Thèse de doctorat : Mathématiques appliquées : Metz : 2009. Thèse de doctorat : Mathématiques appliquées : Yaoundé 1 : 2009. / Thèse soutenue en co-tutelle. Titre provenant de l'écran-titre. Notes bibliogr.

Thèse de doctorat : Sciences de la Vie et de la Santé. Aspects Moléculaires et Cellulaires de la Biologie : Strasbourg : 2009. / Titre provenant de l'écran-titre. Bibliogr. 12 p.

Th. 3e cycle--Parasitol.--Paris 5, 1985. N°: 80.

Le paludisme est l'une des maladies infectieuses les plus dévastatrices qui a affecté environ 214 millions de personnes dans le monde. Elle est causée par l'infection par le parasite plasmodium, dont P. falciparum et P. vivax sont les plus représentés. Le développement asexué du parasite dans le sang provoque la physiopathologie de la maladie dont l'évolution passe du paludisme simple au paludisme grave, notamment le neuropaludisme. Nos travaux ont d'abord porté sur l'analyse du transcriptome, par la technologie des microarrays, des cellules sanguines d'une cohorte constituée au Sénégal. L'analyse des résultats a permis d'identifier un ensemble de gènes dont l'expression permettait de distinguer le profil transcriptomique du neuropaludisme de ceux du paludisme simple et des autres formes de paludisme grave. Ces gènes sont enrichis en voies biologiques impliquées dans l'activation des récepteurs des lymphocytes B et T mais aussi des TLR et des récepteurs Fcgamma. On y trouve aussi plusieurs gènes candidats qui ont déjà été testés pour leur résistance au paludisme, dont RNASE3 et IL18R. Nous avons aussi réalisé, avec une partie de cette même cohorte sénégalaise, une étude d’association cas-contrôles qui n’a pas permis de détecter d’association entre le polymorphisme NCR3-412 et le paludisme sévère. Enfin l’approche basée sur une métaanalyse a permis de confirmer son implication dans le paludisme simple, ainsi que celle du polymorphisme LTA+252 dans le paludisme sévère, contrairement au LTA+80, au TNF-238 et au TNF-308. L’ensemble des travaux contribuent à une meilleure compréhension des facteurs génétiques et génomiques impliqués dans la résistance de l’hôte au paludisme. / Malaria is one of the most devastating infectious diseases that has affected an estimated 214 million people worldwide and caused nearly 600,000 deaths in 2015. It is caused by infection with the plasmodium parasite, P. falciparum and P. vivax are the most represented. The asexual development of the parasite in the blood causes the pathophysiology of the disease which can evolve from mild malaria to severe malaria, including cerebral malaria. Our work first focused on the analysis of the microarray transcriptome of blood cells of a cohort composed in Senegal. The analysis of the results allow to identify a set of genes whose expression permit to distinguish the transcriptomic profile of cerebral malaria from those of mild malaria and other forms of severe malaria. These genes are enriched in biological pathways involved in the activation of B and T lymphocyte receptors also TLRs and Fcgamma receptors. These genes also include several candidate proteins that have already been tested for resistance to malaria, including RNASE3 and IL1RN.

Thèse d'exercice : Médecine. Médecine générale : Paris 12 : 2007. / Titre provenant de l'écran-titre. 97 f. : ill. Bibliogr. f. 83-89.

Thèse de doctorat : Mathématiques : Mathématiques appliquées : Metz : 2006. / Thèse soutenue sur ensemble de travaux. Bibliogr. p. 133-139.

Proefschrift--Leiden--Rijksuniversiteit, 1994. / Bibliogr. p. 227-232. Résumé en anglais.

