A ação das metaloproteinases de matriz (MMP-2, MMP-9 e MT1-MMP) é necessária para degradação da membrana basal em carcinomas da cérvice uterina. O objetivo deste trabalho consistiu na avaliação da expressão das metaloproteinases MMP -2, -9 e MT1-MMP, do gene supressor de metástase RECK e do inibidor tecidual de MMPs (TIMP-2) em modelo de células de neoplasia da cérvice-uterina cultivadas em substratos de matriz extracelular. As linhagens celulares de carcinoma de cérvice uterina SiHa, CaSki, ambas HPV 16 positivas, e C33A, HPV negativa, foram cultivadas em gel de colágeno tipo I, Matrigel e plástico. Avaliou-se o crescimento, invasão, expressão gênica, através de ensaios de real-time PCR, e atividade de metaloproteinases, através de ensaios de zimografia. Os resultados demonstraram que estas linhagens de carcinoma cervical quando cultivadas em gel de colágeno tipo I apresentaram uma diminuição no crescimento, morfologia modificada na presença de substrato de matriz extracelular, e que nas linhagens HPV positivas há um aumento da expressão de MMP-2, MT1-MMP e TIMP-2 e da atividade de pró-MMP-2 em relação à linhagem HPV negativa. Observou-se também que, RECK apresentou maior expressão gênica em CaSki associada à atividade de pró-MMP-2. MMP-9 apresentou muito baixa expressão gênica em todas as linhagens e condições estudadas. Quando analisamos as linhagens separadamente, observamos que o Matrigel influenciou a expressão gênica de MMP-2, e que o gel de colágeno tipo I aparece como indutor da atividade de pró-MMP-2 em todas as linhagens. Em conclusão, nossos resultados mostram que a expressão de MMP-2, MT1-MMP e TIMP-2 e que a atividade de pró-MMP-2 estão aumentadas nas células HPV positivas, sugerindo que o HPV está associado com a expressão de MMPs e TIMP-2. / Matrix metalloproteinases (MMPs) -2, -9, and MT1-MMP are required for basement membrane degradation in cervical carcinoma. We evaluated the expression and activity of MMPs and their inhibitors RECK and TIMP-2 in three human invasive cervical carcinoma cell lines. Two HPV-16- positive cell lines (SiHa and CaSki), HPV-negative cell line (C33A) were cultured either onto type-I collagen gel, Matrigel or plastic, in order to recreate their three-dimensional growth environment and evaluate the growth and invasion of the cells and expression of these genes using quantitative real-time PCR (Q-PCR). We also analyzed the gelatinolytic activity of MMP-2 and -9 by zymography. We found that the growth curves carcinoma cells are decreased and cells morphology are modified in ECM substrate. HPV-positive cell lines expressed higher levels of MMP-2, MT1-MMP and TIMP-2 than the HPV negative cell line. In addition, MMP-9 was expressed at very low levels in both HPV-negative and HPV-positive cell lines. We also observed that the expression of the RECK gene is higher in CaSki cells, being associated with pro-MMP-2 activity. The Matrigel substrate influence MMP-2 expression for SiHa and CaSki cells. On the other hand, we found that type-I collagen gel, but not Matrigel, can enhance pro-MMP-2 activity in all cell lines. Our results suggest that the presence of HPV is related to increased expression of MMP -2, MT1-MMP and TIMP-2 and pro-MMP-2 activity in HPV-positive cells than in HPV-negative cells.

