O estudo foi desenvolvido com o intuito de detectar e caracterizar Cryptosporidium spp. em pacientes de diferentes comunidades brasileiras, atendidos no HC-FMUSP. A amostra utilizada foi de 2.410 amostras fecais, provenientes de exames realizados na Divisão de Laboratório Central do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (DLC-HCFMUSP), no período de 2000 a 2006. A maioria das amostras (96,82%) era oriunda do Estado de São Paulo (DIR 1 a DIR 24), sendo que 56,18% eram do Município de São Paulo (DIR 1). Foi avaliada, também, sua relação com outros enteroparasitos, com dados clínicos e localização geográfica. Todas as amostras fecais foram submetidas a métodos de concentração para pesquisa de enteroparasitos, com resultado positivo de 4,6% e 27,8% para helmintos e protozoários, respectivamente. Oocistos de Cryptosporidium spp. foram detectados, por microscopia óptica após coloração pelo método de Kinyoun em 233 amostras fecais (9,7%), semi quantificados e medidos. A maioria das amostras apresentava pequena quantidade de oocistos. Nos isolados biológicos obtidos foi feito a extração do DNA genômico utilizando 223 amostras fecais preservadas a 20°C negativos, incubadas com solução de lise (Tris-HCl + EDTA + SDS 10% + beta mercaptoetanol + PVP) e proteinase K seguida de extração com fenol-clorofórmio-álcool isoamílico (25:24:1) em tubo Phase Lock Gel light . A amplificação do DNA alvo foi feita com PCR dupla, tendo como marcador genético o gene 18 SSUrRNA. Os produtos da amplificação (amplicons) da PCR - Dupla foram digeridos pelas enzimas de restrição: TaqI e AseI. A PCR dupla confirmou Cryptosporidium em 37,2% (83/223) das amostras fecais analisadas, com sua caracterização em 62,7% (52/83) após a digestão de seus produtos. Foram observados perfis característicos de C. hominis (88,5%), C. parvum (3,8%), Cryptosporidium não parvum não hominis (34,9%) e infecções mistas com C. hominis (27,2%). Os não caracterizados foram considerados Cryptosporidium spp. Cryptosporidium spp. apresentou associações significativas com todos os grupos de riscos avaliados e diarréia. Foi observada correlação estatisticamente significativa entre tamanho dos oocistos detectados na microscopia e os genótipos Cryptosporidium hominis e Cryptosporidium não hominis não parvum. Conclui-se que diferentes genótipos de Cryptosporidium circulam em uma mesma região geográfica, infectando indivíduos tanto imunocompetentes como imunodeprimidos. A maior freqüência de Cryptosporidium hominis indica a rota fecal oral como a mais importante na transmissão desta infecção. Métodos moleculares de genotipagem são essenciais para estudos epidemiológicos deste organismo. / The study was developed with the purpose to detect and characterize Cryptosporidium spp. in patients of different Brazilian communities attended at the HC-FMSUP. Fecal samples from 2,410 individuals were arise from the Central Laboratory Division of the University of São Paulo Medical School Hospital (DLC-HC-FMUSP) searching for enteroparasites, in the period from 2000 to 2006. Most samples (96.82%) were from São Paulo state (DIR 1 to DIR 4) of which 58.18% were from São Paulo city (DIR 1). Their relationship with other enteroparasites, clinical data and geographical localization was also assessed. In the search for enteroparasites, all fecal samples were submitted to concentration methods with a 4.6% and 27.8% positive result for helminths and protozoans, respectively. Cryptosporidium spp. oocysts were detected, semi-quantified and measured in 233 fecal samples (9.7%), using light microscopy after staining by Kinyoun\'s method. Most samples presented few oocysts. In the biologic isolates genomic DNA extraction was performed using 223 fecal samples stored at -20oC, incubated with lysing solution (Tris-HCl + EDTA + 10% SDS + ? mercaptoethanol + PVP) and proteinase K followed by extraction with phenol-chloroform-isoamylic alcohol in a Phase Lock Gel Light tube. Amplification of target DNA was performed with double PCR, with 18 SSUrRNA gene as genetic marker. The double PCR amplification products (amplicons) were digested by TaqI and AseI restriction enzymes. Double PCR confirmed Cryptosporidium in 37.2% (83/223) of the analyzed fecal samples with characterization in 62.7% (52/83) after digestion of its products. Characteristic profiles of C. hominis (88.5%). C. parvum (3.8%), Cryptosporidium non-parvum non-hominis (34.9%) and mixed infection with C. hominis (27.2%) were observed. Those not characterized were considered to be Cryptosporidium spp. Cryptopsoridium hominis presented significant associations with all evaluated risk groups and diarrhea. A statistically significant correlation between size of the oocysts detected by microscopy and the Cryptosporidium hominis and Cryptosporidium non-hominis non-parvum genotypes was observed. It is concluded that different Cryptosporidium genotypes circulate in the same geographical region, infecting both immunocompetent and immunodepressed individuals. The higher frequency of Cryptosporidium hominis indicates the fecal-oral pathway as the most important in the transmission of this infection. Molecular genotyping methods are essential for epidemiological studies on this parasite.

