Résumé Les cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDCs) sont considérées comme quantitativement et qualitativement supérieures aux autres types cellulaires pour la synthèse des interférons (IFNs) de type I lors d’une infection virale. Plusieurs observations viennent supporter cette désignation. Tout d’abord, elles expriment un éventail très large des sous-types d’IFN-alpha en comparaison aux autres types cellulaires. Par ailleurs, elles possèdent la capacité de détecter la présence des virus via leurs TLR7 et TLR9, reconnaissant respectivement l’ARN ou l’ADN d’origine virale. Enfin, elles expriment de manière constitutive dans leur cytoplasme le facteur de transcription IRF-7 qui permet une synthèse rapide et robuste des IFNs de type I en réponse à l’infection. Dans un précédent travail, il a été montré que les pDCs néonatales présentent un défaut majeur de synthèse d’IFN-alpha en réponse aux CpG ODNs, ligands du TLR9. Nous avons ensuite étendu notre étude des pDCs néonatales en les stimulant avec le R-848, ligand du TLR7, mais également en présence de virus tels que HCMV et HSV. Dans ces conditions également, la synthèse de l’IFN-alpha est déficiente dans les pDCs du nouveau-né. Nous avons également observé une déficience de production de l’IFN-beta suite à une stimulation via les ligands TLR7 et TLR9, tant au niveau protéique que de l’expression de l’ARN messager. Par ailleurs, la synthèse des cytokines/chimiokines inflammatoires par les pDCs du sang de cordon ainsi que leur maturation, fonctions dépendantes du facteur NF-kappaB, sont également diminuées en comparaison aux pDCs adultes, suite à une stimulation en présence du CpG ODN ou du R-848. L’ensemble de ces données nous a amené à étudier de manière plus précise les voies de signalisation des pDCs néonatales suite à leur activation. Tout d’abord, nous avons observé que les taux d’expression des TLR7 et 9 tout comme le taux basal d’IRF-7 sont équivalents dans les pDCs néonatales et les pDCs adultes. Ensuite, grâce à la technique d’ImageStream (Amnis corporation), nous avons pu quantifier la translocation nucléaire des facteurs de transcription IRF-7 et de NF-kappaB dans les pDCs activées. Nous avons ainsi pu observer que la translocation de NF-kappaB est comparable dans les pDCs adultes et néonatales en réponse aux ligands TLR7 ou TLR9. Par contre, elle est déficiente lors d’une stimulation par HSV. La translocation du facteur IRF-7, quant à elle, est significativement déficiente en réponse au CpG ODN et au virus HSV dans les pDCs néonatales. Nous proposons que le défaut de translocation d’IRF-7 mis en évidence dans les pDCs néonatales pourrait en partie expliquer la déficience de synthèse des IFNs de type I de ces cellules et fournir une base moléculaire à la plus grande susceptibilité du nouveau-né vis-à-vis des infections virales.

