Orientador: Marlene Aparecida Schiavinato / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T01:30:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zanella_Fabio_D.pdf: 3335237 bytes, checksum: 3b2e2ed08a98b8b872d7639d306a1a86 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Inúmeros relatos apontam para um efeito negativo do N-mineral sobre o estabelecimento e atividade dos nódulos radiculares em leguminosas que fixam o Nz via associação simbiótica com rizóbios. Entretanto, não são muitos os trabalhos que estabelecem uma relação entre a fotossíntese e fontes de N. O presente trabalho objetivou investigar a influência do suprimento de N mineral sobre o processo de fixação simbiótica do Nz e a fotossíntese em plantas de Canavalia ensiformis (Feijão-de-porco) e correlacionar esses dois importantes processos metabólicos. Para isso, foram utilizados diferentes tratamentos em que se variou a fonte de N (N03-1NH/) e o tempo de suprimento às plantas. A despeito da fonte, a aplicação de N-mineral na maior concentração e/ou o maior tempo de suprimento, acarretou um maior acúmulo de biomassa total nas plantas de C. ensiformis. As plantas que receberam adubação nitrogenada somente após 30 dias do transplantio, apresentaram acúmulo de biomassa total semelhante ao das plantas slN, cujo nitrogênio foi suprido via fixação biológica do nitrogênio (FBN). A adubação nitrogenada inibiu o crescimento dos nódulos radiculares e, de uma maneira geral, o nitrato exerceu maior efeito inibitório do que o amônio. Houve influência da fonte e da concentração de N sobre o desempenho fotos sintético, contudo, a transpiração (E), condutância estomática (gs), concentração interna de COz (C) e a razão entre a concentração interna e a concentração atmosférica de COz (C IC a) não foram significativamente influenciadas pelos tratamentos. Os maiores valores de fotossíntese (A) -foram obtidos nos tratamentos slN, N03- 100/30d e em todos os tratamentos com NRt O suprimento de N03-, tanto na maior concentração quanto com maior tempo de suprimento, acarretou menores valores de A. A razão entre a fluorescência variável e a fluorescência máxima (F./Fm) e a taxa de transporte de elétrons (ETR) apresentaram tendências semelhantes entre si e com os valores das taxas fotossintéticas, sendo que os menores valores foram obtidos nas plantas expostas aos seguintes tratamentos com N03-: IOO/Od, 200/0d e 200/30d. Dessa forma, o menor desempenho fotossintético apresentado nos tratamentos com maior concentração e/ou exposição ao N03- pode ser atribuído ao fato desse composto atuar como um forte dreno de elétrons da etapa fotoquímica, o que limitaria as reações de assimilação do COzo As concentrações de carotenóides e clorofilas totais foram maiores no tratamento s/N e menores nos tratamentos supridos com N03- desde o transplantio. A razão lorofila a/clorofila b não diferiu entre os tratamentos. Comparando-se fontes minerais de N, o suprimento com ~ + promoveu, de forma geral, maior acúmulo dos pigmentos fotossintéticos do que o N03-, A maior concentração de aminoácidos livres totais (AL T) foi apresentada na seiva xilemática das plantas supridas com NH/ 200/30d e as menores concentrações foram observadas nos tratamentos s/N, N03- 200/30d e ~+ IOO/Od. Em todos os tratamentos, a asparagina (ASN) foi o aminoácido transportado em maior abundância na seiva do xilema. Em seguida, destacou-se a concentração da glutamina (GLN), cujas maiores concentrações foram obtidas nos tratamentos s/N e NH4+ IOO/30d. De maneira geral, os tratamentos com N03- presentaram as menores concentrações desse aminoácido. Além da ASN e da GLN, a glicina (GLI), a treonina (THR) e o aspartato (ASP), também se destacaram quanto à concentração. A concentração de ureídeos totais (URE) na seiva das plantas s/N foi de 5,6 J..UI101 rnL- 1, muito superior à dos demais tratamentos. Assim sendo, por meio da concentração dos compostos nitrogenados analisados, constata-se que os principais produtos de transporte no xilema em C. ensiformis foram as amidas ASN e GLN. Dentre os órgãos analisados, os nódulos constituíram o dreno mais forte para os carboidratos analisados, sendo que as menores concentrações de amido ocorreram nas raízes e houve pouca diferença nos teores de açúcares solúveis totais (AST) entre raízes e folhas. Não houve um padrão definido de acúmulo de carboidratos, haja visto não ter ocorrido uma tendência similar entre os tratamentos quando se comparou o órgão e/ou o carboidrato analisado. A concentração de leghemoglobina (LegHb) em nódulos radiculares foi maior nas plantas sIN. Comparando-se a mesma fonte e concentração de N, verificou-se não haver diferença quanto ao tempo de exposição ao N-mineral. De uma maneira geral, o NH/ teve um efeito mais inibitório que o N03-. O suprimento de N-mineral exerceu efeito inibitório sobre a atividade da nitrogenase (N2ase), assim sendo, a maior atividade dessa enzima foi obtida nas plantas sIN. Comparando- se a mesma concentração e o mesmo tempo de suprimento, pode-se afirmar que as duas fontes minerais de N (N03-INH/) tiveram efeito inibitório semelhante sobre a atividade da nitrogenase. O acúmulo de nitrato nos órgãos analisados seguiu a seguinte ordem decrescente em relação aos tratamentos: N03- 200/0d, N03- 200/30d, N03- IOO/Od e N03- IOO/30d. Comparando-se os órgãos analisados, o maior conteúdo de N03- foi observado em nódulos e raízes. O N-total cumulado oscilou em torno de 2% em raÍzes e 8% em nódulos, sendo que nesses órgãos não houve influência significativa dos tratamentos no conteúdo de N-total. Nas folhas, o tratamento NH/ 200/0d apresentou o maior conteúdo de N-total (5,6 %). Os menores valores obtidos foram 3,4 % no tratamento N03- IOO/Od e 3,7 % nos tratamentos sIN e N03- 200/0d. Em relação às fontes de N