O estudo foi desenvolvido com o intuito de detectar e caracterizar Cryptosporidium spp. em pacientes de diferentes comunidades brasileiras, atendidos no HC-FMUSP. A amostra utilizada foi de 2.410 amostras fecais, provenientes de exames realizados na Divisão de Laboratório Central do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (DLC-HCFMUSP), no período de 2000 a 2006. A maioria das amostras (96,82%) era oriunda do Estado de São Paulo (DIR 1 a DIR 24), sendo que 56,18% eram do Município de São Paulo (DIR 1). Foi avaliada, também, sua relação com outros enteroparasitos, com dados clínicos e localização geográfica. Todas as amostras fecais foram submetidas a métodos de concentração para pesquisa de enteroparasitos, com resultado positivo de 4,6% e 27,8% para helmintos e protozoários, respectivamente. Oocistos de Cryptosporidium spp. foram detectados, por microscopia óptica após coloração pelo método de Kinyoun em 233 amostras fecais (9,7%), semi quantificados e medidos. A maioria das amostras apresentava pequena quantidade de oocistos. Nos isolados biológicos obtidos foi feito a extração do DNA genômico utilizando 223 amostras fecais preservadas a 20°C negativos, incubadas com solução de lise (Tris-HCl + EDTA + SDS 10% + beta mercaptoetanol + PVP) e proteinase K seguida de extração com fenol-clorofórmio-álcool isoamílico (25:24:1) em tubo Phase Lock Gel light . A amplificação do DNA alvo foi feita com PCR dupla, tendo como marcador genético o gene 18 SSUrRNA. Os produtos da amplificação (amplicons) da PCR - Dupla foram digeridos pelas enzimas de restrição: TaqI e AseI. A PCR dupla confirmou Cryptosporidium em 37,2% (83/223) das amostras fecais analisadas, com sua caracterização em 62,7% (52/83) após a digestão de seus produtos. Foram observados perfis característicos de C. hominis (88,5%), C. parvum (3,8%), Cryptosporidium não parvum não hominis (34,9%) e infecções mistas com C. hominis (27,2%). Os não caracterizados foram considerados Cryptosporidium spp. Cryptosporidium spp. apresentou associações significativas com todos os grupos de riscos avaliados e diarréia. Foi observada correlação estatisticamente significativa entre tamanho dos oocistos detectados na microscopia e os genótipos Cryptosporidium hominis e Cryptosporidium não hominis não parvum. Conclui-se que diferentes genótipos de Cryptosporidium circulam em uma mesma região geográfica, infectando indivíduos tanto imunocompetentes como imunodeprimidos. A maior freqüência de Cryptosporidium hominis indica a rota fecal oral como a mais importante na transmissão desta infecção. Métodos moleculares de genotipagem são essenciais para estudos epidemiológicos deste organismo. / The study was developed with the purpose to detect and characterize Cryptosporidium spp. in patients of different Brazilian communities attended at the HC-FMSUP. Fecal samples from 2,410 individuals were arise from the Central Laboratory Division of the University of São Paulo Medical School Hospital (DLC-HC-FMUSP) searching for enteroparasites, in the period from 2000 to 2006. Most samples (96.82%) were from São Paulo state (DIR 1 to DIR 4) of which 58.18% were from São Paulo city (DIR 1). Their relationship with other enteroparasites, clinical data and geographical localization was also assessed. In the search for enteroparasites, all fecal samples were submitted to concentration methods with a 4.6% and 27.8% positive result for helminths and protozoans, respectively. Cryptosporidium spp. oocysts were detected, semi-quantified and measured in 233 fecal samples (9.7%), using light microscopy after staining by Kinyoun\'s method. Most samples presented few oocysts. In the biologic isolates genomic DNA extraction was performed using 223 fecal samples stored at -20oC, incubated with lysing solution (Tris-HCl + EDTA + 10% SDS + ? mercaptoethanol + PVP) and proteinase K followed by extraction with phenol-chloroform-isoamylic alcohol in a Phase Lock Gel Light tube. Amplification of target DNA was performed with double PCR, with 18 SSUrRNA gene as genetic marker. The double PCR amplification products (amplicons) were digested by TaqI and AseI restriction enzymes. Double PCR confirmed Cryptosporidium in 37.2% (83/223) of the analyzed fecal samples with characterization in 62.7% (52/83) after digestion of its products. Characteristic profiles of C. hominis (88.5%). C. parvum (3.8%), Cryptosporidium non-parvum non-hominis (34.9%) and mixed infection with C. hominis (27.2%) were observed. Those not characterized were considered to be Cryptosporidium spp. Cryptopsoridium hominis presented significant associations with all evaluated risk groups and diarrhea. A statistically significant correlation between size of the oocysts detected by microscopy and the Cryptosporidium hominis and Cryptosporidium non-hominis non-parvum genotypes was observed. It is concluded that different Cryptosporidium genotypes circulate in the same geographical region, infecting both immunocompetent and immunodepressed individuals. The higher frequency of Cryptosporidium hominis indicates the fecal-oral pathway as the most important in the transmission of this infection. Molecular genotyping methods are essential for epidemiological studies on this parasite.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-03T12:56:44Z No. of bitstreams: 1 Romulo Menna Barreto Valenca.pdf: 688661 bytes, checksum: d80c675dd68a0dfbf5ff078ecc666613 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-03T12:56:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Romulo Menna Barreto Valenca.pdf: 688661 bytes, checksum: d80c675dd68a0dfbf5ff078ecc666613 (MD5) Previous issue date: 2009-10-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The objective of this study was to determine the prevalence and identify the risk factors associated with infection by Leptospira spp. in commercial pig farms in the state of Alagoas, Brazil. To compose the study, were used 342 pigs (312 sows and 30 boars) from at seven swine herds distributed in five districts of the state of Alagoas. The serological diagnosis of infection was done by Microscopic Agglutination Test (SAM). The risk factors analysis was performed by the application of research questionnaires, consisting of objective questions relating to the designer, the general characteristics of the property, the production management, and reproductive health. Detected a prevalence of 16.10% (55/352) of pigs positive. The risk factors associated were: The not perform quarantine (p = 0.003, OR = 5.43, CI = 1.79 -16.41) and artificial insemination utilization (p = 0.023, OR = 3.38, CI = 1.18 - 9, 66). Was foundsignificant association of sows infection with the increased number of stillborn and mummified, and with the increase frequency of estrus recurrence and increased the numbers of days from weaning to service of seropositive sows. It is concluded that infection with Leptospira spp. is disseminated in commercial pig farms in the state of Alagoas, favoring the reproductive failures and decrease of zootechnical performance. The risk factors identified in this study are facilitators in the dissemination of infection and should be adjusted to control the disease in the herds studied. / Objetivou-se com este estudo calcular a prevalência e identificar os fatores de risco associados à infecção por Leptospira spp. em suínos criados em granjas tecnificadas no Estado de Alagoas, Brasil. Para compor a amostra do estudo de prevalência foram utilizados 342 suínos, sendo 312 matrizes e 30 varrões, oriundos de sete granjas de ciclo completo e distribuídas em cinco municípios do Estado de Alagoas. O diagnóstico sorológico da infecção foi realizado pela técnica de Soroaglutinação Microscópica (SAM). A análise dos fatores de risco foi realizada por meio da aplicação de questionários constituídos por perguntas objetivas referentes ao criador, às características gerais da propriedade, ao manejo produtivo, reprodutivo e sanitário. Obteve-se uma prevalência de 16,10% (55/342) de suínos soropositivos. Os fatores associados foram: não realização de quarentena (p = 0,003; OR = 5,43; IC = 1,79 – 16,41) e a utilização da inseminação artificial (p = 0,023; OR = 3,38; IC = 1,18 – 9,66). Detectou-se associação entre a infecção dasmatrizes e o aumento do número de natimortos e mumificados, assim como com a maior freqüência de repetição de cio e aumento do intervalo desmama/estro nas matrizes soropositivas. Conclui-se que a infecção por Leptospira spp. encontra-se disseminada nas granjas suinícolas tecnificadas no Estado de Alagoas e contribui com a ocorrência de falhas reprodutivas e queda nos índices zootécnicos nessas propriedades. Os fatores de risco identificados nesse estudo são facilitadores na disseminação do agente e devem ser corrigidos para controlar a doença nos rebanhos estudados.