La ventilation liquidienne totale (VLT) est une modalité de support respiratoire qui consiste à remplir les poumons avec du perfluorocarbone (PFC) et un ventilateur liquidien assure le renouvellement du volume courant. Par contre, une quantité excessive de PFC dans les poumons peut causer une distension ou un perfluorothorax, et une trop petite quantité peut entraîner un collapsus lors de l'expiration. Ainsi, ce volume doit être bien contrôlé. Notre objectif est de mesurer le volume de PFC en continu dans les poumons pendant la VLT afin d'optimiser sa fiabilité et sécurité. Trois approches différentes ont été utilisées : une balance de précision, le réservoir tampon du ventilateur et un débitmètre branché entre le ventilateur et le sujet. De plus, une courbe pression-volume statique a été tracée afin d'évaluer la possibilité d'une surdistension pulmonaire. Ces techniques ont été réalisées à l'aide du ventilateur liquidien Inolivent-5, prototype de ventilateur liquidien total mis au point par l'équipe Inolivent. Six agneaux sains, (< 5 jours, poids entre 2 et 4 kg) ont été anesthésiés et installés sur la balance. Ensuite, ils ont été branchés en ventilation mécanique conventionnelle (VMC) afin de recueillir les paramètres physiologiques de base. Une couverture a été mise sur les animaux pour diminuer les pertes insensibles par la peau. Après 30 minutes en VMC, les agneaux ont été installés en VLT, où ils sont demeurés pour 4 heures. Les paramètres physiologiques ont été analysés à chaque heure et un bilan précis des ingesta et excreta a été réalisé. Le débitmètre ne nous permet pas d'estimer le volume pulmonaire au cours de la VLT. Par contre, la fiabilité des mesures de la balance et du réservoir tampon a été estimée (0,8 [plus petit ou égal]r[indice supérieur 2][plus petit ou égal] 0,9) et l'accord relatif démontre que pour environ 95% des cas, la mesure du poids de l'agneau obtenue par la balance sera comprise entre 1.04 et 3.28 fois la mesure obtenue par le réservoir tampon. La mesure de la compliance du système respiratoire, à partir des courbes P-V nous a permis d'identifier une surdistension pulmonaire lors des variations de volume imposées et le coefficient de corrélation de Spearman (> 0,91) démontre la force de corrélation entre le ?P et le ?V, qui caractérisent l'élasticité pulmonaire. Ces résultats suggèrent que d'autres études sont encore nécessaires pour que nous puissions avoir une mesure fiable du volume pulmonaire au cours de la VLT.

Problématique : La morbidité et la mortalité pédiatriques, ainsi que les caractéristiques épidémiologiques de l'enfant hospitalisé ont connu de nettes modifications durant la dernière décennie. But du travail : Est d'analyser les causes de morbidité et de mortalité pédiatriques hospitalières dans le service de Médecine Infantile « C » de l'hôpital d'enfants de Tunis durant l'année 1991 et l'année 2007, de déterminer l'évolution du profil épidémiologique de la morbidité et de la mortalité et de discuter l'impact de cette évolution sur l'activité médicale, paramédicale et les besoins en matériel de santé. Méthodes : Il s'agit d'une étude descriptive, rétrospective incluant tous les enfants hospitalisés pour la première fois durant l'année 2007 en comparant les résultats avec ceux d'une étude analogue réalisée dans le même service en 1991. Résultats : Le nombre des hospitalisations a augmenté de 27,68% passant de 1727 en 1991 à 2205 en 2007. Les admissions des nouveau-nés se sont accrues passant de 9,32% à 21,41% entre les deux années. La durée moyenne de séjour est passée de dix à cinq jours. Les admissions pour affections périnatales (13,87%) et affections respiratoires (23,87%) ont doublé. Les maladies infectieuses demeurent une cause fréquente d'hospitalisation (19%). Le taux de mortalité globale est passé de 8,63% à 2,4%. Il a baissé chez les deux sexes et pour toutes les tranches d'âge. Une augmentation de la proportion des nouveau-nés parmi les décès passant de 31,54% en 1991 à 58,49% en 2007 a été constatée. Les affections respiratoires péri et néonatales ont constitué la première cause de décès (49,06%) en 2007 remplaçant les maladies infectieuses. Le taux de létalité a baissé pour toutes les pathologies à l'exception des maladies du système nerveux et des anomalies congénitales. Conclusion : La Tunisie est en phase intermédiaire entre les pays en développement et les pays développés. Les efforts doivent se concentrer sur la pathologie périnatale, la réanimation des nouveaunés, et particulièrement les prématurés, et la pathologie respiratoire.

Dans ce mémoire, nous étudions la relation (aussi appelée le « gradient ») qui unit la santé des enfants en bas âge au revenu familial. Ce sujet d'étude en économie de la santé a été plusieurs fois exploré chez les adultes avec des résultats qui tendent à démontrer que les gens disposant d'un revenu plus élevé ont une meilleure santé et, de surcroît, une espérance de vie plus grande que ceux disposant d'un revenu moindre. En cherchant à approfondir la connaissance du sujet, les chercheurs se sont naturellement intéressés à l'impact du revenu familial sur la santé des enfants. Case et alii (USA 2002) ont récemment proposé une démarche et des techniques afin de vérifier, d'abord, si le gradient existe et, ensuite, de mesurer la profondeur de son influence sur le développement des jeunes enfants. En nous aidant de l'enquête longitudinale du développement des enfants du Québec (l'ELDEQ 1998) et en suivant une démarche semblable à celle proposée par Case et alii, nous observons l'existence d'un gradient faible selon lequel la santé des nouveaux-nés québécois est affectée positivement par le revenu familial.

