the patent blue dye, direct vision. For the analysis statistics were used the test of McNemar and the Quantify agreement with Kappa. The level of significance was established in 5% (p≤0,05). When the radioisotopic 99mtechnetium labeled phytate was used single, the LS was identified in 20 animals (80%). With the patent blue dye single, in 24 animals (96%). There is no statistic significance with the use of those markers for the LS research in the gastric antrum of the dog. The conclusions are (1) The stomach of the dog is adjusted for experimental model in alive research of the sentinel lymph node (2) The radioisotopic 99mtechnetium labeled phytate and patent blue dye (V Guerbert 2.5%) are efficients as markers of sentinel lymph node of the dog’s gastric antrum. / A gastrectomia com linfadenectomia ampliada ainda é o padrão ouro para o tratamento curativo do câncer de estômago (CaE), embora este procedimento possa levar a alto índice de morbidade ou mortalidade, principalmente nos pacientes que não apresentem disseminação linfática da doença. A pesquisa do linfonodo sentinela (LS), já consagrada nos tumores iniciais de mama e nos melanomas, apresenta-se cada vez mais freqüente no trato digestório, em especial no CaE com resultados animadores. Estudos iniciados nos meados do ano 2000 retratam busca crescente e bastante próspera para esclarecimento desta questão. O objetivo deste trabalho é elaborar um modelo experimental que possa demonstrar tecnicamente, em laboratório, a viabilidade da pesquisa do LS no antro gástrico da cadela. Foram estudadas 25 cadelas com peso aproximado de 11 Kg e idade de 01 a 02 anos, sem raça definida (SRD), clinicamente saudáveis, proveniente do Centro de Controle de Zoonoses do Município de Fortaleza (CCZ) que tinham programação para eutanásia. Com escolha aleatória, estes animais foram estudados individualmente e semanalmente. Utilizou-se, separadamente, Tecnécio (99mTc) com traçador/colóide Fitato e corante vital azul patente V Guerbert 2,5 % (AP) injetados a 01 cm do piloro, na pequena curvatura no antro gástrico da cadela e analisados nos tempos zero, 05, 10, 15 e 20 minutos. Após este período realizou-se pesquisa “in vivo” do local de injeção do marcador e linfonodos encontrados e “ex-vivo” destes linfonodos. Para o estudo com o 99mTc utilizou-se o aparelho Gamma Probe modelo Nuclearlab DGC-II - detector para cirurgia radioguiada e sonda captadora de irradiação acoplada com unidade de contagem e rastreamento sonoro e para o AP, visão direta. Para a análise estatística utilizou-se o teste de McNemar e o Coeficiente de Concordância de Kappa. Foi estabelecido em 5% o nível de significância (p≤0,05). Com o uso do 99mTc isolado foi identificado a presença do LS em 20 animais (80%). Quando se utilizou o corante AP isolado a presença do LS foi identificada em 24 animais (96 %). Não houve significância estatística quanto ao uso destes marcadores para a pesquisa do LS no antro gástrico da cadela. Concluiu-se que (1) O estômago da cadela é adequado para modelo experimental de pesquisa “in vivo” do linfonodo sentinela e (2) O tecnécio (99mTc) e corante vital – azul patente V Guerbert 2,5 % (AP) são eficientes como marcadores de linfonodo sentinela do antro gástrico da cadela.