O projeto tem como objetivo a detecção e caracterização das células epiteliais circulantes de pacientes com carcinoma de mama no estádio III. Analisou-se a presença ou ausência destas células antes da realização de quimioterapia neoadjuvante. Para tanto, utilizou-se o sistema de enriquecimento de amostras de sangue periférico por meio da marcação intracelular imunomagnética direta, empregando-se microbeads conjugados com citoqueratina e posterior separação imunomagnética. A amostra final, com as células alvo detectadas, foi então quantificada por imunocitoquímica ou citometria de fluxo. Resultados: A reação de imunocitoquímica no sangue periférico foi negativa em todos os casos enquanto que na citometria de fluxo foi positiva em 22/23 casos analisados. Conclusão: A detecção e caracterização de células tumorais circulantes em pacientes com câncer de mama podem vir a se constituir em um novo fator prognóstico, porém, são ainda necessárias novas estratégias para melhor detectá-las. / The aim of this study was to detect and characterize carcinoma cells of patients with breast cancer with clinical stage III analyzing the presence or absence before chemotherapy by enrichment of peripheral blood with super paramagnetic microbeads, using direct Immunomagnetic labeling of intracellular 7/8 cytokeratin. For enrichment, magnetically labeled tumor cells are passed over a high-gradient magnetic positive selection column. Cytospin preparations are made after immunomagnetic enrichment and are examined immunocytochemically (ICC) using an anti-cytokeratin and quantified by flow cytometry (CMF). Results: No cytokeratin positive cells were detected in the 32 peripheral blood of patients of breast carcinoma by ICC and cytokeratin positive cells were detected in the 22 of 23 patients by CMF. Conclusion: These methods of detection and characterization breast carcinoma cells will become useful in the diagnosis and prognosis but is necessary optimization of existing methods.

O projeto tem como objetivo a detecção e caracterização das células epiteliais circulantes de pacientes com carcinoma de mama no estádio III. Analisou-se a presença ou ausência destas células antes da realização de quimioterapia neoadjuvante. Para tanto, utilizou-se o sistema de enriquecimento de amostras de sangue periférico por meio da marcação intracelular imunomagnética direta, empregando-se microbeads conjugados com citoqueratina e posterior separação imunomagnética. A amostra final, com as células alvo detectadas, foi então quantificada por imunocitoquímica ou citometria de fluxo. Resultados: A reação de imunocitoquímica no sangue periférico foi negativa em todos os casos enquanto que na citometria de fluxo foi positiva em 22/23 casos analisados. Conclusão: A detecção e caracterização de células tumorais circulantes em pacientes com câncer de mama podem vir a se constituir em um novo fator prognóstico, porém, são ainda necessárias novas estratégias para melhor detectá-las. / The aim of this study was to detect and characterize carcinoma cells of patients with breast cancer with clinical stage III analyzing the presence or absence before chemotherapy by enrichment of peripheral blood with super paramagnetic microbeads, using direct Immunomagnetic labeling of intracellular 7/8 cytokeratin. For enrichment, magnetically labeled tumor cells are passed over a high-gradient magnetic positive selection column. Cytospin preparations are made after immunomagnetic enrichment and are examined immunocytochemically (ICC) using an anti-cytokeratin and quantified by flow cytometry (CMF). Results: No cytokeratin positive cells were detected in the 32 peripheral blood of patients of breast carcinoma by ICC and cytokeratin positive cells were detected in the 22 of 23 patients by CMF. Conclusion: These methods of detection and characterization breast carcinoma cells will become useful in the diagnosis and prognosis but is necessary optimization of existing methods.