Introdução: O Papilomavírus Humano está muito bem associado com diversos tipos de cânceres humanos, como câncer anogenital e oral. Alguns estudos demonstram que o aparecimento de lesões e a progressão para o câncer estão relacionados ao tipo de resposta imune do hospedeiro. Deste modo, evidências indicam que a resposta imune do hospedeiro tem um papel muito importante para o curso da infecção pelo HPV. Objetivo: Avaliar a resposta imune específica in vitro ao Papilomavírus Humano (HPV) em homens com lesões causadas por HPV e sem lesão por HPV. Material e Métodos: Foram recrutados 31 pacientes e 11 voluntários, que formaram 4 grupos de estudo; sendo 12 pacientes no Grupo A (HIV +/ HPV +); 09 pacientes no Grupo B (HIV-/HPV+); 10 pacientes no Grupo C (HIV+/ HPV-); e 11 indivíduos saudáveis no Grupo D (HIV-/HPV-). Foram realizados ensaios de cultura celular para mensurar a resposta celular específica \"in vitro\" do tipo Th1/Th2/Th17 (INF-y, IL-2, TNFalfa, IL-4, IL-10 e IL-17) sob o estímulo da vacina quadrivalente do HPV (HPV 6, 11, 16 e 18) e à proteína E7 de HPV-16. Resultados: O grupo coinfectado (HIV +/ HPV+) apresentou níveis mais elevados de citocinas, principalmente do perfil Th2, comparando-se com os dados dos demais grupos de estudo. O grupo coinfectado apresentou níveis elevados de IL-6 e IL-10 (Perfil Th2) em relação ao grupo controle (HIV-/HPV-), com significância estatística (p < 0.0001 e p < 0.0001, respectivamente). Conclusão: Foi demonstrada uma elevada produção de citocinas no grupo HPV+/HIV+, sugerindo uma forte imunomodulação pela coinfecção HIV/HPV. Entretanto, novos estudos devem ser realizados para comprovar estes dados. Além de apresentar um perfil essencialmente Th2 do grupo coinfectado, principalmente pelos níveis elevados de IL-6 e IL-10 apresentados, sugerindo que estas duas citocinas possam servir como biomarcadores para persistência viral, uma vez que, os pacientes soropositivos para HIV apresentam maior persistência de HPV, e monitorar a progressão para lesões mais graves / Introduction: Human Papillomavirus is associated with different types of human cancers, such as anogenital and oral cancer. Some studies show that the appearance of lesions and progression to cancer are related to the type of host immune response. Thus, evidence indicates that the host immune response has a role key in the course of HPV infection. Objective: To evaluate the specific immune response in vitro to HPV in men with lesions caused by HPV and without injury caused by HPV. Methods: We recruited 31 patients and 11 volunteers, who formed four groups, with 12 patients in Group A (HIV+/HPV+); 09 patients in Group B (HIV-/HPV+); 10 patients in Group C (HIV+/HPV-) and 11 healthy subjects in Group D (HIV-/HPV-). Cells culture assay was performed to measure the specific immune response \"in vitro\" Th1/Th2/Th17 (IFN-y, IL-2, TNF-alfa, IL-4, IL-10 and IL-17) under the stimulation of quadrivalent HPV vaccine (HPV 6, 11, 16 and 18) and the E7 protein of HPV-16. Results: The coinfected group (HIV+/HPV+) had higher levels of cytokines, especially Th2 profile, compared with data from the other study groups. The coinfected group showed high levels of IL-6 and IL-10 (Th2 profile) compared to the control Group (HIV- /HPV-), with statistical significance (p < 0.0001 and p < 0.0001, respectively). Conclusion: This study demonstrated a high production of cytokines in the coinfected group, suggesting a strong immunomodulation by coinfection HIV/HPV. However, further studies should be conducted to confirm these data. In addition to presenting essentially a Th2 profile, especially by high levels of IL-6 and IL-10 presented, suggesting that these two cytokines may serve as biomarkers for viral persistence, since HIV seropositive patients have a higher persistence of HPV, and monitor the progression to more serious injuries