adotadas (N03- e NH/), o NH/ promoveu maior acúmulo de N-total / Abstract: Several reports point to a negative effect of mineral N on the fonnation and activity of root nodules in legumes that fix the N2 by simbiotic association with rizobia. However, there are few studies establishing a relation between aspects ofthe photosynthesis and the source of N. In this study, an investigation was carried out to verify the influence of the mineral N source on the process of simbiotic N2 fixation and photosynthesis in C. ensiformís plants, as welI as study the interaction of these two important metabolic processes. To fulfill these objectives, several treatments were used, where it varied source ofN (N03 -/NRt) and its time of application was alternated. In spite of the source, the mineral N application at the highest concentration and/or the longest feeding period, led to a higher accumulation oftotal biomass in the C. ensiformís. The plants treated with nitrogen fertilizer at 30 days after transplantation, presented similar total biomass to those grown without N, and totally reliant on biologic nitrogen fixation (BNF). The application of nitrogen fertilizer inhibited the growth of the root nodules and in general nitrate caused a stronger inhibitory effect than the ammonium. Both the source and the concentration of N influenced photosynthetic perfonnance, however, transpiration (E), stomatal conductance (gs), internal CO2 concentration (Cj) and the C;Ca ratio were not strongly affected by the treatments. The highest values of photosynthesis (A) were obtained for the -N, N03- 100/30d treatments and in alI the treatments with NlI/. The supply ofN03-, both at the highest concentration and the longest period offeeding resulted in the lowest values of A. The FIFm ratio and the electron transport rate (ETR) both presented similar trends as did the values of photosynthesis, since the lowest values were obtained in the plants receiving the folIowing N03- treatments: 100/Od, 200/0d and 200/30d. Therefore, the lowest photosynthetic perfonnance presented in the treatments with the highest concentIation and/or exposure to N03- can be attributed to the fact ofthis compound acts as a strong electron drain on the photochemical reactions, which could thereby limit CO2 assimilation. The concentIation of total carotenoids and chlorophylls was higher in the - N treatment and lower in the treatments in with N03. was supplied from transplantation. The chlorophyll aIb ratio did not differ from one treatment to the other. In general, comparing mineral sources ofN, the application ofNH/ led to a higher accumulation ofphotosynthetic pigments than N03 -. The highest total ftee amino acid concentration (AL T) was observed in the xylem sap for plants supplied with NH/ 200/30d and lowest concentrations were observed with the -N, N03- 200/30d and NH/ 100/0d treatments. In all treatments, asparagine (ASN) was the most abundant amino acid in the xylem sap, followed by glutamine (GLN), whose highest concentrations were obtained with the -N and NH4+ 100/30d treatments. In most cases, the treatments with N03- presented the lowest concentrations of this amino acid. The concentration of total ureides (URE) in xylem sap was 5.6 ~ol mL-1 in the -N plants, much higher than the concentration obtained for the other treatments. Thus, it appears that the main products of N transport in xylem sap in C. ensiformis were ureides together with the amides ASN and GLN. Among the plant organs analyzed, the nodules constituted the strongest drain for the carbohydrates, since the lower starch concentrations occurred in the roots and there was little difference in the concentration of total soluble sugars (AST) between roots and leaves. There was no clear pattem of carbohydrates accumulation, considering there was no similar trend among the treatments when the organ and/or the analyzed carbohydrate were compared . The leghaemoglobin concentration (LegHb) in root nodules was higher in the -N plants. Comparing the same source and concentration of N, no difference was found with regard to time of exposure to mineral N. In general, the NH/ caused a stronger inhibitory efIect than the N03-. Nitrogenase (N2ase) activity was inhibited by the-mineral N sources; thus, the highest activity ofthis enzyme was obtained for the -N plants. Comparing the same concentration and the same feeding period, it may be concluded that the two mineral sources ofN (N03-~"1 exerted a similar inhibitory effect on nitrogenase activity. The accumulation of nitrate in the analyzed organs followed the following decreasing order in relation to the treatments: N03- 200/0d, N03- 200/30d, N03- IOO/Od and N03- lOO/30d. Comparing the analyzed organs, the highest content of N03- was observed in nodules and roots. The accumulated total N oscillated around 2% in roots and 8% in nodules yet in these organs there was no significant influence of the treatments on the total N contento In leaves, the NH/ 200/0d treatment presented the highest content oftotal N (5.6%). The lower values were 3.4, for the N03- lOO/Od treatment, and 3.7, obtained for the -N and N03- 200/0d treatments. In relation to the investigated sources ofN, NH/ led to the highest accumulation oftotal N / Doutorado / Biologia Vegetal / Doutor em Biologia Vegetal