Orientador: Regina Maura Bueno Franco / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T22:08:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CantusioNeto_Romeu_D.pdf: 1288923 bytes, checksum: 6747f006dc8fe56fe9a7284e80649fe0 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A veiculação hídrica tem sido considerada uma das principais vias de transmissão de giardiose e criptosporidiose sendo implicada na ocorrência de vários surtos de gastroenterites, em vários países nos últimos anos. Diante deste panorama, no Brasil foi emitida Portaria 518/04 (Ministério da Saúde), que recomenda a pesquisa destes protozoários em água de consumo humano. Por este motivo, o objetivo deste estudo foi realizar um estudo comparativo entre as metodologias de concentração já existentes: Filtração em Membrana (FM) e Floculação em Carbonato de Cálcio (FCC), tecendo uma análise crítica das mesmas e verificando-se a sua aplicabilidade em amostras naturais de água superficial do Rio Atibaia. Este estudo foi conduzido em duas etapas: na primeira, foram realizados 52 experimentos, visando analisar o desempenho dos métodos propostos determinando-se a precisão inicial em amostras de água reagente inoculadas com suspensões comerciais de cistos e oocistos Easy Seed® (Biotecnology Frontiers, Austrália), aplicando-se ou não a etapa de purificação mediante o uso da separação imunomagnética. Quando foram avaliadas amostras do rio Atibaia, a suspensão comercial de cistos e oocistos utilizada para a contaminação artificial foi Color Seed® (Biotecnology Frontiers, Austrália). Em uma segunda etapa, um total de 36 experimentos foi conduzido com o objetivo de se avaliar o comportamento dos mesmos métodos frente a fatores interferentes, característicos da matriz de água bruta superficial, entre eles a turbidez. Nos experimentos controle com amostra de água reagente, a metodologia de FM recuperou mais organismos (21,5 % dos oocistos e 25,0 % dos cistos), quando comparada com a metodologia de FCC (5,3 % e 5,8 % dos oocistos e cistos, respectivamente). A inclusão da etapa de purificação por separação imunomagnética (IMS) não resultou num aumento na recuperação de cistos e oocistos nestas metodologias (FM e FCC). Nos experimentos com amostras de água do Rio Atibaia, de uma maneira geral, a metodologia de FCC apresentou melhor desempenho de recuperação dos organismos e quando incluída a etapa de IMS, uma melhora ocorreu apenas para a recuperação de cistos de Giardia spp. Quando avaliada amostras de água bruta superficial do rio Atibaia em condições de turbidez até 50 NTU a etapa de purificação por IMS acarretou uma maior eficiência de recuperação de cistos de Giardia spp. e oocistos de Cryptosporidium spp., para as duas metodologias de concentração. Quando a turbidez das amostras foi superior a 50 NTU, uma melhora da recuperação ocorreu apenas para Cryptosporidium spp, utilizando-se o método de FM. Assim, ambas as metodologias avaliadas, mostraram-se eficientes para serem aplicadas em um monitoramento desses protozoários em amostras hídricas, mesmo em situações de alta turbidez. A etapa de purificação pela separação imunomagnética nem sempre apresentou um ganho na recuperação dos organismos e, as variações nos valores de recuperação para ambos os protozoários, são inerentes aos protocolos utilizados e também associados à matriz analisada. A FM é indicada pela praticidade, tempo e resultados, podendo auxiliar para o conhecimento da ocorrência destes patógenos e assim, minimizar a possibilidade de sua transmissão mediante veiculação hídrica / Abstract: The waterborne transmission route of giardiosis and criptosporidiosis has been considered the major one, causing the occurrence of several gastroenteritis outbreaks in several countries in the last years. Looking to this panorama, was published in Brazil the Governmental Decree 518/04 (Health Department), that recommends the research of these protozoa in water samples. For this reason, the goal of this study was to accomplish a comparative study between Membrane Filtration (MF) and Calcium Carbonate Flocculation (FCC) concentration methodologies, doing a critical analysis of both and verifying its apply in natural samples of Atibaia River superficial water. Two stages took place: in the first one, 52 experiments were carried out, aiming to analyze the performance of the methods proposed, determining the initial precision in samples of reagent water inoculated with commercial suspensions of cysts and oocysts (Easy Seed®-Biotecnology Frontiers Australia), applying or not the purification step by Immunomagnetic Separation. When natural water samples were evaluated, the commercial suspension of cysts and oocysts utilized for the artificial contamination was (Color Seed®-Biotecnology Frontiers Australia). In a second step, 36 experiments were carried out aiming to evaluate the behavior of the methods facing interferential factors, peculiar of the superficial raw water matrix, as turbidity. In the trial control with reagent water sample, the FM methodology recovered more organisms (21.5% of the oocysts and 25.0% of the cysts), in comparison to the FCC methodology (5.3% of the oocysts and 5.8% of the cysts). The purification step by Immunomagnetic Separation (IMS) did