Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-08T20:21:01Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Diego Moura Soares.pdf: 1795202 bytes, checksum: 5acbafbcd9505be445c74529d09f5ac5 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-16T22:36:03Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Diego Moura Soares.pdf: 1795202 bytes, checksum: 5acbafbcd9505be445c74529d09f5ac5 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T22:36:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Diego Moura Soares.pdf: 1795202 bytes, checksum: 5acbafbcd9505be445c74529d09f5ac5 (MD5) Previous issue date: 2017-02-16 / FACEPE / O citrato de sildenafila é um potente inibidor seletivo da fosfodiesterase-5 e a sua descoberta representou um grande avanço no tratamento da disfunção erétil. Atualmente, este fármaco vem mostrando efeitos positivos no que diz respeito à diminuição do processo inflamatório e redução do estresse oxidativo, com conseqüente redução do dano tecidual, em diversas patologias. Como o processo inflamatório é um fator primordial na destruição dos tecidos periodontais decorrente da periodontite, objetivou-se avaliar o efeito do citrato de sildenafila na prevenção e progressão da periodontite experimental (PE) em ratos. Este estudo foi dividido em dois grupos. Grupo 1 (n=18), a droga foi administrada previamente e apenas 15 dias depois a PE foi induzida, permanecendo mais 15 dias de administração diária da droga. No grupo 2 do estudo (n=18) a administração da droga e a indução da PE iniciaram no mesmo dia e se mantiveram por mais 15 dias. Nos dois grupos os animais foram divididos em três subgrupos (n=6). Subgrupo placebo, doses diárias de veículo e indução da PE. Subgrupo controle, doses diárias de 10mg/kg de sildenafila sem indução da PE. Subgrupo sildenafila, indução da PE e doses diárias de 10mg/kg de sildenafila. A PE foi induzida no primeiro molar inferior esquerdo, através de ligadura e decorrido o período experimental, os animais foram eutanasiados e as mandíbulas removidas e analisadas através de microtomografia computadorizada (microCT), histologia e histomorfometria. Os dados foram tabulados e submetidos ao teste T para amostras independentes ou teste de Mann Whitney, de acordo com a distribuição das variáveis, considerando um intervalo de confiança de 95%. No grupo 1 do estudo, não observou-se diferenças significativas quando comparado o grupo que recebeu veículo associado a PE com o grupo tratado com droga, em nenhuma das análises realizadas. No grupo 2, a partir da análise por microCT verificou-se, diferença estatística na área de furca quando comparado o subgrupo controle com o subgrupo que recebeu doses diárias de sildenafila associado a PE, com um menor padrão de reabsorção óssea para o grupo sildenafila. Da mesma forma, o grau de inflamação mostrou diferença estatística quando comparou a área de furca dos subgrupos controle e sildenafila, com menores escores de inflamação para o grupo sildenafila, no grupo 2 do estudo. Além disso, observou-se formação de microabscessos e áreas de osso necrótico em todos os espécimes avaliados do subgrupo placebo no segundo grupo do estudo, este fato não foi verificado no subgrupo tratado com sildenafila. Na análise histomorfométrica houve uma tendência a menor reabsorção óssea para o subgrupo sildenafila quando comparado com o subgrupo placebo, no grupo 2 do estudo, porém sem significância estatística. Conclui-se que doses diárias de 10 mg/kg de citrato de sildenafila, diminuiu o processo inflamatório na região de furca, bem como a reabsorção óssea quando utilizado para fins de tratamento da periodontite experimental em ratos. / Sildenafil Citrate is a potent selective phosphodiesterase-5 inhibitor and its discovery represented a breakthrough in the treatment of erectile dysfunction. Currently, this drug has been showing positive effects with regard to the reduction of inflammatory process and reduction of oxidative stress, with consequent reduction of tissue damage, in several pathologies. The effect of sildenafil citrate on the prevention and progression of experimental periodontitis (PE) in rats was evaluated as the inflammatory process is a primary factor in the destruction of periodontal tissues due to periodontitis. This study was divided into two groups. Group 1 (n = 18), the drug was administered previously and only 15 days later PE was induced, remaining another 15 days of daily administration of the drug. In group 2 of the study (n = 18) the administration of the drug and the induction of PE started the same day and were maintained for another 15 days. In both groups, the animals were divided into three subgroups (n = 6). Placebo subgroup, daily vehicle doses and PE induction. Subgroup control, daily doses of 10mg / kg sildenafil without induction of PE. Subgroup sildenafil, induction of PE and daily doses of 10mg / kg of sildenafil. PE was induced in the lower left first molar by ligation and after the experimental period the animals were euthanized and the jaws removed and analyzed by computerized microtomography (microCT), histology and histomorphometry. The data were tabulated and submitted to the T test for independent samples or Mann Whitney test, according to the distribution of the variables, considering a 95% confidence interval. In group 1 of the study, no significant differences were observed when comparing the group that received vehicle associated to PE with the drug-treated group, in none of the analyzes performed. In group 2, a statistical difference was observed in the furcation area when the control subgroup was compared with the subgroup receiving daily doses of sildenafil associated with PE, with a lower bone resorption pattern for the sildenafil group. Likewise, the degree of inflammation showed statistical difference when comparing the furcation area of the control and sildenafil subgroups, with lower inflammation scores for the sildenafil group in group 2 of the study. In addition, formation of microabscesses and necrotic bone areas were observed in all assessed specimens of the placebo subgroup in the second study group, this fact was not found in the subgroup treated with sildenafil. In the histomorphometric analysis, there was a trend towards lower bone resorption for the sildenafil subgroup when compared to the placebo subgroup, in group 2 of the study, but without statistical significance. It is concluded that daily doses of 10 mg / kg sildenafil citrate decreased the inflammatory process in the furca region as well as bone resorption when used for the treatment of experimental periodontitis in rats.

