O gênero Sarcocystis é constituído por várias espécies que se diferenciam pelas características morfológicas, biológicas e moleculares. Foram relatadas mais de 196 espécies encontradas em mamíferos, aves e répteis e somente 26 dessas espécies possuem o ciclo completo conhecido. Toxoplasma gondii é um parasito intracelular obrigatório, com distribuição geográfica cosmopolita, capaz de infectar uma ampla variedade de mamíferos e aves, inclusive o homem, caracterizando seu potencial zoonótico. Nas últimas décadas, a quantidade de pinguins vindos da Patagônia argentina e chilena, região de nascimento dessas aves, para o litoral brasileiro, onde muitos encalham e são resgatados, tem aumentado significativamente. Pouco se sabe sobre as doenças causadas por protozoários nessas aves. O presente estudo teve como objetivo conhecer aspectos epidemiológicos da infecção por coccídios da família Sarcocystidae em pinguins-de-magalhães (Spheniscus magellanicus), através de análises moleculares e sorológicas. Foram realizadas duas campanhas, uma em 2014 e outra em 2015, com a finalidade de obter amostras de sangue e tecidos dos pinguins que vieram a óbito durante reabilitação no Instituto de Pesquisa e Reabilitação de Animais Marinhos (IPRAM) localizada em Cariacica, Espírito Santo. Foram colhidas 514 amostras de tecidos (músculo=342, coração=86, cérebro=86) de 310 indivíduos. Dos tecidos de 54 pinguins foi realizado o bioensaio em camundongos para o isolamento de T. gondii, mas nenhum isolado foi obtido. Amostras de 310 indivíduos tiveram o DNA extraído para a pesquisa de coccídios da família Sarcocystidae utilizando-se os marcadores 18S rDNA, espaçador interno transcrito 1 (ITS1), codificador de proteínas de superfície (SAG)2, SAG3 e SAG4, subunidade beta da RNA polimerase (RPOB) e citocromo B (CytB). Destas, 16 (3.0%) amostras de músculo peitoral foram positivas para o gênero Sarcocystis spp., quando analisadas pelo marcador 18S, e todas com resultados idênticos. Com o ITS1, RPOB e Ctv. foram confirmadas as espécies de Sarcocystis em 12 amostras, todas idênticas a S. falcatula-like. Com os marcadores SAGs foi possível observar que as sequências não tinham variabilidade genética. Das 145 amostras de soro avaliadas para a presença de anticorpos anti-T. gondii, pelo Teste de Aglutinação Modificado (MAT ≥20), 18 aves foram positivas com títulos de: 20 (7 aves), 40 (9 aves) e 80 (2 aves). Este é o primeiro relato de S. falcatula-like e de anticorpos anti - T. gondii em pinguins-de-magalhães de vida livre. / The genus Sarcocystis is composed of several species that are differentiated by the morphological, biological and molecular characteristics. More than 196 species found in mammals, birds and reptiles have been reported, and only 26 of these species have the complete known cycle. Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite with cosmopolitan geographic distribution, capable of infecting a wide variety of mammals and birds, including man, characterizing its zoonotic potential. In recent decades, the number of penguins that have come from Argentine and Chilean Patagonia, the region of birth of these birds, to the Brazilian coast, where many of them are stranded and rescued, has increased significantly. Little is known about the diseases caused by protozoa in these birds. The present study had as objective to study epidemiological aspects of coccidia infection of the family Sarcocystidae in Magellanic Penguins (Spheniscus magellanicus), through molecular and serological analyzes. Two campaigns were carried out, one in 2014 and another in 2015, in order to obtain blood and tissue samples from penguins who died during rehabilitation at the Institute of Research and Rehabilitation of Marine Animals (IPRAM) in the municipality of Cariacica, Espírito Santo. Tissue samples (total = 514: muscle = 342, heart = 86, brain = 86) were collected from 310 birds. From the tissues of 54 penguins the mouse bioassay was performed for the isolation of T. gondii, but no isolates were obtained. Samples of 310 individuals had DNA extracted for coccidia from the Sarcocystidae family using the 18S rDNA, Transcribed internal spacer 1(ITS1), surface protein encoder (SAG)2, SAG3, SAG4, beta subunit of RNA polymerase (RPOB) and citocrome B (CytB) markers. Of these, 16 (3.0%) samples, of pectoral muscle, were positive and all were identical to Sarcocystis spp. when analyzed by the 18S marker. With ITS1, RPOB and CytB the Sarcocystis species were confirmed in 12 samples, all identical to S. falcatula-like. With the SAGs it was possible to observe that the sequences had no genetic variability. Of the 145 serum samples evaluated for the presence of anti-T. gondii antibodies by Modified Agglutination Test (MAT ≥20), 18 were positive with titers of: 20 (7 birds), 40 (9 birds) and 80 (2 birds). This is the first report of S. falcatula-like and the presence of antibodies to T. gondii in free-living magellanic penguins.