not show an improvement in the recovery of cysts and oocysts in these methodologies (FM and FCC). In the experiments with natural water performance of the organisms and when IMS step was included, an improvement occurred just for the recovery of Giardia spp. cysts. When superficial raw water of Atibaia river samples with turbidity up to 50 NTU were evaluated, the purification step by IMS showed higher efficiency in the recovery of Giardia spp. cysts and Cryptosporidium spp. oocysts, for both concentration methodologies. When the turbidity of the sample was over 50 NTU, a recovery improvement occurred just for Cryptosporidium spp, using the FM method. Thus, both methodologies showed efficiency in monitoring these protozoa in water samples, even in situations of high turbidity. The purification step by Immunomagnetic Separation not always showed gain in the recovery of the organisms and the variations in the values of recovery for both protozoa are inherent to the protocols that were used and also associated to the analyzed matrix. However, the FM method is indicated for its practicability, time and results, being able to help the knowledge of the occurrence of these pathogens and minimize the possibility of its transmission by waterborne route / Doutorado / Parasitologia / Doutor em Parasitologia

Orientador: Regina Maura Bueno Franco / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T08:57:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BonideOliveira_ClarisseMaria_M.pdf: 6327674 bytes, checksum: 05abbfdb0fdd48f248f326f48096fc33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O solo, principalmente quando melhorado com matéria orgânica proveniente de lodo de estação de tratamento de esgoto e/ou fezes humanas e de animais, pode se tornar importante fonte de veiculação de doenças por abrigar diversos parasitos. Estes, por serem amplamente dispersos no ambiente, podem gerar problemas de saúde pública. Como o solo é uma das principais rotas de transmissão desses organismos, este trabalho teve como objetivo - a partir dos protocolos descritos na literatura para a detecção de cistos de protozoários e ovos de helmintos em solos - avaliar as metodologias mais eficientes e escolher um método visando a padronização de um protocolo eficaz na detecção de cistos de Giardia e ovos de helmintos. Foram analisadas as variáveis: Homogeneização: vórtex por 2 minutos; agitador magnético por 10 minutos; homogeneização em mixer rotatório durante 30 minutos e homogeneização manual por 5 minutos; Soluções Dispersantes: 1% 7X ICN; glicina 1 M; 0,1M tetrassódio pirofosfato e 1% Tween 40; Filtração: ausência da etapa de filtração e , filtração em peneira, para os ensaios referentes aos ovos; Soluções de Purificação: sulfato de zinco (densidade 1,18), solução saturada de cloreto de sódio; sacarose (densidade 1,33 para protozoários e 1,3 para helmintos) e polietileno glicol 60%, além da separação imunomagnética (apenas para ensaios com cistos); Força Centrífuga Relativa: 650 x g durante 5 minutos (apenas para ovos); 1050 x g durante 10 minutos e 1050 x g durante 20 minutos. As amostras de solo foram contaminadas artificialmente com um número conhecido (5 x 10² ou 10³) de cistos de Giardia spp e de ovos de Ascaris suum. Comprovou-se, previamente aos experimentos, a negatividade do solo coletado quanto aos cistos de Giardia, mediante a realização da PCR, e flutuação em solução de sacarose, para ovos de helmintos. Verificou-se que, a homogeneização do solo com o ICN 7X em mixer rotatório é o processo mais adequado para cistos e ovos, a separação imunomagnética é a melhor forma de purificação para cistos e a solução de sacarose para ovos. As forças centrífugas relativas mais apropriadas são 650 x g durante 5 minutos para ovos e 1050 x g durante 10 minutos para cistos. Após a padronização da metodologia foi avaliada a aplicabilidade desta em solos irrigados por efluente de esgoto hospitalar tratado e em areia do filtro de tratamento deste esgoto. Foram encontrados cistos em ambas as matrizes. O uso desta metodologia efetiva permite o melhor controle da transmissão de parasitoses / Abstract: The soil, especially when enriched with organic matter from sludge sewage treatment plant or human and animal feces, may become an important source of diseases transmissions for holding several parasites. These parasites, for being widely spread in the environment, may cause public health problems. As the soil is one of the main routes for pathogens transmission, this study aimed to - from the protocols described in scientific literature for the detection of protozoan and helminth eggs in soil - evaluate the most effective methodologies and standardize a method to recover cysts and helminth eggs from soil. The following variables were analyzed: vortex Homogenization for 2 minutes, magnetic stirrer for 10 minutes, homogenization in rotary mixer for 30 minutes, and manual shaking for 5 minutes; Dispersion Solutions such as 1% ICN 7X, 1M glycine, 0.1M tetrasodiumPPi and1% tween 40; Filtration: the absence of filtration step, and filtering through a sieve, eggs testing; Purifying Solutions such as zinc sulphate (1,18density) saturated sodium chloride, sucrose (1,33 density for cysts and 1,3 density for eggs), polyethylene