O sistema coletor de luz (LHC) é o principal complexo de proteínas associado a carotenóides e clorofilas, localizado nas membranas dos tilacóides nas plantas e algas superiores. O LHC atua como um sistema antena para o fotossistema I e o fotossistema II e tem um papel chave na captação da energia luminosa para a fotossíntese (Horton et aI, 1996). Os processos de transporte de elétrons, fixação do CO2 e assimilação do nitrato estão relacionados às necessidades de ATP, poder redutor e cofatores proteicos como, ferredoxina ou tiorredoxinina. Existe uma forte correlação entre o metabolismo do carbono e nitrogênio em plantas superiores, pois os esqueletos carbônicos e a energia, produtos da fotossíntese, são necessários à assimilação do nitrato direta ou indiretamente, através da síntese de sacarose (Ferrario-Mery, 1998; Foyer et al., 1998). A regulação deste processo é necessária para prevenir uma competição potencial da disponibilidade de poder redutor e precursores orgânicos, necessários para às vias biossintéticas (Champigny, 1995). A assimilação do nitrato para a biossintese de amino ácidos e outras moléculas necessita de ferredoxina reduzida (Durnford & Falkowski, 1997). Neste trabalho nós investigamos a regulação do metabolismo fotossintético e a assimilação do nitrato, em plantas trangênicas de tabaco que produzem uma proteína da ervilha de 28kDa do sistema principal do complexo LHCII. As análises foram conduzidas em condições de baixa luminosidade. Os resultados demostraram um aumento na assimilação de nitrogenio das plantas transgênicas, evidenciado pelo maior estado de ativação da nitrato redutase, maior atividade da glutarnina sintetase e mudanças no conteúdo de amino ácidos. Glutamato e Glutarnina aumentaram nas folhas das plantas transgênicas, enquanto Treonina teve uma severa diminuição. / not available

O manejo do nitrogênio (N) é considerado um dos mais complexos. Diante disso, estratégias de manejo que visam otimizar seu uso e minimizar perdas, devem ser consideradas. Com isso, os objetivos deste trabalho foram avaliar a) os teores de amônio (NH4+) e nitrato (NO3-) nas diferentes camadas de solo em função de manejo da irrigação e dose de nitrogênio ao longo do ciclo de desenvolvimento do milho e b) o efeito do parcelamento da adubação nitrogenada em cobertura, sob diferentes doses de N e disponibilidade hídrica, sobre o desempenho agronômico do milho em um Argissolo. O experimento foi conduzido em dois anos agrícolas, 2013/14 e 2014/15, em Eldorado do Sul-RS. O delineamento experimental utilizado foi de blocos casualizados, dispostos em parcelas subdivididas. Na parcela principal foram alocados os manejos da irrigação, que consistiram da aplicação de uma quantidade total de 160 mm de água, sendo uma de 80 mm aos oito dias após a aplicação da primeira dose da adubação nitrogenada e uma, também de 80 mm, 18 dias após, e de uma testemunha sem aplicação dessa quantidade de água. Esses tratamentos foram considerados, respectivamente, com e sem excesso hídrico. Na subparcela foi alocado os manejos da adubação nitrogenada, que constaram da aplicação de três doses, 100, 200 e 400 kg ha-1 de N. A aplicação do N foi de forma única em cobertura no milho (estádio V3-4, da escala de Ritchie et al. (1993) e parcelada em duas vezes, sendo metade no estádio V3-4 e metade no estádio V9-10. Uma testemunha sem aplicação de N em cobertura foi incluída. Para avaliar os teores de N do solo foram realizadas cinco coletas de solo durante o ciclo de desenvolvimento do milho, em quatro camadas: 0-10; 10-20; 20-30 e 30-40 cm, apenas em três doses de N e que foram aplicadas em uma só vez (0, 200 e 400 kg ha-1). A aplicação de um excesso hídrico reduz os teores de amônio e nitrato do solo, principalmente na maior dose de N aplicada (400 kg ha-1) e quando o milho é semeado em setembro. O teor de NH4+ no solo foi semelhante ao de NO3-, nas mesmas coletas e camadas do solo avaliadas, em ambos os manejos da irrigação. Doses maiores que 200 kg ha-1 de N não é recomendado o parcelamento da adubação nitrogenada. / The management of nitrogen (N) is considered one of the most complex in agriculture. Therefore, management strategies to optimize their use and minimize losses should be considered.Thus, the objectives of this study were to evaluate a) the content of ammonium (NH4+) and nitrate (NO3-) in the different layers of soil, associated with the irrigation management and nitrogen dose along the cycle of corn development b) the effect of splitting the nitrogen topdressing fertilization under different doses of N and water availability on the agronomic performance of corn in a Ultisol.The experiment was conducted in two agricultural years 2013/14 and 2014/15, in Eldorado do Sul, RS, Brazil. The experimental design used was randomized blocks with split plots. In main plots was allocated the managements of irrigation, which consisted of applying a total quantity of 160 mm of water. The first 80 mm were applied after eight days of the first dose of nitrogen fertilization and the remaining 80 mm, 18 days after the first dose. A control without application of this amount of water was also tested. These treatments were considered, respectively, with and without water excess. In the subplot, was allocated the managements of nitrogen fertilizer, which consisted of three different doses: 100, 200 and 400 kg ha-1 of N. The application of N was in unique ways in top dressing on corn (V3-4 stage, the scale of Ritchie et al. (1993)) and split into two times: V3-4, and V9-10. A control without nitrogen as top dressing was included. For evaluate the nitrogen levels in soil, were performed five samplings during corn development cycle, in four layers: 0-10; 10-20; 20-30 and 30-40 cm, associated with three different dose of N applied only once (0, 200 and 400 kg ha-1). The application of a water excess reduces ammonia and nitrate levels in soil, especially at the highest dose of N applied (400 kg ha-1) and when the corn is sown in September. The NH4+ content of the soil was similar to that of NO3-, on the same sampling and layers of soil evaluated in both management of irrigation. Results shows that on higher doses than 200 kg ha-1 of N, the parceling of nitrogen fertilization was not recommended.