Na fase crônica da doença de Chagas, 70% dos pacientes são assintomáticos, 20-30% apresentam a forma cardíaca e 8% a digestiva. A influência da heterogeneidade genética das cepas de Trypanosoma cruzi na evolução da forma clínica foi cogitada. Neste trabalho, utilizamos PCRs para genes do maxicírculo de T. cruzi para caracterizar parasitas isolados de 75 pacientes com a forma assintomática ou cardíaca. Verificamos que os genes que codificam as subunidades 7 (ND7) e 4 (ND4) da NADH desidrogenase (complexo I mitocondrial) apresentam deleções em algumas cepas. No entanto, não observamos correlação entre as deleções nos genes e as formas clínicas. Investigamos alguns parâmetros do funcionamento da mitocôndria em cepas controle e com mutações. Verificamos que as deleções em ND7 ou ND4 não afetam a velocidade de consumo de oxigênio em epimastigotas permeabilizados com digitonina, concluindo que o complexo I mitocondrial não é funcional neste estágio. Observamos que os níveis de produção de H2O2 pela mitocôndria não guardam relação com a presença das mutações. / In the chronic phase of Chagas disease, 70% of the patients are asymptomatic, 20-30% develop the cardiac form and 8% the digestive form. The influence of the genetic heterogeneity of Trypanosoma cruzi strains in the outcome of the clinical presentation has been considered. In this study, we employed PCR assays targeted to T. cruzi maxicircle genes to genotype parasite isolates from 75 patients with the asymptomatic or cardiac forms. We verified that the genes that code for subunits 7 (ND7) and 4 (ND4) of the NADH dehydrogenase (mitochondrial complex I) show deletions in some strains. Nevertheless, we found no correlation between the presence of the deletions and the clinical presentations. We investigated some mitochondrial functional parameters in control and mutant strains. We observed that deletions in ND7 or ND4 do not affect the rate of oxygen consumption in epimastigotes permeabilized with digitonin. We conclude that complex I is non-functional in this stage. We observed no correlation between mitochondrial production of H2O2 and the gene deletions.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-10-20T16:34:20Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Vania Lúcia Dias Soares - 2010.pdf: 2719926 bytes, checksum: 1c97489df4974bad588171364647d4d2 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-10-20T17:09:31Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Vania Lúcia Dias Soares - 2010.pdf: 2719926 bytes, checksum: 1c97489df4974bad588171364647d4d2 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-20T17:09:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Vania Lúcia Dias Soares - 2010.pdf: 2719926 bytes, checksum: 1c97489df4974bad588171364647d4d2 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2010-06-08 / Neuropsychological assessment and differential diagnosis between infective and degenerative dementias.. There are no studies comparing the neuropsychological profile of patients with parasitic infectious dementia (DIP) and other forms of primarily degenerative dementia. The objectives were to compare the neuropsychological deficits present in three groups of patients with dementia and a normal control group in relation to the DIP group. For this purpose, we prospectively evaluated 130 individuals with dementia from Dementia Unit, Hospital das Clinicas, Federal University of Goias and from the Tropical Diseases Hospital, Goiânia, aged above 18 years, divided in the following groups: infectious dementia (DIP), Alzheimer's disease (AD) , frontotemporal lobar degeneration(DLFT) , parkinsonism plus (PP) and normal controls. All underwent extensive neuropsychological assessment, addressing all cognitive domains (verbal and visual memory, attention, executive functions, gnosis, praxis, visuospatial skills, language). The productions were transcribed into tables and quantified by specific tests (Stroop, Trail Making A / B, Cancelation Test, Maze, Digit Span, Rey Figure, RAVLT, Logical Memory, Verbal Fluency, Hooper and Proverbs from WAIS). The DIP group generally presented with severe neuropsychological deficits present in multiple cognitive domains, and possibly even higher than those presented by primarily degenerative dementia in the elderly. These cognitive deficits can signal that the functional and / or lesional disturbances in DIP group undertake extensive brain areas or even that are impaired basic neuropsychological functions (attention, executive functions) that support the other functions with which are interdependent (memory, visuospatial functions). The DIP group had a higher run time, and committed more errors in the bell cancellation test than the control group (p <0.001), indicating deficits in selectivity and planning suggestive of involvement of fronto-subcortical areas. Overall, the