CARVALHO, M. A. J. Efeito do sildenafil em modelo colinérgico de convulsão em camundongos e de estresse In vitro: abordagem comportamental e neuroquímica. 2016. 103 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-07-19T11:57:34Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_majcarvalho.pdf: 1426126 bytes, checksum: 2bf8f7e395ae3f30d2ddf4f50c50f3c2 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-07-19T11:57:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_majcarvalho.pdf: 1426126 bytes, checksum: 2bf8f7e395ae3f30d2ddf4f50c50f3c2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-19T11:57:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_majcarvalho.pdf: 1426126 bytes, checksum: 2bf8f7e395ae3f30d2ddf4f50c50f3c2 (MD5) Previous issue date: 2016-05-27 / Seizures are the transient behavior changes resulting from rhythmic outbreaks, synchronic and disordered populations of brain neurons. Sildenafil is a selective inhibitor of PDE5 which enhances erectile function due to increased cytoplasmic levels of cGMP. Some experimental studies and case reports suggest that sildenafil may exert pro convulsive activity. This work aimed to study the effects of sildenafil on seizure pilocarpine model in mice and on the viability of astrocytes in vitro before the cholinergic stress. Swiss male mice (25-34g) were pre-treated with sildenafil (2.5, 5,. 10 or 20mg / kg, ip, n = 8) and in acute treatment for 7 days. Half an hour after the last dose of sildenafil convulsion was induced in all animals by the administration of pilocarpine 400 mg / kg, ip. (P400). In behavioral analysis, the time to occurrence of the first seizure and death after the tests were dissected three brain areas were recorded (pre-frontal cortex, hippocampus and striatum) to determine the activity of acetylcholinesterase, the degree of lipid peroxidation, by measuring the concentration of malondialdehyde (MDA), the concentration of nitrite and also the participation of glutathione reductase antioxidant defense (GSH). In vitro assay, cell viability was determined cortical astrocytes after treatment with different concentrations of Sildenafil + pilocarpine. Data were analyzed by ANOVA and Student-Newman-Keuls test and post-test, for in vivo tests and ANOVA followed by Bonferroni post-test, for in vitro experiments. It was observed that sildenafil reduced the latency of convulsions and death at doses of 10 and 20 mg / kg in both acute pretreatment such as 7 days. Regarding the parameters of oxidative stress and antioxidant defense, an increase of MDA levels in all areas at doses of 10 and 20 mg / kg in the acute pretreatment, whereas in pretreatment for 7 days there were increasing levels of MDA in the prefrontal cortex at the dose of 20 mg / kg and the hippocampus in the dose of 10 and 20 mg / kg. The nitrite concentration was increased at doses of 10 and 20 mg / kg in the prefrontal cortex and hippocampus in doses of 10 and 20 mg / kg and in the striatum at a dose of 20 mg / kg pre-treatment for 7 days, and in acute pretreatment was increased in the frontal cortex pre dose of 20 mg / kg and in the striatum at a dose of 10mg / kg. Regarding the reduced glutathione did not change in group pretreated with sildenafil compared to P400 + P400 group. The combined treatment of sildenafil (1000, 500, 250, 125, 75, 37 ug / ml) and pilocarpine (IC 50 - Cytotoxicity index to 50% of the cell population study corresponding to 31.83 mM) caused a reduction in viability cells only in the concentration of 1000 ug / mL, suggesting that astrocytes can be involved in the possible neurotoxicity of sildenafil in the convulsive process, requiring further studies.. Our findings suggest sildenafil has a proconvulsivant activity related to cholinergic mechanisms and demonstre oxidizing action in the highest doses studied. / Convulsões consistem em alterações transitórias do comportamento decorrente das deflagrações rítmicas, sincrônicas e desordenadas de populações de neurônios cerebrais. Sildenafil é um inibidor seletivo da PDE5 que potencializa a função erétil devido ao aumento dos níveis citoplasmáticos de GMPc. Alguns estudos experimentais e relatos de caso apontam que o sildenafil pode exercer uma atividade pró-convulsiva. Esse trabalho teve como objetivo estudar os efeitos do sildenafil em modelo de convulsão induzida por pilocarpina em camundongos e sobre a viabilidade de astrócitos in vitro diante do estresse colinérgico. Camundongos Swiss machos (25-34g) foram pré-tratados com o sildenafil (2,5; 5; 10 ou 20mg/kg, ip., n= 8) em tratamento agudo e por 7 dias. Meia hora após a última dose de sildenafil foi induzida a convulsão em todos os animais através da administração de pilocarpina 400 mg/kg, ip. (P400). Na análise comportamental, foram registrados os tempos para ocorrência da primeira convulsão e morte e, após os testes, foram dissecadas três áreas cerebrais (córtex pré-frontal, hipocampo e corpo estriado) para determinar a atividade da acetilcolinesterase, o grau de peroxidação lipídica, pela mensuração da concentração de malondialdeido (MDA), a concentração de nitrito e também a participação da defesa antioxidante glutationa redutase (GSH). No ensaio in vitro, foi determinada a viabilidade celular de astrócitos corticais após o tratamento com diferentes concentrações de sildenafil+pilocarpina. Os dados foram analisados por ANOVA e Student-Newman-Keuls como pós-teste, para os ensaios in vivo, e ANOVA seguido pelo pós-teste de Bonferroni, para as experimentações in vitro. Foi observado que o sildenafil reduziu a latência de convulsão e de morte nas doses de 10 e 20 mg/kg tanto no pré-tratamento agudo como por 7 dias. Em relação aos parâmetros de estresse