Made available in DSpace on 2014-06-12T17:36:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5688_1.pdf: 2994190 bytes, checksum: 71f7c3cc37d50e576d3e3efc3780b4c1 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A contaminação das águas subterrâneas, tema central dessa pesquisa, está intimamente correlacionada à falta de controle dos órgãos competentes e fiscalizadores, os quais não se fazem presente apenas no que se refere à parte construtiva e operacional dos poços tubulares construídos em muitos casos indiscriminadamente, como também no processo de fiscalização continuada. A presença do Nitrato (NO3) na área de pesquisa em locais de vulnerabilidade alta dos aqüíferos em áreas das Grandes Concentrações Urbanas observadas in situ diz respeito à presença dos Aqüíferos, Beberibe, Barreiras, e o Boa Viagem, esse último existente principalmente em áreas de poços com poucas profundidades (poços amazonas), utilizado pela população menos esclarecida, geralmente com baixo poder aquisitivo, exposta a doenças veiculadas através da água consumida. Na área de pesquisa, definida como Área II (área foco), mais precisamente na subárea A , onde está localizada uma grande concentração habitacional, duas empresas de água mineral estão presentes (Santa Clara e Lisboa), nos bairros de Dois Unidos e Linha do Tiro, respectivamente (zona norte do Recife-PE). Nela foram encontradas situações preocupantes relacionadas com o (1) Aqüífero Barreiras, em alguns pontos já com índices elevados de Nitrato (NO3), e o (2) Aqüífero Beberibe, localizado em maiores profundidades, porém já propiciando a indícios de riscos futuros. Os riscos de contaminação do Nitrato (NO3) se fazem presente em geral através de poços mal construídos, independente de sua profundidade, pois apesar da causa da contaminação estão geralmente associada a áreas superficiais, afetadas por cargas contaminantes, poços perfurados de forma errada podem levar a contaminação dos aqüíferos, através de isolamentos mal elaborados (cimentação), ou simplesmente pela falta de camadas impermeabilizantes entre os aqüíferos mais superiores e os aqüíferos localizados mais abaixo, ou ainda através de rupturas ou colapso no seu revestimento ou filtros. No que diz respeito à Gestão Ambiental das Águas Minerais, as perspectivas não são muito animadoras, pois a presença crescente a cada ano no mercado de um novo conceito de água potável, definida como Água Adiciona de Sais, está em ritmo acelerado, inclusive com a presença de um grande número de poços tubulares clandestinos, construídos muitos deles por empresas sem respeito a qualquer norma técnica, e perfurados sem qualquer tipo de fiscalização, contribuindo para aumentar a possibilidade de contaminação das águas subterrâneas, comprometendo a qualidade das águas minerais explotadas de forma legal. O presente estudo tem por pretensão proporcionar informações com relação às águas minerais e mananciais subterrâneos da Região Metropolitana do Recife particularmente no que se refere aos riscos de poluição e contaminações relacionados a elevados índices de Nitrato, procurando mostrar as autoridades setoriais os possíveis riscos de contaminações, registrados durante as visitas realizadas in situ , bem como durante os trabalhos técnicos- científicos realizados durante a última década

Este trabalho descreve o desenvolvimento de um método eletroanalítico para determinação sequencial de nitrito (NO2-) e nitrato (NO3-), utilizando como técnica, a voltametria de pulso diferencial. O método se baseia na redução eletroquímica dos íons nitrato sobre um ultramicroeletrodo de ouro modificado in situ com cádmio depositado em regime de subtensão, e na seqüência, a remoção da monocamada de cádmio e a oxidação eletroquímica dos íons nitritos sobre o ultramicroeletrodo não modificado. Os ensaios voltamétricos para determinação quantitativa de nitrato e nitrito foram realizados em solução de NaClO4 0,1 molL-1 + HClO4 1,0x 10-3 molL-1 (pH = 3,3) preparada com água ultrapura. Utilizando as condições experimentais e os parâmetros voltamétricos otimizados, foram construídas curvas analíticas para determinação de nitrito e nitrato separadamente e também para determinação sequencial dos dois analitos. Para a determinação do NO2-, foi observado uma relação linear entre a corrente de pico e a concentração desse íon dentro do intervalo de concentração de 1,0 x 10-5 molL-1 a 1,1 x 10-4 molL-1, com um limite de detecção igual a 1,151 ± 0,091 µmolL-1 e limite de quantificação igual a 3,838 ± 0,091 µmolL-1. Para a determinação do NO3-, também foi observado uma relação linear entre corrente de pico e concentração desse analito dentro do intervalo estudado, que foi de 2,00 x 10-5 molL-1 a 2,50 x 10-4 molL-1. O limite de detecção encontrado foi 4,839 ± 0,275 µmolL-1 e o limite de quantificação 16,131 ± 0,275 µmolL-1. A determinação sequencial de nitrito e nitrato foi avaliada dentro do intervalo de concentração de 5,00 x 10-5 molL-1 a 2,50 x 10-4 molL-1 para NO3- e 1,00 x 10-5 molL-1 a 4,50 x 10-5 para NO2-. Para ambos os casos, a relação entre corrente de pico versus concentração do analito foi linear. Para a determinação sequencial os limites de detecção são 16,177 ± 0,794 µmolL-1 para NO3- e 2,243 ± 0,179 µmolL-1 para NO2- e os limites de quantificação são 53,922 ± 0,794 µmolL-1 para o NO3- e 7,476 ± 0,179 µmolL-1 para o NO2-. Os limites de detecção, os limites de quantificação e demais parâmetros estatísticos apresentados nesse trabalho, foram obtidos a partir de cálculos baseados em procedimentos descritos em Miller e Miller68 e Silva69. / This work describes the development of an electroanalytical method for sequential determination of nitrite (NO2-) and nitrate (NO3-), using as a technique, differential pulse voltammetry. The method is based on the electrochemical reduction of nitrate ions on a gold ultramicroelectrode modified in situ by underpotential deposition of cadmium, and subsequently, the removal of cadmium monolayer and the electrochemical oxidation of nitrite on ultramicroelectrode unmodified. The voltammetric analysis for quantitative determination of nitrate and nitrite were carried out in NaClO4 0.1 molL-1 + HClO4 1.0 x 10-3 molL-1 (pH = 3.3) prepared with ultrapure water. Using the optimized experimental conditions and voltammetric parameters, analytical curves were constructed for determination of nitrite and nitrate separately and for sequential determination of the two analytes. The relationship between peak current and concentration of NO2- were found to be linear in the concentration range between 1.0 x 10-5 molL-1 and 1.1 x 10-4 molL-1, with a detection limit of 1.151 ± 0.091 µmolL-1 and quantification limit of 3.838 ± 0.091 µmolL-1. For determination of NO3- was also observed a linear relationship between peak current and concentration of analyte within the concentration range studied, which was from 2.00 x 10-5 molL-1 to 2.50 x 10-4 molL-1. The detection limit was 4.839 ± 0.275 µmolL-1 and the quantification limit was 16.131 ± 0.275 µmolL-1. The sequential determination of nitrite and nitrate was assessed within concentration range from 5.00 x 10-5 molL-1 to 2.50 x 10-4 molL-1 for NO3- and from 1.00 x 10-5 molL-1 to 4.50 x 10-5 for NO2-. In both cases, the relationship between peak current versus analyte concentration were found to be linear. The detection limits for sequential determination are 16.177 ± 0.794 µmolL-1 for NO3- and 2.243 ± 0.179 µmolL-1 for NO2- and the quantification limits are 53.922 ± 0.794 µmolL-1 for NO3- and 7.476 ± 0.179 µmolL-1 for NO2-. The detection and quantification limits and other statistical parameters presented in this work were obtained from calculations based on procedures described in Miller and Miller68 and Silva69.

A estabilidade do nitrato de isoconazol foi avaliada frente às condições de degradação (hidrólise ácida, alcalina e oxidativa, radiação UV). A matéria-prima foi caracterizada e identificada pelos métodos disponíveis na monografia do insumo: características organolépticas, solubilidade, faixa de fusão, espectrofotometria de absorção molecular no infravermelho, cromatografia em camada delgada e testes qualitativos via úmida. Para a análise do produto utilizou-se metodologia analítica por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção na região ultravioleta (UV) em 225 nm. O processo de validação de metodologia analítica foi baseado de acordo com as guias de validação disponíveis na literatura. As amostras foram expostas às seguintes condições: ácido clorídrico 0,1 M, hidróxido de sódio 0,1 e 1 M e peróxido de hidrogênio 3%. A fotoestabilidade foi realizada em câmara de luz UV. Nas condições avaliadas, o fármaco é degradado apenas em meio alcalino (57% para a matéria-prima e 30% para o creme). Em meio fortemente alcalino (3h) o teor é reduzido em 90%. Finalmente, diferentes soluções da amostra hidrolisadas em meio alcalino, ajustadas em diferentes valores de pH e analisadas em espectrofotômetro ultravioleta demonstraram um ponto isosbéstico em aproximadamente 275 nm, sugerindo que o comportamento em meio alcalino descreve uma reação reversível. / The stability of isoconazole nitrate was evaluated under degradation conditions: acid, alkaline, oxidative hydrolyses and UV irradiation. The raw material was characterized and identified by the methodology available in the pharmacopeia: organoleptic characteristics, solubility, fusion temperature range, molecular absorption in the infrared, thin layer chromatography, and qualitative tests. For the analysis of the product, high performance liquid chromatography with UV detector (225 nm) was employed. The validation process of the analytical methodology was based in accordance with the available guides of validation in literature. The samples were exposed to the following conditions: chloridric acid (0.1 M), sodium hydroxide (0.1 and 1 M) and hydrogen peroxide (3 %). The photostability was carried on a UVchamber. Under the evaluated conditions, the drug was degraded solely in alkaline medium (57 % for the raw material and 30% for the cream). In strong alkaline medium (3 h), the initial content is reduced in 90 %. Finally, different sample solutions which were subjected to alkaline degradation, after pH adjustments and UV analysis have shown the presence of an isosbestic point in 275 nm, suggesting a reversible phenomenon in alkaline medium.

