Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2017-05-05T19:00:03Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Winnie Castro Amorim e Albuquerque - 2017.pdf: 2279498 bytes, checksum: 160e4a276e405c6393dd5bb7742b106b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-05-10T13:37:01Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Winnie Castro Amorim e Albuquerque - 2017.pdf: 2279498 bytes, checksum: 160e4a276e405c6393dd5bb7742b106b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-10T13:37:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Winnie Castro Amorim e Albuquerque - 2017.pdf: 2279498 bytes, checksum: 160e4a276e405c6393dd5bb7742b106b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-03-31 / Outro / Bovine papillomavirus is the etiological agent of bovine papillomatosis, a disease that triggers warts throughout the skin, udder, roofs, genitalia and in more severe cases can develop extensive papillomas, cause neoplasia in the digestive tract and bladder, weaken the animal's health and cause losses in the Productivity and losses for livestock. The present study aims to detect and typify bovine Papillomavirus present in bovine tissue and blood samples with papillomatosis, to sequence the isolated viral types, to analyze the nucleotide sequences and the phylogeny of the detected viral types. As a result, amplification was obtained in five tissue samples (papilloma) from different bovines, not being successful in the amplification of blood samples. PCR reactions revealed the presence of BPV-1 in 60%, BPV-5 in 40%, BPV-9, BPV-10, BPV-13 and BPV-14 in 20% and BPV-12 in 40% of the analyzed samples. The presence of coinfection was verified in 60% of the lesions analyzed, with up to four viral types infecting the same sample. Alignments of viral type sequences 1, 5 and 14 were validated with identity ranging from 74% to 95%. The phylogenetic diagram showed a genetic approximation between viral types 1 and 14, both belonging to the genus Deltapapillomavirus, and distancing between nucleotide sequences of viral types 5, 9 and 14. Papillomaviruses of types 5 and 9 belong to different genera, Epsilonpapillomavirus and Xipapillomavirus, Respectively, the phylogenetic distance between these viral types, verified in the diagram, is justified. / Papilomavírus bovino é o agente etiológico da papilomatose bovina, doença que desencadeia verrugas por toda pele, úbere, tetos, genitália e em casos mais graves pode desenvolver papilomas extensivos, causar neoplasia no trato digestivo e bexiga, debilitar a saúde do animal e provocar perdas na produtividade e prejuízos para a pecuária. O presente estudo possui como objetivo detectar e tipificar Papilomavírus bovino presentes em amostras de tecido e sangue de bovinos com papilomatose, sequenciar os tipos virais isolados, analisar as sequências nucleotídicas e a filogenia dos tipos virais detectados. Como resultado, obteve-se amplificação em cinco amostras de tecido (papiloma) de diferentes bovinos, não obtendo sucesso na amplificação das amostras de sangue. As reações de PCR revelam a presença do BPV-1 em 60%, BPV-5 em 40%, BPV-9, BPV-10, BPV-13 e BPV-14 em 20% e BPV-12 em 40% das amostras analisadas. A presença de coinfecção foi verificada em 60% das lesões analisadas, com até quatro tipos virais infectando a mesma amostra. Os alinhamentos das sequencias do tipo viral 1, 5 e 14 foram validados com identidade variando de 74% a 95%. O diagrama filogenético demonstrou aproximação genética entre os tipos virais 1 e 14, ambos pertencentes ao gênero Deltapapillomavirus, e distanciamento entre as sequências nucleotídicas dos tipos virais 5, 9 e 14. Os papilomavírus dos tipos 5 e 9 pertencem a gêneros diferentes, Epsilonpapillomavirus e Xipapillomavirus, respectivamente, justifica-se dessa forma, a distância filogenética entre esses tipos virais, verificada no diagrama.