oxidativo e defesa antioxidante, houve aumento dos níveis de MDA em todas as áreas nas doses de 10 e 20 mg/kg no pré-tratamento agudo, enquanto que no pré-tratamento por 7 dias houve aumento dos níveis de MDA no córtex pré-frontal na dose de 20 mg/kg e no hipocampo nas doses de 10 e 20 mg/kg. A concentração de nitrito foi aumentado nas doses de 10 e 20 mg/kg no córtex pré-frontal e hipocampo nas doses de 10 e 20 mg/kg e no corpo estriado na dose de 20 mg/kg no pré-tratamento por 7 dias e no pré-tratamento agudo houve aumento no córtex pré frontal na dose de 20 mg/kg e no corpo estriado na dose de 10mg/kg. Em relação a glutationa reduzida, não houve alteração nos grupos pré-tratados com sildenafil+P400 em relação ao grupo P400. O tratamento combinado entre sildenafil (1000, 500, 250, 125, 75, 37 μg/mL) e pilocarpina (IC 50 - índice de citotoxicidade para 50% da população celular em estudo que correspondente a 31,83 mM) causou redução da viabilidade das células apenas na concentração de 1000 μg/mL, sugerindo que os astrócitos podem estar envolvidos na possível neurotoxicidade do sildenafil no processo convulsivo, sendo necessário mais estudos. Nossos achados sugerem que o sildenafil possui uma atividade pró-convulsivante relacionado a mecanismos colinérgicos e que apresentou ação oxidante nas doses mais altas estudadas.

Título de Ingeniero en Biotecnología Molecular. / Durante la maduración de los frutos, existen cambios a nivel fisiológico y bioquímico, como son: variaciones en la respiración, textura, color y acidez; como consecuencia de la remodelación de la pared celular, síntesis y degradación de pigmentos y variaciones en la acumulación de azúcares y ácidos orgánicos. Los dos últimos, son utilizados por las células vegetales como sustratos respiratorios, y particularmente los ácidos orgánicos como el ácido cítrico y málico tienden a ser degradados a lo largo de la maduración. En contraposición a lo anterior, estudios previos realizados en nuestro laboratorio en frutos de Annona cherimola var. Concha Lisa, se encontró mayores niveles de ácido cítrico, mayor actividad citrato sintasa y una mayor acumulación de transcrito codificante para la enzima citrato sintasa (CS) en el estado de madurez de consumo en comparación con el estado analizado en cosecha. Considerando lo anterior, la enzima CS parece tener un rol importante en la acumulación de citrato en frutos de chirimoya. Como una primera aproximación al estudio de su posible función, este seminario de título tiene por objetivo general caracterizar Ac-mCS mediante su localización subcelular en N. tabacum y la transformación estable de S. lycopersicum, a través de dos estrategias enfocadas en la expresión heteróloga de la enzima mCS de A. cherimola var. Concha lisa. Se observó mediante microscopía confocal, que la enzima Ac-mCS posee localización mitocrondial en hojas de Nicotiana tabacum. Por otro lado, para la transformación de tomate se construyeron y utilizaron dos vectores para la expresión heterologa de Ac-mCS bajo el control del promotor CaMV 35S y de un fragmento del promotor de poligalacturonasa de tomate (PG), sometiéndose los explantes de tomate a la transformación y organogénesis somática, pero sin lograr obtener plantas transgénicas adultas. / During fruit ripening, biochemichal and phisiological changes occur, such as variations in respitarory rate, texture, colour, and acidity; as a consequence of the cell wall remodelation, pigments synthesis and degradation, and variations in the accumulation of sugar and organic acids. The latter ones, are vegetable cell metabolic substrates, and particularly organic acids such as citric and malic acid, tend to be degraded during ripening. However, previous studies held in our laboratory in Annona cheriloma cv Concha Lisa fruits, showed increased levels in citric acid, increased citrate synthase activity and large mitochondrial citrate synthase (Ac-mCS) transcript accumulation at consumption maturity compared to the analyses performed at harverst. Considering all these points, citrate synthase seems to account for an important role in the citrate accumulation in cherimola fruit. As a first approach to the potential function of this enzyme, the main objective of this work was to characterize Ac-mCS by subcellular localization in N. tabacum, and stable transformation of S. lycopersicum, using two strategies, both of them focused in the mCS enzyme heterologue expression from A. cherimola cv. Concha lisa. Confocal microscopy in Nicotiana tabacum leaves revealed that the Ac-mCS enzyme has a mitochondrial localization. On the other hand, two expression vectors were built and used to express Ac-mCS under the transcriptional control of the CaMV 35S promoter or the tomato polygalacturonase promoter fragment (PG).Tomato explants were, subjected to the transformation process, and somatic organogenesys, but no adult transgenic plants were obtained.