glycol 60% and immunomagnetic separation (just for cysts testing); Relative Centrifugal Force: 650 x g for 5 minutes (for eggs); 1050 x g for 10 minutes, 1050 x g for 20 minutes. Soil samples were artificially infected with a know number (5 x 10² or 10³) of Giardia spp cysts and Ascaris suum eggs. The negativity of the collected soil regarding the Giardia cysts was proved previously to the experiments, through PCR, and by flotation in sucrose solution for helminth eggs. It was verified that, the soil homogenization with ICN 7X in rotary mixer is the most efficient process for cysts and eggs, the immunomagnetic separation is the best purifying way for cysts and the sucrose solution for eggs. The most appropriated relative centrifugal force are 650 x g for 5 minutes for the eggs and 1050 x g for 10 minutes for the cysts. After the standardization of the methodology, its applicability was evaluated in soils irrigated with hospital treated wastewater and in the sand filter of this sewage treatment. Cysts were found in both matrices. The usage of this effective methodology allows better controlling of parasitosis transmission / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia

Esta pesquisa comparou a incorporação de iodeto de propídio (IP) com a avaliação simultânea de corantes indicativos de danificação em membrana e atividade enzimática (Live/Dead Cell Assay®) para a estimar a viabilidade de cistos de Giardia muris e oocistos de Cryptosporidium parvum. Além disso, foram testados métodos de recuperação de (oo)cistos em amostras de lodo e água de lavagem de filtros (ALF) geradas em escala de bancada, simulando tratamento de água por ciclo completo com decantação. Dentre os métodos estudados para a detecção de G. muris e C. parvum inoculados em amostras de lodo, destacou-se a floculação com sulfato férrico, seguida de separação imunomagnética (IMS). Realizou-se, portanto, ensaio de qualidade analítica com ColorSeedTM, para este método, tendo atendido ao requerido pelo Método 1623.1 da USEPA (2012) para Giardia spp. (32,25%; CV=9,00%), mas não tendo sido suficiente para Cryptostoridium spp. (11,00%; CV=47,67%). O teste com ColorSeedTM em amostras de ALF reproduziu o procedimento de filtração em membrana (FM) com raspagem utilizando Tween® 80 (45°C, 0,1%) seguido de IMS, tendo atendido ao Método 1623.1 para Giardia spp. (13,00%, CV=19,61%), mas não tendo sido suficiente para Cryptostoridium spp. (2,00%; CV=93,54%). Optou-se por este procedimento na avaliação de qualidade analítica, pois o inóculo prévio de suspensões comerciais seguido de recuperação por FM sem IMS superou 100% para C. parvum, devido à utilização de fator de multiplicação. O desempenho do Live/Dead Cell Assay® sobre suspensões comerciais de (oo)cistos foi subjetivo, sobretudo para visualização de organismos enzimaticamente ativos, de modo que optou-se pela inclusão de IP como parâmetro para estimar o efeito dos métodos de recuperação sobre a viabilidade. Em função da baixa recuperação e fluorescência de G. muris, a incorporação de IP foi avaliada apenas em C. parvum. Os resultados reiteraram a dificuldade na recuperação de protozoários em lodo e ALF e o fato de que as particularidades destes procedimentos analíticos podem prejudicar a interpretação de dados de viabilidade. / This study compared the incorporation of propidium iodide (PI) with the simultaneous evaluation of dyes that indicate both membrane damage and enzymatic activity (Live/Dead Cell Assay®) to assess the viability of Giardia muris cysts and Cryptosporidium parvum oocysts. In addition, methods of recovering protozoan cysts and oocysts from sludge and filter backwash water (FBW) samples generated on bench scale, simulating conventional water treatment with decantation, were tested. Among the studied methods for detection of G. muris and C. parvum spiked into sludge samples, ferric sulphate flocculation followed by immunomagnetic separation (IMS) lead to higher recoveries. An analytical quality assay was therefore carried out with ColorSeedTM having met the USEPA Method 1623.1 (2012) recommendation for Giardia spp. (32.25%, CV=9.00%) but not for Cryptostoridium spp. (11.00%, CV = 47.67%). The quality assay test for FBW samples replicated the membrane filtration (MF) procedure using Tween® 80 (45 °C, 0.1%) followed by IMS, having complied with Method 1623.1 for Giardia spp. (13.00%, CV=19.61%) but again not for Cryptostoridium spp. (2.00%; CV=93.54%). This procedure was chosen for the analytical quality exam, since the previous inoculum of commercial suspensions followed by MF without IMS exceeded 100% recovery for C. parvum, due to the use of a multiplication factor. The Live/Dead Cell Assay® performance on commercial suspensions of cysts and oocysts was subjective, especially for visualizing enzymatically active organisms, thus PI inclusion was chosen as the parameter to estimate the effect of recovery methods on the organisms\' viability. Due to the low recovery and poor fluorescence of G. muris, IP inclusion was evaluated only in C. parvum. The results reiterated the difficulty in the recovery of protozoa from sludge and FBW and the possibility of these analytical procedures hinder the interpretation of cysts and oocysts viability.

