Entre as biotécnicas da reprodução, a inseminação artificial (IA) é a que proporciona maior amplitude de resultados nos programas de melhoramento genético animal. A adequada seleção dos atributos produtivos e reprodutivos de fêmeas e principalmente dos machos é a base essencial para a maximização do potencial dessa técnica. O sêmen para IA pode ser fresco, fresco diluído, refrigerado e congelado. Os diluidores têm papel fundamental na expansão do volume seminal, permitindo seu fracionamento na preservação do sêmen no processo de refrigeração, eles devem ser atóxicos, ter pH e pressão osmótica compatíveis com a sobrevivência espermática, de baixo custo e fácil preparo. Sendo assim o objetivo deste trabalho foi avaliar a conservação de sêmen ovino resfriado com diluente de Kenney (K) ou diluente de Kenney mais gema de ovo (KG) por até 48 horas. Foram utilizados quatro carneiros, sendo feitas 40 colheitas. Logo após o sêmen era dividido em duas alíquotas uma com o diluente de K e outra alíquota com diluente de KG. As amostras foram resfriadas à 10ºC. As análises subjetivas usuais foram feitas nos tempos 0, 24 e 48 horas. Estas análises incluíram turbilhonamento, motilidade e vigor. Foram feitas também análises de testes funcionais como a avaliação da integridade das membranas plasmática e acrossomal através das colorações de eosina-nigrosina e técnica da coloração Fast Green / Rosa Bengala (POPE, 1991) respectivamente, avaliação da atividade citoquímica mitocondrial através da coloração de diaminobenzidina (DAB) e avaliação da susceptibilidade do espermatozóide ao estresse oxidativo através da avaliação dos níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico após a incubação com sistema gerador constituído de sulfato de ferro e ascorbato. Neste trabalho o tempo afetou significativamente a motilidade e o vigor espermático, caindo de 79,16±1,41 para 40,25±2,55 após 48hs e de 3,92±0,06, para 2,57±0,10 após 48hs respectivamente. O tempo influenciou também a integridade das membranas plasmática e acrossomal, fazendo com que houvesse uma queda gradativa nas integridades (0hs=95,75±0,36, 24hs=90,69±0,99, 48hs=86,11±1,45) e (0hs=90,34±0,80, 24hs=84,33±1,30, 48hs=76.67±1,69) respectivamente. Foi possível observar também que ao longo do tempo houve uma diminuição da atividade mitocondrial e um aumento nas espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), que diferiu do tempo 0hs para o tempo 48hs (807,42±39.22 e 937,76 ± 41,87). Verificou-se ainda que o meio K apresentou maiores valores de vigor do que o meio KG (p=0,0144), e que o meio K foi capaz de preservar melhor a atividade mitocondrial P=0,0005. A concentração de TBARS no diluente K correlacionou-se negativamente com as variáveis motilidade, vigor, integridade de membrana plasmática e acrossomal. No diluente KG as correlações do TBARS e DAB III foram positiva (r=0,35), demonstrando que quanto maior a quantidade de células com baixa atividade mitocondrial, maior a concentração de TBARS. Foi também encontrada uma correlação negativa entre a variável integridade de acrossomo (ACRO) e TBARS (r=-0,40; P=0,0001), mostrando que quanto menor a porcentagem de células com acrossomo integro, maior a concentração de substancias reativas ao acido tiobarbitúrico. Concluindo que o diluente K foi eficaz em preservar as características seminais de ovino por até 48 horas e que a adição da gema de ovo ao diluente de Kenney não foi capaz de melhorar estas características. / Among the reproductive biotechniques routinely used in animal production, the artificial insemination (AI) is known to provide a greater gain in genetic improvement programs. The adequate selection of female and especially male productive and reproductive traits is the keystone to maximize the potential of this technique. Semen used for AI can be used fresh diluted or not, chilled and frozen. An essential role is played by semen extenders on volume expansion, allowing not only the fractioning in multiple insemination doses, but also the maintenance of sperm fertilizing potential. Therefore, for semen fractioning, chilling or cryopreservation, extenders are required to be atoxic, must maintain pH and osmolarity compatible to the sperm