Le but de cette étude était d'étudier la procédure de sevrage de la ventilation liquidienne totale (VLT) au cours de laquelle deux types de perfluorocarbones (PFC), soit le Perfluorodecalin (PFDEC) et le Perflubron (PFOB) ont été utilisés et ce à l'aide d 'un modèle néonatal ovin. Méthodes : Dix agneaux nouveau-nés à terme étaient d'abord ventilés, anesthésiés et paralysés. Une instrumentation chirurgicale permettait un suivi des gaz artériels et d'index ventilatoires ainsi que de l'état hémodynamique p .. techniques de thermodilution (Pulsion Médical System, Allemagne). Puis, les agneaux étaient randomisés en deux groupes selon le type de PFC utilisé lors de la VLT, soit le PFDEC (F2 Chemicals, UK) (n=5) ou le PFOB (Fluoromed L.P., USA) (n=5). Pour les deux groupes, une VLT d 'une heure a été effectuée à l'aide de ces paramètres: Vt=25 mL/kg, FR=6,5/min, PEEP=1 cm H [indice inférieur 2] O. Puis, le passage en ventilation liquidienne partielle (VLP) se faisait en fin d 'expiration à l'aide de notre prototype Inolivent-4. Le Vt, la PEEP et la FiO[indice inférieur 2] étaient ensuite ajustés périodiquement pendant 12 h et une technique de succion était employée au besoin pour évacuer le mucus du tube endotrachéal. Principaux résultats : Lors de la VLT, les gaz artériels des agneaux ventilés avec le PFOB et avec le PFDEC étaient comparables. Par contre, une baisse de la pression artérielle systémique moyenne (APm) et de la pression pulmonaire artérielle moyenne (PAPm) ont été notées dans le groupe PFDEC. Lors du sevrage de la VLT, les pressions de ventilation étaient plus basses dans le groupe PFOB, mais sans autre différence statistiquement significative. La ventilation alvéolaire était normale dans les deux groupes, mais l'oxygénation s 'est graduellem ent détériorée. Les analyses histologiques ont démontré une bonne préservation de l'architecture pulmonaire globale. Conclusions : Le sevrage de la VLT chez des sujets sains a été effectué en préservant une bonne ventilation alvéolaire, mais avec un niveau d'oxygénation se dégradant au cours des 12h de sevrage et ce peu importe le type de PFC utilisé. Notre hypothèse principale serait une anomalie du rapport ventilation/perfusion lors de la phase de sevrage. Par ailleurs, la phase de VLT a été plus efficace lorsque PFOB était em ployé comparativement au PFDEC.

