Made available in DSpace on 2014-06-17T02:02:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000458701-Texto+Completo-0.pdf: 1213511 bytes, checksum: 5c4a01085ee74091dcd6f5af755a1eca (MD5) Previous issue date: 2014 / Studies on dental caries demonstrate inflammation on dental pulp tissues following infection. Cytokines are able to activate those cells linked to inflammatory and immune response thus neutralizing potentially aggressive agents and allowing tissue repair. Some of those cytokines, denominated chemokines, could contribute to the establishment of an immunotherapy able to control those cytokines involved with the triggering of dental pulp inflammation. Research on chronic inflammation has provided some relevant insights. However, the role of certain chemokines on acute inflammation is yet not conclusive. This study attempts to unveil the role of the chemokines CCL5/RANTES, CCR5 and RANKL on initial and acute pulpal inflammation. Methods: 18 Wistar rats were subjected to anesthesia. Access was performed on their first lower molars until pulp exposure. They were divided into three experimental groups considering the solution administered: Saline, lipopolysaccharide (LPS) and lipoteichoic acid (LTA) (n=6 each group). Higid second lower molars were used as controls. The cavities were sealed with amalgam and euthanasia occurred after 48 h and the jaws were dissected for histologic evaluation. CCL5/RANTES is expressed in all groups, unlike CCR5, that was not expressed. RANKL appears only in inflammatory cells, including control group. Only RANKL could be expressed during initial pulpal inflammation, being able to detect inflammatory cell activity. / Estudos de cárie demonstraram aspectos inflamatórios nos tecidos pulpares decorrentes de infecção estabelecida. Citocinas seriam capazes de ativar células ligadas à resposta inflamatória e imune no sentido de neutralizar potenciais agentes invasores e permitir o reparo dos tecidos pulpares. Algumas destas, denominadas quimiocinas, poderiam contribuir no estabelecimento de uma imunoterapia capaz de bloquear aquelas citocinas responsáveis pelo processo inflamatório. Na inflamação crônica estas pesquisas já possuem resultados satisfatórios. Na inflamação aguda, os estudos ainda estão inconclusivos. Este estudo teve como objetivo testar as quimiocinas CCL5/RANTES, CCR5 e RANKL na inflamação pulpar aguda. Métodos: 18 Ratos Wistar foram anestesiados. Foram feitas cavidades até a exposição pulpar nos primeiros molares inferiores. Eles foram divididos em três grupos onde se administrou solução salina estéril, lipopolissacarídeo (LPS) e ácido lipoteicóico (LTA) (n= 6 por grupo). Os segundos molares inferiores hígidos foram utilizados como controle. As cavidades foram seladas com amálgama e a eutanásia foi realizada após 48h. As mandíbulas foram dissecadas para exame histológico e da imunoexpressão das quimiocinas em estudo. Obteve-se como resultados: CCL5/RANTES é expressa em todos os grupos, ao contrário do CCR5, que não foi expressa. RANKL aparece apenas em células inflamatórias. Somente a expressão de RANKL foi capaz de demonstrar atividade celular na inflamação pulpar inicial.

Submitted by Ginamara Lima (ginaj@pucrs.br) on 2013-06-19T13:08:40Z No. of bitstreams: 1 434616.pdf: 1582052 bytes, checksum: cc637f53364c5652d47a360c1e06850b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-19T13:08:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 434616.pdf: 1582052 bytes, checksum: cc637f53364c5652d47a360c1e06850b (MD5) / Diferentes abordagens têm sido advogadas para implementação do tratamento conservador do tecido pulpar, usualmente empregando o controle da inflamação e a aplicação de compostos com potencial terapêutico sobre a polpa. A Resolvina E1 (RvE1) é um mediador lipídico capaz de regular rotas inflamatórias que não envolvem o bloqueio de intermediários enzimáticos. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito tópico da RvE1 sobre polpas dentais expostas ao meio oral. Para esta finalidade, 42 ratos machos Wistar (n = 6 por grupo/período), tiveram as polpas dos primeiros molares inferiores direitos acessadas e deixadas expostas ao meio oral por 24 horas. Após este período, medicação tópica com etanol 0.1% (veículo da RvE1), RvE1 ou corticosteróide foi aplicada sobre o tecido pulpar e os dentes foram selados com amálgama de prata. Os efeitos dos protocolos testados foram avaliados histologicamente após 24 e 72 horas. Dentes intactos foram utilizados como referência para análise das alterações verificadas nos grupos experimentais. RvE1 induziu significativa redução e contenção da inflamação com danos pulpares menos extensos em comparação ao etanol 0.1% ou corticosteróide (P<0.05). Nenhum dos fármacos testados promoveu características pulpares idênticas às observadas nos dentes intactos (P<0.01). Os resultados apresentados revelaram a função protetora da RvE1 na inflamação da polpa, sugerindo que ela possa ser candidata para uma nova estratégia terapêutica para a preservação de sua vitalidade. / Different approaches have been advocated for implementation of conservative treatment of the pulp tissue, usually employing inflammation control and the application of compounds with therapeutic potential on the pulp. The Resolvin E1 (RvE1) is a lipid mediator capable of regulating inflammatory routes that do not involve the blockage of enzymatic intermediates. The aim of this study was to evaluate the effect of the topical application of RvE1 on dental pulps exposed to the oral environment. To this end, 42 male Wistar rats (n=6 per group/period) had the pulps of the right mandibular first molars assessed and then left exposed to the oral environment for 24 hours. After this period, topical medication either with 0.1% ethanol (vehicle of RvE1), RvE1 or a corticosteroid was applied onto the pulp tissue, and the teeth were then sealed with silver amalgam. The effects of the tested protocols were assessed by histology after 24 and 72 hours. Untouched teeth were used as reference for relative analysis and grading of the alterations observed in test groups. RvE1 induced significant reduction and containment of pulp inflammation with less extensive damage compared to either 0.1% ethanol or corticosteroid (P<0.05). Within the conditions tested none of the tested drugs promoted identical pulp tissue features compared to the observed in untouched teeth (P<0.01). The results presented herein have uncovered protective roles for RvE1 in pulp inflammation, suggesting that it may be a candidate for a novel therapeutic strategy for preservation of its vitality.

