Orientador: Regina Maura Bueno Franco / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T08:57:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BonideOliveira_ClarisseMaria_M.pdf: 6327674 bytes, checksum: 05abbfdb0fdd48f248f326f48096fc33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O solo, principalmente quando melhorado com matéria orgânica proveniente de lodo de estação de tratamento de esgoto e/ou fezes humanas e de animais, pode se tornar importante fonte de veiculação de doenças por abrigar diversos parasitos. Estes, por serem amplamente dispersos no ambiente, podem gerar problemas de saúde pública. Como o solo é uma das principais rotas de transmissão desses organismos, este trabalho teve como objetivo - a partir dos protocolos descritos na literatura para a detecção de cistos de protozoários e ovos de helmintos em solos - avaliar as metodologias mais eficientes e escolher um método visando a padronização de um protocolo eficaz na detecção de cistos de Giardia e ovos de helmintos. Foram analisadas as variáveis: Homogeneização: vórtex por 2 minutos; agitador magnético por 10 minutos; homogeneização em mixer rotatório durante 30 minutos e homogeneização manual por 5 minutos; Soluções Dispersantes: 1% 7X ICN; glicina 1 M; 0,1M tetrassódio pirofosfato e 1% Tween 40; Filtração: ausência da etapa de filtração e , filtração em peneira, para os ensaios referentes aos ovos; Soluções de Purificação: sulfato de zinco (densidade 1,18), solução saturada de cloreto de sódio; sacarose (densidade 1,33 para protozoários e 1,3 para helmintos) e polietileno glicol 60%, além da separação imunomagnética (apenas para ensaios com cistos); Força Centrífuga Relativa: 650 x g durante 5 minutos (apenas para ovos); 1050 x g durante 10 minutos e 1050 x g durante 20 minutos. As amostras de solo foram contaminadas artificialmente com um número conhecido (5 x 10² ou 10³) de cistos de Giardia spp e de ovos de Ascaris suum. Comprovou-se, previamente aos experimentos, a negatividade do solo coletado quanto aos cistos de Giardia, mediante a realização da PCR, e flutuação em solução de sacarose, para ovos de helmintos. Verificou-se que, a homogeneização do solo com o ICN 7X em mixer rotatório é o processo mais adequado para cistos e ovos, a separação imunomagnética é a melhor forma de purificação para cistos e a solução de sacarose para ovos. As forças centrífugas relativas mais apropriadas são 650 x g durante 5 minutos para ovos e 1050 x g durante 10 minutos para cistos. Após a padronização da metodologia foi avaliada a aplicabilidade desta em solos irrigados por efluente de esgoto hospitalar tratado e em areia do filtro de tratamento deste esgoto. Foram encontrados cistos em ambas as matrizes. O uso desta metodologia efetiva permite o melhor controle da transmissão de parasitoses / Abstract: The soil, especially when enriched with organic matter from sludge sewage treatment plant or human and animal feces, may become an important source of diseases transmissions for holding several parasites. These parasites, for being widely spread in the environment, may cause public health problems. As the soil is one of the main routes for pathogens transmission, this study aimed to - from the protocols described in scientific literature for the detection of protozoan and helminth eggs in soil - evaluate the most effective methodologies and standardize a method to recover cysts and helminth eggs from soil. The following variables were analyzed: vortex Homogenization for 2 minutes, magnetic stirrer for 10 minutes, homogenization in rotary mixer for 30 minutes, and manual shaking for 5 minutes; Dispersion Solutions such as 1% ICN 7X, 1M glycine, 0.1M tetrasodiumPPi and1% tween 40; Filtration: the absence of filtration step, and filtering through a sieve, eggs testing; Purifying Solutions such as zinc sulphate (1,18density) saturated sodium chloride, sucrose (1,33 density for cysts and 1,3 density for eggs), polyethylene glycol 60% and immunomagnetic separation (just for cysts testing); Relative Centrifugal Force: 650 x g for 5 minutes (for eggs); 1050 x g for 10 minutes, 1050 x g for 20 minutes. Soil samples were artificially infected with a know number (5 x 10² or 10³) of Giardia spp cysts and Ascaris suum eggs. The negativity of the collected soil regarding the Giardia cysts was proved previously to the experiments, through PCR, and by flotation in sucrose solution for helminth eggs. It was verified that, the soil homogenization with ICN 7X in rotary mixer is the most efficient process for cysts and eggs, the immunomagnetic separation is the best purifying way for cysts and the sucrose solution for eggs. The most appropriated relative centrifugal force are 650 x g for 5 minutes for the eggs and 1050 x g for 10 minutes for the cysts. After the standardization of the methodology, its applicability was evaluated in soils irrigated with hospital treated wastewater and in the sand filter of this sewage treatment. Cysts were found in both matrices. The usage of this effective methodology allows better controlling of parasitosis transmission / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia

Orientadores: Jancarlo Ferreira Gomes, Alexandre Xavier Falcão / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T15:19:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_JulianaBarboza_M.pdf: 1818938 bytes, checksum: d44ab358d0482575e52d1f77a3f4c07b (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: As parasitoses intestinais são altamente prevalentes no mundo, estando entre as maiores causadoras de doenças e óbitos em seres humanos. Atualmente, o diagnóstico laboratorial destas parasitoses é realizado por meio de procedimentos técnicos manuais, desenvolvidos na sua grande maioria há décadas, o que justifica a aplicabilidade de técnicas mais sensíveis e práticas para esta finalidade, visando obter resultados eficientes, especialmente em programas governamentais direcionados à Saúde Pública. Sendo assim, o objetivo do projeto foi de avaliar e validar uma nova técnica parasitológica, denominada TF-Test Modified, em comparação com três técnicas parasitológicas convencionais consagradas pela literatura: TF-Test Conventional; Rugai, Mattos e Brisola; e Kato-Katz/Helm-Test. As etapas do trabalho consistiram em realizar coleta de material fecal de 457 indivíduos localizados em regiões endêmicas para parasitoses no município de Campinas, SP; no processamento laboratorial de 1.828 exames; no diagnóstico de 14 espécies parasitárias; e na análise estatística qualitativa de resultados de maneira abrangente. Dentre as espécies parasitárias encontradas, helmintos e protozoários intestinais foram detectados em 42,23% de indivíduos pela técnica de TF-Test Modified, ante 36,76% por TF-Test Conventional, 5,03% por Kato-Katz/Helm-Test, e 4,16% por Rugai, Mattos e Brisola. Destes casos, 54,40% de infecção simples dos indivíduos demonstrou serem portadores de monoparasitismo. A nova técnica parasitológica de TF-Test Modified, quando comparada com as demais técnicas, apresentou alto valor de infecção, como exemplo para dupla, tripla e múltipla, de maneira a perfazer um total de 98,37% de infecções. Ademais, a nova técnica apresentou índice Kappa com grau de concordância Quase Perfeito em todos os parâmetros avaliados com estimativa de 95% (P<0,05), permitiu encontrar com alta eficiência diagnóstica todas as espécies parasitárias estudadas, mostrou um notável diagnóstico verdadeiro, especialmente quando analisada comparativamente com as outras três técnicas convencionais. O atual estudo permitiu concluir que a técnica de TF-Test Modified pode ser utilizada de forma abrangente no diagnóstico qualitativo de protozoários e helmintos intestinais de humanos. O ganho de sensibilidade diagnóstica proporcionada por esta nova técnica deverá ser de estimável contribuição para o diagnóstico individual laboratorial, inquéritos populacionais e controle das parasitoses intestinais, de modo a repercutir em contribuição social / Abstract: Intestinal parasites are highly prevalent worldwide and is among the largest cause of illness and death in humans. Currently, the laboratory diagnosis of these parasites is accomplished through technical procedures manuals, developed mostly for decades, justifying the applicability of more sensitive techniques and practices for this purpose, to obtain effective results, especially in government programs aimed at Public Health. Thus, the objective of the project was to evaluate and validate a new technique parasite, called TF-Test Modified, compared with three conventional parasitological techniques enshrined in literature: TF-Test Conventional; Rugai, Mattos and Brisola, and Kato-Katz / Helm-Test. The steps of the work consisted of conducting a collection of fecal samples from 457 individuals located in regions endemic for parasitic infections in Campinas, SP, in laboratory processing of 1,828 examinations, the diagnosis of 14 parasitic species, and the qualitative statistical analysis of results so comprehensive. Among the species found parasitic, helminths and intestinal protozoa were detected in 42,23% of subjects using the technique of TF-Test Modified, against 36,76% by TF-Test Conventional, 5,03% by Kato-Katz/Helm-Test, and 4,16% Rugai, Mattos and Brisola. Of these cases, 54,40% of single infections of individuals were shown to be carriers of monoparasitism. The new technique parasitological TF-Test Modified compared to other techniques of infection showed a high value, for example double, triple and multiple so as to make a total of 98,37% infections . Moreover, the new technique presented Kappa index level of agreement with Almost Perfect in all parameters with estimated 95% (P <0.05), allowed to meet with high diagnostic efficiency all parasitic species studied showed remarkable true diagnosis, especially when viewed in comparison with other three conventional techniques. The current study showed that the technique TF-Test Modified can be used comprehensively in qualitative diagnosis of intestinal protozoa and helminths of humans. The gain in diagnostic sensitivity afforded by this new technique should be estimable contribution to the individual diagnostic laboratory, population surveys and control of intestinal parasites, in order to reflect on social contribution / Mestrado / Parasitologia / Mestra em Parasitologia