Selon un rapport de l’OMS, les maladies infectieuses figurent parmi les 3 causes les plus fréquentes de mortalité en début de vie. En effet, les nouveau-nés présentent une sensibilité particulièrement importante aux infections, de par leur système immunitaire toujours en développement et donc immature. Parmi les particularités de l’immunité néonatale, l’absence de cDCs CD11chigh CD8α+ durant la 1ère semaine de vie rend compte de l’incapacité du nouveau-né à développer des réponses de type Th1 et T CD8+ cytotoxiques, essentielles à la protection contre certains pathogènes comme Listeria monocytogenes (Lm). Mon travail de thèse a porté sur l’ontogénie des DCs conventionnelles CD11chigh CD8α+ et plus particulièrement sur la fonction de cette lignée de DCs en début de vie lors d’une infection par Lm. Au cours de cette étude, nous avons identifié, chez le nouveau-né, une population splénique de cDCs CD11chigh qui expriment les marqueurs CD24, CD205 et Clec9A mais pas le CD8α. Cette population, qui dépend du facteur de transcription Batf3, acquière le CD8α une fois transférée dans une souris adulte. Ces DCs néonatales, que nous nommerons DCs pre-CD8α Clec9A+, constituent donc les précurseurs des DCs CD8α+. L’étude fonctionnelle de ces DCs pre-CD8α Clec9A+ a montré qu’elles étaient capables de phagocyter Lm et de générer des réponses T CD8+ contre cette bactérie. De plus, ces cellules sécrètent de l’IL-12p40 et de manière unique de l’IL-10 en réponse à une stimulation par Lm. Par contre, contrairement aux cDCs CD8α+ adultes, nous n’avons observé aucune production d’IL-12p70 par les DCs pre-CD8α Clec9A+ en conditions physiologiques. Elles ne sécrètent pas non plus d’IL-23. Nous avons également montré que ces sécrétions d’IL-12p40 et d’IL-10 jouaient respectivement un rôle positif et négatif dans l’induction des réponses T CD8+ contre Lm. Ainsi, la génération des réponses T CD8+ contre Lm semble résulter, en début de vie, d’une balance entre la sécrétion de ces 2 cytokines aux propriétés antagonistes. Par ailleurs, nous avons démontré que ces cellules constituaient une cible privilégiée en vue d’améliorer les stratégies vaccinales en début de vie. En effet, l’administration à des nouveau-nés d’une construction anti-Clec9A/OVA, associée au poly(I:C), induit des réponses T CD8+ anti-Lm mémoires protectrices à l’âge adulte. Finalement, nous montrons que le TNF-α produit par les monocytes et les neutrophiles joue un rôle essentiel dans la génération des réponses T CD8+ en régulant notamment le statut et la fonction des DCs pre-CD8α Clec9A+ en début de vie. En effet, cette cytokine modifie, en faveur d’une production d’IL-12p40, la balance IL-12p40/IL-10 sécrétée par celles-ci. L’inhibition de la production d’IL-10 par le TNF-α pourrait s’expliquer au moins en partie par une inhibition de la β-caténine au sein des DCs pre-CD8α Clec9A+. En conclusion, nous avons caractérisé un précurseur des DCs CD8α+ biologiquement actif au sein de la rate du nouveau-né de 3 jours. Celui-ci représente une cible potentielle pour l’amélioration des stratégies vaccinales contre des bactéries intracellulaires ou des virus en début de vie, et ce pour autant que l’on puisse contrôler ses propriétés régulatrices. / Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine) / info:eu-repo/semantics/nonPublished

L'entérocolite nécrosante (NEC) est une maladie inflammatoire affectant le tractus gastro-intestinal de 5 à 10 % des enfants prématurés ayant un poids inférieur à 1500 g à la naissance. Elle se traduit principalement par la perte de tissu de la muqueuse intestinale, ce qui permet l'invasion bactérienne, menant ultimement à une nécrose de l'intestin. Parmi les options pouvant être envisagées pour prévenir la NEC, le lait maternel constitue l'approche la plus efficace. En effet, ce dernier fournit aux nouveau-nés des nutriments essentiels, mais également des substances bioactives pouvant être à l'origine de sa capacité à prévenir l'inflammation, une des caractéristiques principales de l'entérocolite nécrosante. Toutefois, il n'existe pas de test ou de marqueur permettant de prédire le potentiel anti-inflammatoire des dons de lait maternel. Un test fonctionnel in vitro utilisant des cellules épithéliales intestinales a été développé et il a été possible d'identifier certains dons de lait maternel pouvant prévenir l'inflammation de façon significative, via la réduction de l'expression du signal NF-κB (nuclear factor kappa-B), à l'intérieur des cellules. À partir de ces données, un profil de certains facteurs bioactifs clés contenus dans le lait, tels que le facteur de croissance épidermique, les cytokines inflammatoires et les oligosaccharides, a été dressé pour différents dons de lait. Il fut possible de comparer la composition de ces dons en fonction de leur potentiel anti-inflammatoire et de tenter d'identifier une ou plusieurs molécules pouvant être à l'origine de la prévention de l'inflammation. / Necrotizing enterocolitis (NEC) is an inflammatory disease affecting the gastrointestinal tract in 5-10 % of premature infants weighing less than 1500 g at birth. It mainly results in the loss of tissue from the intestinal lining, which allows bacterial invasion, ultimately leading to necrosis of the intestine. Of the treatment options that may likely be able to prevent NEC, breast milk is the most effective approach. Indeed, the latter provides newborns with essential nutrients, but also bioactive substances that may be the origin of its ability to prevent inflammation, one of the main characteristics of NEC. However, there is no assay or marker to predict anti-inflammatory potential of breast milk samples. A functional in vitro test using intestinal epithelial cells has been developed and showed ability to identify certain donated breast milk that can significantly prevent inflammation, via the reduction of the expression of the NF-κB signal (nuclear kappa-B factor), inside cells. From these data, a profile of some key bioactive factors contained in milk, such as epidermal growth factor, inflammatory cytokines, and oligosaccharides, was dressed in different milk donations. It was possible to compare the composition of these donations according to their anti-inflammatory potential and to try to identify one or more molecules which could be the origin of the prevention of inflammation.