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-05-04T10:38:55Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2326379 bytes, checksum: 85cf46696829782c1197895cf2033483 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-04T10:38:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2326379 bytes, checksum: 85cf46696829782c1197895cf2033483 (MD5) Previous issue date: 2015-02-24 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O Citrato é um ligante polidentado muito importante na complexação de metais. No solo pode também ser usado como agente quelante em fitoextração. Desse modo, sua determinação em solução e em solo é muito importante para a otimização de sistemas de liberação controlada. Assim, foi desenvolvido um método espectrofotométrico inverso baseado na relação entre a concentração analítica de citrato no meio e a diminuição da absorbância do complexo. Foi estudado incialmente o complexo de Fe(II)-ortofenantrolina. Entretanto, mesmo otimizando as condições, a sensibilidade não foi adequada. Foi necessário trabalhar em uma faixa analítica formada por concentrações mais elevadas do analito. Desse modo, julgou- se adequado a seleção de outro complexo colorido para a obtenção de um método adequado para a determinação de citrato. Para isso estudou-se o complexo cromo(III)-EDTA. As curvas analíticas apresentaram comportamento quadrático de maneira que, na otimização, foi utilizada a sensibilidade analítica mínima como resposta. Para seleção dos termos significativamente diferente de zero foram utilizadas regressões lineares múltiplas tipo stepwise. Um planejamento fatorial 23 com ponto central foi realizado para avaliar a influência do pH, concentração de cromo(III) e EDTA no meio. Apenas as duas últimas variáveis foram significativas considerando os intervalos das variáveis. Um planejamento baseado na matriz de Doehlert, para essas duas variáveis com 3 pontos centrais foi realizado. Após aplicar uma expansão da matriz o ponto ótimo foi: concentração de Cr(III) 4,2 mmol L -1 e de EDTA, 5,1 mmol L-1 em pH 4,0. O método otimizado apresentou um bom ajuste R2=0,998 e desvio padrão dos resíduos igual 0,0085, na faixa analítica de 0,29 mmol L-1 a 5,0 mmol L-1. O desvio padrão relativo (N=7) foi inferior a 1,71%. Os limites de detecção e de quantificação foram 0,087 e 0,29 mmol L-1, respectivamente. Ensaios de adição e recuperação de citrato em amostras de solo apresentaram recuperações entre 98,0% e 122,0%. Foi proposto um sistema de liberação modulada por equilíbrio de precipitação. Foi avaliada a influência do pH e da concentração de cálcio na solução receptora do sistema de liberação modulada. A concentração de citrato na solução desse sistema foi determinada pelo método espectrofotométrico baseado na competição do ligante com o complexo Cr(III)- EDTA. Para caracterizar o mecanismo de liberação, foram aplicados modelos cinéticos de pseudo 2a ordem, Noyes-Whitney e difusão intrapartícula, sendo que o modelo de Noyes foi o que apresentou o melhor ajuste, constatando que a liberação ocorre por processos de difusão. Em todas as condições testadas, as concentrações de citrato atingiram o equilíbrio após 25 horas de liberação, observando-se diferentes taxas de liberação do citrato de acordo com as condições experimentais. A influência das variáveis foi avaliada por ANOVA, com nível de confiança de 95% usando a concentração de citrato no equilíbrio como resposta. O pH e a concentração de cálcio não influenciaram significativamente a taxa de liberação, assim como a interação entre os dois fatores. / Citrate is an important polydentate ligand for complexation of metals. It can also be used as chelating agent in phytoextraction in soil. Thus, determination in solution and soil is very important for the optimization of controlled release systems. Therefore, it was developed a inverse spectrophotometric method based on the relationship between citrate concentration and decreasing absorbance of the complex. It was initially studied Fe(II)-1,10-phenantroline complex. However, even with optimization, the analytical sensitivities obtained were not high enough, it was necessary to work in an analytical range with higher concentrations of analyte. Thus, it was considered appropriate to select another colored complex to obtain an adequate method for determination of citrate. Thereby, it was studied Cr(III)-EDTA complex. In the optimization, analytical curves presented quadratic behavior, it was used the minimum analytical sensitivity. For selection of terms significantly different from zero were used linear regressions multiple stepwise. A 23 factorial design was made with a central point to evaluate the influence of pH, chromium(III) concentration and EDTA. Considering the ranges of the variables, only the last two variables were significant. A planning based on Doehlert matrix for these two variables with 3 central points was performed. After to apply a matrix expanding the optimum concentration was: concentration of Cr(III) 4.2 mmol L -1 and EDTA, 5.1 mmol L -1 at pH 4.0. The optimized method display a good adjustment R2 = 0.998 and standard deviation of residues equal to 0.0085, analitycal range between 0.29 mmol L 1. -1 to 5.0 mmol L - The relative standard deviation (N = 7) was less than 1.71%. The limits of detection and quantification were 0.087 and 0.29 mmol L -1, respectively. Recovery citrate test in soil samples presented recoveries between 98,0% and 122,0%. One modulated delivery system by precipitation equilibrium has been proposed. The influence of pH and calcium concentration in the receptor solution modulated delivery system was evaluated. The concentration of citrate in the solution of the system was determined by the spectrophotometric method based on the competition between the ligand and Cr(III)-EDTA complex. To characterize the releasing mechanism were applied kinetic models of pseudo 2nd order, Noyes-Whitney and intraparticle diffusion, and the Noyes model showed the best fitting, noting that the release occurs by diffusion processes. In all conditions tested, the citrate concentrations reached equilibrium after 25 hours of release, observing different release rates of citrate according to the experimental conditions. The influence of the variables was evaluated by ANOVA with 95% confidence level using the citrate concentration at equilibrium as a response. The pH and the calcium concentration did not influence the rate of release as well as the interaction between the two factors.