Os oocistos de Cryptosporidium spp. e os cistos de Giardia spp. podem gerar doenças de veiculação hídrica associadas a problemas de saúde pública. Os (oo)cistos são de difícil remoção e inativação durante o tratamento de água, principalmente devido ao tamanho reduzido e à resistência ao processo de cloração. Além disso, os métodos de detecção de protozoários na água apresentam elevado custo e estão sujeitos à grande variabilidade e à baixa reprodutibilidade, especialmente em águas de elevada turbidez. Com água de estudo com turbidez de aproximadamente 110 uT, ensaios de tratabilidade com cloreto de polialumínio foram feitos em jarteste para a obtenção da água de lavagem dos filtros (ALF) e do resíduo sedimentado. O método escolhido para detecção de (oo)cistos foi a centrifugação direta com adição de solução de dispersão ICN 7X seguido de IMS com duas dissociações ácidas (CD + ICN 7X). O tratamento dos resíduos objetivou a inativação dos (oo)cistos, por meio de danos à estrutura celular dos parasitos, identificada pela incorporação do corante iodeto de propídio no microrganismo. Para o método CD + ICN 7X, menor interferência na viabilidade dos (oo)cistos foi observada em relação à floculação em carbonato de cálcio e melhor recuperação do que a centrifugação direta. O controle de qualidade analítica desse método, feito com suspensão do kit EasySeed®, apresentou recuperação de 2,8±0,8% de oocistos e 7,8±2,9% de cistos para a ALF e de 3,3±2,0% e 24,8±8,0%, para oocistos e cistos no resíduo sedimentado. Apenas a recuperação de cistos de Giardia spp. no resíduo sedimentado atendeu aos padrões recomendados pelo Método 1623.1 da USEPA. A presença de microesferas magnéticas aderidas aos (oo)cistos foi observada nos poços de leitura após a IMS, indicando limitações desse método de purificação. Para o tratamento alcalino do resíduo sedimentado, a dosagem de 27mg/100mL foi testada para os tempos de 3 e 5 dias e, respectivamente, foram obtidos 1,85 e 3,0 log de inativação de oocistos e 2,05 e 2,14 log de inativação para cistos. Para o processo de ozonização da ALF, avaliado apenas para oocistos, as inativações de 2,83 log e 3,44 log foram obtidas para as dosagens de 7,5 mg O3 L-1 por 10 min e 10 mg O3 L-1 por 5 min, respectivamente. / Cryptosporidium spp. oocysts and Giardia spp. cysts are infectious forms and can cause public health problems due to associated waterborne diseases. (Oo)cysts are difficult to remove and inactivate during water treatment, mainly because of reduced size and resistance to chlorination. In addition, protozoan detection methods in water are expensive and subject to high variability and low reproducibility, especially in high turbidity water. In jartest treatability tests, 110 uT study water was treated with polyaluminium chloride to obtain backwashing water (BW) and sedimented residue. The method chosen for detection of (oo)cysts was direct centrifugation with addition of 7X ICN dispersion solution followed by IMS with two acid dissociations. Treatment of residuals objectified inactivation of (oo)cysts by damages on parasites cellular structure, identified by inclusion of propidium iodide as an indicator. The method of detection chosen showed less interference in the viability of (oo)cysts in comparison to flocculation in calcium carbonate and better recovery than direct centrifugation. The analytical quality control of this method, performed with EasySeed® suspension, obtained recovery of 2.8±0.8% oocysts and 7.8±2.9% cysts for BW and of 3.3±2.0% and 24.8±8.0%, for oocysts and cysts in sedimented residue. Only Giardia spp. recovery in sedimented residue complied with the standards recommended by USEPA Method 1623.1. Magnetic microspheres were found attached to (oo)cysts in microscope slides after IMS, indicating limitations of this purification method. For the alkaline treatment of sedimented residue, dosage of 27mg / 100mL was tested for 3 and 5 days and respectively 1.85 and 3.0 log inactivation were obtained for oocysts while 2.05 and 2.14 log of. For ozonation of BW, evaluated only for oocysts, 2.83 log and 3.44 log inactivation were obtained for dosages of 7.5 mg O3 L-1 for 10 min and 10 mg O3 L-1 for 5 min, respectively.