L'augmentation de la survie des grands prématurés fait de la réduction des séquelles dans cette population un enjeu majeur. Alors qu'il influence leur devenir, le support nutritionnel des grands prématurés échoue souvent à prévenir le déficit protéino-énergétique, les carences nutritionnelles, et les ralentissements de croissance, aggravant leur pronostic. Nos recherches investiguaient plusieurs axes des stratégies nutritionnelles actuelles, leurs limites ainsi que les perspectives d'améliorations : I) parentérales, II) entérales, III) préventions des complications, IV) évaluation de la croissance. Il s'agissait d'un ensemble d'études cliniques, qui révélaient : I) Des variations significatives d'apports parentéraux à l'intérieur des centres, ainsi qu'une sous-utilisation des lipides, participant au déficit protéino-énergétique précoce. Un impact des lipides sur la croissance, le développement cérébral, voire l'incidence de complications était suggéré. II) Des avantages de l'utilisation de lait maternel frais dans la 1ère semaine de vie sur la poursuite de l'allaitement des nouveau-nés hospitalisés, ainsi que des variations importantes de sa composition. Une augmentation des taux d'allaitement sur les périodes d'études révélait un effet bénéfique de la recherche, même « observationnelle », sur l'allaitement. III) Une augmentation du risque d'hyperglycémie en cas de diminution de la phosphatémie. IV) Des répercussions modérées de la restriction de croissance intra-utérine sur le neuro-développement des prématurés, malgré des réserves auxologiques. Ces travaux permettaient donc d'identifier plusieurs barrières, et d'envisager différentes stratégies d'amélioration du soutien nutritionnel. Ils soulignent la complexité et l'importance des liens entre nutrition, croissance et développement neurologique des enfants à risques. Des efforts supplémentaires sont nécessaires pour optimiser les connaissances, les recommandations et les pratiques dans ce domaine / Facing to increasing survival of very preterm neonates, reducing sequelae in this population became a major public issue. Nutritional support of preterm neonates has a durable impact on their future. However, it often fails to prevent the protein-energetic imbalance, nutritional deficiencies, and post-natal growth restriction, which act as aggravating factors. Our researches evaluated different axes of current nutritional strategies, limitations and possible improvements: I) parenteral, II) enteral, III) prevention of complications, IV) growth assessment. Most relevant findings of these clinical studies were: I) Significant variations of parenteral intakes in the centres, as well as inadequate use of lipids, involved in early energetic-protein deficit. Impact of lipids on growth, brain development, and even the incidence of complications were suggested. II) Advantages in using fresh raw mother's own milk in the early days to enhance breastfeeding in hospitalized neonates, as well as important changes in mother's milk composition. An increase in breastfeeding rates over the periods of studies showed a beneficial effect of the research, although "observational", on breastfeeding. III) An increased risk of hyperglycemia in case of low phosphatemia. IV) A moderate impact of being small for gestational age on neuro-development in a preterm cohort, and related auxologic limitations. This work allowed to recognize some barriers of the nutritional support, and to consider different improvement strategies. It emphasizes the close and important links between nutrition, growth and neurological development of vulnerable infants. Further efforts are needed to optimize knowledge, recommendations and practices in this area