Este trabalho aplicou uma tecnologia alternativa para a obtenção de polpa de acerola pasteurizada com alto valor agregado mediante a aplicação de uma técnica promissora de processamento, o aquecimento ôhmico. O objetivo principal foi estudar essa tecnologia, avaliando sua aplicabilidade no tratamento térmico de alimentos líquidos e também a influência das variáveis de processo sobre a degradação de compostos nutricionais da polpa. Inicialmente, foram determinadas algumas propriedades físicas de polpa de acerola - tais como massa específica, condutividade elétrica, calor específico, difusividade térmica e condutividade térmica - para posterior utilização desses dados em estudos envolvendo a modelagem do processo de aquecimento ôhmico. Os resultados obtidos demonstram que é possível a utilização das propriedades físicas da água, uma vez que os valores encontrados experimentalmente são muito próximos aos valores tabelados para a água pura. Na sequência, um sistema de aquecimento ôhmico em escala de bancada foi projetado, construído e validado. Foi realizada uma avaliação dos parâmetros críticos de processo durante a operação do sistema de aquecimento ôhmico. Após a construção de três células ôhmicas, o aparato desenvolvido tornou-se adequado para a realização de estudos e testes envolvendo o tratamento térmico de polpas de frutas. Em seguida, foram realizados estudos avaliando a degradação da vitamina C, de antocianinas e também perdas de cor em polpa de acerola após o tratamento térmico da mesma pela aplicação do processo de aquecimento ôhmico e aquecimento convencional (aquecimento por transferência de calor em célula encamisada). Nesses estudos foram analisadas diferentes condições de processamento, visando uma maior conservação dos compostos nutricionais. No primeiro estudo, a tecnologia de aquecimento ôhmico foi estudada através de um planejamento fatorial onde o teor de sólidos totais da polpa (2 a 8%) e a tensão (120 a 200 V) do sistema de aquecimento foram as variáveis avaliadas. Ambas variáveis influenciaram significativamente a degradação do ácido ascórbico. A tensão exerceu efeito positivo, ou seja, um aumento da tensão promoveu um aumento da degradação do composto. Por outro lado, a variável teor de sólidos exerceu um efeito negativo sobre a variável de resposta. A comparação com o processo convencional de pasteurização demonstrou que o aquecimento ôhmico, quando realizado com baixos valores de tensão, apresenta valores de degradação ácido ascórbico bastante semelhantes aos do aquecimento convencional. Contudo, altos valores de tensão promoveram uma maior degradação de composto. Este comportamento pode ser explicado pelo aumento de reações eletroquímicas quando elevados gradientes de tensão são utilizados; essas reações catalisam as vias de degradação do ácido ascórbico na presença de oxigênio. No segundo estudo conduzido, foi avaliado o efeito da frequência do campo elétrico (10 a 105 Hz) na degradação do ácido ascórbico e na alteração de cor da polpa de acerola durante o aquecimento ôhmico comparativamente ao aquecimento convencional. Os resultados demonstraram que a utilização de baixa frequência (10 Hz) resultou em maior taxa de degradação de ácido ascórbico e maiores alterações de coloração devido a reações eletroquímicas. O aquecimento ôhmico utilizando frequência acima de 100 Hz e a tecnologia convencional apresentaram taxas de degradação de ácido ascórbico e alterações de cor similares, indicando que acima de 100 Hz as reações eletroquímicas são minimizadas e o principal mecanismo de degradação é a oxidação. O aumento da frequência para valores acima de 100 Hz não afetou a cinética de degradação de ácido ascórbico e as mudanças de cor. Esse comportamento foi observado mesmo em altas frequências onde não há tempo suficiente para a polarização de equilíbrio ser estabelecida e, portanto, as moléculas não são capazes de se reorientar no campo elétrico variando rapidamente. No terceiro estudo, foi investigada a influência da presença de sólidos quando se utiliza diferentes frequências de campo elétrico por meio da comparação da cinética de degradação de ácido ascórbico na polpa e no soro (obtido por centrifugação da polpa). Os resultados mostraram um comportamento distinto da cinética de degradação entre a polpa e o soro na faixa de frequências entre 10 e 1000 Hz, indicando que a presença de partículas sólidas pode afetar tanto as taxas de aquecimento no meio circundante, como também o processo de polarização estimulado pelo campo elétrico oscilante. Os sólidos insolúveis presentes na polpa podem participar de interações que restringem as orientações dipolares, afetando o tempo de relaxamento das moléculas. Estes fenômenos podem ter influenciado a capacidade de doar hidrogênio em reações de oxidação. Por fim, um estudo avaliando o efeito do aquecimento ôhmico e convencional sobre a cinética de degradação de antocianinas monoméricas de polpa de acerola em temperaturas variando de 75 a 90 °C foi conduzido. Os resultados indicaram mecanismos de degradação similares visto que as constantes de velocidade foram estatisticamente semelhantes em todas as temperaturas, os parâmetros termodinâmicos apresentaram valores aproximados para ambas as tecnologias de aquecimento e o valor de energia de ativação para os dois processos foi equivalente. De um modo geral, os resultados obtidos no presente trabalho demonstraram que o aquecimento ôhmico pode ser visto como uma tecnologia potencial para o tratamento térmico dos alimentos que contêm níveis significativos de antocianinas e ácido ascórbico. Para tanto, é necessário a utilização de materiais adequados na confecção dos eletrodos e sensores de temperatura e também a utilização frequências de campo elétrico mais elevadas, para evitar a ocorrência de reações eletroquímicas. Os estudos que avaliaram os efeitos não térmicos associados com a passagem de eletricidade pelo alimento na degradação dos compostos bioativos demonstraram que a utilização de corrente elétrica alternada acima de 100 Hz não influencia na degradação desses compostos. / The aim of the present work was to develop an alternative method for pasteurization of acerola pulp using a promising processing technology: ohmic heating. The main objective was to study this technology, to evaluate its applicability for the heat treatment of liquid foods and also to study the influence of process parameters on the degradation of the nutritional compounds of the pulp. Initially, some physical properties of the acerola pulp - such as density, electrical conductivity, specific heat, thermal diffusivity and thermal conductivity - were determined for subsequent studies aiming to model the ohmic heating process. The results showed that the thermophysical properties of the pulp are close to the thermophysical properties of the pure water. Further, a bench scale ohmic heating system that operates in batch mode, was designed, built and validated. An assessment of the critical process parameters during operation of the ohmic heating system was performed. After the construction of three ohmic cells, the apparatus developed was appropriate to run experiments for the heat treatment of fruit pulps and juices. In addition, studies were conducted to evaluate vitamin C and anthocyanins degradation, as well as loss of color, in acerola pulp after heat treatment by ohmic and conventional heating (heat transfer in jacketed cell). Different processing conditions were investigated to enhance preservation of the nutritional compounds. In the first study, the ohmic heating