survival, and should be preferably inexpensive and easy to prepare. Therefore, the objective of the present study was to evaluate chilled ram semen using the Kenney extender (K) of the Kenney extender with egg yolk (KG) for 48 h. Forty ejaculates of four rams were (n=40) were used. Samples were equally divided into two aliquots and extended in K extender and KG extender. Samples were chilled at 10ºC and evaluated immediately after chilling (0h), 24 and 48 h later. These analyses included gross motility (swirl pattern), individual motility and vigor. Functional test analyses such as evaluation of plasma membrane integrity using the eosin-nigrosin staining technique, acrosome integrity using the fast green / bengal rose staining method (POPE, 1991), mitochondrial cytochemical activity evaluation utilizing diaminobenzidine (DAB) staining and assessment of sperm susceptibility to the oxidative stress based the levels of thiobarbituric acid reactive substances after the incubation with ferrous sulphate and ascorbate (TBARS) were performed. In this study, a significant influence of chilling period was found for spermatic motility and vigor dropping from 79.16±1.41 to 40.25±2.55 after 48 hours and from 3.92±0.06 to 2.57±0.10 after 48 hours, respectively. Time also negatively influenced the integrity of plasma and acrosomal membrane (0hr=95.75±0.36, 24hrs=90.69±0.99, 48hrs=86.11±1.45; and 0hr=90.34±0.80, 24hrs=84.33±1.30, 48hrs=76.67±1.69, respectively). Also, during the course of time there was a decrease in mitochondrial activity and an increase in TBARS, with an increase from moment 0 to 48 hrs (807.42 ± 39.22 and 937.76 ± 41.87). It was also found that the medium K had greater values of vigor than the medium KG (p=0.0144), and that the medium K was capable of better preserve mitochondrial activity (P=0.0005). A negative correlation was found between the TBARS concentration with motility and vigor and plasma and acrosomal membrane integrity when samples were stored with the extender K. In the KG extender, the TBARS and DAB III correlations were positive (r=0, 35) indicating that showing that the greater the number of cells with low mitochondrial activity, the higher the TBARS concentration. Also, a negative correlation between the acrosomal integrity variable (ACRO) and TBARS (r=-0, 40; P=0,0001) was found, which demonstrates that the lower the percentage of cells with intact acrosomal, the higher the susceptibility to the oxidative stress. Therefore, results indicated that the K extender was effective in preserve the seminal characteristics of ovine for 48 hours and the addition of egg yolk to kenney extender was not capable of improving such characteristics.

Sheep rearing is an activity that in the last years has undergone several changes related to the production systems, focusing its search in efficient managements that provide the creation profitability. Among the main obstacles in the activity, the errors in sanitary and nutritional management are directly responsible for the decrease in production, the costs with treatments and the loss of genetic material by death, mainly of fetuses and females in peripartum. There fore microminerals used as nutraceuticals can minimize these losses. In order to evaluate the metabolism of a new source of injectable zinc, called zinc edetate and its effect on metabolic and oxidative parameters in postpartum ewes, two experimental studies were performed. In the first one, six male lambs were used and housed in individual metabolic cages. The animals went through a period of 10 days of adaptation and later were divided into two experimental groups. Three animals received a dose of 3mg/kg (2ml) of zinc edetate subcutaneous (SC), being considered the treated group (GT), and other three animals received the same dose of 0.9% sodium chloride solution by the same route, being denominated control group (CG). After the adaptation period the animals were monitored for 30 days to determine the production of faeces and urine and the zinc excretion was measured. During the first 7 days, blood samples were collected for the determination of serum zinc. After this initial period, the blood collections were performed on