O interesse na aplicação de embalagens ativas para conservação de alimentos tem aumentado, bem como uma maior demanda por substâncias antimicrobianas naturais, devido à maior consciência dos consumidores quanto aos potenciais riscos à saúde ocasionados pelo consumo de compostos sintéticos. Entre os aditivos naturais, a própolis, por suas propriedades antibacteriana, antioxidante e antifúngica, tem despertado o interesse dos pesquisadores. Portanto, o objetivo deste trabalho foi investigar o efeito da adição do extrato etanólico de própolis (EEP) em filmes à base de gelatina plastificados com citrato de acetiltributila (CA) ou sorbitol (S), nas propriedades funcionais (propriedades mecânicas, solubilidade, permeabilidade ao vapor de água, parâmetros de cor e opacidade) e a atividade antimicrobiana dos filmes contra Staphylococcus aureus. Para a produção do EEP, 30g de resina de própolis (tipo 12) foram misturadas com 100mL de álcool etílico 80%, e a solução foi mantida sob agitação mecânica (500rpm, 30minutos) a 50ºC, e filtrada após 24horas sob refrigeração. Os filmes foram produzidos por casting com 2g de gelatina/100g de solução filmogênica, 30g de CA ou S/100g de gelatina, 35g de lecitina/100g de plastificante e o EEP nas concentrações de 0, 5, 40 ou 200g/100g de gelatina, e avaliados quanto às suas propriedades mecânicas (tração e perfuração), solubilidade em água (Sol), cor e opacidade, permeabilidade ao vapor de água (PVA), espectroscopia de infravermelho com transformada de Fourier (FTIR) e microscopia eletrônica de varredura, após acondicionamento (5 dias, UR = 58%, T = 25ºC). A atividade antimicrobiana dos filmes contra Staphylococcus aureus foi analisada pelo método da difusão em ágar. A incorporação de EEP causou variação na tensão (T) dos filmes com CA (58,7 a 66,4MPa), mas afetou mais intensamente os filmes com S (31,7 a 50,4MPa). Quanto à elongação (%), os filmes (CA e S) também apresentaram variações. Na perfuração, verificou-se que a adição de EEP não afetou significativamente a força máxima para ambos os plastificantes. Para a solubilidade em água, o filme com CA apresentou aumento significativo (Sol = 18,6%) para 200% de EEP, contudo, os filmes com S praticamente não variaram. Quanto à cor, para ambos os plastificantes estudados (CA e S) o aumento da concentração de EEP promoveu alterações significativas de L*, a*, b*, ΔE* e opacidade. As análises de PVA dos filmes (CA e S) mostraram que o aumento na concentração de EEP aumentou a propriedade de barreira dos filmes. Segundo a análise de FTIR, os filmes aditivados não apresentaram mudanças estruturais em relação ao controle, o que sugere que o EEP encontra-se disperso na matriz. As micrografias mostraram que a adição de EEP causou alterações, principalmente, nos filmes plastificados com S. A atividade contra S. aureus foi observada para os filmes (CA e S) com 40 e 200% de EEP, com aumento significativo do diâmetro de inibição em função do aumento da concentração de EEP. Os filmes mantiveram sua atividade antimicrobiana durante 177 dias de armazenamento. Estes resultados demonstraram a capacidade antimicrobiana dos filmes de gelatina aditivados com própolis, bem como sua estabilidade em função do tempo. / The interest in the use of active packaging for food conservation has increased, along with a higher demand for natural antimicrobial substances, due to higher consumer awareness of the potential health risks caused by synthetic compounds consumption. Among natural additives, propolis, has awaken the interest of the researchers for its antibacterial, antioxidant and antifungal properties. Thus, the aim of this work was to investigate the effect of the addition of an ethanolic propolis extract (EPE) to gelatin-based films plasticized with acetyltributyl citrate (AC) or sorbitol (S), on the functional properties (mechanical properties, solubility, water vapor permeability, color parameters and opacity) and the antimicrobial activity of the films against Staphylococcus aureus. For the EPE production, 30g for the propolis resin (type 12) were mixed with 100mL ethyl alcohol (80%), and the solution was maintained under mechanical stirring (500rpm, 30minutes) at 50°C, and filtered after 24hours under refrigeration. The films were produced by casting, using 2g of gelatin/100g of film forming solution, 30g of AC or S/100 g of gelatin, 35g of lecithin/100g of plasticizer and EPE in the concentrations of 0, 5, 40 or 200g/100g of gelatin, and evaluated for their mechanical properties (traction and puncture tests), water solubility (Sol), color and opacity, water vapor permeability (WVP), Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR) and scanning electron microscopy, after storage (5 days, relative humidity = 58%, temperature = 25°C). The antimicrobial activity of the films against Staphylococcus aureus was analyzed by agar diffusion method. The EPE addition caused variation of the tensile strength (T) of the films with AC (58.7 a 66.4MPa), but affected more intensely the films with S (31.7 a 50.4MPa). The films (AC and S) also presented variations for the elongation (%). For the puncture force, the addition did not affect significantly the maximum force for any of the plasticizers. For the water solubility, the films with AC presented significant increase (Sol = 18,6%) for 200% of EPE, however the films with S did not vary. For both plasticizers studied (AC and S), the increase of EPE concentration promoted significant changes of the color parameters, L*, a*, b*, ΔE* and opacity. The WVP analysis of the films (AC and S) showed that the increase of the EPE concentration increased the barrier property of the films. According to FTIR analysis, the EPE addition in the films did not present structural changes compared to the control, suggesting that the EPE was disperse in the protein matrix. The micrographs showed that the EPE addition caused changes mainly in films plasticized with S. The activity against S. aureus was observed for the films containing 40 and 200% of EPE, with significant increase of inhibition diameter with increase of EPE concentration. The films kept their antimicrobial activities during 177 days of storage. These results demonstrated the antimicrobial capacity of gelatin-based films added of propolis, and their stability in time.