technology was studied using a Central Composite Rotatable Design in which the variables evaluated were the total solids content of the pulp (2 – 8 g/100g) and the heating voltage (120 – 200 V). Both variables significantly influenced the degradation of ascorbic acid. The voltage gradient had a positive effect, i.e., an increase in the voltage gradient lead to an increase in the ascorbic acid degradation. Moreover, the solids content negatively affected the dependent variable. Ohmic heating, when performed with low voltage gradients, exhibited ascorbic acid degradation similar to conventional heating. However, high voltage gradients increased ascorbic acid degradation. This behavior may be explained by the increase of electrochemical reactions when using high voltage gradients, which can adversely affect the ascorbic acid and catalyze the degradation pathways in the presence of oxygen. In the second study, the effect of the electric field frequency (from 10 to 105 Hz) on ascorbic acid degradation and color changes in acerola pulp during ohmic heating was evaluated and this technology was compared with the conventional heating process. Low electric field frequency (10 Hz) showed higher ascorbic acid degradation and higher color changes probably due to occurrence of electrochemical reaction. Ohmic (above 100 Hz) and conventional heating processes showed similar degradation rates of ascorbic acid. This might be an indication that above 100 Hz the electrochemical reactions were probably minimized and the mainly mechanism of degradation is the oxidation. The increase of the field frequency (above 100 Hz) during ohmic heating did not affect the degradation kinetics of ascorbic acid. This was observed even at high frequencies where the molecules are not able to reorient in the rapidly varying electric field and there is no time for an equilibrium polarization to be established. The third study investigated the influence of the presence of solids when different frequencies were used by comparing the degradation kinetics of the pulp and the serum (obtained by pulp centrifugation). A distinct behavior between the degradation kinetics of the pulp and the serum in the range of frequencies between 10 and 1000 Hz indicates that the presence of solids may have an influence on ascorbic acid degradation. The presence of solid particles might affect both the heating rates in the surrounding medium and the polarization process stimulated by the oscillating electric field. The pulp had insoluble solids which may have participated on bonding interactions that restrict the dipolar orientations affecting the relaxation time of the molecules. These phenomena may have influenced the hydrogendonating capability in oxidation reactions. Finally, a study to evaluate the effect of ohmic and conventional heating on the degradation kinetics of monomeric anthocyanins of acerola pulp at temperatures ranging from 75 to 90 °C was conducted. The results indicate similar mechanisms of degradation when using ohmic and conventional heating since the rate constants were statistically similar in all temperatures evaluated, all thermodynamic parameters showed close values for both heating technologies and ohmic and conventional heating showed the same value of activation energy. Overall ohmic heating can be seen as a potential technology for heat treatment of foods containing significant levels of anthocyanins and ascorbic acid. Therefore, it is importance to use either inert coatings on electrodes and sensors, and high frequency electric currents to control electrochemical reactions. Studies to evaluate the “non-thermal” effects associated with using electricity during a thermal process showed that the passage of alternating electric current through the product (above 100 Hz) did not influence the degradation of bioactive compounds, since comparative results between this technology and conventional heating were similar.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2012-09-03T14:26:59Z No. of bitstreams: 1 2012_LucianaOliveiraPereira.pdf: 5537376 bytes, checksum: 9f1e734c1906cc06c87427ecb8a16e83 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2012-09-10T11:34:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_LucianaOliveiraPereira.pdf: 5537376 bytes, checksum: 9f1e734c1906cc06c87427ecb8a16e83 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-10T11:34:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_LucianaOliveiraPereira.pdf: 5537376 bytes, checksum: 9f1e734c1906cc06c87427ecb8a16e83 (MD5) / Introdução: As células-tronco da polpa dental (DPSC) têm se mostrado multipotentes e têm sido muito estudadas para engenharia de tecidos. Estudos recentes sugeriram a presença de células mesenquimais viáveis na polpa dental humana inflamada. Objetivo: a) Comparar células de polpas dentais normais e inflamadas quanto à presença de células-tronco, proliferação e potencial de diferenciação; b) Investigar se a irradiação com laser de baixa potência aumentaria o potencial de proliferação e diferenciação de DPSC isoladas a partir de polpas dentais normais (DPSC-N) e inflamadas (DPSC-I); c) Construir bibliotecas subtrativas de cDNA com células de polpas dentais normais e inflamadas para identificar possíveis transcritos diferencialmente expressos. Métodos: a) Células de polpas dentais humanas normais e inflamadas foram comparadas quanto à proliferação (MTT), morfologia, e expressão de STRO-1. Células STRO-1-positivas foram submetidas a ensaios de proliferação (MTT e contagem de UFC), a análises morfológicas e do perfil imunofenotípico e às diferenciações odonto-osteogênica, adipogênica e condrogênica. As células diferenciadas foram avaliadas quanto à morfologia e à expressão dos genes BSP, LPL e SOX-9 por qRT-PCR. A quantidade de matriz mineralizada produzida após a diferenciação odonto-osteogênica também foi comparada. b) DPSC-N e DPSC-I foram irradiadas com um laser de baixa potência vermelho (660 nm) em quatro diferentes fluências de energia (0,05; 0,30; 7 e 42 J/cm2 ). As duas fluências menores foram produzidas por irradiação das duas fluências mais elevadas através de um disco de dentina, usado para simular uma condição clínica. A proliferação e a competência na diferenciação odonto- osteogênica foram comparadas. c) O cDNA de células de polpas dentais normais e inflamadas foi utilizado, após hibridações subtrativas, para a construção de duas bibliotecas enriquecidas com transcritos diferencialmente expressos em cada população. Amostras de cDNA das bibliotecas foram sequenciadas, comparadas às depositadas no banco de dados Swiss-Prot e funcionalmente classificadas, usando a ferramenta KEGG Orthology. Resultados: Não se observaram diferenças na morfologia e na proliferação de DPSC-N e DPSC-I antes ou depois da separação das STRO-1-positivas. Elas tiveram expressões semelhantes de STRO-1 e seus perfis imunofenotípicos foram compatíveis com o de células-tronco mesenquimais. Tanto DPSC-N quanto DPSC-I foram capazes de se diferenciarem sob as três condições analisadas e apresentaram padrões semelhantes de expressão de BSP, LPL e SOX-9. A produção de matriz mineralizada também foi compatível. Em todos os experimentos quantitativos, houve diferenças entre as células de cada paciente, tanto de polpa normal como de inflamada, mas não houve diferença estatística entre os dois grupos. Após a irradiação com laser, não houve diferença significativa entre as taxas de proliferação e as produções relativas de nódulos mineralizados em comparação com os respectivos controles, tanto para DPSC-N quanto para DPSC-I. A análise das bibliotecas subtrativas de cDNA não revelou diferenças estatisticamente significativas quanto à expressão gênica nas categorias funcionais. Conclusão: Não foram identificadas diferenças significativas entre as propriedades das células da polpa dental normal e inflamada quanto à presença de células-tronco e seu potencial de proliferação e diferenciação, assim como em relação ao padrão de expressão gênica global. Além disso, o laser não intensificou as propriedades dessas células. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introduction: Human dental pulp stem cells (DPSC) have shown multipotency and have been widely studied for tissue engineering. Recent studies have sugested the presence of viable mesenchymal cells in the inflamed human dental pulp. Aim: a) To compare cells from normal and inflamed human dental pulps regarding the presence of stem cells, their proliferation and differentiation potential; b) To investigate if low-level laser therapy could increase the proliferation and differentiation potential of DPSC isolated from normal dental pulps (DPSC-N) and from inflamed pulps (DPSC- I); and c) To construct subtractive cDNA libraries with cells from normal and inflamed dental pulps to identify potential differentially expressed transcripts. Methodology: a) Cells from human normal and inflamed pulps were compared in respect to proliferation (MTT assay), morphology and STRO-1 expression. STRO-1-positive cells were subject to proliferation assays (MTT and CFU counting), to morphological and immunophenotypic analyses and then submitted to odonto-osteogenic, adipogenic and condrogenic differentiation. Differentiated cells were evaluated concerning the morphology and the expression, by qRT-PCR, of BSP, LPL and SOX-9 genes. The amount of mineralized matrix produced after odonto-osteogenic differentiation was also compared. B) DPSC-N and DPSC-I were irradiated with a red low-level laser (660 nm) in four different energy fluences (0.05, 0.30, 7 and 42 J/cm2 ). The two lower fluences were produced by irradiating the two higher fluences through a dentin disc, which was used to simulate a clinical condition. The proliferation and the cell odonto-osteogenic differentiation competence were compared. c) cDNA of cells from normal and inflamed dental pulps were used, after subtractive hybridizations, to construct two libraries, enriched with differently expressed transcripts in each cell population. The cDNA samples were sequenced and compared to sequences which were deposited in the database Swiss-Prot. Then, they were functionally classified, using the tool KEGG Orthology. Results: No difference was observed in the morphology and in the proliferation rate of DPSC-N and DPSC-I either before or after separation of STRO-1-positive cells. They had similar expressions of STRO-1 and had mesenchymal immunophenotype. Both DPSC-N and DPSC-I were capable of differentiating under the three assayed conditions and presented similar patterns for BSP, LPL and SOX-9 expression. Mineralized matrix production was also compatible. In all the quantitative experiments, differences were found between cells from each patient, either from normal or inflamed pulps. Nonetheless, there was no statistical difference between these two groups. After laser irradiation, there was no statistically significant difference between the proliferation rates and the relative productions of mineralized nodules compared to the respective controls, either for DPSC-N or DPSC-I. The analysis of the subtractive cDNA libraries revealed no statistically significant difference in gene expression in the functional categories. Conclusion: No significant differences were found between the properties of cells from normal and inflamed dental pulps for the presence of stem cells and their proliferation and differentiation potentials, as well as in relation to global gene expression pattern. Furthermore, the laser did not increase the properties of these cells.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2013. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2013-11-21T19:07:28Z No. of bitstreams: 1 2013_ClarissaCalaisRomez.pdf: 1504430 bytes, checksum: 4766ff473691c29620666cd2b96ea51b (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-11-25T11:14:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_ClarissaCalaisRomez.pdf: 1504430 bytes, checksum: 4766ff473691c29620666cd2b96ea51b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-25T11:14:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_ClarissaCalaisRomez.pdf: 1504430 bytes, checksum: 4766ff473691c29620666cd2b96ea51b (MD5) / Introdução: A literatura tem demonstrado que células diferenciadas, por exemplo, fibroblastos, podem, por meio de transfecção mediada por retrovírus, adquirir cópias extras de genes cuja expressão está associada à pluripotência e voltarem assim a um estado de indiferenciação, similar ao encontrado em células-tronco embrionárias. Entretanto, a transfecção de genes mediada por retrovírus tem potencial restrito para uso em terapias humanas, pois, além de ser de baixíssima eficiência, pode ocorrer a inserção de genes virais no genoma das células com pluripotência induzida por essa técnica. Nesse sentido, diversos estudos têm sido desenvolvidos de modo a reverter essas células diferenciadas a um estado similar ao embrionário sem utilizar a transfecção de genes. O restabelecimento da pluripotência de células diferenciadas poderia também ser induzido por alterações na expressão de genes envolvidos na pluripotência celular sem afetar a sequência do DNA, ou seja, por mecanismos epigenéticos, como a inibição por algumas substâncias da ação de enzimas que desacetilam histonas ou metilam o DNA. Dentre as substâncias capazes de inibir a ação de enzimas com atividade Histona Desacetilase, ou seja, favorecer a expressão gênica situa-se o butirato de sódio, um ácido graxo de cadeia curta. A inibição da metilação do DNA ocorre por meio da inibição da atividade de enzimas DNA metiltransferases (DNMTs). Uma das drogas que inibe a ação de DNMTs é a hidralazina, um potente vasodilatador arterial. Objetivo: O presente estudo se propôs a avaliar o efeito da hidralazina e do butirato de sódio na desdiferenciação de células de polpa dental hígida e inflamada. Métodos: Células de polpa dental hígida (PN) e inflamada (PI) foram analisadas quanto à sua viabilidade celular, ensaio MTT e coloração por azul de tripano, quanto à sua morfologia, microscopia de luz e citometria de fluxo, e quanto à sua expressão gênica, RT-qPCR, na presença ou não de butirato de sódio ou hidralazina. Resultados: Seis subculturas de polpa dental hígida e inflamada não tiveram sua viabilidade alterada quando tratadas com butirato de sódio (10 mM) e hidralazina (30 μM). O tratamento com butirato de sódio (10 mM) induziu alterações discretas na morfologia das células, como o aumento do tamanho e da granulosidade celular. Células tratadas com hidralazina não mostraram alterações quanto a sua morfologia com relação às células não tratadas. O tratamento com butirato de sódio (10 mM) não alterou a expressão relativa dos genes OCT-4 (PN-3; PI-1; PI-2; PI-3); colágeno tipo I (PN-1; PN-3; PI-2; PI-3). O tratamento com butirato de sódio diminuiu a expressão relativa dos genes OCT- 4 (PN-1; PN-2); colágeno tipo III (PN-1; PN-2; PN-3; PI-1; PI-2; PI-3); colágeno tipo I (PI-1) e aumentou a expressão relativa do gene colágeno tipo I (PN-2). O tratamento com hidralazina (30 μM) não alterou a expressão relativa dos genes OCT-4 (PN-2; PN-3; PI-1; PI- 