Xue, Hongmei. / "December 2010." / Thesis (Ph.D.)--Chinese University of Hong Kong, 2011. / Includes bibliographical references (leaves 165-206). / Electronic reproduction. Hong Kong : Chinese University of Hong Kong, [2012] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Abstract also in Chinese.

Blockade of the renin-angiotensin system lowers the rate of cardiovascular events in patients at risk for vascular disease and also improves endothelial function but the mechanism remains unclear. HUVECs were stimulated with Ang II (100 nM). Ang II produced a 2-fold increase in O2- production, which was measured by lucigenin-enhanced chemiluminescence. This increase was blocked by NAD(P)H oxidase inhibitor DPI, but not by eNOS inhibitor L-NAME. Ang II increased monocyte adhesion to ECs by 4.5-fold, and this increase was blocked by candesartan (AT1 receptor antagonist), DPI, L-NAME, wortmannin (PI3K inhibitor), dominant negative-AKT, and p22phox siRNA. Dominant active-AKT increased adhesion by 1.5-fold. Our findings indicate that the simultaneous activation by Ang II of eNOS and NAD(P)H oxidase leads to endothelial activation. This process can partially explain the therapeutic benefits of reducing the action of Ang II.

Thesis (Ph. D.)--University of Missouri-Columbia, 2007. / The entire dissertation/thesis text is included in the research.pdf file; the official abstract appears in the short.pdf file (which also appears in the research.pdf); a non-technical general description, or public abstract, appears in the public.pdf file. Vita. "August 2007" Includes bibliographical references.

No description available.

Dissertation (Ph.D.)--University of South Florida, 2008. / Includes vita. Includes bibliographical references.

Dissertation (Ph.D.)--University of South Florida, 2005. / Includes vita. Includes bibliographical references (leaves 179-187). Also available online.

A sepse envolve mecanismos complexos de respostas imunológicas e inflamatórias, e o papel do NF- B é essencial. A diminuição da NO sintase endotelial (eNOS) durante a sepse contribui com a disfunção endotelial. A eritropoietina (EPO) é uma citocina protetora de diversos tecidos durante o estresse. Investigamos o papel da EPO na injúria renal aguda (IRA) induzida pela sepse usando o modelo de ligadura e punção do ceco (LPC). Ratos Wistar foram divididos em três grupos: controle; LPC e LPC+EPO (EPO, 4.000UI/kg, administrada 24h e 1h antes da cirurgia). Com a finalidade de estudar os efeitos precoces e tardios da EPO sobre a IRA induzida pela sepse realizamos três etapas de experimentos: Primeira etapa: 24 horas após LPC; Segunda etapa: 48 horas após LPC; Terceira etapa: análise de sobrevida. No estudo precoce o grupo LPC+EPO apresentou clearance de inulina significativamente maior que o grupo LPC. Recuperou os níveis de hematócrito na sepse, melhorou a pressão arterial e a acidose metabólica. No estudo tardio o grupo LPC+EPO apresentou clearance de creatinina significativamente maior que o grupo LPC. Nesta fase tardia a EPO recuperou os níveis de eNOS, suprimiu a infiltração de macrófagos no tecido renal e inibiu a ativação do NF- B. A EPO protege a função renal e aumenta a sobrevida neste modelo de sepse. A proteção da EPO na sepse é dependente, em parte, da inibição do NF- B e do aumento da expressão de eNOS / The pathophysiology of sepsis involves complex cytokine and inflammatory mediator networks, a mechanism to which nuclear factor-kappa B (NF- B ) activation is central. Downregulation of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) contributes to sepsis-induced endothelial dysfunction. Erythropoietin (EPO) has emerged as a major tissue-protective cytokine in the setting of stress. We investigated the role of EPO in sepsis-related acute kidney injury (AKI) using a cecal ligation and puncture (CLP) model. Wistar rats were divided into three groups: control (sham-operated); CLP-only; and CLP+EPO. The EPO (4000 IU/kg BW, i.p.) was administered 24 h and 1 h before CLP. To study the early and late effects of EPO on sepsis-induced AKI, we performed experiments at 24 h and 48 h after CLP/sham operation, and we plotted the survival curves. At post-procedure hour 24, CLP+EPO rats presented significantly higher inulin clearance than did CLP-only rats; EPO treatment restored hematocrit levels, as well as mean arterial pressure and metabolic balance. At post-procedure hour 48, CLP+EPO rats presented significantly higher creatinine clearance than did CLP-only rats; EPO treatment restored eNOS levels, suppressed macrophage infiltration, and inhibited NF-B activation,thereby increasing survival. In conclusion, EPO protects renal function and increases survival in this model of sepsis-induced AKI. This protection is dependent on eNOS activation and is partly due to inhibition of the inflammatory response via downregulation of NF- B

