Orientador: Regina Maura Bueno Franco / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T22:08:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CantusioNeto_Romeu_D.pdf: 1288923 bytes, checksum: 6747f006dc8fe56fe9a7284e80649fe0 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A veiculação hídrica tem sido considerada uma das principais vias de transmissão de giardiose e criptosporidiose sendo implicada na ocorrência de vários surtos de gastroenterites, em vários países nos últimos anos. Diante deste panorama, no Brasil foi emitida Portaria 518/04 (Ministério da Saúde), que recomenda a pesquisa destes protozoários em água de consumo humano. Por este motivo, o objetivo deste estudo foi realizar um estudo comparativo entre as metodologias de concentração já existentes: Filtração em Membrana (FM) e Floculação em Carbonato de Cálcio (FCC), tecendo uma análise crítica das mesmas e verificando-se a sua aplicabilidade em amostras naturais de água superficial do Rio Atibaia. Este estudo foi conduzido em duas etapas: na primeira, foram realizados 52 experimentos, visando analisar o desempenho dos métodos propostos determinando-se a precisão inicial em amostras de água reagente inoculadas com suspensões comerciais de cistos e oocistos Easy Seed® (Biotecnology Frontiers, Austrália), aplicando-se ou não a etapa de purificação mediante o uso da separação imunomagnética. Quando foram avaliadas amostras do rio Atibaia, a suspensão comercial de cistos e oocistos utilizada para a contaminação artificial foi Color Seed® (Biotecnology Frontiers, Austrália). Em uma segunda etapa, um total de 36 experimentos foi conduzido com o objetivo de se avaliar o comportamento dos mesmos métodos frente a fatores interferentes, característicos da matriz de água bruta superficial, entre eles a turbidez. Nos experimentos controle com amostra de água reagente, a metodologia de FM recuperou mais organismos (21,5 % dos oocistos e 25,0 % dos cistos), quando comparada com a metodologia de FCC (5,3 % e 5,8 % dos oocistos e cistos, respectivamente). A inclusão da etapa de purificação por separação imunomagnética (IMS) não resultou num aumento na recuperação de cistos e oocistos nestas metodologias (FM e FCC). Nos experimentos com amostras de água do Rio Atibaia, de uma maneira geral, a metodologia de FCC apresentou melhor desempenho de recuperação dos organismos e quando incluída a etapa de IMS, uma melhora ocorreu apenas para a recuperação de cistos de Giardia spp. Quando avaliada amostras de água bruta superficial do rio Atibaia em condições de turbidez até 50 NTU a etapa de purificação por IMS acarretou uma maior eficiência de recuperação de cistos de Giardia spp. e oocistos de Cryptosporidium spp., para as duas metodologias de concentração. Quando a turbidez das amostras foi superior a 50 NTU, uma melhora da recuperação ocorreu apenas para Cryptosporidium spp, utilizando-se o método de FM. Assim, ambas as metodologias avaliadas, mostraram-se eficientes para serem aplicadas em um monitoramento desses protozoários em amostras hídricas, mesmo em situações de alta turbidez. A etapa de purificação pela separação imunomagnética nem sempre apresentou um ganho na recuperação dos organismos e, as variações nos valores de recuperação para ambos os protozoários, são inerentes aos protocolos utilizados e também associados à matriz analisada. A FM é indicada pela praticidade, tempo e resultados, podendo auxiliar para o conhecimento da ocorrência destes patógenos e assim, minimizar a possibilidade de sua transmissão mediante veiculação hídrica / Abstract: The waterborne transmission route of giardiosis and criptosporidiosis has been considered the major one, causing the occurrence of several gastroenteritis outbreaks in several countries in the last years. Looking to this panorama, was published in Brazil the Governmental Decree 518/04 (Health Department), that recommends the research of these protozoa in water samples. For this reason, the goal of this study was to accomplish a comparative study between Membrane Filtration (MF) and Calcium Carbonate Flocculation (FCC) concentration methodologies, doing a critical analysis of both and verifying its apply in natural samples of Atibaia River superficial water. Two stages took place: in the first one, 52 experiments were carried out, aiming to analyze the performance of the methods proposed, determining the initial precision in samples of reagent water inoculated with commercial suspensions of cysts and oocysts (Easy Seed®-Biotecnology Frontiers Australia), applying or not the purification step by Immunomagnetic Separation. When natural water samples were evaluated, the commercial suspension of cysts and oocysts utilized for the artificial contamination was (Color Seed®-Biotecnology Frontiers Australia). In a second step, 36 experiments were carried out aiming to evaluate the behavior of the methods facing interferential factors, peculiar of the superficial raw water matrix, as turbidity. In the trial control with reagent water sample, the FM methodology recovered more organisms (21.5% of the oocysts and 25.0% of the cysts), in comparison to the FCC methodology (5.3% of the oocysts and 5.8% of the