A percepção da dor resulta de inúmeros mecanismos de transmissão e codificação neural. Neste processo, participam diferentes moléculas e mensageiros químicos. Dados na literatura sugerem que as disfunções articulares afetam a função neural pela liberação de agentes pró-inflamatórios, como radicais livres de oxigênio e nitrogênio, resultando em dor crônica. Na lesão nervosa, uma alta produção de óxido nítrico (NO) e radicais superóxido (O2¯) resulta em formação de peroxinitrito (ONOO¯), um potente oxidante e agente citotóxico. Os sistemas antioxidantes regulam a produção de espécies reativas de oxigênio e envolvem inúmeras moléculas e enzimas de degradação. A manipulação articular vertebral de alta velocidade e baixa amplitude/quiropraxia parece ter influência sobre mecanismos de controle envolvidos na sensibilidade dolorosa. Uma vez que a oxi-hemoglobina é um agente redutor de ONOO¯, uma hipótese plausível para a ação analgésica da manipulação articular poderia ser o aumento do fluxo sanguíneo regional e diluição dos agentes pró-oxidantes formados localmente. Ainda, poderia atuar reduzindo a disponibilidade dos precursores do ONOO¯. A quiropraxia também poderia influenciar a atividade de enzimas envolvidas no equilíbrio entre pró- e antioxidantes. O presente estudo avaliou o efeito analgésico do tratamento de manipulação articular vertebral de alta velocidade e baixa amplitude em homens com cervicalgia crônica e a influência deste tratamento sobre parâmetros de estresse oxidativo e nitrosativo. Para avaliação da dor, utilizaram-se escala verbal numérica e o índice de incapacidade cervical. Os efeitos sobre o estresse oxidativo foram avaliados por medida da lipoperoxidação, determinada em eritrócitos e em plasma, pelas técnicas de quimiluminescência e xilenol laranja, respectivamente. As defesas antioxidantes foram determinadas em eritrócitos pela atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT). Determinaram-se também, os efeitos desse tratamento sobre as concentrações plasmáticas de nitritos+nitratos, metabólitos do NO. Para fins comparativos, foram feitas as mesmas determinações bioquímicas em amostras de homens saudáveis e assintomáticos para dor. Os valores de lipoperoxidação sanguínea em eritrócitos e em plasma não sofreram modificações significativas ao longo do tratamento. As concentrações plasmáticas de nitritos+nitratos também não modificaram significativamente e não diferiram dos valores obtidos em indivíduos controle. A atividade antioxidante da enzima SOD em indivíduos com dor foi similar àquela do controle assintomático antes e ao longo do tratamento. Contudo, observamos aumento significativo (P < 0,05) na atividade da enzima catalase ao longo do tratamento de manipulação articular vertebral em homens com cervicalgia (MD ± EP, antes: 3,49 ± 0,26 pmoles/mg prot; durante: 4,80 ± 0,45 pmoles/mg prot.; após tratamento: 5,30 ± 0,41 pmoles/mg prot). Ainda, os valores de catalase após o tratamento assemelharam-se aos valores encontrados em indivíduos saudáveis (4,35 ± 0,42 pmoles/mg prot). Os efeitos sobre esse sistema antioxidante foi acompanhado de redução na intensidade da dor percebida pelos pacientes (P < 0,05) e melhora nos índices de incapacidade cervical (P < 0,05). Além dos efeitos analgésicos percebidos pelos pacientes, a manipulação articular vertebral de alta velocidade e baixa amplitude/quiropraxia foi capaz de interferir positivamente no desempenho de componentes dos sistemas antioxidantes, como a enzima catalase. Contudo, estudos complementares são necessários para melhor compreensão dessa relação.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-19T12:26:10Z No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 18256 bytes, checksum: ec60d71ddac70af12d876c9945806d90 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-19T12:26:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 18256 bytes, checksum: ec60d71ddac70af12d876c9945806d90 (MD5) Previous issue date: 2005-07-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Neste trabalho foram realizadas a clonagem e a caracterização parcial de um fragmento de 7,1Kb contendo o gene que codifica a nitrato redutase no fungo basidiomiceto Crinipellis perniciosa. A análise da seqüência parcial desse fragmento revelou a organização em cluster do gene nia com o gene que codifica a nitrito redutase e permitiu uma comparação filogenética com seqüências homólogas em outros fungos filamentosos. Foi realizada, também, a análise parcial comparativa das seqüências putativas das proteínas homólogas ao regulador geral positivo AREA, ao regulador específico NIRA e ao transportador de nitrato CRNA, depositadas no banco de dados do projeto genoma de C. perniciosa. O alinhamento das seqüências revelou maior proximidade genética de C. perniciosa ao fungo basidiomiceto Hebeloma cylindrosporum. A caracterização do gene nia em dez isolados de C. perniciosa de distintos biótipos e regiões geográficas por PCR-RFLP e hibridização revelou polimorfismo para os isolados do biótipo-S e biótipo-L. Não foi possível agrupar os isolados por hospedeiro ou região geográfica a partir da comparação das seqüências do gene que codifica a nitrato redutase, porém, os dados evidenciaram variabilidade genômica intraespecífica nessa espécie. A transformação da linhagem mutante niaD- de Penicillium griseoroseum, PG63, com o plasmídeo contendo o fragmento de 7,1 Kb resultou no isolamento de poucos transformantes. A complementação da mutação em P. griseoroseum, com o gene heterólogo do basidiomiceto C. perniciosa demonstrou que o gene niaCP é expresso e funcional, sugerindo estar sujeito a um controle de regulação similar ao do gene niaD desse organismo. A