Made available in DSpace on 2016-12-23T14:37:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thiago da Silva Altoe.pdf: 286806 bytes, checksum: 1e768c565a73c84a09d913fc5468daf6 (MD5) Previous issue date: 2009-08-31 / This research had the objective to study the biology and determine the thermal exigencies of Trichogramma pretiosum reared on Trichoplusia ni eggs, in temperatures of 18, 21, 24, 27, 30, 33°C and the parasitism capacity on the ideal temperature as well. The experiment was conducted at the Laboratório de Entomologia (NUDEMAFI) of Centro de Ciências Agrárias da Universidade Federal do Espírito Santo (CCA UFES). The relationship of the egg-adult period presented an inverse ratio with the temperature increase, this way, 18 days in 18°C and 6 days in 33°C were necessary. Viabilities above 90% were found in the temperatures of 18 to 27°C. The highest temperatures promoted smallest parasitism rates. The number of individuals emerged per egg and the sex ratio did not suffer influence of temperature variation. About the basis temperature (Tb) and the thermal constant (K) of T.pretiosum in T.ni, eggs, the values obtained were of 11,84°C and 128,37°GD. When the parasitism capacity was tested under the temperature of 24°C, there was a small oscillation on the daily parasitism, varying from 1,0 to 2,6 parasitized eggs. The average number of parasitism per female per day was of 2,0 eggs, in a period of 14 days. The accumulated egg parasitism reached 80% in the ninth day. The females survival of the parasitoid showed a normal distribution, presenting brusque fall in the sixth day. The results obtained in the present research demonstrate that T. pretiosum can be used in the fitossanitary management of T. ni / Esta pesquisa objetivou estudar a biologia e determinar as exigências térmicas de Trichogramma pretiosum criado em ovos de Trichoplusia ni, nas temperaturas de 18, 21, 24 27, 30 e 33°C, bem como a capacidade de parasitismo na temperatura ideal. O experimento foi conduzido no Laboratório de Entomologia do NUDEMAFI, no Centro de Ciências Agrárias da Universidade Federal do Espírito Santo (CCA UFES). A relação do período de desenvolvimento ovo-adulto apresentou uma relação inversa ao incremento da temperatura, sendo necessários 18 dias a 18°C e 6 dias a 33°C. Viabilidades superiores a 90% foram encontradas nas temperaturas de 18 a 27°C. As maiores temperaturas proporcionaram menores taxas de viabilidade. O número de indivíduos emergidos por ovo e a razão sexual não sofreram influência da variação da temperatura. Com relação à temperatura base (Tb) e a constante térmica (K) de T. pretiosum em ovos de T. ni, os valores obtidos foram de 11,84°C e 128,37°GD. Quando testado a capacidade de parasitismo a temperatura de 24°C, o parasitismo diário apresentou uma pequena oscilação variando de 1,0 a 2,6 ovos parasitados. O número médio de parasitismo por fêmea por dia foi de 2,0 ovos, num período de 14 dias. O parasitismo acumulado de ovos atingiu 80% no nono dia. A sobrevivência das fêmeas do parasitóide apresentou uma distribuição normal, apresentando queda brusca no sexto dia. Os resultados obtidos na presente pesquisa demonstram que T. pretiosum pode ser utilizado no manejo fitossanitário de T. ni

Made available in DSpace on 2015-04-17T14:55:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arquivototal.pdf: 1356123 bytes, checksum: 7115ed47a5956fbd95bdffd700b48424 (MD5) Previous issue date: 2012-11-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Trichogramma species are identified by the morphology of the male genitalia, making the identification difficult due to the small size of the individual (0.25 mm) and/or the presence of cryptic species. Therefore molecular biology constitutes a good alternative for the identification of Trichogramma species and is also used in the identification of Proteobacteria of the genus Wolbachia, known to induce parthenogenesis in Trichogramma species. The purpose of this thesis was to use molecular methods to identify Trichogramma species, verify the diversity of Trichogramma pretiosum populations in 11 cities in Brazil and its association with bacteria of the genus Wolbachia. The samples of Trichogramma pretiosum species and Trichogramma populations were submitted to extraction of genomic DNA for PCR using the forward primer ITS-2- 5 TGTGAACTGCAGGACACATG-3 and the reverse primer IT2-5 GTCTTGCCTGCTCTGCTCTGAG.