O presente trabalho avaliou o uso e a detecção de óxido de cálcio e ozônio para a inativação de cistos de Giardia spp. e oocistos de Cryptosporidium parvum presentes nos resíduos e na água de lavagem dos filtros gerados após a utilização da tecnologia de ciclo completo com flotação por ar dissolvido (coagulação, floculação, flotação e filtração) em escala de bancada, usando o cloreto de polialumínio PAC como coagulante. Para os ensaios analíticos de recuperação dos protozoários e validação do método foram utilizados as suspensões e o Easyseed® nas matrizes ALF e resíduos. A quantificação dos protozoários foi realizada pelo método de centrifugação direta com a adição de solução de dispersão detergente ICN 7X (MP BIO®) a 1,0% na amostra com a etapa de separação imunomagnética – IMS. As recuperações nos ensaios de qualidade utilizando as suspensões de protozoários foram de 19,86% ± 16,29 e 43,95% ± 11,21, para oocistos de Cryptosporidium e cistos de Giardia respectivamente na matriz ALF, enquanto que para a matriz resíduo foram de 8,16% ± 30,24 para Cryptosporidium e 32,54% ± 46,48 para Giardia. Para os ensaios de recuperação empregando o Easyseed® os valores da matriz ALF foram 2,25% ± 1,37 para Cryptosporidium e 3,75% ± 2,25 para Giardia. No resíduo, a recuperação foi de 4,5% ± 1,50 para Cryptosporidium e 49% ± 1 para Giardia. Para os ensaios com óxido de cálcio na matriz resíduo, a primeira condição com dosagem de 23 mg cal/100mL no tempo de contato de 3 dias a 25° C, não foram encontrados protozoário positivo para o teste IP (iodeto de propídeo), o que deixa esta condição satisfatória. Na segunda condição, com dosagem de 16 mg cal/100mL e tempo de contato de 3 dias a 25°C, foram encontrados protozoários negativos para IP. Para as condições de desinfecção, utilizando ozônio, com tempos de contato 5 min e 10 min e dosagens de 10 mg O3.L-1 e 7,5 mg O3.L-1, respectivamente, poucos organismos foram detectados. Portanto, destaca-se a dificuldade em avaliar a permeabilidade dos protozoários após os ensaios de desinfecção realizados. Faz-se necessário realizar novos ensaios com outras dosagens e tempos de contato. / The present work evaluated the use of calcium oxide and ozone for the inactivation of Giardia spp. and Cryptosporidium parvum oocysts present in the wastes and in the wash water of the filters obtained after the use of the complete cycle technology with dissolved air flotation (coagulation, flocculation, flotation and filtration) on a bench scale using polyaluminium chloride - PAC as a coagulant. For the analytical tests of protozoan recovery and validation of the method, suspensions and Easyseed ® were used in the ALF and residues matrices. Protozoan quantification was performed by the direct centrifugation method with the addition of detergent dispersion solution ICN 7X (MP BIO ®) at 1.0% in the sample with the immunomagnetic separation step - IMS. The recoveries in the quality assays using the protozoal suspensions were 19.86% ± 16.29 and 43.95% ± 11.21 for Cryptosporidium oocysts and Giardia cysts respectively in the ALF matrix, whereas for the residue matrix were 8.16% ± 30.24 for Cryptosporidium and 32.54 ± 46.48 for Giardia. For the recovery assays using Easyseed ® the ALF matrix values were 2.25% ± 1.37 for Cryptosporidium and 3.75% ± 2.25 for Giardia. In the residue, recovery was 4.5% ± 1.50 for Cryptosporidium and 49% ± 1 for Giardia. For the calcium oxide assays in the residue matrix, the first condition with a dosage of 23 mg cal/100mL at the contact time of 3 days at 25°C, no positive protozoan was found for the IP (propidium iodide) test, which leaves is a satisfactory condition. In the second condition with a dosage of 16 mg cal/100mL and contact time of 3 days at 25°C, negative protozoa were found for IP. For the disinfection conditions using ozone with contact times 5 min and 10 min and dosages of 10 mg O3.L-1 and 7.5 mg O3.L-1, respectively, few organisms were detected. Therefore, the difficulty in evaluating the permeability of protozoa after the disinfection tests carried out. Realization of new tests with other dosages and contact times.