2; PI-3); colágeno tipo I (PN-2; PN-3; PI-1; PI-2; PI-3); colágeno tipo III (PN-1; PN-2; PN-3; PI-1; PI-2; PI-3). O tratamento com hidralazina (30 μM) diminuiu a expressão relativa do gene OCTOCT-4-4 (PN-1); e aumentou a expressão relativa do gene colágeno tipo I (PN-1). Conclusão: O butirato de sódio e a hidralazina não induziram a desdiferenciação celular de células de polpa dental hígida e inflamada. _____________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introduction: The literature has demonstrated that differentiated cells, such as fibroblasts, may, by retrovirus-mediated transfection, gain extra copies of genes whose expression is associated with pluripotency and thus return to an undifferentiated state, similar to the state found in embryonic stem cells. However, the transfection of genes mediated by retrovirus has limited potential for use in human therapy, because, besides being very low efficiency, may occur the insert of viral genes into the genome of the cells with induced pluripotent by this technique. In this regard, various studies have been conducted in order to reverse these differentiated cells to an embryonic-like state without using the gene transfection. The restoration of pluripotency could be achived by changes in the expression of genes involved in cell pluripotency without affecting the DNA sequence, in other words, by epigenetic mechanisms, using certain substances that inhibit the action of histone deacetylases enzymes or DNA methyltransferase enzymes. Among the substances capable of inhibiting the action of enzymes with histone deacetylase activity, or promote gene expression is situated sodium butyrate, a fatty acid short-chain. Inhibition of DNA methylation occurs through inhibition of the enzyme DNA methyltransferase (DNMTs). A drug that inhibits the action of DNMTs is hydralazine, a potent arterial vasodilator. Objective: This study aims to analyze the effect of hydralazine and sodium butyrate on cell dedifferentiation of healthy and inflamed dental pulp cells. Methods: Cells from healthy (NP) and inflamed dental pulp (IP) were analyzed for cell viability, MTT assay and trypan blue staining, for cell morphology, light microscopy and flow cytometry, and gene expression, RT-qPCR, in the presence or absence of sodium butyrate or hydralazine. Results: Six subcultures of healthy and inflamed dental pulp did not have their viability altered when treated with sodium butyrate (10 mM) and hydralazine (30 μM). Treatment with sodium butyrate (10 mM) led to subtle changes in cell morphology, such as increased cell size and granularity. hydralazine treated cells showed no change in their morphology as compared to untreated cells. Treatment with sodium butyrate (10 mM) did not alter the relative expression of the genes OCT-4 (NP-3, IP-1, IP-2, IP-3); collagen type I (NP- 1, PN-3; PI-2, PI-3). Treatment with sodium butyrate decreased the relative expression of genes: OCT-4 (NP-1, NP-2), collagen III (NP-1, NP-2, NP-3, IP-1, IP-2, IP-3), collagen type I (IP-1) and increased the relative expression of collagen type I gene (NP-2). Treatment with hydralazine (30 mM) did not alter the relative expression of genes: Oct-4 (NP-2, NP-3, IP-1, IP-2, IP-3); collagen type I (NP-2, NP-3, IP-1, IP-2, IP-3), type III collagen (NP-1, NP-2, NPix 3, IP-1, IP-2, IP-3). Treatment with hydralazine (30 mM) decreased the relative expression of OCT-4 gene (NP-1) and increased the relative expression of type I collagen gene (NP-1). Conclusion: Sodium butyrate and hydralazine did not induce cellular dedifferentiation of cells from inflamed and healthy dental pulp.

Este trabalho aplicou uma tecnologia alternativa para a obtenção de polpa de acerola pasteurizada com alto valor agregado mediante a aplicação de uma técnica promissora de processamento, o aquecimento ôhmico. O objetivo principal foi estudar essa tecnologia, avaliando sua aplicabilidade no tratamento térmico de alimentos líquidos e também a influência das variáveis de processo sobre a degradação de compostos nutricionais da polpa. Inicialmente, foram determinadas algumas propriedades físicas de polpa de acerola - tais como massa específica, condutividade elétrica, calor específico, difusividade térmica e condutividade térmica - para posterior utilização desses dados em estudos envolvendo a modelagem do processo de aquecimento ôhmico. Os resultados obtidos demonstram que é possível a utilização das propriedades físicas da água, uma vez que os valores encontrados experimentalmente são muito próximos aos valores tabelados para a água pura. Na sequência, um sistema de aquecimento ôhmico em escala de bancada foi projetado, construído e validado. Foi realizada uma avaliação dos parâmetros críticos de processo durante a operação do sistema de aquecimento ôhmico. Após a construção de três células ôhmicas, o aparato desenvolvido tornou-se adequado para a realização de estudos e testes envolvendo o tratamento térmico de polpas de frutas. Em seguida, foram realizados estudos avaliando a degradação da vitamina C, de antocianinas e também perdas de cor em polpa de acerola após o tratamento térmico da mesma pela aplicação do processo de aquecimento ôhmico e aquecimento convencional (aquecimento por transferência de calor em célula encamisada). Nesses estudos foram analisadas diferentes condições de processamento, visando uma maior conservação dos compostos nutricionais. No primeiro estudo, a tecnologia de aquecimento ôhmico foi estudada através de um planejamento fatorial onde o teor de sólidos totais da polpa (2 a 8%) e a tensão (120 a 200 V) do sistema de aquecimento foram as variáveis avaliadas. Ambas variáveis influenciaram significativamente a degradação do ácido ascórbico. A tensão exerceu efeito positivo, ou seja, um aumento da tensão promoveu um aumento da degradação do composto. Por outro lado, a variável teor de sólidos exerceu um efeito negativo sobre a variável de resposta. A comparação com o processo convencional de pasteurização demonstrou que o aquecimento ôhmico, quando realizado com baixos valores de tensão, apresenta valores de degradação ácido ascórbico bastante semelhantes aos do aquecimento convencional. Contudo, altos valores de tensão promoveram uma maior degradação de composto. Este comportamento pode ser explicado pelo aumento de reações eletroquímicas quando elevados gradientes de tensão são utilizados; essas reações catalisam as vias de degradação do ácido ascórbico na presença de oxigênio. No segundo estudo conduzido, foi avaliado o efeito da frequência do campo elétrico (10 a 105 Hz) na degradação do ácido ascórbico e na alteração de cor da polpa de acerola durante o aquecimento ôhmico comparativamente ao aquecimento convencional. Os resultados demonstraram que a utilização de baixa frequência (10 Hz) resultou em maior taxa de degradação de ácido ascórbico e maiores alterações de coloração devido a reações eletroquímicas. O aquecimento ôhmico utilizando frequência acima de 100 Hz e a tecnologia convencional apresentaram taxas de degradação de ácido ascórbico e alterações de cor similares, indicando que acima de 100 Hz as reações eletroquímicas são minimizadas e o principal mecanismo de degradação é a oxidação. O aumento da frequência para valores acima de 100 Hz não afetou a cinética de degradação de ácido ascórbico e as mudanças de cor. Esse comportamento foi observado mesmo em altas frequências onde não há tempo suficiente para a polarização de equilíbrio ser estabelecida e, portanto, as moléculas não são capazes de se reorientar no campo elétrico variando