análise da regulação do gene nia de C. perniciosa por RT-PCR foi feita a partir de RNA total extraído de micélio cultivado em diferentes fontes de nitrogênio. O transcrito detectado na presença de nitrato como indutor e ausência de fontes de nitrogênio prontamente metabolizáveis sugere uma via de regulação específica e geral. A transcrição do gene niaCP foi ativada também no micélio cultivado no meio acrescido do fruto de cacau liofilizado e moído. Estes resultados sugerem uma provável importância da enzima nitrato redutase para C. perniciosa durante o seu desenvolvimento no hospedeiro. / In this study cloning and partial characterization of a 7.1Kb fragment containing the gene that encodes nitrate reductase in the basidiomycete fungus Crinipellis perniciosa were performed. The analysis of the partial sequence of this fragment revealed a cluster organization of nia gene with the gene encoding nitrite reductase and allowed a phylogenetic comparison among homologous sequences of other filamentous fungi. A partial comparative analysis was done for putative sequences of proteins homologous to the positive general regulator AREA, the specific regulator NIRA and the nitrate transporter CRNA deposited in the data bank of the genome project of C. perniciosa. Sequences alignment revealed a closer genetic proximity of C. perniciosa to Hebeloma cylindrosporum. The characterization of nia gene in ten isolates of C. perniciosa from different biotypes and geographic regions of C. perniciosa by PCR-RFLP and hybridization revealed a polimorfism for isolates of the biotype S and biotype L. It was not possible to group the isolates by host or geographic region through nitrate reductase gene sequences, but these data evidenced an intraspecific genomic variability in this species. The transformation of niaD- mutant of Penicillium griseoroseum, PG63, with the plasmid containing the xi7.1Kb fragment resulted in the isolation of few transformants. The complementation of the mutation in P. griseoroseum with the heterologous gene of the basidiomycete C. perniciosa showed that niaCP gene is expressed and functional, which suggests that it is under a regulation control similar to the one of niaD gene of this organism. The analysis of the regulation of nia gene in C. perniciosa by RT-PCR was performed from total RNA extracted from cultivated mycelium in different nitrogen sources. The transcript detected in the presence of nitrate as inductor and in the absence of nitrogen sources readily metabolized suggests a specific and general regulation pathway. The transcription of niaCP gene was also activated in the mycelium cultivated in the medium added with lyofilized and triturated cacao fruit. These results suggest a probable importance of the nitrate reductase enzyme for C. perniciosa during its development in the host.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-29T14:42:15Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 389089 bytes, checksum: 30dd70ab808dcca3fd35b609f02f468b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-29T14:42:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 389089 bytes, checksum: 30dd70ab808dcca3fd35b609f02f468b (MD5) Previous issue date: 2005-02-25 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Com o objetivo de estabelecer a fração da lâmina de irrigação em que o pulso de nitrogênio (amônio e nitrato), potássio e fósforo deve ser aplicado e o fracionamento das doses desses nutrientes, de modo a localizá-los na profundidade adequada e determinar a distribuição de amônio, nitrato, potássio e fósforo, aplicados por fertirrigação, realizou-se um experimento em laboratório, utilizando colunas de percolação. Os tratamentos corresponderam a um fatorial 4 x (1 + 7), sendo quatro Latossolos de Minas Gerais (dois Latossolos Vermelho-Amarelos distróficos, um Latossolo Vermelho distroférrico e um Latossolo Vermelho distrófico), uma testemunha (aplicação de água deionizada) e sete formas de aplicação de 1 mmol c de N-NH 4 + , 1 mmol c de N-NO 3 - , 2 mmol c de K e 2 mmol c de P. A lâmina de água foi dividida em cinco frações iguais (F i ) e a dose dos nutrientes aplicada integralmente (D), ou fracionada em duas (D 1/2 ) ou em três vezes (D 1/3 ). Assim, a aplicação dos nutrientes foi feita segundo o esquema: F 2 D, F 3 D, F 4 D, F 2 D 1/2 F 3 D 1/2 , F 3 D 1/2 F 4 D 1/2 , F 2 D 1/2 F 4 D 1/2 ou F 2 D 1/3 F 3 D 1/3 F 4 D 1/3 . Subamostras foram utilizadas na análise de N-NH 4 + , N- NO 3 - , potássio e fósforo, determinando-se o perfil de distribuição desses nutrientes. A mobilidade apresentou esta ordem: nitrato > amônio > potássio > fósforo, nos solos LVAd1, LVAd2 e LVd. Já para o solo LVdf, a ordem foi amônio > nitrato > potássio > fósforo. A quantidade de água acrescentada a cada coluna, inferior a meio volume de poros, não foi suficiente para deslocar o fósforo além do primeiro anel. Para os outros íons em estudo, a localização em maior profundidade, quando aplicados como pulso único, foi verificada com a maior concentração no pulso (D > D 1/2 > D 1/3 ) e com a maior lâmina de água posterior à sua aplicação (F 2 D > F 3 D > F 4 D e F 2 D 1/2 F 3 D 1/2 > F 3 D 1/2 F 4 D 1/2 ). Concluiu-se que é conveniente utilizar tratamentos que localizem os nutrientes em maior profundidade na fertirrigação de culturas perenes e, mais superficialmente, nas culturas de ciclo curto. Em acréscimo, a mobilidade diferencial de nitrogênio e potássio exigiria dosagem cuidadosa desses nutrientes na solução, a fim de evitar perdas de nitrogênio por lixiviação, ou localização excessivamente superficial do potássio. A baixíssima mobilidade do fósforo mostra que a fertirrigação não seria uma técnica apropriada