Introdução: A relação causal entre infecção genital por papilomavirus humano (HPV) de alto risco e o câncer do colo uterino está bem estabelecida; porém, há controvérsias em diferentes populações quanto à prevalência e distribuição da infecção em relação à idade. Objetivos: Caracterizar, pela Captura Híbrida II (CHII), a prevalência da infecção genital por HPV de alto risco e sua estratificação por idade. Verificar a associação da infecção com fatores de risco, resultados da citologia oncológica (CO), da colposcopia e da biópsia cervical. Casuística e Métodos: Em estudo transversal estudou-se 2300 mulheres (15-65 anos) que buscaram rastreamento para o câncer cervical. Aplicou-se questionário epidemiológico e foi feita a coleta da CO e da CHII, no caso de alteração em destes exames ou ambos indicou-se colposcopia e, nos casos anormais, procedeu-se à biópsia cervical. Resultados: A prevalência da infecção genital por HPV de alto risco em toda amostra foi de 17,8%: 27% (<25 anos), 21% (25-34 anos), 12% (35-54 anos) e de 14% (55-65 anos). Participantes com maior número de parceiros sexuais durante a vida apresentaram uma maior chance de infecção, relacionamento estável, idade entre 30 a 54 anos e ser ex-fumante foram fatores associados à proteção da infecção. Encontrou-se 204 (8,8%) CO anormais e uma relação direta entre severidade do diagnostico citológico e infecção por HPV de alto risco, 14,3% em citologia normal, 78% em lesão escamosa de alto grau, 100% nos esfregaços compatíveis com carcinoma. Foram histologicamente confirmados: 10 casos de Neoplasia intra-cervical grau 2/3 (NIC2/3) entre as mulheres infectadas por HPV, com citologia normal; 4 NIC 2/3 e um carcinoma nas que apresentavam exclusivamente alteração citológica e 15 NIC 2/3 e 3 carcinomas em mulheres com ambos os testes positivos. Conclusão: A prevalência da infecção genital por HPV de alto risco foi alta, seguindo uma curva na qual se observou novo aumento da prevalência após os 55 anos. / The causal role of high risk human papillomavirus (HPV) infection and cervical cancer has been well documented. However HPV prevalence varies greatly across populations, as might the age distribution. Objective: We aimed to determine high risk HPV prevalence and its distribution by age groups. Risk factors, cytological, colposcopic and cervical biopsies results associated with high risk HPV infection in a sample of women who self referred for cervical cancer screening. Methods: In a cross sectional study we interviewed and obtained cervical specimens from a sample of randomized 2300 women (15-65 years). Specimens were tested for the presence of high risk HPV using Hybrid Capture II (HCII) and for cervical cytological abnormalities by Pap smears or liquid based cytology. Women, who had abnormal cytology or positive HCII, or both results, were referred to colposcopy examination. Whenever colposcopy revealed an abnormal pattern, a directed punch biopsy was taken. Results: Four hundred and eight (17.7%) study participants tested positive for high risk HPV types by HC2: 27% (<25 years), 21% (25-34 years), 12% (35-54 years) and 14% (55-65 years). The main risk factor for HPV infection was number of lifetime sexual partners; age at 30 to 54 years, women who live with a partner and former smokers were negative associated with high risk HPV infection. Two hundred four (8, 8%) women had cytological abnormalities. HC II positive was associated with cytology outcome (14, 3% in normal cytology, 78% in HSIL and 100% in cervical cancer). Cervical Intraepithelial Neoplasia grade 2/3 (CIN 2/3) were found in 10 HPV infected women with normal cytological results. Women with abnormal cytological results only had 4 CIN 2/3 and 1 carcinoma and women testing positive in both techniques had 15 CIN 2/3 and 3 carcinomas. Conclusions: High risk HPV prevalence was high in this sample and the prevalence age curve showed a second pick starting around 55 years old.