O câncer cervical é o segundo mais comum em mulheres em países em desenvolvimento, sendo causado por infecção persistente por Papilomavírus Humano (HPV). Quando esta persistência ocorre, entre outros fatores, está relacionada a mecanismos de evasão do sistema imune apresentados pelo vírus. A frequência de macrófagos aumenta com a progressão da lesão cervical e há aumento de células mielóides no baço de camundongos com tumor. Este trabalho tem como objetivo observar os efeitos sistêmicos de tumores associados ao HPV sobre a proliferação e recrutamento de células do sistema imune e identificar fatores que tenham papel nesses mecanismos. Utilizando modelos de tumor in vivo, observou-se que tumores associados ao HPV recrutam mais células para o tumor e induzem maior proliferação celular. Também avaliamos o perfil de expressão de citocinas nas linhagens tumorais e o perfil geral de expressão de proteínas através de eletroforese 2D. Com isto, demonstramos que linhagens tumorais positivas para HPV apresentam maior expressão de IL-6, IL-8, CXCL1, sICAM e Serpina E1. / Cervical cancer is the second most common type of cancer in women in developing countries. Its main etiologic factor is persistent infection with high risk human papillomavirus (HPV). This persistence occurs only in some cases and, among other factors, is related to mechanisms of immune evasion displayed by the virus. There is an increase in the frequency of macrophages proportional to cervical intraepithelial lesion grade and an increase of myeloid cells in the spleen of tumor bearing mice. This work aims to observe the systemic effects of HPV associated tumors on the proliferation and recruitment of immune cells, and identify factors that have a role in these mechanisms. Using in vivo tumor models, we found that HPV positive tumors recruit a higher percentage of cells and induce cellular proliferation. We also studied cytokine expression profiles of tumor cell lines, and performed proteomic assay with tumor cells transduced with HPV oncogenes. Our data shows that HPV associated tumor cell lines display higher expression of IL-6, IL-8, CXCL1, sICAM and Serpin E1.

MicroRNAs regulam processos celulares e tumorigênese. O carcinoma epidermoide de cabeça e pescoço (CECP) é a sexta neoplasia mais comum no mundo e não existe consenso sobre características moleculares representativas deste tumor. O receptor de fator de crescimento epidemal (EGFR), bem como efetores de sua via de sinalização, podem ser regulados por miRNA-7. Avaliamos a expressão de EGFR e miRNA-7 em amostras tumorais e livres de tumor, observando maior expressão em tumores. O papel do miRNA-7 em CECP foi investigado através de estudo de ganho de função em linhagem celular de carcinoma epidermoide de cabeça e pescoço e em queratinócito oral e por PCR Array direcionado para genes de vias mediadas por EGF. A super-expressão do miRNA-7 alterou a expressão de diversos genes na linhagem celular de carcinoma, resultando na diminuição da proliferação, possivelmente relacionada com a diminuição da expressão gênica e proteica de p70S6K1. Em queratinócitos orais não houve alteração significativa na expressão dos genes avaliados. Concluímos que miRNA-7 interfere na progressão do ciclo celular através da regulação de p70S6K1. A resposta diferente de dois tipos celulares à super-expressão do miRNA-7 mostra a complexidade de suas vias de regulação. / MicroRNAs regulate gene expression. Alterations in microRNA expression are involved in the progression of cancers. MiRNA-7 regulates epidermal growth factor receptor (EGFR) signaling and multiple other genes involved in EGFR-related pathways. Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is the six most common cancer in the world, with no consensus on molecular markers for prognosis. We assessed EGFR and miRNA-7 expression levels in HNSCC and tumor-free samples. MiRNA-7 was over-expressed in tumor. Aiming to understand the role of miRNA-7 and EGFR regulation in HNSCC, we over-expressed this molecule in an oral squamous cell carcinoma cell line and in normal oral keratinocytes, and evaluated the expression level of genes of the EGFR signaling pathway using a PCR Array. Most genes were deregulated in the cell line. Cell cycle arrest, possibly due to the down-regulation of p70S6K1, was observed. This deregulation was not detected, in keratinocytes. We conclude that miRNA-7 can interfere in cell cycle progression through targeting p70S6K1 but this action varies according to the molecular background of a given pathology. The understanding of this complexity in gene regulation in critical for therapeutic application of miRNAs.