interspersed days up to 30 days. Water and food samples were also collected to determine the diet concentration of zinc. At the end of the study, the animals were submitted to euthanasia, where 5 grams each of liver, muscle (Longissimus dorsi), heart and kidney were collected in order to determine the concentration of tissue zinc. At the end of the experiment, it was concluded that the zinc edetate presented a greater urinary excretion than the fecal one, as well as being the main route of elimination of this mineral. The use of zinc edetate did not alter the concentrations of this mineral in the tissues and blood of the animals, but presented a higher apparent absorption and retention of this mineral. In the second study, which aimed to evaluate zinc edetate on metabolic and oxidative variables in ewes in the immediate postpartum period, 26 Texel ewes, raised extensively, aged 3 to 4 years, with pregnancy confirmed by ultrasonography at 45 days of gestation, and with mean body score 3.0 were used. Only sheep with simple gestation distributed in two experimental groups were used in the study: the animals in the treated group (GT; n = 13) received 100mg of zinc edetate SC (2mL) 15 days before the expected delivery date and the group control (CG; = 13) received 2mL of 0.9% sodium chloride solution SC at the same date as GT. Blood samples were collected 15 days before the expected delivery date and immediately after delivery for evaluation of the effect of zinc edetate. The 20mL of blood sample was collected in a silicone tube without anticoagulant. The levels of insulin-like growth factor (IGF-1), fructosamine, cholesterol, triglycerides, and oxidative stress index were obtained by measuring the total antioxidants and oxidants, and the blood levels of zinc. There was no difference in oxidative metabolic parameters between the experimental groups (P> 0.05) as well as in blood zinc concentrations (P> 0.05). Zinc edetate had no action on metabolic and oxidative variables in the postpartum period of sheep with reduced metabolic challenge. / A ovinocultura é uma atividade que nos últimos anos passou por uma série de mudanças relacionadas aos sistemas de produção, focando sua busca em manejos eficientes que proporcionem a lucratividade da criação. Dentre os principais entraves na atividade destacam-se os erros nos manejos sanitário e nutricional que são responsáveis diretos pela diminuição da produção, custos com tratamentos e perda de material genético por morte, principalmente de fetos e fêmeas no perirparto. Diante disso, os microminerais utilizados como nutracêuticos podem minimizar estas perdas. Com o objetivo de avaliar o metabolismo de uma nova fonte de zinco injetável, denominada edetato de zinco e seu efeito em parâmetros metabólicos e oxidativos em ovelhas no pós-parto, realizou-se dois estudos experimentais. No primeiro utilizou-se-se 6 cordeiros machos que foram alocados em gaiolas metabólicas individuais. Os animais passaram por um período de 10 dias de adaptação e, posteriormente, foram divididos em dois grupos experimentais. Três animais foram tratados com uma dose de 3mg/kg (2ml) de edetato de zinco por via subcutânea (SC), sendo considerado o grupo tratado (GT), e três receberam a mesma dose de solução de cloreto de sódio a 0,9% pela mesma via, sendo denominado grupo controle (GC). Os animais foram monitorados durante 30 dias para determinação da produção de fezes e de urina e da excreção de zinco. Durante os 7 primeiros dias foram realizadas coletas de amostras de sangue para determinação do zinco sérico. Após este período, as coletas foram realizadas em dias intercalados até 30 dias. Também foram coletas amostras da água e do alimento para determinar a concentração de zinco na dieta. Ao final do estudo os animais foram submetidos à eutanásia com posterior coleta de 5 gramas dos seguintes tecidos: fígado, músculo (Longissimus dorsi), coração e rim, com a finalidade de determinar a concentração de zinco tecidual. Ao final concluiu-se que o edetado de zinco apresentou uma excreção urinária maior que a fecal, assim como foi a principal via de eliminação deste mineral. A aplicação do edetato de zinco não alterou as concentrações de zinco