Esta pesquisa teve como objetivo analisar a remoção de cistos de Giardia spp. e oocistos de Cryptosporidium spp. em água de abastecimento utilizando a tecnologia de tratamento de ciclo completo com flotação (coagulação, floculação, flotação e filtração) em escala de bancada e utilizando cloreto de polialumínio – PAC como coagulante. Para isso, o método de floculação em carbonato de cálcio – FCCa com e sem a separação imunomagnética – IMS foi utilizado para quantificação dos organismos. Os resultados mostraram que as etapas de coagulação, floculação e flotação (Fase1) removeram 1,55 log de cistos de Giardia spp. e 1,21 log de oocistos de Cryptosporidium spp. O tratamento apenas com filtração (Fase 2) removeu 1,2 log de cistos de Giardia spp. e 0,88 log de oocistos de Cryptosporidium spp. A combinação dos tratamentos (Fase 3) foi capaz de remover 2,64 log de cistos de Giardia spp. e 2,5 log de oocistos de Cryptosporidium spp. Na quantificação de protozoários, o método de FCCa sem IMS demonstrou ser mais econômico e com melhor recuperação do que com IMS. Também foi analisada a influência da terceira dissociação ácida no método com IMS e tal procedimento acarretou em diferenças significativas nos resultados. Mesmo atendendo aos padrões de potabilidade, o tratamento estudado não removeu completamente os protozoários, este fato demonstra a necessidade da preservação dos mananciais, do tratamento dos esgotos e da desinfecção final para maximizar as barreiras que permitam reduzir o risco microbiológico presente na água de consumo. / This research aimed to analyze the removal of Giardia spp. cysts and Cryptosporidium spp. oocysts in drinking water using the full cycle of treatment with flotation technology (coagulation, flocculation, flotation and filtration) at bench scale and using polyaluminum chloride - PAC as coagulant. For this, the flocculation in calcium carbonate - FCCa method with and without immunomagnetic separation - IMS was used for quantification of organisms. The results showed that the stages of coagulation, flocculation and flotation (Step 1) removed 1,55 log Giardia spp. and 1,21 log Cryptosporidium spp. oocysts. Only the treatment with filtration (Step 2) removed 1,2 log Giardia spp. and 0,88 log Cryptosporidium spp. oocysts. The combination of treatment (Step 3) was able to remove 2,64 log Giardia spp. and 2,5 log Cryptosporidium spp. oocysts. In quantifying of protozoa, the FCCa method without IMS proved to be more economical and better recovery than with IMS. It also analyzed the influence of the third acid dissociation in the method with IMS and this procedure resulted in significant differences in the results. Even taking into account the potability standards, the treatment studied didnt completely remove protozoa, this fact demonstrates the need for preservation of water sources, treatment of sewage and final disinfection to maximize the barriers to reduce the microbiological risk present in drinking water.

Orientador: Romeu Cantusio Neto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-09-28T14:16:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pinto_DiegodeOliveira_M.pdf: 2983083 bytes, checksum: 203eb1379711790b56fd1c53f7740c0c (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Os protozoários patogênicos Giardia spp. e Cryptosporidium spp. estão entre os principais contaminantes associados à veiculação hídrica e seu monitoramento em águas de abastecimento público é determinado pela Portaria n. 2.914/2011, do Ministério da Saúde do Brasil. Este trabalho foi dividido em duas partes. Na primeira, foi realizado um estudo da aplicabilidade do Método 1623 utilizando Filta-Max® (FMx) e Método de Filtração em Membranas (FM). Cistos de Giardia spp. e oocistos de Cryptosporidium spp. foram inoculados artificialmente em amostras de água bruta superficial proveniente do rio Atibaia, coletadas na cidade de Campinas/SP, Brasil, e agrupadas de acordo com faixas de turbidez. Cistos de Giardia spp. naturalmente presentes nas amostras foram detectados em todas as faixas de turbidez por ambos os métodos. O método de FM atendeu aos critérios de controle de qualidade analítica da USEPA em todas as faixas de turbidez. Não houve diferença estatística significativa entre os métodos de FMx e FM. Na segunda parte deste trabalho, foi feito um estudo da etapa de purificação por Separação Imunomagnética (IMS) no qual foi avaliado o desempenho dos procedimentos de dissociação: ácida e térmica; bem como investigado possíveis causas de perdas dos organismos-alvo durante execução desta etapa. A dissociação ácida apresentou maior média de eficiência de recuperação e precisão do que a dissociação térmica para cistos de Giardia spp.. Para oocistos de Cryptosporidium spp. não houve diferença estatística significativa. Após o procedimento de dissociação, tanto ácida quanto térmica, haviam cistos e