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:54:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LUANA CARVALHO DA SILVA.pdf: 1919863 bytes, checksum: 43845eab7ebc38ce4258c581e7475ae9 (MD5) Previous issue date: 2015-05-29 / Cervical cancer is considered an important public health problem, since it affects and kills a large number of women throughout the world. The main risk factor for cervical cancer is the infection by the Human Papillomavirus (HPV), considered to be the most common sexually transmitted disease, in the present days. Despite the high incidence, cervical cancer prevention programs have been implemented worldwide, through the Pap smear and HPV vaccine. Objective: To evaluate the perception and knowledge of nursing students about HPV infection, HPV associated diseases and HPV vaccine, in a private education institution, in Goiânia-GO. METHODS: It comprises a descriptive study with a quantitative approach, carried out through a questionnaire with objective questions that allowed to quantify the knowledge of the participants with regard to HPV infection, diseases associated with the virus and HPV vaccine, ensuring the analysis and interpretation of the results. The research was applied to 361 scholars from both genders. RESULTS: Correct answers related to the knowledge about HPV infection ranged from 40.3% to 99.2%, with an average of 73.8%; about the diseases associated with viruses, the indexes of correct answers ranged from 24.8% to 82.8%, with an average of 61.8%; regarding the HPV vaccine, the indexes of correct answers ranged from 40.8% to 93.0%, averaging 74.6%. CONCLUSION: The results allowed to conclude that academic nursing knowledge was reasonable in relation to HPV infection and HPV vaccine. However, insufficient results were obtained with respect to the knowledge about cancer of the uterine cervix. Thus, we highlight the need for continuing education about the subject, during and after graduation of these professionals, since nursing presents an important role in health teams and in the process of health education of the population. / O câncer do colo do útero é considerado um importante problema de saúde pública, pois ainda acomete e mata um grande número de mulheres em todo mundo. O principal fator de risco para o câncer do colo do útero é a infecção pelo Papilomavírus humano (HPV), considerada a doença sexualmente transmissível mais comum, nos dias atuais. Apesar da alta incidência, o câncer do colo do útero apresenta programa de prevenção, por meio do exame de Papanicolaou e da vacina anti-HPV. OBJETIVO: Avaliar a percepção e o conhecimento dos acadêmicos de enfermagem de uma instituição de ensino superior privada de Goiânia-GO, sobre a infecção pelo HPV, o câncer do colo do útero e a vacina anti-HPV. MÉTODOS: Estudo descritivo com abordagem quantitativa, realizado por meio de questionário com perguntas objetivas que permitiu quantificar o conhecimento dos participantes com relação à infecção pelo HPV, as doenças associadas ao vírus e a vacina anti-HPV, garantindo a análise e interpretação dos resultados. A pesquisa foi aplicada a 361 acadêmicos de ambos os gêneros. RESULTADOS: Os níveis de acertos observados para as questões relacionadas ao conhecimento sobre a infecção pelo HPV variaram de 40,3% a 99,2%, com média de 73,8%; sobre o câncer do colo do útero, os índices de acertos variaram de 24,8% a 82,8%, com média de 61,8%; com relação à vacina anti-HPV, os índices de acertos variaram de 40,8% a 93,0%, com média de 74,6%. CONLUSÃO: Os resultados desse estudo permitiram concluir que o conhecimento dos acadêmicos de enfermagem foi razoável em relação à infecção pelo HPV e à vacina anti-HPV. Entretanto, resultados insuficientes foram obtidos com relação ao conhecimento sobre o câncer do colo do útero. Assim, destacase a necessidade da educação continuada durante e após a graduação desses profissionais, pois a enfermagem apresenta um importante papel em equipes de saúde e no processo de educação em saúde da população.