-3`. The DNA products obtained from Trichogramma species and populations of T. pretiosum were purified and sequenced. To detect the presence of bacteria of the Wolbachia genus in T. pretiosum populations, the amplifications were done using wsp specific primers, with a final reaction volume of 25 μl. The size of PCR products was determined using a molecular weight marker 100 bp using a negative control without DNA, the remaining components and a positive control containing Wolbachia. It can be verified that it was possible to extract DNA from all the Trichogramma species with quantities and qualities sufficient for electrophoretic profiles with genomic DNA concentrations ranging from 15.3 to 50ng/μl. Using PCR, the fragments of the ITS2 region of ribosomal DNA were amplified and one can identify the species of Trichogramma with the sequencing by using the similarity search of the BLAST program in the GenBank database (NCBI - National Center for Biotechnology Information) and dendrogram analysis performed according to the genetic distance matrix, from which three groups were formed, the first by T. exigum, the second by T. pretiosum and the third by T. galloi. With the results of the query by similarity using the BLAST program in the GenBank database a maximum identification average of 92,2% was obtained regarding the species of Trichogramma pretiosum, confirming the correct sequencing. The size of the sequences ranged from 355 to 503 bp. The average G + C content (guanine + cytosine) was 53,2%. After aligning the 11 sequences of T. pretiosum, 391 sites were found conserved, reflecting 73% of the total of 536 sites found, confirming the similarity between samples, as well as confidence in the sequences obtained. The average found for this distance matrix was 0.30. According to the dendrogram obtained from the genetic distance matrix using the neighbor-joining method one can verify the presence of four groups, the first formed by the TPAES, TPPARS, TPRMT TPCVMT populations and the second by the TPSPMT population, the third group by the TPPPE, TPMVCE, TPPPB, TPPPMT, TPJSP populations, and the fourth by the TPPLMT population, being the most genetically distant population. The geographical distance did not affect the genetic similarity or dissimilarity between parasitoids having no significant difference between geographic distance and genetic similarity of the T. pretiosum samples in the locations collected. Of the T. pretiosum populations analyzed, the presence of viii endobacterias occurred in the population from the state of Espírito Santo, the first local record of the presence of this α proteobacteria for the species. / As espécies de Trichogramma são identificadas por meio da morfologia da genitália do macho, sendo dificultada pelo tamanho reduzido do indivíduo (0,25 mm) e/ou a presença de espécies crípticas. Por esta razão, a biologia molecular se constituí em uma boa alternativa para a identificação de espécies de Trichogramma, sendo também utilizada na identificação de proteobactéria do gênero Wolbachia, conhecida por induzir partenogênese em espécies de Trichogramma. O objetivo desta tese foi utilizar métodos moleculares para identificação de espécies de Trichogramma, verificar a diversidade de populações de Trichogramma pretiosum em 11 municípios no Brasil e sua associação com a bactéria do gênero Wolbachia. As amostras de espécies do gênero Trichogramma e de populações de Trichogramma pretiosum foram submetidas à extração de DNA genômico para a realização de PCR utilizando o primer direto ITS-2- 5 TGTGAACTGCAGGACACATG-3 e o reverso IT2-5 GTCTTGCCTGCTCTGCTCTGAG.-3`. Os produtos de DNA obtidos das espécies de Trichogramma e das populações de T. pretiosum foram purificados e submetidos ao seqüenciamento. Para detectar a presença de bactérias do gênero Wolbachia em populações de T. pretiosum, as amplificações foram realizadas com primers específicos wsp, com um volume final da reação de 25 μl. O tamanho dos produtos de PCR foi determinado utilizando um marcador de peso molecular de 100 pb, sendo utilizado um controle negativo sem DNA e o restante dos componentes e um controle positivo com a presença de Wolbachia. Pode-se verificar que foi possível extrair DNA de todas as espécies de Trichogramma estudadas com quantidades e qualidades suficientes para obter perfis eletroforéticos, com concentrações