Orientadores: Eliana Cotta de Faria, José Eduardo Tanus dos Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T16:38:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zago_VanessaHelenadeSouza_M.pdf: 4029424 bytes, checksum: 82a248a89f7f9c4b4bee67ad6c6f0d07 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O óxido nítrico (NO) é produzido no endotélio vascular pela óxido nítrico sintase endotelial (eNOS), enzima regulada negativamente pela presença do polimorfismo T- 786C, levando à disfunção endotelial. A lipoproteína de alta densidade (HDL) têm funções anti-aterogênicas bem estabelecidas, incluindo mecanismos que aumentam a atividade da eNOS. As estatinas são fármacos que possuem, dentre seus efeitos pleiotrópicos, a melhora na função do endotélio e na composição da HDL. Dada a importância tanto da expressão quanto da atividade da eNOS para a função endotelial, bem como dos efeitos pleiotrópicos das estatinas sobre estas duas variáveis, avaliamos os parâmetros bioquímicos e a composição das sub-frações de HDL (HDL2 e HDL3) após uso de placebo e atorvastatina em uma amostra populacional de 30 indivíduos, divididos em dois grupos: 15 indivíduos portadores do polimorfismo T-786C do gene da eNOS (CC) e 15 não portadores (TT). Duzentos indivíduos foram genotipados, e pareamos conforme idade e IMC 15 indivíduos TT e 15 indivíduos CC, que receberam placebo e/ou atorvastatina na dose de 10mg/dia, por 14 dias. Os parâmetros séricos analisados foram determinados através de métodos bioquímicos enzimáticos, radiométricos, nefelométricos e microultracentrifugação. Mediu-se lípides, lipoproteínas, composição das sub-frações da HDL (HDL2 e HDL3), apolipoproteínas, atividade da proteína de transferência de colesteril éster, metabólitos do NO e proteína C reativa. Após o uso da estatina, como esperado, drásticos efeitos redutores foram observados tanto nos lípides, lipoproteínas, apolipoproteínas e de forma independente do polimorfismo, além da redução de ácidos graxos livres nos portadores do genótipo CC. Nas sub-frações a relação lípides/proteínas foi reduzida tanto em HDL2 quanto em HDL3.O aumento da atividade da CETP nos portadores foi corrigido pela estatina e os níveis de ácidos graxos livres reduziram-se de maneira polimorfismo-dependente, em oposição à redução observada do nitrito, que foi polimorfismo-independente. usPCR e Lp(a) não se modificaram. A atorvastatina pode ter atuado sobre o transporte reverso de colesterol através da redução da atividade da lipase hepática e aumento de atividade da PLTP. Foram observadas interações genótipo/tratamento limítrofes para CETP e Lp(a). Estes resultados sugerem que o tratamento com estatinas pode ser relevante na prevenção primária da aterosclerose em portadores do polimorfismo, independentemente de modificações lipídicas séricas. Portanto estes indivíduos se beneficiariam com o uso de estatinas através da modulação da atividade da CETP e redução da concentração de ácidos graxos livres. / Abstract: Nitric oxide (NO) is produced in the vascular endothelium by endothelial nitric oxide synthase (eNOS), an enzyme negatively regulated by the presence of the T-786C polymorphism, leading to endothelial dysfunction. High-density lipoproteins (HDL) have well-established anti-atherogenic functions, for example mechanisms that enhance eNOS activity. Statins are drugs that have pleiotropic effects, such as the improvement in endothelial function and beneficial composition of HDL. Taking into account both the activity of eNOS on endothelial function, and the validity of the pleiotropic effects of statins, we evaluated the biochemical parameters and the composition of subfractions of HDL (HDL2 and HDL3) after use of placebo and atorvastatin at a dose of 10mg/day for 14 days, in a population sample of 30 individuals divided into two genotype groups of the T-786C polymorphism of the eNOS gene: CC (carriers) or TT (non-carriers). Two hundred individuals were genotyped, and the selected groups paired by age and BMI. The serum parameters analyzed were determined using biochemical enzymatic, radiometric, nephelometric and microultracentrifugation methods. We measured lipids, lipoproteins, the composition of sub-fractions of HDL (HDL2 and HDL3), apolipoproteins, activity of cholesteryl ester transfer protein, NO metabolites and hsCRP. After statin, as expected, drastic effects were observed both in lipids, lipoproteins, apolipoproteins, independently of the polymorphism. In HDL sub-fractions the ratio lipid/protein was smaller in both HDL2 and HDL3. CETP activity and free fatty acids were reduced in a polymorphism-dependent manner, and the reduction of nitrite was polymorphism-independent. hsCRP did not change. Atorvastatin may have acted on the reverse cholesterol transport by reducing the activity of hepatic lipase, increased PLTP activity and reducing CETP. There was a genotype/drug interaction effect on CETP and Lp(a). These results suggest that statin treatment may be relevant for primary prevention of atherosclerosis in patients with the polymorphism, irrespective of serum lipid changes. These individuals would benefit from the use of statins because of reduction of CETP activity and free fatty acids. / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