nos tecidos e no sangue dos animais, porém apresentou uma maior absorção e retenção aparentes deste mineral. No segundo estudo, que teve por objetivo avaliar o edetato de zinco sobre variáveis metabólicas e oxidativas em ovelhas no pós-parto imediato, utilizou-se 26 ovelhas da raça Texel, criadas extensivamente, com idade entre 3 e 4 anos, com prenhez confirmada através de ultrassonografia aos 45 dias de gestação e com média de escore corporal 3,0. Foram utilizadas somente ovelhas com gestação simples distribuídas em dois grupos experimentais: grupo tratado (GT; n= 13), animais que receberam 100mg de edetato de zinco SC (2ml) 15 dias antes da data prevista do parto e grupo controle (GC; n= 13), animais que receberam 2ml de cloreto de sódio a 0,9% no mesmo momento experimental. Foram coletadas amostras de sangue 15 dias antes da data prevista do parto e imediatamente após o parto para avaliação do efeito do edetato de zinco. Foram mensurados os teores de Fator de Crescimento Semelhante à Insulina Tipo 1 (IGF-1), de frutosamina, de colesterol, de triglicerídeos, do índice de estresse oxidativo, sendo este obtido através da mensuração do total de antioxidantes e de oxidantes, e dos teores sanguíneos de zinco. Não houve diferença nos parâmetros metabólicos oxidativos entre os grupos experimentais (P>0,05), bem como nas concentrações de zinco sanguíneo (P>0,05). O edetato de zinco não tem ação sobre variáveis metabólicas e oxidativas no pós-parto de ovelhas com reduzido desafio metabólico.

Entre as biotécnicas da reprodução, a inseminação artificial (IA) é a que proporciona maior amplitude de resultados nos programas de melhoramento genético animal. A adequada seleção dos atributos produtivos e reprodutivos de fêmeas e principalmente dos machos é a base essencial para a maximização do potencial dessa técnica. O sêmen para IA pode ser fresco, fresco diluído, refrigerado e congelado. Os diluidores têm papel fundamental na expansão do volume seminal, permitindo seu fracionamento na preservação do sêmen no processo de refrigeração, eles devem ser atóxicos, ter pH e pressão osmótica compatíveis com a sobrevivência espermática, de baixo custo e fácil preparo. Sendo assim o objetivo deste trabalho foi avaliar a conservação de sêmen ovino resfriado com diluente de Kenney (K) ou diluente de Kenney mais gema de ovo (KG) por até 48 horas. Foram utilizados quatro carneiros, sendo feitas 40 colheitas. Logo após o sêmen era dividido em duas alíquotas uma com o diluente de K e outra alíquota com diluente de KG. As amostras foram resfriadas à 10ºC. As análises subjetivas usuais foram feitas nos tempos 0, 24 e 48 horas. Estas análises incluíram turbilhonamento, motilidade e vigor. Foram feitas também análises de testes funcionais como a avaliação da integridade das membranas plasmática e acrossomal através das colorações de eosina-nigrosina e técnica da coloração Fast Green / Rosa Bengala (POPE, 1991) respectivamente, avaliação da atividade citoquímica mitocondrial através da coloração de diaminobenzidina (DAB) e avaliação da susceptibilidade do espermatozóide ao estresse oxidativo através da avaliação dos níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico após a incubação com sistema gerador constituído de sulfato de ferro e ascorbato. Neste trabalho o tempo afetou significativamente a motilidade e o vigor espermático, caindo de 79,16±1,41 para 40,25±2,55 após 48hs e de 3,92±0,06, para 2,57±0,10 após 48hs respectivamente. O tempo influenciou também a integridade das membranas plasmática e acrossomal, fazendo com que houvesse uma queda gradativa nas integridades (0hs=95,75±0,36, 24hs=90,69±0,99, 48hs=86,11±1,45) e (0hs=90,34±0,80, 24hs=84,33±1,30, 48hs=76.67±1,69) respectivamente. Foi possível observar também que ao longo do tempo houve uma diminuição da atividade mitocondrial e um aumento nas espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), que diferiu do tempo 0hs para o tempo 48hs (807,42±39.22 e 937,76 ± 41,87). Verificou-se ainda que o meio K apresentou maiores valores de vigor do que o meio KG (p=0,0144), e que o meio K foi capaz de preservar melhor a atividade mitocondrial P=0,0005. A concentração de TBARS no diluente K correlacionou-se