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-02-08T10:24:15Z No. of bitstreams: 2 Tese - Andrea Alves Ribeiro - 2017.pdf: 3681565 bytes, checksum: ba070b3da33be6a596380c597c60ac22 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-02-08T10:24:49Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Andrea Alves Ribeiro - 2017.pdf: 3681565 bytes, checksum: ba070b3da33be6a596380c597c60ac22 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-08T10:24:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Andrea Alves Ribeiro - 2017.pdf: 3681565 bytes, checksum: ba070b3da33be6a596380c597c60ac22 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2014-06-25 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Sexually transmitted infections are considered (STIs) pose a major public health problem. Adolescents and young adults are more likely to get Human papillomavirus (HPV) infection for two main reasons: sexual behavior and biological vulnerability. Some risk factors such as parity and number of children as well as Chlamydia trachomatis (CT) infection are co-factors associated with HPV infection responsible for precursor lesions and cervical cancer. OBJETIVE: Estimate the prevalence of HPV types and CT in adolescents and young adult females and to relate to the detection of cytological abnormalities, with sociodemographic and habits related to sexual risk factors. MATERIALS AND METHODS: This cross-sectional study included 276 adolescents and young adult females sexually active aged 15-24 years. Conventional cytology was performed to detect HPV DNA by PCR using the primers PGMY09/PGMY11 and genotyping by reverse dot blot hybridization. Detection of CT was performed by PCR using primers directed to the region encoding the cryptic plasmid. The population was stratified into two age groups: Group I (15-19 years) and Group II (20-24 years). It was conducted univariate analysis considering a p <0.20 for inclusion in the multivariate analysis to calculate the odds ratio (OR), confidence interval of 95% and significance level of <0.05. RESULTS: The prevalence of HPV infection was 47.1% (CI 95% 41.0–53.2). The HPV 16 was the most prevalent, present in 27.7% (36/129) of cases, followed by HPV 68 (8.5%; 11/130), HPV 52 (6.2 %; 8/130) e HPV 39 (4.6%; 6/130). The prevalence of HPV in the cytologic diagnosis of ASC-US was 66.7% in adolescents and 77.8% in young adult females. In diagnosis of LSIL HPV infection that present in 87.5% of adolescents and 75% of young adults females. The cytologic diagnosis of HSIL were detected only in adolescents with 100% prevalence of HPV infection. The total prevalence of CT infection was 9.1% (IC 95% 5.61–12.4). Among adolescents, the prevalence was 68% (17/25) and among young adults was 32% (8/25). The association with HPV infection related to behavioral and sociodemographic risk factors was statistically significant in the single marital status and had more than four sexual partners. Cytological abnormalities present among adolescents and young adults were associated with HPV and CT infection. CONCLUSION: HPV and CT infections are prevalent in adolescents and young adults, especially those with cytologic abnormalities. Sexual habits have a relationship with HPV infection, corroborating two of the risk factors for single marital status, the number of sexual partners. CT infection increases the risk for acquisition of cytologic abnormalities. / As infecções sexualmente transmissíveis são consideradas (ISTs) representam um grande problema de saúde pública. As adolescentes e adultas jovens estão mais susceptíveis a adquirem infecção pelo Papilomavírus humano (HPV), por dois motivos principais: o comportamento sexual e a vulnerabilidade