O gene TrCit do fungo filamentoso Trichoderma reesei codifica a proteína citrato sintase, uma enzima chave do ciclo de Krebs. Análise da região 5´ upstream de TrCit mostra que o gene está adjacente ao gene TrIcl (que codifica a proteína isocitrato liase, uma enzima do ciclo de glioxalato), em uma orientação cabeça-cabeça. A região promotora intergênica de 647 pb rica em G + C, apresenta uma ilha CpG, seqüência INR, caixas GC, caixas CAAT, sítios de ligação para diversos fatores de transcrição e é isenta de caixa TATA. O gene TrCit de 1573 pb contém 3 éxons e 2 íntrons. Sua seqüência codificadora de 1422 pb produz uma proteína de 474 aminoácidos, com um peso molecular estimado de 52,3 kD. O gene TrIcl de 1880 pb contém 3 éxons e 2 íntrons. Sua seqüência codificadora de 1788 pb produz uma proteína de 596 aminoácidos, com um peso molecular estimado de 65,4 kD. A atividade transcricional da região promotora foi analisada utilizando como repórter o gene de higromicina B fosfotransferase (hph). Uma região funcional necessária à transcrição de ambos os genes foi identificada na região central do promotor e contém uma caixa GC que liga o putativo fator de transcrição Sp1 de T. reesei (TrZnFSp1). O gene do putativo fator de transcrição “zinc-finger" TrZnFSp1 de 1500 pb contém 3 éxons e 2 íntrons. Sua seqüência codificadora de 1344 pb produz uma proteína de 448 aminoácidos, com um peso molecular estimado de 48,4 kD. Os resultados mostram que ambos os genes são transcritos de forma divergente a partir de um promotor bidirecional que compartilha na região central uma caixa GC, necessária para a transcrição de ambos os genes. / The TrCit gene from the filamentous fungus Trichoderma reesei codes for the citrate synthase protein, a key enzyme in the Krebs cycle. Analysis of TrCit 5’ upstream region showed that it is adjacent to the TrIcl gene that codes for isocitrate lyase protein, an enzyme involved in the glyoxylate cycle. Both genes, on a head-to-head orientation, are separated by an intergenic GC-rich and TATA-less promoter region of 647 base pairs. This bidirectional promoter has diverse cis regulatory elements: a CpG island, two INR sequences, GC boxes, CAAT boxes and several putative interaction sites for different transcription factors. The TrCit gene, 1,573-base pair-long, has an open reading frame of 1,422 base pairs interrupted by two introns. The gene codes for a protein with an estimated molecular weight of 52.3 kD. The TrIcl gene, 1,880-base pair-long, contains 3 exons and 2 introns and a putative coding sequence of 1,788 base pairs. The estimated molecular weight of TrICL is 65.4 kD. he transcriptional activity of the intergenic promoter region was analyzed using hygromicin B phosphotransferase (hph) as a reporter gene. A functional region required for the transcription of both genes was identified in the centre of this promoter. It has a GC box that interacts with a putative transcription factor Sp1 from T. reesei (TrZnFSp1). The results presented in this work show that both genes are divergently transcribed from a bidirectional promoter that shares an essential central GC box.

OBJETIVOS: O aumento da expectativa de vida tem gerado um envelhecimento populacional global, fazendo com que a proporção de indivíduos com mais de 60 anos de idade cresça mais rapidamente do que as demais faixas etárias. A incidência de litíase urinária em indivíduos idosos tem aumentado nos últimos anos, principalmente em nações industrializadas. Aspectos particulares do envelhecimento orgânico aumentam a morbidade associada à litíase urinária em idosos, tornando a prevenção e o tratamento clínico ainda mais relevantes nessa faixa etária. Nosso objetivo é analisar a avaliação metabólica de homens idosos portadores de cálculos renais. MATERIAIS E MÉTODOS: Realizamos um estudo clínico tipo caso-controle. Os critérios de inclusão foram: indivíduos do sexo masculino com mais de 60 anos de idade, com antecedente de cólica renal ou diagnóstico incidental de litíase urinária após os 60 anos (grupo caso); no grupo controle foram incluídos pacientes da mesma faixa etária sem antecedente de cólica renal ou diagnóstico incidental de litíase renal. Todos os participantes foram submetidos à anamnese e aqueles selecionados realizaram perfil metabólico para diagnóstico de litíase urinária: dosagem sérica de cálcio total, cálcio ionizado, ácido úrico, fósforo, glicemia, uréia, creatinina e paratormônio (PTH); coleta de urina para urocultura e pH urinário, e amostras de urina de 24 horas para quantificação do volume e dosagem de cálcio, citrato, creatinina, ácido úrico e sódio. Foram também submetidos à radiografia simples de abdome e ultrassonografia do aparelho urinário. Os indivíduos do grupo caso realizaram dois perfis metabólicos completos de urina de 24 horas, enquanto os do grupo controle somente um perfil. Os resultados foram submetidos à análise estatística. RESULTADOS: Cento e dez indivíduos foram convocados e, após aplicação dos critérios de inclusão, 70 foram selecionados. Cinquenta e um indivíduos concluíram a investigação clínica, sendo 25 no grupo caso e 26 no controle. Cinquenta e seis por cento dos pacientes do grupo caso apresentaram hipocitratúria comparados a 15,4% do grupo controle (p=0,002). A determinação de sódio em urina de 24 horas também apresentou diferença estatisticamente significativa entre casos e controles: 64% versus 30,8%, respectivamente (p=0,017). Estes resultados foram submetidos à análise de regressão logística univariada e múltipla, respectivamente, e mantiveram seus níveis de significância. CONCLUSÃO: A hipocitratúria e a hipernatriúria são os principais distúrbios metabólicos apresentados por indivíduos idosos do sexo masculino