rapidamente. No terceiro estudo, foi investigada a influência da presença de sólidos quando se utiliza diferentes frequências de campo elétrico por meio da comparação da cinética de degradação de ácido ascórbico na polpa e no soro (obtido por centrifugação da polpa). Os resultados mostraram um comportamento distinto da cinética de degradação entre a polpa e o soro na faixa de frequências entre 10 e 1000 Hz, indicando que a presença de partículas sólidas pode afetar tanto as taxas de aquecimento no meio circundante, como também o processo de polarização estimulado pelo campo elétrico oscilante. Os sólidos insolúveis presentes na polpa podem participar de interações que restringem as orientações dipolares, afetando o tempo de relaxamento das moléculas. Estes fenômenos podem ter influenciado a capacidade de doar hidrogênio em reações de oxidação. Por fim, um estudo avaliando o efeito do aquecimento ôhmico e convencional sobre a cinética de degradação de antocianinas monoméricas de polpa de acerola em temperaturas variando de 75 a 90 °C foi conduzido. Os resultados indicaram mecanismos de degradação similares visto que as constantes de velocidade foram estatisticamente semelhantes em todas as temperaturas, os parâmetros termodinâmicos apresentaram valores aproximados para ambas as tecnologias de aquecimento e o valor de energia de ativação para os dois processos foi equivalente. De um modo geral, os resultados obtidos no presente trabalho demonstraram que o aquecimento ôhmico pode ser visto como uma tecnologia potencial para o tratamento térmico dos alimentos que contêm níveis significativos de antocianinas e ácido ascórbico. Para tanto, é necessário a utilização de materiais adequados na confecção dos eletrodos e sensores de temperatura e também a utilização frequências de campo elétrico mais elevadas, para evitar a ocorrência de reações eletroquímicas. Os estudos que avaliaram os efeitos não térmicos associados com a passagem de eletricidade pelo alimento na degradação dos compostos bioativos demonstraram que a utilização de corrente elétrica alternada acima de 100 Hz não influencia na degradação desses compostos. / The aim of the present work was to develop an alternative method for pasteurization of acerola pulp using a promising processing technology: ohmic heating. The main objective was to study this technology, to evaluate its applicability for the heat treatment of liquid foods and also to study the influence of process parameters on the degradation of the nutritional compounds of the pulp. Initially, some physical properties of the acerola pulp - such as density, electrical conductivity, specific heat, thermal diffusivity and thermal conductivity - were determined for subsequent studies aiming to model the ohmic heating process. The results showed that the thermophysical properties of the pulp are close to the thermophysical properties of the pure water. Further, a bench scale ohmic heating system that operates in batch mode, was designed, built and validated. An assessment of the critical process parameters during operation of the ohmic heating system was performed. After the construction of three ohmic cells, the apparatus developed was appropriate to run experiments for the heat treatment of fruit pulps and juices. In addition, studies were conducted to evaluate vitamin C and anthocyanins degradation, as well as loss of color, in acerola pulp after heat treatment by ohmic and conventional heating (heat transfer in jacketed cell). Different processing conditions were investigated to enhance preservation of the nutritional compounds. In the first study, the ohmic heating technology was studied using a Central Composite Rotatable Design in which the variables evaluated were the total solids content of the pulp (2 – 8 g/100g) and the heating voltage (120 – 200 V). Both variables significantly influenced the degradation of ascorbic acid. The voltage gradient had a positive effect, i.e., an increase in the voltage gradient lead to an increase in the ascorbic acid degradation. Moreover, the solids content negatively affected the dependent variable. Ohmic heating, when performed with low voltage gradients, exhibited ascorbic acid degradation similar to conventional heating. However, high voltage gradients increased ascorbic acid degradation. This behavior may be explained by the increase of electrochemical reactions when using high voltage gradients, which can adversely affect the ascorbic acid and catalyze the degradation pathways in the presence of oxygen. In the second study, the effect of the electric field frequency (from 10 to 105 Hz) on ascorbic acid degradation and color changes in acerola pulp during ohmic heating was evaluated and this technology was compared with the conventional heating process. Low electric field frequency (10 Hz) showed higher ascorbic acid degradation and higher color changes probably due to occurrence of electrochemical reaction. Ohmic (above 100 Hz) and conventional heating processes showed similar degradation rates of ascorbic acid. This might be an indication that above 100 Hz the electrochemical reactions were probably minimized and the mainly mechanism of degradation is the oxidation. The increase of the field frequency (above 100 Hz) during ohmic heating did not affect the degradation kinetics of ascorbic acid. This was observed even at high frequencies where the molecules are not able to reorient in the rapidly varying electric field and there is no time for an equilibrium polarization to be established. The third study investigated the influence of the presence of solids when different frequencies were used by comparing the degradation kinetics of the pulp and the serum (obtained by pulp centrifugation). A distinct behavior between the degradation kinetics of the pulp and the serum in the range of frequencies between 10 and 1000 Hz indicates that the presence of solids may have an influence on ascorbic acid degradation. The presence of solid particles might affect both the heating rates in the surrounding medium and the polarization process stimulated by the oscillating electric field. The pulp had insoluble solids which may have participated on bonding interactions that restrict the dipolar orientations affecting the relaxation time of the molecules. These phenomena may have influenced the hydrogendonating capability in oxidation reactions. Finally, a study to evaluate the effect of ohmic and conventional heating on the degradation kinetics of monomeric anthocyanins of acerola pulp at temperatures ranging from 75 to 90 °C was conducted. The results indicate similar mechanisms of degradation when using ohmic and conventional heating since the rate constants were statistically similar in all temperatures evaluated, all thermodynamic parameters showed close values for both heating technologies and ohmic and conventional heating showed the same value of activation energy. Overall ohmic heating can be seen as a potential technology for heat treatment of foods containing significant levels of anthocyanins and ascorbic acid. Therefore, it is importance to use either inert coatings on electrodes and sensors, and high frequency electric currents to control electrochemical reactions. Studies to evaluate the “non-thermal” effects associated with using electricity during a thermal process showed that the passage of alternating electric current through the product (above 100 Hz) did not influence the degradation of bioactive compounds, since comparative results between this technology and conventional heating were similar.