Made available in DSpace on 2011-05-04T12:36:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010 / Segundo o Ministério da Saúde, o diagnóstico laboratorial da Leishmaniose Visceral Canina (LVC) permanece como um problema para os serviços de saúde, e está relacionado a três fatores: variedade de sinais clínicos semelhantes aos observados em outras doenças infecciosas, alterações histopatológicas inespecíficas e a inexistência de um teste de diagnóstico próximo a 100% de especificidade e sensibilidade. Esta questão, associada ao fato de haver registro de cães infectados por Leishmania sp, agente etiológico da LVC, desde o final da década de 1990 em Mato Grosso, motivou a realização deste trabalho. O objetivo geral desta dissertação foi analisar amostras de cães com suspeita clínica ou não de leishmaniose visceral, recolhidos pelo Centro de Controle de Zoonoses (CCZ), oriundos de área urbana de Cuiabá (MT), a partir da comparação de técnicas laboratoriais de RIFI, ELISA, teste rápido imunocromatográfico DPPTM e cultivo in vitro com o exame parasitológico direto (esfregaço de medula óssea), desenvolver uma metodologia de diagnóstico utilizando, como substrato, o papel de filtro FTA® Card embebido com o aspirado de tecido subcutâneo dos animais e caracterizar a espécie de Leishmania circulante. Foram analisados 45 cães, de ambos os sexos e de diferentes raças. (...) A combinação do aspirado de tecido subcutâneo dos cães, em papel de filtro FTA® Card, com a PCR não obteve resultados positivos nesta pesquisa. Portanto, esta metodologia deve ser aprimorada mediante novos testes. A priori, com abordagem diferente para a coleta do aspirado de tecido subcutâneo em cães e realização da PCR. A espécie de Leishmania, caracterizada pela enzima 6PGDH, circulante em cinco cães amostrados, provenientes de área urbana de Cuiabá, foi a Leishmania (Leishmania) infantum. / According to the Ministry of Health, the laboratory diagnosis of Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) remains as a problem for health services, and is linked to three factors: variety of clinical evidence similar to those observed in other infectious diseases, histopathologic-unspecific changes and the lack of a diagnostic test near 100% specificity and sensitivity. This issue associated with having infected dogs record for Leishmania sp, etiological microorganism of the CVL, since the late 1990s in Mato Grosso state, motivated this study. The main purpose of this dissertation was analyzing samples of dogs with clinical suspicion or not with leishmaniasis, collected by Zoonoses Control Center (ZCC) from Cuiabá (MT) urban area by comparing laboratory techniques IFR, ELISA, rapid test imunocromatographic DPPTM and cultivation in vitro with parasitological direct examination (smear of bone marrow), to develop a methodology for diagnosis using as substrate, the filter paper FTA ® card wet and embedded with the infiltrate of subcutaneous tissue of animals and characterize the species of Leishmania stock present in the culture. The results showed that 45 dogs were examined, of both sexes and of different races. The clinical evidences recorded in dogs sampled from Cuiabá urban area were, in descending order of frequency: desquamation (53.33%), alopecia (44.44%), injuries (40%), cachexia (26.67%), onychogryphosis (26.67%), mucosal pale (26.67%), keratoconjunctivitis, (26.67%) and apathy (13.33%). The positive results obtained by direct parasitological techniques (gold standard), cultivation in vitro IFR, ELISA and DPPTM accounted for 37.21% (16/43), 44.44% (8/18), 84.44% (38/45), 42.22% (19/45) and 46.67% (21/45), respectively. The rapid test sensitivity = imunocromatographic DPPTM (68.42%, specificity = 87.5%, accurate = 73.07%, k = 0.57) proved to be more sensitive, more specific and with greater reliability than IFR (sensitivity = 44.44%, specificity = 100%, accurate = 53.49%, k = 0.21) and ELISA (sensitivity = 58.52%, specificity = 76.92%, accurate = 69.77%, k = 0.36). The combination of subcutaneous infiltrate dogs tissues in filter paper FTA ® card with the PCR did not succeed in this poll. Therefore, this methodology must be enhanced by further testing. A priori with different approach to the collection of induction of subcutaneous in dogs tissues and the proceedings of PCR. The species of Leishmania, characterized by the enzyme 6PGDH, stock in five dogs sampled from Cuiabá, urban area was Leishmania (Leishmania) infantum.