biológica. Alguns Fatores de risco como, paridade e número de filhos, assim como infecção por Chlamydia trachomatis (CT) são cofatores associados à infecção pelo HPV responsáveis pelas lesões precursoras e câncer cervical. OBJETIVO: Estimar a prevalência de tipos de HPV e CT presentes em adolescentes e adultas jovens e relacionar com a detecção de anormalidades citológicas, com fatores de risco sóciodemográficos e relacionados aos hábitos sexuais. MATERIAIS E MÉTODOS: Trata de um estudo de corte transversal, incluiu 276 adolescentes e adultas jovens sexualmente ativas com idade entre 15 a 24 anos. Foi realizada a citologia convencional, a detecção de DNA-HPV por PCR utilizando os primers PGMY09/PGMY11 e a genotipagem por hibridização reversa em pontos. Para a amplificação do DNA de CT foi usado o teste AMPLICOR CT/NG, um ensaio multiplex, qualitativo, que permite a amplificação do DNA de CT, de NG e do controle interno (CI) da reação, simultaneamente. A população foi estratificada em dois grupos etários: Grupo I (15 a 19 anos) e Grupo II (20 a 24 anos). Realizou-se a análise univariada considerando um p< 0,20 para a inclusão na análise multivariada com o cálculo do Odds Ratio (OR), intervalo de confiança de 95% e nível de significância < 0,05. RESULTADOS: A prevalência de infecção por HPV foi de 47,1% (IC 95% 41,0–53,2). O HPV 16, em infecções simples e múltiplas, foi o mais prevalente detectado em 27,7% (36/130) dos casos, seguido pelo HPV 68 (8,5%; 11/130), HPV 52 (6,2 %; 8/130) e HPV 39 (4,6%; 6/130). A prevalência de HPV nos diagnósticos citológicos de ASC-US foi de 66,7 % em adolescentes e 77,8% nas adultas jovens. Nos diagnósticos de LSIL a infecção pelo HPV este presente em 87,5% das adolescentes e 75% das adultas jovens. Os diagnósticos citológicos de HSIL foram detectados apenas nas adolescentes com 100% de prevalência de infecção por HPV. A prevalência total da infecção por CT foi de 9,1% (IC 95% 5,61–12,4). Entre as adolescentes a prevalência foi de 68% (17/25) e entre as adultas jovens foi de 32% (8/25). A associação infecção pelo HPV relacionada aos fatores de risco comportamentais e sociodemográficos, mostrou-se estatisticamente significante o estado civil solteira e possuir mais que quatro parceiros sexuais. As anormalidades citológicas presentes entre adolescentes e adultas jovens foram associadas quanto à infecção pelo HPV e por CT. CONCLUSÃO: Infecções por HPV e CT são prevalentes em adolescentes e adultas jovens, especialmente nas que apresentam anormalidades citológicas. Hábitos sexuais possuem uma relação com a infecção por HPV, corroborando dois dos fatores de risco o estado civil solteira, o número de parceiros sexuais. A infecção por CT aumenta o risco para aquisição das anormalidades citológicas.

O Câncer Cervical é um importante problema de saúde pública, causando aproximadamente 270 milhões de mortes anuais. Atualmente, esse câncer é o segundo mais comum em mulheres no mundo, com os maiores índices de incidência ocorrendo nos países em desenvolvimento. O Câncer cervical tem como agente etiológico o Papilomavírus Humano (HPV). O vírus possui DNA circular duplo com genes que codificam oito proteínas, E1, E2, E4, E5, E6, E7 (não estruturais), e L1 e L2 (estruturais) que formam o capsídio viral. A proteína L1 quando produzida em sistema heterólgo de expressão tem a capacidade de auto-arranjo em partículas semelhantes ao vírus chamadas de VLPs (\"Vírus like Particles\"), que são a base das vacinas profiláticas disponíveis, Gardasil® e Cervarix®. Neste trabalho, foram produzidas VLPs da proteína L1 do HPV-16 na levedura metilotrófica Pichia pastoris utilizando dois tipos de vetores de expressão para leveduras, um epissomal e outro integrativo, para os trabalhos de purificação. Inicialmente as amostras obtidas ao final da purificação apresentaram degradação e agregação da proteína L1, além de