Submitted by Etelvina Domingos (etelvina.domingos@ufpe.br) on 2015-04-08T19:47:51Z No. of bitstreams: 2 TESE Talita Ribeiro Tenório de França.pdf: 2159437 bytes, checksum: a09cf062950b6f3702406267ef2fb752 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T19:47:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Talita Ribeiro Tenório de França.pdf: 2159437 bytes, checksum: a09cf062950b6f3702406267ef2fb752 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / Introdução: Os principais fatores de risco locais para o desenvolvimento da osteonecrose associada ao uso bisfosfonatos (OABF) são a extração dentária e a presença de doença periodontal. Lesões periapicais crônicas são comuns na clínica odontológica, mas ainda não está totalmente esclarecido se a presença destas lesões pode ser um fator de risco para o desenvolvimento de OABF. O objetivo deste estudo foi determinar se lesões periapicais são fatores de risco para o desenvolvimento de osteonecrose em animais tratados com zolendronato. Métodos: Foram utilizados 40 ratos Wistar machos. Para induzir lesões periapicais, as polpas dos primeiros molares inferiores foram expostas usando uma broca esférica ½ acoplada a um motor de alta rotação. Em seguida, foram formados 8 grupos com 5 animais em cada um: G1- indução da lesão periapical (LP) e a administração intraperitoneal semanal (AIS) de solução salina (NaCl 0,9 %) durante 4 semanas; G2- indução LP e AIS de zolendronato (0,15 mg/kg/semana) durante 4 semanas; G3- indução da LP e AIS de solução salina por 8 semanas; G4- indução da LP e AIS de zolendronato por 8 semanas; G5- AIS de solução salina durante 4 semanas e posterior indução da LP; G6- AIS de zolendronato durante 4 semanas e posterior indução da LP; G7- AIS de solução salina durante 8 semanas e posterior indução da LP; G8- AIS de zolendronato durante 8 semanas e posterior indução da LP. Para mensurar o tamanho da LP foram realizadas tomografia computadorizada de feixe cônico (TCFC). Também foi realizada uma análise histomorfológica para determinar a intensidade do infiltrado inflamatório e a presença de necrose óssea. As análises estatísticas usadas foram o teste ANOVA e o Kruskal-Wallis. Resultados: Os grupos tratados com zolendronato mostraram tamanho da LP significativamente menor que o grupo tratado com NaCl 0,9% (p < 0,05). As lesões periapicais eram compostas por inflamação crônica variando de leve a moderada, sem diferença entre os grupos. Não foi observada necrose mandibular em todas as amostras analisadas. Conclusão: A presença de LP não representa um fator de risco importante para o desenvolvimento de OABF. Além disso, o tratamento com zolendronato não alterou a população de células de LP.

Orientador: Glaucia Maria Bovi Ambrosano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-26T02:52:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Duz_Sergio_M.pdf: 2921729 bytes, checksum: b07f79128c98890fe5a8788baa6ddd32 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Desde 1949, quando BARR e BERTRAM descobriram incidentalmente, ao examinarem os neurônios de gatos, que havia um grânulo heteropicnótico, cujos estudos posteriores levaram à descoberta de que o cromocentro era peculiar ao núcleo neural das remeas, vários estudos foram desenvolvidos para investigar a presença da cromatina sexual em outros animais e no homem. Esta descoberta tem sido de inegável importância para a clínica e a prática médica. Assim considerada, sua contribuição à Odontologia Legal não poderia ser menosprezada, visto que a identificação sexual é um O escopo da presente pesquisa foi o de procurar determinar, tópico relevante para essa Ciência. através de exames histológicos da polpa dentária em dentes íntegros e hígidos, de pacientes jovens com idade entre 10 e 30 anos de idade, a existência de uma diferenciação quantitativa e qualitativa significante de cromatina sexual em pessoas de ambos os sexos, de tal modo que fosse possível determinar o sexo pelo exame desse material. As pessoas das quais foram colhidas as polpas dentárias eram clinicamente saudáveis e, aparentemente, sem qualquer evidência para desvio sexual. Assim, foram examinadas 50 polpas dentárias de pessoas do sexo masculino e 50 polpas dentárias oriundas de pessoas do sexo feminino, retiradas de pré-molares e terceiros molares que, por indicação ortodôntica, foram submetidos à extração. Os cortes histológicos dessas polpas dentárias, depois de fixados, foram corados pela hematoxilina férrica de HENDENHAIN. Um número de 100 células foi contado em cada preparo, determinando-se a presença de fibroblastos que continham ou não a presença de cromatina sexual. Os resultados encontrados pennitiram concluir que é possível a determinação do sexo em seres humanos, através da frequência da incidência da cromatina sexual pelo exame microscópico de fibroblastos da polpa dentária, tomando-se mais um dado pericial a ser adicionado aos procedimentos de identificação do indivíduo / Abstract: In 1949, BARR and BERTRAM accidentally discovered the presence of heteropycnotic granules in neurones of cats. Further studies revealed that chromo center was peculiar to the neural nucleus of females. Since then, several studies were made to investigate the presence of sex chromatin in other animals and in human beings. Such findings have been of utmost importance to medical practice. The contribution of such investigations to Forensic Odontology should not be underestimated, given the relevance of sex identification to this Science. The present study had the scope of determining the existence of significant qualitative and quantitative differentiation in the sex chromatin in a sample of white male and female subjects. The ultimate objective was to determine sex through analysis of that material. Histological tests were performed in the dental pulp of 50 male subjects and 50 female subjects, of ages between 10 and 30. The subjects in this sample were in good medical condition, without any visible sign of sexual abnormality. The teeth ITom which the pulp was extracted were in perfect condition. The pulp was extracted ITom premolars and third molars removed after orthodontic evaluation. Histological samples of the pulps, after fixation, were stained with HERDENHAIN'S ferric hematoxylin. One hundred cells were counted in each slide. In these cells the presence or absence of sex chromatin in fibroblasts was determined. Results allow the conclusion that human sex determination is possible when the incidence of sex chromatin in fibroblasts of dental pulp is analyzed in the microscope / Mestrado / Mestre em Odontologia Legal e Deontologia