A sepse envolve mecanismos complexos de respostas imunológicas e inflamatórias, e o papel do NF- B é essencial. A diminuição da NO sintase endotelial (eNOS) durante a sepse contribui com a disfunção endotelial. A eritropoietina (EPO) é uma citocina protetora de diversos tecidos durante o estresse. Investigamos o papel da EPO na injúria renal aguda (IRA) induzida pela sepse usando o modelo de ligadura e punção do ceco (LPC). Ratos Wistar foram divididos em três grupos: controle; LPC e LPC+EPO (EPO, 4.000UI/kg, administrada 24h e 1h antes da cirurgia). Com a finalidade de estudar os efeitos precoces e tardios da EPO sobre a IRA induzida pela sepse realizamos três etapas de experimentos: Primeira etapa: 24 horas após LPC; Segunda etapa: 48 horas após LPC; Terceira etapa: análise de sobrevida. No estudo precoce o grupo LPC+EPO apresentou clearance de inulina significativamente maior que o grupo LPC. Recuperou os níveis de hematócrito na sepse, melhorou a pressão arterial e a acidose metabólica. No estudo tardio o grupo LPC+EPO apresentou clearance de creatinina significativamente maior que o grupo LPC. Nesta fase tardia a EPO recuperou os níveis de eNOS, suprimiu a infiltração de macrófagos no tecido renal e inibiu a ativação do NF- B. A EPO protege a função renal e aumenta a sobrevida neste modelo de sepse. A proteção da EPO na sepse é dependente, em parte, da inibição do NF- B e do aumento da expressão de eNOS / The pathophysiology of sepsis involves complex cytokine and inflammatory mediator networks, a mechanism to which nuclear factor-kappa B (NF- B ) activation is central. Downregulation of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) contributes to sepsis-induced endothelial dysfunction. Erythropoietin (EPO) has emerged as a major tissue-protective cytokine in the setting of stress. We investigated the role of EPO in sepsis-related acute kidney injury (AKI) using a cecal ligation and puncture (CLP) model. Wistar rats were divided into three groups: control (sham-operated); CLP-only; and CLP+EPO. The EPO (4000 IU/kg BW, i.p.) was administered 24 h and 1 h before CLP. To study the early and late effects of EPO on sepsis-induced AKI, we performed experiments at 24 h and 48 h after CLP/sham operation, and we plotted the survival curves. At post-procedure hour 24, CLP+EPO rats presented significantly higher inulin clearance than did CLP-only rats; EPO treatment restored hematocrit levels, as well as mean arterial pressure and metabolic balance. At post-procedure hour 48, CLP+EPO rats presented significantly higher creatinine clearance than did CLP-only rats; EPO treatment restored eNOS levels, suppressed macrophage infiltration, and inhibited NF-B activation,thereby increasing survival. In conclusion, EPO protects renal function and increases survival in this model of sepsis-induced AKI. This protection is dependent on eNOS activation and is partly due to inhibition of the inflammatory response via downregulation of NF- B