contaminantes. O protocolo de purificação foi modificado e as amostras obtidas no final do processo de purificação não apresentaram degradação e nem agregação da proteína L1, embora ainda tenha sido detectada a presença de contaminantes e, portanto, as amostras obtidas estavam semi-purificadas. Uma segunda abordagem para o desenvolvimento de uma vacina alternativa foi realizada, na qual foram produzidos candidatos vacinais baseados na proteína L2 do Papilomavírus Humano (L2 do HPV-16, L2 do HPV-18 e L2 Multimérica), e também foram expressas proteínas fusionadas ao domínio ZZ de Staphylococcus aureus, utilizado neste caso como adjuvante. Em geral as proteínas de fusão, ainda que apresentando a fusão em sua forma funcional, geraram uma fraca indução de anticorpos IgG e de anticorpos neutralizantes. Pode-se observar uma produção de anticorpos neutralizantes contra pseudovírus homólogos e heterólogos que dependeu da combinação com os adjuvantes utilizados. Numa tentativa de maximizar a eficiência imunológica dos antígenos utilizados, um novo ensaio de imunização foi realizado com uma formulação conjunta contendo três proteínas (L2 do HPV-16, L2 do HPV-18 e L2 Multimérica), sendo também avaliadas as propriedades de três adjuvantes. A combinação da formulação vacinal com os adjuvantes gerou altos níveis de anticorpos L2-específicos, destacando-se as formulações com o hidróxido de alumínio/MPLA e com a vacina celular Pertussis low. Com a utilização desses adjuvantes, os níveis de anticorpos permaneceram elevados a longo termo. Pode-se observar a imunogenicidade de cada um dos antígenos dependeu de sua formulação com os adjuvantes testados. / Cervical cancer is one of the most important problems of public health, causing nearly 270 million deaths annually. Currently, cervical cancer is the second more common type in women worldwide and the highest incidences occuring in developing countries. Human papillomavirus (HPV) are the ethiologic agents of cervical cancer. HPV have a double-stranded circular DNA genome encoding eight viral proteins, E1, E2, E4, E5, E6, E7 (non-structural), and L1, L2 (structural), the last ones forming the viral capsid. L1 protein expressed in heterologous systems self-assembles into VLPs (\"Virus like Particles\"), the base of prophylactic vaccines available commercially, Gardasil and Cervarix. In this work, we produced VLPs of HPV-16 L1 protein in the methylotrophic yeast Pichia pastoris for purification assays. Initially, samples obtained from purification presented degradation and aggregation of L1 protein and also contaminants. The purification protocol was modified and samples obtained in the new process did not present degradation nor aggregation but the presence of some contaminants could still be detected. Therefore, samples obtained were semi-purified. A second approach to the development of an alternative vaccine was performed with the production of vaccine candidates based on the HPV L2 protein (HPV-16 L2, HPV-18 L2 and Multimeric L2) and we also expressed the same proteins fused to Staphyloccocus aureus ZZ domain, using it as an adjuvant. In general, the fused proteins induced low antibodies titer and low neutralizing antibodies titer when compared to other formulations. Neutralizing antibodies elicited against homologous and heterologous pseudovirus depended on the adjuvant used. In another approach, trying to enhance immunologic antigen efficiencies, an immunization assay was performed with a formulation containing L2 HPV- 16, L2 HPV-18 and Multimeric L2 and the properties of three adjuvants were assessed. The vaccine formulations adjuvanted with alum/MPLA and cellular Pertussis low vaccine induced the highest levels of L2-specific antibodies. In addition, the usage of adjuvants maintained the antibody levels in the long term. The immunogenicity of each antigen depends on the adjuvant combination used.