Submitted by Jadson Francisco de Jesus SILVA (jadson@uefs.br) on 2018-01-23T22:40:05Z No. of bitstreams: 1 ANA PAULA EUFR?ZIO.pdf: 1790027 bytes, checksum: 4b9b469a85fd902129536275d6da931f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-23T22:40:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ANA PAULA EUFR?ZIO.pdf: 1790027 bytes, checksum: 4b9b469a85fd902129536275d6da931f (MD5) Previous issue date: 2016-08-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Introduction: Malignant neoplasms represent one of the main causes of morbi-mortality in Brazil and worldwide. Radiotherapy, whether associated or not with chemotherapy, is the therapeutic modality most often used for cancer of the head and neck. However, it can trigger reactions at the oral level, such as oral mucositis, the most limiting side effect, with intense pain and difficulty eating, which may require the suspension of oncologic treatment for the patient. Polyhexanide has been used effectively and safely in the treatment of acute and chronic wounds. Objectives: To describe the clinical-epidemiologic profile and investigate the efficacy of polyhexanide in the treatment of oral mucositis and pain relief, in the period of 8-15 days, among patients with cancer of the head and neck undergoing treatment with radiotherapy (whether associated or not with chemotherapy). Methods: A randomized clinical trial was conducted, parallel and double-blind, among patients with cancer of the head and neck undergoing radiotherapy treatment with or without chemotherapy, in the High Complexity Oncology Unit of Feira de Santana, Bahia, who developed oral mucositis, were 18 years of age or older and consented to participation and signed informed consent forms in the period of July 2015 to May 2016. Two equal groups were formed by random allocation?an intervention group (polyhexanide gel) and a control group (gel without polyhexanide). These groups were reevaluated after 8 and 15 days of use of the gels. Clinical exams, evaluations of the medical records, and interviews with the application of a survey instrument used in the study were approved by the Committee for Ethics in Human Subjects Research of the State University of Feira de Santana, under the number 1.074.479/2015. Statistical analysis consisted of relative and absolute frequencies, averages, medians, and standard deviation, and the p-value?considered statistically signification when <0.05?were obtained by non-parametric Friedman tests, Wilcoxon the posts with signs and Wilcoxon-Mann-Whitney. Results: The findings were presented as an article. The mean age was 59.68 years; 58.8% men; 67.6% Brown/Black, and 79.4% with an elementary school education or less. The majority of tumors (64.7%) already presented in advanced stage, and the most frequent were those of the pharynx (23.5%) and the oral cavity (20.4%). Radiotherapy associated with chemotherapy was the most used therapy. Grades III and IV of oral mucositis were the most frequent in the third and fourth weeks of radiotherapy treatment. A total of 34 individuals were accompanied, 17 in the intervention group and 17 in the control group. After a period of 8 to 15 days, statistically significant differences were observed (p<0.05) in relation to the reduction in severity of the oral mucositis and pain, between the time points of gel use in the intervention group. Conclusions: Knowledge of the clinical-epidemiologic profile of patients undergoing oncology