do DNA genômico variando entre 15,3 e 50 ng/μl. Por meio da técnica de PCR, os fragmentos da região ITS2 do DNA ribossomal foram amplificados, sendo possível identificar as espécies de Trichogramma pelo sequenciamento, sendo realizada a busca por similaridade utilizando o programa BLAST, no banco de dados do GenBank (NCBI National Center for Biotechnology Information) e feita a análise de dendrograma de acordo com a matriz de distância genética, onde foi obtido três grupos, o primeiro formado pela espécie T. exigum, o segundo pela espécie T. pretiosum e o terceiro pela espécie T. galloi. Com o resultado da busca por similaridade utilizando o programa BLAST, no banco de dados do GenBank, obteve-se uma média de 92,2% de máxima identificação referente à espécie de Trichogramma pretiosum, confirmando o correto sequenciamento. O tamanho das sequências variaram de 355 a 503 pb. A média do conteúdo G + C (Guanina + Citosina) foi de 53,2%. Após o alinhamento das 11 sequências de T. pretiosum, foram encontrados 391 sítios conservados, que refletem 73 % do total de 536 sítios encontrados, confirmando a semelhança entre as amostras, bem como a confiança nas sequências obtidas. A média encontrada para essa matriz de distância foi de 0,30. De acordo com o dendrograma obtido a partir da matriz de distância genética pelo método do vizinho próximo (Neighbor-Joining), pode-se verificar a presença de quatro grupos: o primeiro, formado pelas populações TPAES, TPPARS, TPRMT e TPCVMT; o segundo, pela população de TPSPMT; o terceiro grupo, pelas populações de TPPPE, TPMVCE, TPPPB, TPPPMT, TPJSP e o quarto pela população de TPPLMT, sendo a população mais distante geneticamente. A distância geográfica não afetou a similaridade ouvi dissimilaridade genética entre os parasitóides, não existindo, diferenças significativas entre distância geográfica e a similaridade genética das amostras de T. pretiosum nas localidades coletadas. Das populações de T.pretiosum analisadas, a presença da endobactérias ocorreu na população proveniente do Estado do Espírito Santo, sendo o primeiro registro local da presença dessa α proteobactéria para a espécie.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Fall armyworm, Spodoptera frugiperda (J.E. Smith), is considered the major pest of corn. In general, the control of larvae is achieved with insecticides application, which can cause several environmental problems. In search of alternative control methods, egg parasitoids of the genus Trichogramma have been used in applied biological control programs, since they are aggressive in the host search. Therefore, the objective of this study was to evaluate aspects related with S. frugiperda control efficiency, in field corn, through Trichogramma pretiosum. Experiments were made in two periods: in 2006/2007 at 10º District Arroio Grande, Santa Maria, RS, and in 2007/2008, in two growth seasons, at Pinheirinho, Santa Bárbara do Sul, RS, where three situations were compared: one area was maintained only with S. frugiperda natural control, other with about 110 thousand T. pretiosum release per hectare, and a third with chemical control application, with 150 mL/ha of Rimon® 100 EC (novarulon) and 60 mL/ha Lannate® BR (metomil); each area with 30 x 30 m. The experimental design was randomized blocks with sampling in the plots. Each period and growth season were considered one repetition, therefore comprising three repetitions. All areas were divided in 16 plots, where the evaluations were made. Six plants per plot were sampled randomly and evaluated, and the plants were examined for: the presence or absence of S. frugiperda egg masses, the egg masses location at the plant and on the surface of the leaf, and the presence or absence of damage caused by the fall armyworm. The evaluations were performed daily, reducing the frequency as the presence of egg masses decreased. On each date, the phenological stage of plants was checked and, daily, reported the air temperature and rainfall. At the end of the crop cycle, the yield was assessed. The collected egg masses were taken to the Laboratory of Entomology, Department of Plant Protection, CCR/UFSM, where they were packed in gelatin capsules, and subsequently analyzed for the hatching of larvae or the emergence of parasitoids. The emerged male parasitoids were identified. As main results, it is possible to point out: S. frugiperda