O Câncer Cervical é um importante problema de saúde pública, causando aproximadamente 270 milhões de mortes anuais. Atualmente, esse câncer é o segundo mais comum em mulheres no mundo, com os maiores índices de incidência ocorrendo nos países em desenvolvimento. O Câncer cervical tem como agente etiológico o Papilomavírus Humano (HPV). O vírus possui DNA circular duplo com genes que codificam oito proteínas, E1, E2, E4, E5, E6, E7 (não estruturais), e L1 e L2 (estruturais) que formam o capsídio viral. A proteína L1 quando produzida em sistema heterólgo de expressão tem a capacidade de auto-arranjo em partículas semelhantes ao vírus chamadas de VLPs (\"Vírus like Particles\"), que são a base das vacinas profiláticas disponíveis, Gardasil® e Cervarix®. Neste trabalho, foram produzidas VLPs da proteína L1 do HPV-16 na levedura metilotrófica Pichia pastoris utilizando dois tipos de vetores de expressão para leveduras, um epissomal e outro integrativo, para os trabalhos de purificação. Inicialmente as amostras obtidas ao final da purificação apresentaram degradação e agregação da proteína L1, além de contaminantes. O protocolo de purificação foi modificado e as amostras obtidas no final do processo de purificação não apresentaram degradação e nem agregação da proteína L1, embora ainda tenha sido detectada a presença de contaminantes e, portanto, as amostras obtidas estavam semi-purificadas. Uma segunda abordagem para o desenvolvimento de uma vacina alternativa foi realizada, na qual foram produzidos candidatos vacinais baseados na proteína L2 do Papilomavírus Humano (L2 do HPV-16, L2 do HPV-18 e L2 Multimérica), e também foram expressas proteínas fusionadas ao domínio ZZ de Staphylococcus aureus, utilizado neste caso como adjuvante. Em geral as proteínas de fusão, ainda que apresentando a fusão em sua forma funcional, geraram uma fraca indução de anticorpos IgG e de anticorpos neutralizantes. Pode-se observar uma produção de anticorpos neutralizantes contra pseudovírus homólogos e heterólogos que dependeu da combinação com os adjuvantes utilizados. Numa tentativa de maximizar a eficiência imunológica dos antígenos utilizados, um novo ensaio de imunização foi realizado com uma formulação conjunta contendo três proteínas (L2 do HPV-16, L2 do HPV-18 e L2 Multimérica), sendo também avaliadas as propriedades de três adjuvantes. A combinação da formulação vacinal com os adjuvantes gerou altos níveis de anticorpos L2-específicos, destacando-se as formulações com o hidróxido de alumínio/MPLA e com a vacina celular Pertussis low. Com a utilização desses adjuvantes, os níveis de anticorpos permaneceram elevados a longo termo. Pode-se observar a imunogenicidade de cada um dos antígenos dependeu de sua formulação com os adjuvantes testados. / Cervical cancer is one of the most important problems of public health, causing nearly 270 million deaths annually. Currently, cervical cancer is the second more common type in women worldwide and the highest incidences occuring in developing countries. Human papillomavirus (HPV) are the ethiologic agents of cervical cancer. HPV have a double-stranded circular DNA genome encoding eight viral proteins, E1, E2, E4, E5, E6, E7 (non-structural), and L1, L2 (structural), the last ones forming the viral capsid. L1 protein expressed in heterologous systems self-assembles into VLPs (\"Virus like Particles\"), the base of prophylactic vaccines available commercially, Gardasil and Cervarix. In this work, we produced VLPs of HPV-16 L1 protein in the methylotrophic yeast Pichia pastoris for purification assays. Initially, samples obtained from purification presented degradation and aggregation of L1 protein and also contaminants. The purification protocol was modified and samples obtained in the new process did not present degradation nor aggregation but the presence of some contaminants could still be detected. Therefore, samples obtained were semi-purified. A second approach to the development of an alternative vaccine was performed with the production of vaccine candidates based on the HPV L2 protein (HPV-16 L2, HPV-18 L2 and Multimeric L2) and we also expressed the same proteins fused to Staphyloccocus aureus ZZ domain, using it as an adjuvant. In general, the fused proteins induced low antibodies titer and low neutralizing antibodies titer when compared to other formulations. Neutralizing antibodies elicited against homologous and heterologous pseudovirus depended on the adjuvant used. In another approach, trying to enhance immunologic antigen efficiencies, an immunization assay was performed with a formulation containing L2 HPV- 16, L2 HPV-18 and Multimeric L2 and the properties of three adjuvants were assessed. The vaccine formulations adjuvanted with alum/MPLA and cellular Pertussis low vaccine induced the highest levels of L2-specific antibodies. In addition, the usage of adjuvants maintained the antibody levels in the long term. The immunogenicity of each antigen depends on the adjuvant combination used.