treatment with oral mucositis is important to establish potentially effective treatments. In this study polyhexanide represented an effective therapy in the treatment of oral mucositis and relief of pain, with positive results in the first 8 days of use. / As neoplasias malignas representam uma das principais causas de morbimortalidade no Brasil e no mundo. A Radioterapia, associada ou n?o a quimioterapia, ? a modalidade terap?utica mais empregada para o c?ncer de cabe?a e pesco?o. Todavia, pode desencadear rea??es em n?vel bucal, como a mucosite oral, o efeito mais limitante, com dor intensa e dificuldades na alimenta??o, podendo requerer at? a suspens?o do tratamento oncol?gico do paciente. A polihexanida tem sido empregada no tratamento de feridas agudas e cr?nicas, com efic?cia e seguran?a. Objetivos: Descrever o perfil cl?nico-epidemiol?gico e investigar a efic?cia da polihexanida no tratamento da mucosite oral e do al?vio da dor, no per?odo de 8 e 15 dias, em pacientes com c?ncer de cabe?a e pesco?o, sob tratamento com radioterapia associada ou n?o a quimioterapia. M?todos: Realizou-se um ensaio cl?nico randomizado, paralelo e duplo cego, com todos os pacientes com c?ncer de cabe?a e pesco?o sob tratamento com radioterapia associada ou n?o a quimioterapia, na Unidade de Alta Complexidade em Oncologia de Feira de Santana, Bahia, que desenvolveram mucosite oral, tinham 18 anos ou mais de idade e aceitaram participar assinando o termo de consentimento livre e esclarecido, no per?odo de julho de 2015 a maio de 2016. Dois grupos foram igualmente formados por aloca??o aleat?ria, o de interven??o (gel de polihexanida) e o grupo controle (gel sem polihexanida), e reavaliados nos intervalos de 8 e 15 dias de uso dos g?is. Avalia??es cl?nicas, de prontu?rios e entrevistas com aplica??o de formul?rio foram aplicadas neste estudo aprovado pelo Comit? de ?tica em Pesquisa com Seres Humanos da Universidade Estadual de Feira de Santana sob o n?mero 1.074.479/2015. Para a an?lise estat?stica empregaram-se as frequ?ncias relativas e absolutas, m?dias, medianas e desvio-padr?o, e o valor de p, considerado estatisticamente significativo quando ? 0,05 foi obtido por meio dos testes n?o param?tricos de Friedman, Wilcoxon dos postos com sinais e Wilcoxon-Mann-Whitney. Resultados: Os achados foram apresentados em forma de artigo. A m?dia de idade foi de 59,68 anos; 58,8% homens; 67,6% de cor parda e 79,4% analfabetos ou com baixo grau de escolaridade. A maioria (64,7%) dos tumores j? se apresentava em est?dio avan?ado, sendo os mais frequentes os da faringe (23,5%) e cavidade oral (20,4%). A Radioterapia associada ? quimioterapia foi a terap?utica mais empregada. Graus III e IV de mucosite oral foram mais frequentes nas 3? e 4? semanas de tratamento radioter?pico. Um total de 34 indiv?duos foi acompanhado, sendo 17 do grupo de interven??o e 17 do grupo controle. Ap?s um per?odo de 8 e 15 dias, observaram-se diferen?as estatisticamente significativas (p<0,05) em rela??o a redu??o da gravidade da mucosite oral e da dor, entre os tempos de uso do gel no grupo de interven??o. Conclus?es: O conhecimento do perfil cl?nico-epidemiol?gico de pacientes em tratamento oncol?gico com mucosite oral faz-se importante para se estabelecer terap?uticas potencialmente eficazes. Neste estudo a polihexanida apresentou-se como uma terap?utica eficaz no tratamento da mucosite oral e controle da dor, com resultados positivos ainda nos primeiros 8 dias de uso.