L’objectif de ce travail était d’étudier les conséquences immunologiques du paludisme gestationnel chez la femme enceinte et le nouveau-né. Ce travail de recherche fait partie du projet STOPPAM, un suivi de cohorte de femmes enceinte et de leurs enfants, réalisés dans deux pays d’Afrique : le Bénin et la Tanzanie. Les objectifs de STOPPAM étaient d’élucider les mécanismes et le déroulement de la pathologie du paludisme associé à la grossesse (PAG) et de quantifier les conséquences du PAG sur la santé de la mère et du jeune enfant. Nous avons, dans un premier temps, caractérisé les cellules immunocompétentes chez des femmes infectées et non-infectées au cours de la grossesse. Deux études ont été ainsi réalisées sur deux sous-groupes de femmes prélevées au début de la grossesse et à l’accouchement. Sur une vingtaine de données appariées entre le début de la grossesse et l’accouchement, nous avons mis en évidence une diminution de fréquence des lymphocytes T indépendamment de l’infection palustre. Au cours du PAG, nous avons déterminé sur deux sous-populations de femmes enceintes, au début de la grossesse et à l’accouchement : i) les fréquences et le niveau d’activation des cellules médiatrices de l’immunité et ii) les concentrations de cytokines et de chimiokines plasmatiques. Nos résultats ont permis de montrer, d’une part que le paludisme gestationnel induit des changements qualitatifs et quantitatifs sur le profil cellulaire et cytokinique, en fonction de l’âge gestationnel et en fonction de la date de l’infection. L’originalité de ces études réside dans l’identification au début de la grossesse, de marqueurs cellulaires et cytokiniques, tels que les lymphocytes B et les Treg d’une part, l’IL-10, l’IP-10 et le MIG d’autre part, qui pourraient être un facteur de risque d’infection placentaire à l’accouchement. Ces observations suggèrent la nécessité de la prise en charge des infections au début de la grossesse dans le contrôle du paludisme gestationnel. La deuxième partie de notre travail s’est intéressée aux conséquences du PAG sur les réponses innées du jeune enfant. Dans une première étude, nous avons caractérisé les cellules présentatrices d’antigènes dans le sang du cordon en fonction du paludisme placentaire ou de l’inflammation du placenta. Nos résultats montrent une altération partielle des cellules présentatrices d’antigènes du nouveau-né, induite par la présence de pigment malarique dans le placenta. Nos résultats soulignent l’importance de l’âge de la mère au moment de la grossesse et de la parité, sur les cellules présentatrices d’antigène du nouveau-né. Ces résultats suggèrent une modulation des réponses cellulaires néonatales par le PAG. La dernière partie de ce travail a considéré les réponses cytokiniques dans le sang de cordon et le sang périphérique du jeune enfant, à des ligands de TLR sur une cohorte de 134 enfants. Les observations issues de cette étude démontrent que l’activation du système immunitaire inné du jeune enfant peut être modifiée par une l’infection survenue à l’accouchement chez la mère. Nos résultats montrent que la susceptibilité au paludisme au cours de la première année de vie dépend de la période de stimulation des récepteurs TLR du système immunitaire néonatal. L’ensemble des travaux réalisés au cours de cette thèse permet de comprendre des mécanismes cellulaires et inflammatoires impliqués dans le paludisme gestationnel chez la femme enceinte et chez l’enfant. Nos résultats ont permis d’identifier des bio-marqueurs liés au PAG. / The objective of this thesis was to investigate the immunological consequences of pregnancy associated malaria (PAM) in pregnant women and their newborns. The study populations comprise sub-groups drawn from a longitudinal study known as “Strategies TO Prevent Pregnancy Associated Malaria” (STOPPAM) that was conducted in parallel in the two study sites i.e. Benin and Tanzania. The STOPPAM objectives were to elucidate the mechanisms and course of PAM and quantify the effects of PAM on mothers and their childhood’s health. First, we characterized cell mediated-immunity from P. falciparum-infected or non-infected pregnant women. Two studies were carried out in two sub-groups of pregnant women at early pregnancy and at delivery. In the first study, we observed a decrease frequency of T cells independently of malaria infection in the twenty-four pregnant women matched at early pregnancy and at delivery. In the second study, we characterized: i) the frequency and the level of activation of cell mediated-immunity and ii) quantify the plasma level of cytokine and chemokine in sub-groups at early pregnancy and at delivery. We observed that malaria infected pregnant women enhanced qualitative and quantitative changes in cells frequencies early during pregnancy and at delivery. The main finding of this study was the B cells activation at any time of infection and the decreased frequency of Treg at early pregnancy. PAM enhanced also higher levels of IL-10, IP-10 and MIG in our sub-groups. These bio-markers were identified as risk factors of placental infection at delivery. These observations suggest the management of malaria control in pregnant women in early pregnancy. The second part of this thesis was focused on the impact of PAM on neonatal innate immune responses. In a first study, we characterized antigen-presenting cells (APC) in cord blood as a function of placental malaria infection or inflammation of the placenta. Our results showed that the presence of malaria pigment in the placenta was associated to partial activation of cord blooddendritic cells. Our results highlight the importance of the age of the mother at the time of pregnancy and parity on APC activation in cord blood. These results suggest that PAM can induce neonatal innate responses alteration. Then we considered the cytokine responses in cord blood and in peripheral blood of newborn, to TLR ligands in a cohort of 134 children. The observations from this study demonstrate that infection occurred close to/at delivery in the mother can induce modulation of young-children innate immune system, through the TLR. Our results suggest that susceptibility to malaria infection during the first year of life could depend on the period of stimulation of TLRs neonatal immune system. All the work done in this thesis provides an understanding of the cellular mechanisms involved in inflammatory and gestational malaria in pregnant women and in children. Our results have identified biomarkers associated with PAG.