Thirty bovine with neoplasms of the upper digestive tract (UDT) associated to the spontaneous consumption of bracken fern (Pteridium aquilinum) were studied. They were from 27 farms, localized in the municipalities of Jaguari (23) and Nova Esperança do Sul (4), Rio Grande do Sul, Brazil. The total bovine population in those farms was 1,090 and large amounts of bracken fern were found in the pastures. Twenty-six were cows e four were castrated males. The age ranged from 3 to 13-years-old. Most of them were 7 to 8-years-old (46,6%). Clinical signs observed in the affected animals were progressive weight loss, absence of ruminal movements, cough, dysphagia, regurgitation, halitosis, diarrhea, and bloat. Less frequent signs were selective appetite, dyspnea, and salivation. Two bovines died and 28 were euthanatized in extremis and submitted to necropsy. The main gross and microscopic findings were found in the same areas of the UDT. They were digestive papillomatosis, transforming papillomas, and squamous cell carcinomas (SCC). Twenty-nine bovines had papillomas of various sizes in several areas of the UDT. The digestive papillomatosis ranged from mild (45%), to moderate (38%), to severe (17%). Three developing phases were observed microscopically in the examined papillomas: an early growing phase, a developing phase, and a regressing phase. The regressing phase was characterized by lymphocytic infiltrates at the base of the papilloma. In 16 cases, the microscopic examination of lesions grossly resembling papillomas (although some were slightly round, with lower or ulcerated finger-like projections) revealed malignant transformation of the papillomas into SCCs. The SCCs were solitary (12/30) or multiple (18/30) and were histologicaly characterized as well, moderately, or poorly differentiated. Grouping the distribution of SCCs of larger extension in the UDT into cranial region (base of the tongue, pharynx/oropharynx, and epiglottis), medial region (esophagus), and caudal region (cardia and rumen), the distribution was cranial in 39%, middle in 16%, and caudal in 45% of the cases. By the same grouping criteria, but considering the total number of times SCCs of varied extensions were diagnosed in the cranial, middle, and caudal regions, the percentages changed to 34%, 26%, and 40%, respectively. Metastases to regional lymph nodes and other organs, like liver and lungs, were observed in 18 cases. Immunohistochemistry for cytokeratin was performed in selected sections of SCCs and metastases, showing strong positive reaction in the well and moderately differentiated SCCs, but weak positive reaction in the poorly differentiated ones. The epidemiological and histomorphological evidences showed in this study are in agreement with the observations that point out the co-carcinogesis between bovine papillomavirus type 4 infection and chemicals of bracken fern in the pathogenesis of the SCCs in the UDT of cattle. / Foram estudados 30 bovinos com neoplasias no trato alimentar superior (TAS) associadas ao consumo espontâneo de samambaia (Pteridium aquilinum) provenientes de 27 propriedades rurais, sendo 23 no município de Jaguari e quatro em Nova Esperança de Sul, Rio Grande do Sul. A população bovina total das 27 propriedades em que ocorreram os casos era de 1.090 bovinos e havia quantidade abundante de samambaia nas áreas de pastoreio dos animais. Vinte e seis bovinos eram vacas e quatro eram machos castrados. A idade variou de três a 13 anos, sendo o maior número de casos entre sete e oito anos (46,6%). Os sinais clínicos observados incluíram emagrecimento progressivo, atonia ruminal, tosse, disfagia, regurgitação, halitose, diarréia e timpanismo. Outros sinais clínicos menos freqüentes foram apetite seletivo, dispnéia e salivação. Dois bovinos tiveram morte espontânea e 28 foram submetidos à eutanásia in extremis e necropsiados. Os principais achados macroscópicos e histológicos observados nos 30 bovinos localizavam-se nos mesmos locais do TAS e consistiam de papilomas, papilomas em transformação para carcinomas de células escamosas (CCEs) e CCEs. Vinte e nove bovinos tinham papilomas de diversos tamanhos, sendo a quantidade variável entre leve (45%), moderada (38%) e acentuada (17%). Nos papilomas examinados microscopicamente, foram observadas três fases de desenvolvimento: a) fase inicial de crescimento; b) fase de desenvolvimento; e c) fase de regressão; essa última era caracterizada por infiltrados linfocitários nos eixos fibrovasculares de sustentação. Em 16 bovinos, o exame histológico de lesões macroscópicas compatíveis com papilomas, porém alguns deles apresentando-se mais arredondados, com projeções digitiformes atenuadas ou ulceradas, revelou a transformação maligna desses papilomas em CCEs. Os CCEs eram únicos (12/30) ou múltiplos (18/30) e variaram quanto ao grau de diferenciação celular entre bem diferenciados, moderadamente diferenciados ou pouco diferenciados. Quando a distribuição dos CCEs de maior extensão foi agrupada em regiões cranial (base da língua, faringe/orofaringe, epiglote), média (terços cranial, médio e caudal do esôfago) e caudal (entrada do rúmen e rúmen) do TAS, observou-se que a localização era cranial em 39% dos casos, média em 16%, e caudal em 45%. Utilizando-se esse mesmo critério de agrupamento, porém considerando o número total de vezes em que CCEs (de extensões variadas) foram diagnosticados nas regiões cranial, média e caudal, os números alteraram-se para 34%, 26% e 40%, respectivamente. Metástases de CCEs para linfonodos regionais e outros órgãos como fígado e pulmão foram observadas em 18/30 bovinos. A técnica de imunoistoquímica para citoqueratina foi realizada em cortes selecionados de CCEs e metástases, observando-se células fortemente positivas nos CCEs bem e moderadamente diferenciados, e fraca imunomarcação nos pouco diferenciados. As evidências epidemiológicas e histomorfológicas relatadas neste estudo reforçam as observações de uma estreita correlação entre a infecção pelo papilomavírus bovino tipo 4, causador da papilomatose digestiva, e a co-carcinogênese química dos princípios tóxicos da samambaia na patogênese dos CCEs do TAS de bovinos.