cysts). The purification step by Immunomagnetic Separation (IMS) did not show an improvement in the recovery of cysts and oocysts in these methodologies (FM and FCC). In the experiments with natural water performance of the organisms and when IMS step was included, an improvement occurred just for the recovery of Giardia spp. cysts. When superficial raw water of Atibaia river samples with turbidity up to 50 NTU were evaluated, the purification step by IMS showed higher efficiency in the recovery of Giardia spp. cysts and Cryptosporidium spp. oocysts, for both concentration methodologies. When the turbidity of the sample was over 50 NTU, a recovery improvement occurred just for Cryptosporidium spp, using the FM method. Thus, both methodologies showed efficiency in monitoring these protozoa in water samples, even in situations of high turbidity. The purification step by Immunomagnetic Separation not always showed gain in the recovery of the organisms and the variations in the values of recovery for both protozoa are inherent to the protocols that were used and also associated to the analyzed matrix. However, the FM method is indicated for its practicability, time and results, being able to help the knowledge of the occurrence of these pathogens and minimize the possibility of its transmission by waterborne route / Doutorado / Parasitologia / Doutor em Parasitologia

Orientador: Romeu Cantusio Neto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-09-28T14:16:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pinto_DiegodeOliveira_M.pdf: 2983083 bytes, checksum: 203eb1379711790b56fd1c53f7740c0c (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Os protozoários patogênicos Giardia spp. e Cryptosporidium spp. estão entre os principais contaminantes associados à veiculação hídrica e seu monitoramento em águas de abastecimento público é determinado pela Portaria n. 2.914/2011, do Ministério da Saúde do Brasil. Este trabalho foi dividido em duas partes. Na primeira, foi realizado um estudo da aplicabilidade do Método 1623 utilizando Filta-Max® (FMx) e Método de Filtração em Membranas (FM). Cistos de Giardia spp. e oocistos de Cryptosporidium spp. foram inoculados artificialmente em amostras de água bruta superficial proveniente do rio Atibaia, coletadas na cidade de Campinas/SP, Brasil, e agrupadas de acordo com faixas de turbidez. Cistos de Giardia spp. naturalmente presentes nas amostras foram detectados em todas as faixas de turbidez por ambos os métodos. O método de FM atendeu aos critérios de controle de qualidade analítica da USEPA em todas as faixas de turbidez. Não houve diferença estatística significativa entre os métodos de FMx e FM. Na segunda parte deste trabalho, foi feito um estudo da etapa de purificação por Separação Imunomagnética (IMS) no qual foi avaliado o desempenho dos procedimentos de dissociação: ácida e térmica; bem como investigado possíveis causas de perdas dos organismos-alvo durante execução desta etapa. A dissociação ácida apresentou maior média de eficiência de recuperação e precisão do que a dissociação térmica para cistos de Giardia spp.. Para oocistos de Cryptosporidium spp. não houve diferença estatística significativa. Após o procedimento de dissociação, tanto ácida quanto térmica, haviam cistos e oocistos aderidos às beads (micro-esferas magnéticas) que seriam descartadas de acordo com o protocolo padrão da IMS / Abstract: The pathogenic protozoa Giardia spp. and Cryptosporidium spp. are some the major waterborne contaminants and their monitoring in water supply is determined in Decree no. 2.914/2011, the Brazil¿s Ministry of Health. This study was divided in two parts. In the first, a study was conducted to evaluate the applicability of two methods for concentration of pathogenic protozoa Giardia spp. and Cryptosporidium spp. in water samples: Method 1623 using Filta-Max® (FMX) and Membrane Filtration (MF) Method. Giardia spp cysts and Cryptosporidium spp oocysts were artificially inoculated in samples of raw surface water from the Atibaia River, collected in Campinas/SP, Brazil, and grouped according to ranges of turbidity. Giardia spp. cysts naturally present in the samples were detected in all ranges of turbidity by both methods. The method of FM met the criteria for analytical quality control of USEPA in all ranges of turbidity. There was no statistically significant difference between the methods of FM and FMX. In the second part of this work, a study was made of the purification step by immunomagnetic separation (IMS) in which was evaluate the performance of the dissociation procedures: acid and heat, as well as investigating possible causes loss of target organisms during execution of this step. The acid dissociation showed higher mean recovery efficiency and accuracy than heat dissociation for Giardia spp.. For Cryptosporidium spp. difference was not statistically significant. After the dissociation procedure, both acid and heat, cysts and oocysts were still adhered to the beads (magnetic microspheres) that would be discarded, according to the standard protocol of IMS / Mestrado / Relações Antrópicas, Meio Ambiente e Parasitologia / Mestre em Biologia Animal