portadores de cálculo urinário / PURPOSES: Rise in life expectancy has caused a global populational ageing and people older than 60-years have increased more than any other age group. The incidence of urinary lithiasis in aging people has increased during the last years, mainly in developed nations. Some aspects concerning organic ageing increase morbidity related to urolithiasis in older individuals making prevention and medical management of urinary stones relevant in this age group. Our objective is to evaluate metabolic parameters in men older than 60 years with urinary stones. MATERIALS AND METHODS: A case-control study was performed. Inclusion criteria were: men older than 60- years old with renal pain episodes or incidental diagnosis of urinary lithiasis beginning after 60-years old (case arm). Control group was constituted by patients older than 60 years without renal colic past or diagnosis of urolithiasis. Patients were recruited from a database from the Urologic Clinic at University of São Paulo Medical School Hospital. Each individual was submitted to anamnesis and those selected underwent a metabolic evaluation for urinary stones: serum dosages of total and ionized calcium, uric acid, phosphorus, glucose, urea, creatinine and parathyroid hormone (PTH); urine culture and urinary pH. Twenty four hour urine samples were obtained for volume quantification and for calcium, citrate, creatinine, uric acid and sodium dosages. An abdominal x-ray and ultrasonography were performed in all patients. Case arm patients underwent two complete metabolic urinary investigations while control arm individuals to only one. All results were submitted to statistical analysis. RESULTS: One hundred and ten individuals were called up for initial evaluation and 70 were selected. Fifty-one individuals concluded the whole clinical investigation: 25 in the case arm and 26 in the control arm. Hypocitraturia was present in 56% of case arm patients and 15,4% of the control arm patients (p=0,002). Hypernatriuria in 24-hour urine samples was found in 64% of case arm patients and in 30,8% of control arm patients (p=0,017). These results were submitted to univariate and multiple logistic regressions and maintained their levels of significancy. CONCLUSION: Hypocitraturia and hypernatriuria are the main metabolic disorders among aging men with urolithiasis

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-04-23T18:00:55Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_IntoxicacaoCronicaExperimental.pdf: 1606941 bytes, checksum: 574c9d755f0d6125e10d4e89137b8f31 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-04-24T13:57:28Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_IntoxicacaoCronicaExperimental.pdf: 1606941 bytes, checksum: 574c9d755f0d6125e10d4e89137b8f31 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-24T13:57:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_IntoxicacaoCronicaExperimental.pdf: 1606941 bytes, checksum: 574c9d755f0d6125e10d4e89137b8f31 (MD5) Previous issue date: 2013 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Evidências experimentais sugerem que o alumínio é um agente neurotóxico com ações deletérias sobre os processos cognitivos. Neste estudo, investigou-se os efeitos comportamentais, histopatológicos e bioquímicos da intoxicação crônica com citrato de alumínio sobre o hipocampo de ratos adultos, e ao mesmo tempo aplicou-se uma terapia experimental de tratamento com magnésio para a reversão das alterações neuropatológicas encontradas. Utilizou-se 70 ratos Wistar machos de 200-250 g, divididos em grupos da seguinte maneira: controle, citrato de sódio (CNa), citrato de alumínio (CAl), citrato de alumínio + sulfato de magnésio (CAl+Mg), citrato de sódio + sulfato de magnésio (CNa+Mg). A dose usada de citrato de alumínio foi de 100 mg/kg e sulfato de magnésio 250 mg/kg durante 30 dias. Os animais foram submetidos aos testes comportamentais do campo aberto, Rota rod, Reconhecimento social e Labirinto em T elevado (LTE), análise bioquímica, histopatológica e imunoistoquímica para GFAP. Além disso, foram verificados os níveis de alumínio no plasma e no hipocampo dos animais em espectrômetro de absorção atômica em forno de grafite (GF AAS). Os resultados obtidos mostraram que o grupo CAl apresentou um aumento da atividade locomotora no teste do campo aberto em comparação ao grupo controle e já o grupo CAl+Mg apresentou uma diminuição (P<0.001). Nos testes de memória do LTE e de Reconhecimento social, os animais do grupo CAl apresentaram déficits no cognitivos em relação aos demais grupos enquanto os animais do grupo CAl+Mg apresentaram um bom desempenho nos teste (P<0.001). Os níveis de alumínio encontrados no hipocampo do grupo CAl foram consideravelmente elevados e nos demais grupos os níveis ficaram abaixo do limite de detecção. Na análise histopatológica e imunoistoquímica, os animais do grupo CAl apresentaram diminuição da densidade celular e reatividade astrocitária nas camadas CA1, CA3 e hilo do hipocampo. Estes resultados sugerem que a intoxicação experimental com citrato de alumínio induz déficits de aprendizado e memória e que a administração de sulfato de magnésio pode ter a capacidade de minimizar os danos causados pelo metal no hipocampo de animais intoxicados. / Experimental evidence suggests that aluminum is a neurotoxic agent with harmful effects on cognitive processes. In this study, we investigated the behavioral, biochemical and histopathological effects of chronic intoxication with aluminum citrate on the hippocampus of adult rats, in the same time investigated experimental therapy treatment with magnesium for reversing the neuropathological changes. We used 70 male Wistar rats of 