A idéia de se proteger e manter a vitalidade pulpar não é recente. Vários materiais têm sido preconizados com tal finalidade, no entanto, nenhum ainda pode ser considerado o material ideal, por este motivo compreende-se a importância e o interesse sempre crescente pela evolução dos estudos em torno deste assunto. Levando-se em consideração alguns relatos sobre a semelhança de composição química entre o agregado trióxido mineral (MTA) e o cimento de Portland, foi objetivo deste estudo desenvolver novas estratégias de tratamento na terapia da polpa vital, analisando o comportamento da polpa dentária de dentes de cão após pulpotomia e proteção direta do remanescente pulpar com o MTA Ângelus, ProRoot MTA, cimento Portland e cimento Portland branco. Foram utilizados 76 dentes, divididos de maneira aleatória para cada material. Após o período de 120 dias os animais foram sacrificados, os espécimes removidos e preparados para análise histológica para verificação do reparo do complexo dentino-pulpar. Os resultados obtidos demonstraram que os efeitos sobre o complexo dentino-pulpar após pulpotomia em dentes de cães e recobrimento pulpar com ProRoot MTA, MTA Angelus, cimento Portland e cimento Portland branco foram semelhantes entre si, permitindo a neoformação de tecido mineralizado e a manutenção da vitalidade do tecido conjuntivo pulpar subjacente. / The success of the pulpotomy is related to preserving vitality and function of the dental pulp after complete removal of its coronary portion and protection of the radicular pulp. Several materials have been used with such purpose, however, none of them present all physical, chemical and biologic properties desired, thus stimulating a search for alternative materials. Considering some reports about the similarity in composition of the mineral trioxide aggregate (MTA) and Portland cement, the purpose of this study was to develop new treatment strategies in vital pulp therapy, analyzing the behavior of the dental pulp of dog’s teeth after pulpotomy and direct protection of the radicular pulp with MTA Angelus, ProRoot MTA, Portland cement and white Portland cement. Seventy six teeth were divided ramdomly for each material. After a period of 120 days the animals were sacrificed, the samples were removed and prepared for histologic evaluation to verify reparation of the dentin-pulp complex. The results demonstrated that the effects on the dentin-pulp complex after pulpotomy and pulp protection with ProRoot MTA, MTA Angelus, Portland cement and white Portland cement in dog’s teeeth were very similar, allowing formation of mineralized tissue and preservation of the vitality of the pulpal connective tissue below.

Orientadores: Sérgio Roberto Peres Line, Alexandre Augusto Zaia / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-19T14:41:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Frozoni_MarcosRobertodosSantos_D.pdf: 22284992 bytes, checksum: f3df32a5434f64642e63697df5e27202 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Na polpa saudável, os odontoblastos pós-mitóticos responsáveis pela secreção de dentina primária e secundária sobrevivem durante a toda a vida do dente e são responsáveis pelas respostas às injúrias externas através da produção de dentina terciária focalmente abaixo do local da agressão. Os odontoblastos sobreviventes à injúria secretam uma matriz de dentina reacional, entretanto, os irreversivelmente danificados, são substituídos por uma segunda geração de células com as mesmas características morfofisiológicas. Estas células são derivadas do recrutamento, proliferação e diferenciação de células pulpares que possuam propriedades de células tronco, para formar uma nova matriz de dentina reparativa como parte do processo de reparo do complexo dentino pulpar. O mecanismo de reparo que segue após uma injúria dental é fundamental para a sobrevivência da polpa e envolve uma série de processos que precisam ser completamente esclarecidos mais precisamente a origem das células precursoras da nova geração de odontoblastos que irão secretar dentina reparativa. Embora evidências sugiram que esta nova geração de odontoblastos tenha origem de células do tecido conjuntivo pulpar, a exata origem destas células ainda não está completamente esclarecida. O objetivo deste estudo foi utilizar camundongos transgênicos que expressam green fluorecent protein (GFP) em todas as células do corpo, com exceção dos eritrócitos, e a técnica cirúrgica de parabiose para unir dois camundongos isogênicos, um GFP e outro não-GFP de maneira a formar um par parabiótico, que possa compartilhar a mesma circulação sanguínea cruzada (células marcadas do camundongo GFP passam para a corrente circulatória do camundongo não-GFP). Após a parabiose foi realizada uma exposição pulpar, devidamente capeada, nos molares dos camundongos não-GFP para estimular a produção de dentina terciária reparativa e conseqüentemente a diferenciação de novos odontoblastos. Os animais foram sacrificados e os molares dos camundongos não-GFP, processados para análise em microscopia de fluorescência. Foi observada a presença de células GFP (células verdes ao microscópio de fluorescência), originárias do sangue periférico (SP) de camundongos GFP, participando do processo de dentinogênese reparativa nos molares de camundongos não-GFP. Este estudo sugere a primeira evidência da participação de células troco mesenquimais do sangue periférico (CTM-SP) no processo de diferenciação de novos odontoblastos durante a dentinogênese reparativa / Abstract: In the healthy pulp, the post-mitotic odontoblasts responsible for secretion of primary and secondary dentin survives during the tooth life and are able to respond to injuries with the production of tertiary dentin focally beneath the site of the injury. If the odontoblast survives the injury it secrets a reactionary dentin matrix but if it is irreversibly damaged, it is replaced by a second generation of odontoblast-like cells, with the same morphophysiological profile. Those cells are derived from recruitment, proliferation, and differentiation of pulp cells, which can have stem cell properties to form a new reparative dentin matrix as part of repair process in the dentin-pulp organ. The repair mechanism that follows a tooth injury is critical to the pulp survival and involves a series of processes that need to be completely understood more precisely the origin of the odontoblast-like cells that will secrete reparative dentin. Although evidences suggesting that odontoblast-like cells originate from cells within dental pulp connective tissue the exact origin of these odontoblast-like cells is not clearly defined. The aim of this study was to use transgenic mice expressing green fluorescent protein (GFP) in all body cells except erythrocytes and parabiosis surgical technique for joining two inbred mice, a GFP and other non-GFP to form one parabiotic pair, who can share the same cross-circulation (labeled cells from GFP mice move into the bloodstream of non-GFP mice After parabiosis a pulp exposure, properly capped, was performed on the molar of the recipient non-GFP mice to stimulate the production of tertiary reparative dentin and hence differentiation of odontoblastlike cells. The animals were sacrificed and the molars of the non-GFP mice processed for fluorescence microscopy. It was observed the presence of GFP cells (green cells to the fluorescence microscope), originating from peripheral blood (PB) from GFP mice, participating in the reparative dentinogenesis process in the molars of non-GFP mice. This study suggests the first evidence of the participation of mesenchymal stem cells from PB (MSC-PB) in the differentiation process of odontoblast-like cells during reparative dentinogenesis / Doutorado / Endodontia / Doutor em Clínica Odontológica