preferred to oviposit in the median part of the plant and the abaxial surface of the leaf and, preferentially, in the early stages (V1-V8) of the crop; natural parasitism of S. frugiperda eggs by richogramatids was low; in RS, S. frugiperda eggs can be parasitized by T. pretiosum, Trichogramma atopovirilia, Trichogramma rojasi and Trichogrammatoidea sp., with predominance of the first two (around 70 and 30% of identified parasitoids, respectively); T. rojasi and, possibly, Trichogrammatoidea sp. had the first record of occurrence in S. frugiperda eggs; plants without damages caused by fall armyworm predominate until the V5 stage, and with more severe damage (perforated leaf) from V6 to V10; the chemical control, with metomil (Lannate® BR) and novaluron (Rimon® 100 EC), does not interfere in the number of eggs or egg masses of S. frugiperda as well as in the parasitoids population; and one release of T. pretiosum does not result in increase in the rate of parasitized eggs and the yield of corn crop. / A lagarta-do-cartucho, Spodoptera frugiperda (J. E. Smith), é considerada a principal praga da cultura do milho. O controle das lagartas é realizado através da aplicação de inseticidas, que podem provocar vários problemas ambientais. Na busca de métodos alternativos de controle, parasitóides de ovos do gênero Trichogramma vêm sendo utilizados em programas de controle biológico aplicado, por serem agressivos na procura pelo hospedeiro. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar aspectos relacionados à eficiência de controle de S. frugiperda, na cultura do milho, com Trichogramma pretiosum. Os ensaios foram realizados em duas safras: 2006/2007, no 10º Distrito Arroio Grande, Santa Maria, RS e 2007/2008, em duas épocas, em Pinheirinho, Santa Bárbara do Sul, RS, onde foram comparadas três situações: uma área foi mantida apenas com controle natural de S. frugiperda, outra com liberação de cerca de 110 mil T. pretiosum por hectare e, uma terceira, com aplicação de controle químico com 150 mL/ha de Rimon® 100 EC (novarulon) e 60 mL/ha Lannate® BR (metomil), sendo cada área com 30 x 30 m. O delineamento experimental utilizado foi de blocos ao acaso com amostragens nas parcelas. Cada safra e época foram consideradas uma repetição, totalizando, portanto, três repetições. Todas as áreas foram divididas em 16 parcelas cada uma, onde foram realizadas as avaliações. Foram amostradas ao acaso e avaliadas seis plantas/parcela, sendo que as plantas eram examinadas quanto: à presença ou não de posturas de S. frugiperda, à localização das posturas na planta e na superfície da folha, e à presença ou não de danos causados pela lagarta-do-cartucho. As avaliações foram realizadas diariamente, diminuindo a periodicidade conforme diminuía a presença de posturas. Em cada data, foi verificado o estádio fenológico das plantas e, diariamente, registradas a temperatura do ar e a precipitação pluviométrica. Ao final do cultivo, foi avaliado o rendimento. As posturas coletadas foram conduzidas ao Laboratório de Entomologia do Departamento de Defesa Fitossanitária, CCR/UFSM, onde foram acondicionadas em cápsulas gelatinosas para remédio e, posteriormente, analisadas quanto à eclosão de lagartas ou à emergência de parasitóides. Os parasitóides machos emergidos foram identificados. Como resultados principais, pode-se destacar que: S. frugiperda apresentou preferência em ovipositar na região mediana da planta e na superfície abaxial da folha e, preferencialmente, em estádios iniciais (V1-V8) da cultura; o parasitismo natural em ovos de S. frugiperda por tricogramatídeos foi baixo; no RS, os ovos de S. frugiperda podem ser parasitados por T. pretiosum, Trichogramma atopovirilia, Trichogramma rojasi e Trichogrammatoidea sp., com predomínio dos dois primeiros (cerca de 70% e 30% dos parasitóides identificados, respectivamente); T. rojasi e, possivelmente, Trichogrammatoidea sp. tiveram o primeiro registro de ocorrência em ovos de S. frugiperda no presente trabalho; plantas sem danos causados pela lagarta-do-cartucho predominam até o estádio V5 e, com danos mais severos (folha perfurada), de V6 a V10; o controle químico não interfere tanto no número de ovos e de posturas S. frugiperda quanto na população de parasitóides; e uma liberação inundativa de T. pretiosum não resulta em acréscimo no índice de ovos parasitados nem no rendimento da cultura de milho.