O câncer cervical é o terceiro tipo de câncer mais comum entre as mulheres, sendo a infecção por HPV16 o principal fator de risco para sua etiopatogênese. Neste trabalho avaliamos o potencial profilático e terapêutico da vacina proteica E6E7, constituída de epítopos imunogênicos de E6 e E7 do HPV16, com ou sem Ubiquitina (Ub) fusionada (E6E7Ub e UbE6E7), contra tumor de células TC-1. A vacina E6E7 conferiu total proteção contra a formação de tumores em animais C57BL/6 selvagens, CD4 nocautes e TLR4 deficientes previamente imunizados e posteriormente desafiados com células TC-1. Entretanto, em animais imunizados após desafio, a fusão da Ub no antígeno E6E7 foi crucial para a vacina promover a regressão do tumor em 60% dos animais. Além da fusão da Ub na extremidade N-terminal do antígeno (UbE6E7) aumentar a poliubiquitinação in vitro, essa estratégia de fusão promoveu uma melhor resposta imunoterapêutica contra o tumor que E6E7 e E6E7Ub, sendo promissora para o desenvolvimento de vacinas terapêuticas contra câncer cervical e também contra outros tipos de câncer. / Cervical cancer is the third most common cancer women worldwide and HPV16 infection is a major risk factor for its ethiopathogenesis. In this study we evaluated in mice the prophylactic and therapeutic potential of the E6E7 proteic vaccine, consisting of immunogenic HPV16 E6 and E7 epitopes, with or without Ubiquitin-fused (E6E7Ub and UbE6E7), against TC-1 tumor cells. The E6E7 vaccine conferred complete protection against tumor growth in previously immunized wild-type, CD4 knockout and TLR4 deficient mice challenged with TC-1 cells. However, immunization of previously challenged animals with TC-1 cells, Ubiquitin-fused antigens promoted tumor regression in 60% of mice against 0% in non-Ubiquitinfused antigens. Besides, the fusion of Ubiquitin at the N-terminus of the antigen (UbE6E7) seems to enhance polyubiquitination in vitro, this Ubiquitin fusion strategy promoted an effective immunotherapeutic response against the tumor, being promising for the development of therapeutic cervical cancer vaccines and also other types of tumor.

O câncer cervical é o segundo mais comum em mulheres em países em desenvolvimento, sendo causado por infecção persistente por Papilomavírus Humano (HPV). Quando esta persistência ocorre, entre outros fatores, está relacionada a mecanismos de evasão do sistema imune apresentados pelo vírus. A frequência de macrófagos aumenta com a progressão da lesão cervical e há aumento de células mielóides no baço de camundongos com tumor. Este trabalho tem como objetivo observar os efeitos sistêmicos de tumores associados ao HPV sobre a proliferação e recrutamento de células do sistema imune e identificar fatores que tenham papel nesses mecanismos. Utilizando modelos de tumor in vivo, observou-se que tumores associados ao HPV recrutam mais células para o tumor e induzem maior proliferação celular. Também avaliamos o perfil de expressão de citocinas nas linhagens tumorais e o perfil geral de expressão de proteínas através de eletroforese 2D. Com isto, demonstramos que linhagens tumorais positivas para HPV apresentam maior expressão de IL-6, IL-8, CXCL1, sICAM e Serpina E1. / Cervical cancer is the second most common type of cancer in women in developing countries. Its main etiologic factor is persistent infection with high risk human papillomavirus (HPV). This persistence occurs only in some cases and, among other factors, is related to mechanisms of immune evasion displayed by the virus. There is an increase in the frequency of macrophages proportional to cervical intraepithelial lesion grade and an increase of myeloid cells in the spleen of tumor bearing mice. This work aims to observe the systemic effects of HPV associated tumors on the proliferation and recruitment of immune cells, and identify factors that have a role in these mechanisms. Using in vivo tumor models, we found that HPV positive tumors recruit a higher percentage of cells and induce cellular proliferation. We also studied cytokine expression profiles of tumor cell lines, and performed proteomic assay with tumor cells transduced with HPV oncogenes. Our data shows that HPV associated tumor cell lines display higher expression of IL-6, IL-8, CXCL1, sICAM and Serpin E1.