Le paludisme, une maladie inflammatoire, est caractérisé par une production du facteur de nécrose tumoral (TNF)-α, du facteur d'inhibition de migration des macrophages (MlF) et d'interféron (lFN)-y, qui inhibent les précurseurs érythropoïétiques de la moelle osseuse. Dans ce contexte, le MlF est sécrété durant les infections par Plasmodium, et sa synergie avec l'lFN-y et le TNF-α contribue à inhiber la différenciation érythropoïétiques et la production d'hémoglobine (Hb). Cet travail à démontrer que la neutralisation in vivo du MlF avec un anticorps monoclonal durant l'infection par Plasmodium chabaudi adami DK amène à une diminution du pic de la parasitémie et de façon inattendue à une production accrue de TNF-α en début d'infection et au pic d'infection. La neutralisation du MlF altère la production d'IFN-y et l'IL-10 durant l'infection. Au moment où la parasitémie est faible, une diminution significative de la production d'lFN-y, accompagnée par une chute importante de l'IL-10, est observée dans la rate de souris infectées et traitées avec l'anti-MIF. Par contre, au pic de l'infection, la production de l'IFN-y et l'IL-10 augmente chez les souris traitées avec l'anti-MIF. En plus de ces effets inhibiteurs au pic de l'infection, la neutralisation du MlF entraîne une diminution du pourcentage de réticulocytes en circulation en début d'infection et cet effet est accompagné par une légère diminution des érythrocytes basophiliques (EryA) dans la rate. La concentration d'hémoglobine sanguine était plus élevée chez les souris traitées avec l'anticorps anti-MIF, et ce, au pic de l'infection, ce qui suggère que la neutralisation du MlF, par son effet sur la parasitémie, diminue la destruction des érythrocytes par le parasite. ______________________________________________________________________________ MOTS-CLÉS DE L’AUTEUR : Paludisme, Hémoglobine, Cytokine inflammatoire, MlF, Parasitémie.

Les infections par Plasmodium induisent des changements importants sur la réponse effectrice et la régulation des cellules B. Ces effets se caractérisent par une suppression de la production d'anticorps contre des antigènes hétérologues et par une activation polyclonale non spécifique des cellules B. Nous avons centré notre attention sur le facteur inhibiteur de la migration des macrophages (MlF), une cytokine secrétée de façon constitutive chez plusieurs types cellulaires et intensifiée durant l'infection par Plasmodium. Le MlF inhibe l'apoptose des cellules B «in vitro» et son rôle dans les altérations des cellules B durant la malaria n'a pas encore été évalué. En utilisant des souris BALB/c infectées avec P. chabaudi adami DK avant et suite à un régime d'immunisation avec de la γ-globuline humaine, nous avons observé que l'infection après l'immunisation réduit significativement les titres d'lgG totaux et IgGI anti-γ-globuline humaine. Le possible rôle du MlF a été vérifié en neutralisant des souris BALB/c (immunisées avec de la γ-globuline humaine) avec anti-MIF. Les résultats démontrent une augmentation significative d'lFN-γ; une diminution de cellules B anexine +; mais aucun effet significatif sur la production d'anticorps. Étant donné que le MlF est présent pendants les infections nous avons neutralisé le MlF avant et après l'infection par P. chabaudi DK. L'inhibition dans les titres d'anticorps spécifiques à la γ-globuline induit par l'infection était comparable chez des souris traitées avec l'anti-MlF, ce qui suggère que le MlF n'y participe pas. Malgré les effets suggérés «in vitro» sur des cellules B, nos études ont démontré une diminution de cellules B, PI+ chez des souris infectées et neutralisées. En conclusion, nous pouvons dire que le MlF ne semble pas participer dans l'activation polyclonale non spécifique des cellules B durant la malaria et nous suggérons d'évaluer le temps de vie des anticorps en évaluant l'expression du récepteur néonatale Fc (FcRn) qu'y est impliqué à la régulation, le rôle des cellules T régulatrices ainsi que la modulation de l'expression du complexe CD74-CD44 durant les infections par Plasmodium. ______________________________________________________________________________ MOTS-CLÉS DE L’AUTEUR : Malaria, Cellules B, Réponse d'anticorps, MlF, Activation polyclonale.