oocistos aderidos às beads (micro-esferas magnéticas) que seriam descartadas de acordo com o protocolo padrão da IMS / Abstract: The pathogenic protozoa Giardia spp. and Cryptosporidium spp. are some the major waterborne contaminants and their monitoring in water supply is determined in Decree no. 2.914/2011, the Brazil¿s Ministry of Health. This study was divided in two parts. In the first, a study was conducted to evaluate the applicability of two methods for concentration of pathogenic protozoa Giardia spp. and Cryptosporidium spp. in water samples: Method 1623 using Filta-Max® (FMX) and Membrane Filtration (MF) Method. Giardia spp cysts and Cryptosporidium spp oocysts were artificially inoculated in samples of raw surface water from the Atibaia River, collected in Campinas/SP, Brazil, and grouped according to ranges of turbidity. Giardia spp. cysts naturally present in the samples were detected in all ranges of turbidity by both methods. The method of FM met the criteria for analytical quality control of USEPA in all ranges of turbidity. There was no statistically significant difference between the methods of FM and FMX. In the second part of this work, a study was made of the purification step by immunomagnetic separation (IMS) in which was evaluate the performance of the dissociation procedures: acid and heat, as well as investigating possible causes loss of target organisms during execution of this step. The acid dissociation showed higher mean recovery efficiency and accuracy than heat dissociation for Giardia spp.. For Cryptosporidium spp. difference was not statistically significant. After the dissociation procedure, both acid and heat, cysts and oocysts were still adhered to the beads (magnetic microspheres) that would be discarded, according to the standard protocol of IMS / Mestrado / Relações Antrópicas, Meio Ambiente e Parasitologia / Mestre em Biologia Animal

Esta pesquisa teve como objetivo analisar a remoção de cistos de Giardia spp. e oocistos de Cryptosporidium spp. em água de abastecimento utilizando a tecnologia de tratamento de ciclo completo com flotação (coagulação, floculação, flotação e filtração) em escala de bancada e utilizando cloreto de polialumínio – PAC como coagulante. Para isso, o método de floculação em carbonato de cálcio – FCCa com e sem a separação imunomagnética – IMS foi utilizado para quantificação dos organismos. Os resultados mostraram que as etapas de coagulação, floculação e flotação (Fase1) removeram 1,55 log de cistos de Giardia spp. e 1,21 log de oocistos de Cryptosporidium spp. O tratamento apenas com filtração (Fase 2) removeu 1,2 log de cistos de Giardia spp. e 0,88 log de oocistos de Cryptosporidium spp. A combinação dos tratamentos (Fase 3) foi capaz de remover 2,64 log de cistos de Giardia spp. e 2,5 log de oocistos de Cryptosporidium spp. Na quantificação de protozoários, o método de FCCa sem IMS demonstrou ser mais econômico e com melhor recuperação do que com IMS. Também foi analisada a influência da terceira dissociação ácida no método com IMS e tal procedimento acarretou em diferenças significativas nos resultados. Mesmo atendendo aos padrões de potabilidade, o tratamento estudado não removeu completamente os protozoários, este fato demonstra a necessidade da preservação dos mananciais, do tratamento dos esgotos e da desinfecção final para maximizar as barreiras que permitam reduzir o risco microbiológico presente na água de consumo. / This research aimed to analyze the removal of Giardia spp. cysts and Cryptosporidium spp. oocysts in drinking water using the full cycle of treatment with flotation technology (coagulation, flocculation, flotation and filtration) at bench scale and using polyaluminum chloride - PAC as coagulant. For this, the flocculation in calcium carbonate - FCCa method with and without immunomagnetic separation - IMS was used for quantification of organisms. The results showed that the stages of coagulation, flocculation and flotation (Step 1) removed 1,55 log Giardia spp. and 1,21 log Cryptosporidium spp. oocysts. Only the treatment with filtration (Step 2) removed 1,2 log Giardia spp. and 0,88 log Cryptosporidium spp. oocysts. The combination of treatment (Step 3) was able to remove 2,64 log Giardia spp. and 2,5 log Cryptosporidium spp. oocysts. In quantifying of protozoa, the FCCa method without IMS proved to be more economical and better recovery than with IMS. It also analyzed the influence of the third acid dissociation in the method with IMS and this procedure resulted in significant differences in the results. Even taking into account the potability standards, the treatment studied didnt completely remove protozoa, this fact demonstrates the need for preservation of water sources, treatment of sewage and final disinfection to maximize the barriers to reduce the microbiological risk present in drinking water.