DIP group had a performance in memory tasks higher than the AD group, equal to the DLFT group and lower than the PP group, suggesting the presence of heterogeneous hippocampal pathology in DIP group. The results emphasize that the neuropsychological assessments aid in the differential diagnosis of dementia and the topographic location of lesions associated with the predominant profile of cognitive dysfunction. / A avaliação neuropsicológica constitui importante suporte no diagnóstico diferencial entre as diversas formas de demência. Ainda não existem estudos comparando o perfil neuropsicológico de pacientes com demência infecto-parasitária (DIP) e outras formas de demência primariamente degenerativa. Os objetivos desta pesquisa foram comparar as alterações neuropsicológicas presentes em quatro grupos de pacientes com demência em relação ao grupo de pacientes com DIP e comparar o perfil neuropsicológico do grupo DIP com um grupo controle constituído por sujeitos saudáveis, pontuando os elementos neuropsicológicos diferenciadores entre eles. Para tanto, foram avaliados prospectivamente 130 indivíduos portadores de demência do ambulatório de Demências do Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Goiás e do Hospital de Doenças Tropicais, Goiânia, com idade acima de 18 anos divididos no seguintes grupos:demência infecto parasitária (DIP), doença de Alzheimer (DA), degeneração lobar frontotemporal (DLFT) , parkinsonismo plus (PP) e controles normais. Todos realizaram avaliação neuropsicológica extensa, contemplando todos os domínios cognitivos (memória verbal e visual, atenção, funções executivas, gnosias, praxias, habilidades vísuo-espaciais, linguagem). As produções foram transcritas em tabelas e quantificadas por meio de testes específicos (Stroop, Trail Making A/B, Sinos, Labirinto, Dígitos, Figura Rey, RAVLT, Memória Lógica, Fluência Verbal, Hooper e Provérbios do WAIS). O grupo DIP apresentou desempenho cognitivo prejudicado em praticamente todos os domínios, quando comparado ao grupo controle normal. O grupo DIP apresentou maior tempo de execução e cometeu muito mais erros no teste de cancelamento dos sinos que o grupo controle (p < 0,001), indicando déficits na seletividade e no planejamento sugestivos de comprometimento de áreas fronto-subcorticais. No geral, o grupo DIP apresentou desempenho em tarefas de memória superior ao grupo DA, igual ao grupo DLFT e inferior ao grupo PP e controle, sugerindo a presença heterogênea de patologia hipocampal no grupo DIP. Os resultados ressaltam que as avaliações neuropsicológicas auxiliam no diagnóstico diferencial das demências e na localização topográfica das lesões associadas ao perfil predominante de disfunções cognitivas.

Na fase crônica da doença de Chagas, 70% dos pacientes são assintomáticos, 20-30% apresentam a forma cardíaca e 8% a digestiva. A influência da heterogeneidade genética das cepas de Trypanosoma cruzi na evolução da forma clínica foi cogitada. Neste trabalho, utilizamos PCRs para genes do maxicírculo de T. cruzi para caracterizar parasitas isolados de 75 pacientes com a forma assintomática ou cardíaca. Verificamos que os genes que codificam as subunidades 7 (ND7) e 4 (ND4) da NADH desidrogenase (complexo I mitocondrial) apresentam deleções em algumas cepas. No entanto, não observamos correlação entre as deleções nos genes e as formas clínicas. Investigamos alguns parâmetros do funcionamento da mitocôndria em cepas controle e com mutações. Verificamos que as deleções em ND7 ou ND4 não afetam a velocidade de consumo de oxigênio em epimastigotas permeabilizados com digitonina, concluindo que o complexo I mitocondrial não é funcional neste estágio. Observamos que os níveis de produção de H2O2 pela mitocôndria não guardam relação com a presença das mutações. / In the chronic phase of Chagas disease, 70% of the patients are asymptomatic, 20-30% develop the cardiac form and 8% the digestive form. The influence of the genetic heterogeneity of Trypanosoma cruzi strains in the outcome of the clinical presentation has been considered. In this study, we employed PCR assays targeted to T. cruzi maxicircle genes to genotype parasite isolates from 75 patients with the asymptomatic or cardiac forms. We verified that the genes that code for subunits 7 (ND7) and 4 (ND4) of the NADH dehydrogenase (mitochondrial complex I) show deletions in some strains. Nevertheless, we found no correlation between the presence of the deletions and the clinical presentations. We investigated some mitochondrial functional parameters in control and mutant strains. We observed that deletions in ND7 or ND4 do not affect the rate of oxygen consumption in epimastigotes permeabilized with digitonin. We conclude that complex I is non-functional in this stage. We observed no correlation between mitochondrial production of H2O2 and the gene deletions.