Orientador: Maria Alice da Cruz-Höfling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-27T16:36:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Soares_EdileneSiqueira_M.pdf: 11448561 bytes, checksum: 00aace7be2d8fec579aea2fd4166f813 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Neste trabalho investigamos a permeabilização da barreira hematoencefálica (BHE) pela peçonha da aranha Phoneutria nigriventer (PNV) através da via transcelular no cerebelo de ratos. As cavéolas foram analisadas nas células endoteliais pela expressão de proteínas associadas à sua formação (caveolina-1, Cav-1 e dinamina-2, Din2) e internalização (caveolina-1 fosforilada, pCav-1 e quinase da família Src, SKF), e nos astrócitos com avaliação da caveolina-3 (Cav-3) e da conexina-43 (Cx43) (formadora de junções comunicantes). A ação do PNV sobre o endotélio também foi avaliada pela ativação (acoplamento) ou inativação (desacoplamento) da enzima eNOS, produtora de óxido nítrico (NO). As estruturas que compõe a BHE foram avaliadas através de microscopia eletrônica de transmissão. Inicialmente, o estudo de Cav-1 contemplou sua localização, expressão gênica e proteica após o envenenamento em diferentes idades, ratos neonatos eram mais suceptíveis ao envenenamento do que ratos adultos. Após PNV, a imunomarcação para Cav-1 foi mais evidente na camada granular e molecular e em neurônios de Purkinje. A expressão Cav-1 e Din2 (foramdoras das vesículas e seu gargalo, respectivamente) aumentou em períodos de envenenamento agudo (1 h), de recuperação (5 h) e na ausência de sinais clínicos (24 h); em contrapartida SKF e pCav-1 envolvidas na internalização caveolar foram superexpressas em períodos opostos (às 2 h e 72 h). O PNV induziu aumento da metaloproteinase-9 da matriz (MMP9), importante mediadora de quebra da BHE e aumentou a formação e o tráfego de vesículas no endótelio após envenenamento. A análise de eNOS revelou desacoplamento (aumento de monômeros) nos períodos de envenenamento agudo (1-2 h) com progressivo retorno e super-expressão de dímeros (re-acoplamento) às 72 h; essas alterações foram relacionadas à ação do PNV sobre os níveis intracelulares de cálcio investigado pelo aumento na expressão de calmodulina e confimado pela localização de calbindina-D28. Os dados revelam a interferência do PNV sobre a homeostase endotelial e função vascular ao afetar o sistema eNOS/NO, importante controlador do tônus vascular. Nos astrócitos, as cavéolas são formadas por Cav-3 e sua superexpressão é associada a doenças neurológicas. O PNV aumentou significativamente os níveis basais de Cav-3 em astrócitos GFAP positivos (astrogliose reativa) em períodos de aumento de Cx43 (às 1, 5 e 24 h), e na vigência de edema citotóxico nos pés astrocitários e alterações nos contatos sinápticos axo-dendríticos e axo-somáticos. Em conjunto os resultados revelam que: (a) a quebra da via transcelular da BHE pelo PNV tem aumento da endocitose via cavéolas; (b) componentes da unidade neurovascular, como endotélio, astrócitos e neurônios estão intimamente envolvidos; (c) no endotélio, os efeitos são mediados pelo sistema eNOS/NO; (d) a SKF ativa o sistema endocítico e de transporte vesicular; (e) nos astrócitos, a dinamica expressão de Cx43 e Cav-3 e o retorno aos níveis basais em paralelo com a ausência de sinais de intoxicação nos animais (72 h) dá evidências de que ambas as proteínas interagem na resposta astrocitária. Os dados