Background : This study aimed to implement low-frequency forced oscillation technique (LFFOT) in neonatal total liquid ventilation (TLV) and to provide the first insight into respiratory impedance under this new modality of ventilation. Method. Thirteen newborn lambs weighing 2.5 « 0.4 kg (mean « SD) were premedicated, intubated, anesthetized, and then placed under TLV using a specially-design liquid ventilator and a perfluorocarbon. The respiratory mechanics measurements protocol was started immediately after TLV initiation. Three blocks of measurements were first performed: one during initial respiratory system adaptation to TLV, followed by two others series during steady state conditions. Lambs were then divided into two groups prior to undergoing another three blocks of measurements: the first group received a 10-min i v infusion of salbutamol (1.5 [micro]g/kg/min) after continuous infusion of methacholine (9 [micro]g/kg/min) while the second group of lambs were chest-strapped. Respiratory impedance was measured using serial single-frequency tests at frequencies ranging between 0.05-2 Hz and then fitted with a constant-phase model. 0.2 Hz harmonic test signals were also launched every ten minutes throughout the measurement protocol. Results. Airway resistance and inertance were starkly increased in TLV compared to gas ventilation with a resonant frequency [less than or equal to] 1.2 Hz. 0.2 Hz resistance and reactance were sensitive to bronchoconstriction and dilation as well as during compliance reduction. Conclusions. We report successful implementation of LFFOT to neonatal total liquid ventilation and present the first insight into respiratory impedance under this new modality of ventilation. We show that LFFOT is an effective tool to track respiratory mechanics under TLV.

More than 50% of newborns death is due to the sudden infant death syndrome (SIDS). Exposure to cigarette smoke represents the highest risk factor for SIDS. Cardiac bradycardias are observed in most cases of SIDS. The cardiac conduction system is molded by a resorptive degeneration process (apoptosis). Nicotine is known to possess anti-apoptotic effects. Therefore, we hypothesized that nicotine disrupts the maturation of the sinoatrial (SAN) and auriculoventricular (AVN) nodes, which in return can cause arrhythmias leading to SIDS. Methods: Osmotic pumps delivering nicotine were subcutaneously implanted in pregnant rabbits at their second week of pregnancy. We then characterized the level of apoptosis in SAN of newborn rabbits exposed or not to nicotine in utero. Moreover, we did immunofluorescence to localize the sodium channels (Na[subscript v]s) within the SAN. Then, using quantitative PCR, we quantified the expression of Na[subscript v]s in the atria and ventricles of the newborn rabbits' hearts at 0, 7, 14 and 30 days postnatal. Finally, we looked at the effect of isoproterenol on the cardiac sodium channels in rabbits exposed or not to nicotine. Results: Nicotine decreased apoptosis at 7 days postnatal, thus preventing the early development of SAN. At 14 and 30 days when serum nicotine levels dropped to 0 ng/ml, apoptosis reached levels similar to unexposed rabbit hearts at 7 days. Nicotine increased the expression pattern of SCN1A and SCN5A in the right atria of control newborn rabbits. Therefore, at 0 day PN, we observed an increase in the expression of SCN1A, SCN4A and SCN5A of respectively 3, 2 and 15 times. At 7 days PN, I observe an increase of expression of 7, 30 and 64 times for SCN1A, SCN4A and SCN5A respectively. At 14 days PN, I notice an increase in the expression of SCN1A, SCN4A and SCN5A of respectively 2, 3 and 7 times. At 30 days PN, I note an increase of expression of SCN5A by 44 times when exposed to nicotine. Finally, I observe that nicotine removes the effect of isoproterenol on the amplitude of cardiac sodium channels. Conclusion: In conclusion, our study demonstrates that nicotine disturbed the resorptive degeneration process and delays the development of the SAN and regionally perturbed expression of SCN1A, SCN4A and SCN5A. These changes can help explain the conduction disturbances observed in SIDS.