MicroRNAs regulam processos celulares e tumorigênese. O carcinoma epidermoide de cabeça e pescoço (CECP) é a sexta neoplasia mais comum no mundo e não existe consenso sobre características moleculares representativas deste tumor. O receptor de fator de crescimento epidemal (EGFR), bem como efetores de sua via de sinalização, podem ser regulados por miRNA-7. Avaliamos a expressão de EGFR e miRNA-7 em amostras tumorais e livres de tumor, observando maior expressão em tumores. O papel do miRNA-7 em CECP foi investigado através de estudo de ganho de função em linhagem celular de carcinoma epidermoide de cabeça e pescoço e em queratinócito oral e por PCR Array direcionado para genes de vias mediadas por EGF. A super-expressão do miRNA-7 alterou a expressão de diversos genes na linhagem celular de carcinoma, resultando na diminuição da proliferação, possivelmente relacionada com a diminuição da expressão gênica e proteica de p70S6K1. Em queratinócitos orais não houve alteração significativa na expressão dos genes avaliados. Concluímos que miRNA-7 interfere na progressão do ciclo celular através da regulação de p70S6K1. A resposta diferente de dois tipos celulares à super-expressão do miRNA-7 mostra a complexidade de suas vias de regulação. / MicroRNAs regulate gene expression. Alterations in microRNA expression are involved in the progression of cancers. MiRNA-7 regulates epidermal growth factor receptor (EGFR) signaling and multiple other genes involved in EGFR-related pathways. Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is the six most common cancer in the world, with no consensus on molecular markers for prognosis. We assessed EGFR and miRNA-7 expression levels in HNSCC and tumor-free samples. MiRNA-7 was over-expressed in tumor. Aiming to understand the role of miRNA-7 and EGFR regulation in HNSCC, we over-expressed this molecule in an oral squamous cell carcinoma cell line and in normal oral keratinocytes, and evaluated the expression level of genes of the EGFR signaling pathway using a PCR Array. Most genes were deregulated in the cell line. Cell cycle arrest, possibly due to the down-regulation of p70S6K1, was observed. This deregulation was not detected, in keratinocytes. We conclude that miRNA-7 can interfere in cell cycle progression through targeting p70S6K1 but this action varies according to the molecular background of a given pathology. The understanding of this complexity in gene regulation in critical for therapeutic application of miRNAs.

O câncer cervical é o terceiro tipo de câncer mais comum entre as mulheres, sendo a infecção por HPV16 o principal fator de risco para sua etiopatogênese. Neste trabalho avaliamos o potencial profilático e terapêutico da vacina proteica E6E7, constituída de epítopos imunogênicos de E6 e E7 do HPV16, com ou sem Ubiquitina (Ub) fusionada (E6E7Ub e UbE6E7), contra tumor de células TC-1. A vacina E6E7 conferiu total proteção contra a formação de tumores em animais C57BL/6 selvagens, CD4 nocautes e TLR4 deficientes previamente imunizados e posteriormente desafiados com células TC-1. Entretanto, em animais imunizados após desafio, a fusão da Ub no antígeno E6E7 foi crucial para a vacina promover a regressão do tumor em 60% dos animais. Além da fusão da Ub na extremidade N-terminal do antígeno (UbE6E7) aumentar a poliubiquitinação in vitro, essa estratégia de fusão promoveu uma melhor resposta imunoterapêutica contra o tumor que E6E7 e E6E7Ub, sendo promissora para o desenvolvimento de vacinas terapêuticas contra câncer cervical e também contra outros tipos de câncer. / Cervical cancer is the third most common cancer women worldwide and HPV16 infection is a major risk factor for its ethiopathogenesis. In this study we evaluated in mice the prophylactic and therapeutic potential of the E6E7 proteic vaccine, consisting of immunogenic HPV16 E6 and E7 epitopes, with or without Ubiquitin-fused (E6E7Ub and UbE6E7), against TC-1 tumor cells. The E6E7 vaccine conferred complete protection against tumor growth in previously immunized wild-type, CD4 knockout and TLR4 deficient mice challenged with TC-1 cells. However, immunization of previously challenged animals with TC-1 cells, Ubiquitin-fused antigens promoted tumor regression in 60% of mice against 0% in non-Ubiquitinfused antigens. Besides, the fusion of Ubiquitin at the N-terminus of the antigen (UbE6E7) seems to enhance polyubiquitination in vitro, this Ubiquitin fusion strategy promoted an effective immunotherapeutic response against the tumor, being promising for the development of therapeutic cervical cancer vaccines and also other types of tumor.