Nous avons caractérisé cinq protéines bovines qui sont potentiellement impliquées dans la reproduction.Un travail de clonage a été initié qui permettra à terme de purifier les GPA2 et GPB5 recombinantes puis naturelles pour étudier leurs structures. GPA2 et GPB5 sont considérés comme les ancêtres moléculaires des sous-unités α et β des hormones glycoprotéiques. Nous avons montré la relative fragilité thermique de la structure quaternaire de la FSH bovine par rapport aux FSH ovine et humaine et nous avons étudié les propriétés enzymatiques de la PDI (Protein Disulfide Isomerase) en préalable à l’étude de l’activité PDI de GPA2/GPB5. Nous avons aussi purifié la phosphatidyl-ethanolamine-binding protein (PEBP) et l’ubiquitine testiculaires par chromatographie hydrophobe à très haute concentration de sulfate d’ammonium. A partir de la PEBP purifiée, on a produit des anticorps spécifiques chez le lapin qui nous ont permis d’être les premiers à développer un dosage ELISA fiable pour cette protéine. / We characterized five bovine proteins that are potentially involved in reproduction. We started with the cloning of gpa2 and gpb5 cDNAs in order to eventually purify recombinant and natural GPA2 and GPB5 to study their possible quaternary structure. GPA2 and GPB5 are the evolutionary ancestors of Glycoprotein hormones α and β subunits respectively. Meanwhile, we have shown the relative quaternary structure fragility of bovine FSH compared to human and sheep FSH. We also studied the effect of endocrine disruptors on PDI (Protein Disulfide Isomerase) before addressing GPA2/GPB5 PDI activity of GPA2/GPB5 once purified.We succeeded to purify the phosphatidyl-ethanolamine-binding protein (PEBP) and ubiquitin from bovine testis by hydrophobic interaction chromatography at very high ammonium sulfate concentration and we produced specific antibodies (anti-PEBP) in rabbits that allowed us to be the first to develop a reliable Elisa assay for this protein.

Norway spruce (Picea abies L. Karst) is a conifer belonging to the group gymnosperms and is an ecologically and economically important species in several parts of Europe. It is crucial for trees like Norway spruce to adapt timing of events such as bud set and growth cessation to the local environment in order to maximize the growth period while avoiding frost damage. This thesis aims at widening the knowledge about genetic control of annual growth rhythm in Norway spruce and particularly the control of bud set. Using spruce transformants ectopically expressing PaFT/TFL1-LIKE 2 (PaFTL2) the prior hypothesis that PaFTL2 induces bud set is confirmed. This is further supported by spatial and temporal expression patterns in seedlings and adult trees. It is further shown that gymnosperms possess at least two FLOWERING LOCUS T/TERMINAL FLOWER 1 (FT/TFL1)-like genes with TFL1-like function, suggesting the ancestor of FT and TFL1 to be more TFL1-like. PaFTL1 appears to have complementary expression patterns to that of PaFTL2 both spatially and temporally indicating they may act together to control growth in Norway spruce. Since bud set is controlled by photoperiod and circadian clock genes are implicated in this process, putative clock homologs were studied to gain insight into the circadian clock in gymnosperms. Several clock homologs were identified and their expression showed a diurnal pattern but the expression was rapidly damped in constant conditions. Transgenic Arabidopsis expressing putative core clock genes from spruce indicate that at least three genes, PaCCA1, PaGI and PaZTL, appear to have a conserved function between angiosperms and gymnosperms. Taken together these results suggest that gymnosperms have a similar core clock structure as angiosperms even though fundamental differences might exist since the cycling of the clock genes were rapidly damped in free-running conditions. The studies presented in this thesis support substantial conservation of pathway components controlling photoperiodic responses in angiosperms and gymnosperms and identify PaFTL2 as a component of growth rhythm control. However, important changes in these processes are also evident. The results provide a solid basis for future research on molecular mechanisms controlling an adaptive trait in an important non-model organism.

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Les Phosphatidylethanolamine Binding Proteins (PEBP) sont des protéines d'environ 20 kDa conservées depuis les bactéries jusqu'aux mammifères. Elles sont caractérisées par leur capacité de fixer des ligands anioniques. Les PEBP agissent dans un grand nombre de processus cellulaires (notamment au niveau des voies de transduction du signal), et de processus physiologiques (comme la spermatogénèse) de l'organisme sain. Par ailleurs des modifications de l'expression de ces protéines sont corrélées à des situations pathologiques comme les cancers primaires et métastatiques, le diabète, la maladie d'Alzheimer et l'infertilité. Il existe 7 PEBP chez la drosophile. Durant ce travail de thèse nous avons exprimé 3 d'entre elles chez Escherichia coli et mis au point les protocoles pour les purifier en grande quantité. Parmi les protéines produites, la protéine CG7054 a été choisie pour une étude structurale par RMN. Nous avons réalisé l'attribution des signaux 'H, 13C et 'Shi du squelette peptidique et des chaînes latérales de cette protéine. L'étude de la dynamique de son squelette peptidique a été réalisée et sa structure 3D a été déterminée et analysée.