para sua incorporação no perfil do solo, visando à fertilização das culturas. / An experiment was carried out under laboratory conditions using percolation columns, to establish the irrigation lamina fraction in which nitrogen (ammonium and nitrate), potassium and phosphorus pulses must be applied as well as the optimum dose fractioning of these nutrients so as to locate their adequate depth and determine the distribution of fertigated ammonium, nitrate, potassium and phosphorus. The treatments consisted of a 4 x (1 + 7) factorial, using four Latosols from Minas Gerais (two dystrophic Red-Yellow, one dystroferric Red, and one dystrophic Red), a control (aplication of deionized water) and seven modes of application of 1 mmol c of N-NH 4 + , 1 mmol c of N-NO 3 - , 2 mmol c of K and 2 mmol c of P. The irrigation lamina was divided into five equal fractions (F i ) and the nutrient dose was applied whole (D), or fractioned two (D 1/2 ) or three times (D 1/3 ). Hence, nutrient application was performed according to the following xscheme: F 2 D, F 3 D, F 4 D, F 2 D 1/2 F 3 D 1/2 , F 3 D 1/2 F 4 D 1/2 , F 2 D 1/2 F 4 D 1/2 or F 2 D 1/3 F 3 D 1/3 F 4 D 1/3 . Sub-samples were used to analyze N-NH 4 + , N-NO 3 - , potassium and phosphorus, through the determination of the profile of distribution of these nutrients. Mobility was in the following order: nitrate > ammonium > potassium > phosphorus, on soils LVAd1, LVAd2 and LVd. For the soil LVdf, the order was: ammonium > nitrate > potassium > phosphorus. The amount of water added to the column, lower than half pore per volume, was not sufficient to displace phosphorus beyond the first ring. Regarding the other ions studied, localization at a higher depth when applied as a single pulse, was verified with a higher pulse concentration (D > D 1/2 > D 1/3 ) and with a greater irrigation lamina following its application (F 2 D > F 3 D > F 4 D and F 2 D 1/2 F 3 D 1/2 > F 3 D 1/2 F 4 D 1/2 ). It was concluded that treatments to locate the nutrients at a higher depth should be used for fertigation of perennial cultures and at lower depths for short cycle cultures. In addition, the differential mobility of nitrogen and potassium would require a careful dosage of these nutrients in the solution to prevent nitrogen losses due to leaching, or excessively superficial localization of potassium. The extremely low mobility of phosphorus shows that fertigation would not be an appropriate technique for incorporation of this mineral into soil for crop fertilization purposes.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-10T16:44:41Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 604815 bytes, checksum: 299964cd825884ce449176c3d3e98887 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-10T16:44:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 604815 bytes, checksum: 299964cd825884ce449176c3d3e98887 (MD5) Previous issue date: 2001-02-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O gene que codifica nitrato redutase em Penicillium expansum foi isolado de um banco genômico construído no vetor fago lambda EMBL3. Um fragmento de DNA de 3,17 Kb, contendo parte da região codificadora do gene da nitrato redutase de Penicillium chrysogenum, foi utilizado como sonda. Quatro fagos recombinantes foram isolados e denominados λPENR1, λPENR3, λPENR5 e λPENR6, com fragmentos de DNA clonados de 14,4; 14,4; 12,3 e 12,6 Kb, respectivamente. A análise por hibridização do DNA dos fagos recombinantes, clivado com Sal I, identificou fragmentos cujos tamanhos correspondiam a 4,7 Kb (λPENR1), 6,0 Kb (λPENR3), 8,4 Kb (λPENR5) e 7,6 Kb (λPENR6). Para a construção do mapa físico de restrição do fago recombinante λPENR3, foram feitas clivagens simples e duplas com enzimas de restrição. A análise de restrição e hibridização dos fragmentos de DNA do fago recombinante λPENR3 revelou que o gene nia estava presente em um fragmento de 6,5 Kb. Este fragmento foi subclonado no plasmídeo pBluescript SK+, e o plasmídeo recombinante foi denominado pPENR. Para a construção do mapa físico de restrição de pPENR, foram feitas clivagens simples e duplas com enzimas de restrição. O plasmídeo recombinante pPENR foi utilizado na transformação dos mutantes Nia^- de P. expansum e Penicillium griseoroseum, sendo obtida uma freqüência de 16 transformantes por μg de DNA. / The gene encoding nitrate reductase from Penicillium expansum was isolated from a lambda EMBL3 genomic DNA library. A 3.17 Kb DNA fragment containing part of the coding region for nitrate reductase from Penicillium chrysogenum was used as a probe. Four recombinant phages were isolated and the recombinant phages were labeled λPENR1, λPENR3, λPENR5 e λPENR6, containing cloned DNA fragments of 14.4; 14.4; 12.3 and 12.6 Kb, respectively. DNA hybridization analysis of the recombinant phages cleaved with Sal I identified DNA fragments whose sizes were 4.7 Kb (λPENR1), 6.0 Kb (λPENR3), 8.4 Kb (λPENR5) and 7.6 Kb (λPENR6). For the construction of the a physical restriction map of the recombinant phage λPENR3, single and double digestions with restriction enzimes were performed. Restriction and hybridization analysis of the recombinant phage λPENR3 DNA fragments showed that the nia gene was present in a 6.5 Kb DNA fragment. This fragment was subcloned in the plasmid pBluescript SK+ resulting in plasmid pPENR. For the construction of the a physical restriction map of pPENR, single and double digestions with restriction enzymes were carried out. The recombinant plasmid pPENR was used for transformation of nitrate non-utilising strains of P. expansum and Penicillium. griseoroseum, and a frequency of 16 transformants per μg of DNA was achieved.