negativamente com as variáveis motilidade, vigor, integridade de membrana plasmática e acrossomal. No diluente KG as correlações do TBARS e DAB III foram positiva (r=0,35), demonstrando que quanto maior a quantidade de células com baixa atividade mitocondrial, maior a concentração de TBARS. Foi também encontrada uma correlação negativa entre a variável integridade de acrossomo (ACRO) e TBARS (r=-0,40; P=0,0001), mostrando que quanto menor a porcentagem de células com acrossomo integro, maior a concentração de substancias reativas ao acido tiobarbitúrico. Concluindo que o diluente K foi eficaz em preservar as características seminais de ovino por até 48 horas e que a adição da gema de ovo ao diluente de Kenney não foi capaz de melhorar estas características. / Among the reproductive biotechniques routinely used in animal production, the artificial insemination (AI) is known to provide a greater gain in genetic improvement programs. The adequate selection of female and especially male productive and reproductive traits is the keystone to maximize the potential of this technique. Semen used for AI can be used fresh diluted or not, chilled and frozen. An essential role is played by semen extenders on volume expansion, allowing not only the fractioning in multiple insemination doses, but also the maintenance of sperm fertilizing potential. Therefore, for semen fractioning, chilling or cryopreservation, extenders are required to be atoxic, must maintain pH and osmolarity compatible to the sperm survival, and should be preferably inexpensive and easy to prepare. Therefore, the objective of the present study was to evaluate chilled ram semen using the Kenney extender (K) of the Kenney extender with egg yolk (KG) for 48 h. Forty ejaculates of four rams were (n=40) were used. Samples were equally divided into two aliquots and extended in K extender and KG extender. Samples were chilled at 10ºC and evaluated immediately after chilling (0h), 24 and 48 h later. These analyses included gross motility (swirl pattern), individual motility and vigor. Functional test analyses such as evaluation of plasma membrane integrity using the eosin-nigrosin staining technique, acrosome integrity using the fast green / bengal rose staining method (POPE, 1991), mitochondrial cytochemical activity evaluation utilizing diaminobenzidine (DAB) staining and assessment of sperm susceptibility to the oxidative stress based the levels of thiobarbituric acid reactive substances after the incubation with ferrous sulphate and ascorbate (TBARS) were performed. In this study, a significant influence of chilling period was found for spermatic motility and vigor dropping from 79.16±1.41 to 40.25±2.55 after 48 hours and from 3.92±0.06 to 2.57±0.10 after 48 hours, respectively. Time also negatively influenced the integrity of plasma and acrosomal membrane (0hr=95.75±0.36, 24hrs=90.69±0.99, 48hrs=86.11±1.45; and 0hr=90.34±0.80, 24hrs=84.33±1.30, 48hrs=76.67±1.69, respectively). Also, during the course of time there was a decrease in mitochondrial activity and an increase in TBARS, with an increase from moment 0 to 48 hrs (807.42 ± 39.22 and 937.76 ± 41.87). It was also found that the medium K had greater values of vigor than the medium KG (p=0.0144), and that the medium K was capable of better preserve mitochondrial activity (P=0.0005). A negative correlation was found between the TBARS concentration with motility and vigor and plasma and acrosomal membrane integrity when samples were stored with the extender K. In the KG extender, the TBARS and DAB III correlations were positive (r=0, 35) indicating that showing that the greater the number of cells with low mitochondrial activity, the higher the TBARS concentration. Also, a negative correlation between the acrosomal integrity variable (ACRO) and TBARS (r=-0, 40; P=0,0001) was found, which demonstrates that the lower the percentage of cells with intact acrosomal, the higher the susceptibility to the oxidative stress. Therefore, results indicated that the K extender was effective in preserve the seminal characteristics of ovine for 48 hours and the addition of egg yolk to kenney extender was not capable of improving such characteristics.