200-250 g that were divided in groups as follows: control, sodium citrate (CNa), aluminum citrate (CAl), aluminum citrate + magnesium sulphate (CAl+Mg), sodium citrate + sulfate magnesium (Mg+CNa). The dose used of aluminum citrate was 100 mg/kg and 250 mg/kg of magnesium sulfate. The neurotoxic compound was taken orally for 30 days. The animals were subjected to behavioral tests of open field, Rota Rod, social recognition and the elevated T maze (LTE). Furthermore, aluminum levels in plasma and hippocampus of animals was found by atomic absorption spectrometer graphite furnace (GF AAS), biochemical analysis, histopathology and immunohistochemistry for GFAP. It was found that the CAl group showed increase locomotor activity in the open field test compared to the control group, and CAl+Mg group showed a decrease (P <0.001). In memory tests of LTE and social Recognition, the CAl group showed cognitive deficits in relation to other groups, and CAl+Mg group performed well in the test (P <0.001). Aluminum levels found in the hippocampus of CAl group were considerably higher but in the other groups the levels were below to the detection limit of the equipment. Histopathology and imunistochemistry analysis in CAl group showed decreased in cell density and astrocytic reactivity in layers CA1, CA3 and hilus of the hippocampus. These results suggest that the experimental poisoning with aluminum citrate induce deficits of learning and memory and that the administration of magnesium sulphate may have the ability to minimize the damage caused by metal in the hippocampus of intoxicated animals.

A diferenciação sexual cerebral é um fenômeno importante que ocorre no período perinatal essencial para definir alguns padrões comportamentais na orientação sexual na fase adulta. Este evento ocorre após uma descarga abrupta da testosterona testicular no recém-nascido que é convertido em estrógeno E2 pela aromatase no hipotálamo do neonato e, juntamente com aquela de origem materna promove as alterações no cérebro que determinam a orientação sexual masculina do neonato. Em fêmeas, o E organiza o cérebro feminino e a orientação sexual. Assim, investigou-se o efeito do Citrato de Clomifeno, um inibidor da aromatase em ratos machos e fêmeas tratados perinatalmente. Os resultados mostraram alterações comportamentais e bioquímicas compatíveis com a desmasculinização, alteração do comportamento sexual de ambos os sexos, comportamento homossexual, ciclo estral, alteração dos níveis de testosterona, estrógeno, FSH e LH e do peso dos órgãos na fase adulta. Os resultados são explicados pelo bloqueio da aromatase, no período da diferenciação sexual cerebral. / Sexual differentiation of the brain is an important phenomenon that occurs perinatally essential to define some behavioral patterns of sexual orientation in adulthood. This event occurs after an abrupt discharge of testicular testosterone in newborns that E2 is converted into estrogen by aromatase in the hypothalamus of the newborn and, along with that of maternal origin promotes changes in the brain that determine sexual orientation male neonate. In females, the E organizes the female brain and sexual orientation. Thus, we investigated the effect of clomiphene citrate, aromatase inhibitor in male and female rats treated perinatally. The results showed behavioral and biochemical changes consistent with demasculinization, altered sexual behavior of both sexes, homosexual behavior, estrous cycle, changing levels of testosterone, estrogen, FSH and LH and organ weight in adulthood. The results are explained by blocking the aromatase during the period of sexual differentiation of the brain.

A diferenciação sexual cerebral é um fenômeno importante que ocorre no período perinatal essencial para definir alguns padrões comportamentais na orientação sexual na fase adulta. Este evento ocorre após uma descarga abrupta da testosterona testicular no recém-nascido que é convertido em estrógeno E2 pela aromatase no hipotálamo do neonato e, juntamente com aquela de origem materna promove as alterações no cérebro que determinam a orientação sexual masculina do neonato. Em fêmeas, o E organiza o cérebro feminino e a orientação sexual. Assim, investigou-se o efeito do Citrato de Clomifeno, um inibidor da aromatase em ratos machos e fêmeas tratados perinatalmente. Os resultados mostraram alterações comportamentais e bioquímicas compatíveis com a desmasculinização, alteração do comportamento sexual de ambos os sexos, comportamento homossexual, ciclo estral, alteração dos níveis de testosterona, estrógeno, FSH e LH e do peso dos órgãos na fase adulta. Os resultados são explicados pelo bloqueio da aromatase, no período da diferenciação sexual cerebral. / Sexual differentiation of the brain is an important phenomenon that occurs perinatally essential to define some behavioral patterns of sexual orientation in adulthood. This event occurs after an abrupt discharge of testicular testosterone in newborns that E2 is converted into estrogen by aromatase in the hypothalamus of the newborn and, along with that of maternal origin promotes changes in the brain that determine sexual orientation male neonate. In females, the E organizes the female brain and sexual orientation. Thus, we investigated the effect of clomiphene citrate, aromatase inhibitor in male and female rats treated perinatally. The results showed behavioral and biochemical changes consistent with demasculinization, altered sexual behavior of both sexes, homosexual behavior, estrous cycle, changing levels of testosterone, estrogen, FSH and LH and organ weight in adulthood. The results are explained by blocking the aromatase during the period of sexual differentiation of the brain.