permitem sugerir que a presença de peptídeos neurotóxicos no veneno de Phoneutria nigriventer estão no centro dos efeitos aqui relatados / Abstract: In this work, we investigated the blood-brain barrier (BBB) permeabilization induced by Phoneutria nigriventer venom (PNV) in the transcellular route of rats¿ cerebellum. Caveolae was analyzed in endothelial cells accessing the expression of proteins involved in caveolae formation (caveolin-1, Cav-1 and dynamin-2, Dyn2) and internalization (phosphorylated Caveolin-1, pCav-1 and Src kinase family, SKF), in astrocytes caveolae role were evaluated with caveolin-3 (Cav-3) and connexin-43 (Cx43) (gap-junction main protein). PNV action on the endothelium was also investigated through activation (coupling) or inactivation (uncoupling) of eNOS enzyme, responsible for nitric oxide (NO) production. BBB components were evaluated using transmission electron microcopy. Initially, Cav-1 study addressed its localization along with Cav-1 protein and gene expression after envenoming in different age animals, neonate rats were more susceptible to envenoming than adult rats. After PNV, Cav-1 labeling was intense in granular and molecular layers and in Purkinje neurons. Cav-1 and Dyn2 (responsible for caveolae vesicles formation and scission, respectively) expression increased in periods of acute envenomation (1 h), recovery (5 h) and in the absence of clinical signals (24 h); in opposition SKF and pCav-1 involved in caveolae internalization were overexpress in opposite periods (at 2 h and 72 h). PNV induced increases in matrix metaloproteinases-9 (MMP9) an important BBB breakdown mediator, and increases in vesicles formation and traffic in the endothelium after envenoming. The study of eNOS activity revealed uncoupling (increasing in eNOS monomers) in acute periods after envenomation (1 h and 2 h) and progressive return followed by overexpression of dimers (re-coupling) at 72 h; those alterations were related to PNV action on calcium intracellular levels confirmed by Calmodulin increased expression and confirmed using Calbindin-D28 localization. Data revealed PNV interference on endothelial homeostasis and vascular function once affects the eNOS/NO system, an important vascular tonus controller. In astrocytes, caveolae are formed by Cav-3 and its overexpression is related to neurological disorders. PNV increased the basal levels of Cav-3 in GFAP-positive astrocytes (reactive astrogliosis) in the same periods as increased Cx43 (at 1, 5 e 24 h), during cytotoxic edema in astrocytes end-feet and alterations in axo-dendrites and axo-somatic synaptic contacts. Together, the results revealed that: (a) the BBB breakdown in transcellular route by PNV involves upregulation of caveolae endocytosis (b) the neurovascular unit components such as the endothelium, astrocytes and neurons are intimal involved (c) in the endothelium the effects are mediated by the eNOS/NO system and (d) SKF activates endocytic system and vesicular transport; (e) in the astrocytes, Cx43 and Cav-3 dynamic expression and their return to basal level in parallel with the absence of toxic signals in the animals (72 h) provides evidence that both protein interacts in astrocytes response. The data allows us to suggest that the neurotoxic peptides presented in Phoneutria nigriventer venom are in the center of the effects reported here / Mestrado / Biologia Tecidual / Mestra em Biologia Celular e Estrutural