The increase in the NTPDase and 5'-nucleotidase enzymatic activities, in patients with diabetes and hypertension, unchained the investigation of the possible mechanisms involved in the alterations in ectonucleotidases activities. The oxidative stress level and also the answer of the antioxidant systems were evaluated in patients with type 2 diabetes, hypertension and type 2 diabetes with associated hypertension. The interference of the glucose concentration was evaluated in the enzymatic activity of the ectonucleotidases, serum cholinesterase and also antioxidant enzymes. The curves in vitro demonstrated that the increase in enzymatic activity was proportional to the elevation in the glucose concentrations, demonstrating a direct interference of the hyperglycemia. The increase in the NTPDase expression demonstrated an important correlation with adenine nucleotide ATP and ADP hydrolyze in patients with diabetes and associated hypertension. The increment in markers of oxidative stress and antioxidant systems levels in patients with diabetes and associated hypertension seems to be related with a compensatory mechanism to prevent oxidative damages. Low serum acid ascorbic levels increase exposes to oxidative damages in patients with diabetes and associated hypertension, resultant of the increase in reactive oxygen species generation. The increment in the serum cholinesterase activity can be potentially related with glycemia levels and lipid metabolism in patients with diabetes and associated hypertension. The medicines administered to the patients did not alter the enzymatic responses in the analyzed groups. Therefore, there were a possible interference of the diabetes and hypertension in the catalytic mechanism of the serum cholinesterase enzyme. Data obtained in the studies permit to suggest that high blood glucose levels constitute one of the principal factors capable to promote alterations in the enzymatic responses in patients with diabetes and associated hypertension. / O aumento na atividade enzimática da NTPDase e 5'-nucleotidase, em pacientes com diabetes e hipertensão, desencadeou a investigação dos possíveis mecanismos envolvidos nas alterações na atividade das ectonucleotidases. O nível de estresse oxidativo e também a resposta dos sistemas antioxidantes foram avaliados em pacientes com diabetes tipo 2, hipertensão e diabetes tipo 2 com hipertensão associada. A interferência da concentração de glicose foi avaliada na atividade enzimática das ectonucleotidases, colinesterase sérica e também das enzimas antioxidantes. As curvas in vitro demonstraram que o aumento na atividade dos sistemas enzimáticos foi proporcional à elevação nas concentrações de glicose, demonstrando uma interferência direta da hiperglicemia. O aumento na expressão da enzima NTPDase demonstrou uma importante correlação com a hidrólise dos nucleotídeos de adenina ATP e ADP em pacientes com diabetes e hipertensão associada. O incremento nos níveis de marcadores de estresse oxidativo e dos sistemas antioxidantes, em pacientes com diabetes e hipertensão associada, parecem estar relacionados com um mecanismo compensatório para prevenir o dano oxidativo. Os baixos níveis de ácido ascórbico sérico aumentam a exposição dos pacientes, com diabetes e hipertensão associada, aos danos oxidativos resultantes do aumento na geração de espécies reativas de oxigênio. O aumento na atividade da enzima colinesterase sérica, em pacientes com diabetes e hipertensão associada, pode estar potencialmente relacionado com os níveis de glicemia e com o metabolismo dos lipídios. Os medicamentos administrados aos pacientes não alteraram as respostas enzimáticas nos grupos analisados. Portanto, houve uma possível interferência do diabetes e da hipertensão no mecanismo catalítico da colinesterase sérica. Os dados obtidos nos estudos permitem sugerir que os elevados níveis de glicose sangüínea constituem um dos principais fatores capazes de promover alterações nas respostas enzimáticas em pacientes diabéticos e com hipertensão associada.