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Dissertation (PhD)--University of Stellenbosch, 2004 / ENGLISH ABSTRACT: Newcastle disease (NO) and mycoplasma infections in ostriches have considerable economic implications for the South African ostrich industry in that NO is a limiting factor in the export of ostrich products to the European Union and mycoplasma infections cause stock losses, reduced production, reduced hatchability and downgrading of carcasses. In the first section of this dissertation, the role of passively acquired and mucosal immunity in protection of ostrich chicks against Newcastle disease virus (NOV) was investigated. Ostrich hen serum IgG and yolk IgY were isolated and characterized, and the transfer of maternal anti-NOV antibodies to the egg yolk was determined using an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results indicated that anti-NOV antibodies were successfully transferred from the ostrich hen to the egg yolk. In addition, ostrich IgA was isolated, characterized and rabbit anti-ostrich IgA antibodies produced and used for measuring mucosal anti- NOV IgA antibodies produced in response to mucosal vaccination. Results indicated that the live La Sota vaccine stimulates IgA production and thus mucosal immunity in ostrich chicks. In the second section of this dissertation, ostrich mycoplasmas were isolated and identified using 16S rRNA gene sequencing. These sequences indicated that ostriches carry three unique mycoplasmas, which are phylogenetically quite divergent. The 16S rRNA gene sequences of the ostrich mycoplasmas were subsequently used for the development of specific primers for the detection and diagnosis of mycoplasma infections in ostriches by PCR. The last section of this dissertation focuses on avian malaria in African penguins and the management of this disease during rehabilitation. The Foundation for the Conservation of Coastal Birds (SANCCOB) is a seabird rescue and rehabilitation centre, which is largely dedicated to the rehabilitation of diseased, injured and oiled penguins. Significant mortalities due to avian malaria occur at this facility. The aim of this study was the development of an ELISA for the purpose of assessing the natural levels of anti-Plasmodium antibodies in African penguins on entry into the SANCCOB facility and during rehabilitation. Results indicated significant increases in anti- Plasmodium antibody levels after entry, which was not influenced by oiling. Infection with malaria and not parasite recrudescence was viewed to be the cause of this increase, indicating a possible role of the SANCCOB facility in exposing penguins to avian malaria. / AFRIKAANSE OPSOMMING: Newcastlesiekte (NS) en mikoplasmainfeksies in voltruise het geweldige ekonomiese implikasies vir die Suid-Afrikaanse volstruisbedryf. Die rede hiervoor is dat NS 'n beperkende faktor in die uitvoer van volstruisprodukte na die Europese Unie is, en mikoplasmainfeksies tot kudde verliese, verlaagde produksie en uitbroei asook lae gradering van karkasse lei. In die eerste gedeelte van hierdie proefskrif is die rol van passiewe- en mukosale-immuniteit in die beskerming van volstruiskuikens teen NS virus (NSV) ondersoek. Volstruishenserum IgG en eier IgY is geïsoleer en gekarakteriseer en die oordrag van maternale anti-NSV antiliggame na die eier ondersoek met behulp van 'n 'enzyme-linked immunosorbent assay' (ELISA). Resultate het getoon dat anti-NSV antiliggame suksesvol van die hen na die eier oorgedra is. Volstruis IgA is ook geïsoleer, gekarateriseer en konyn anti-volstruis IgA antiliggame geproduseer wat gebruik is vir die bepaling van mukosale anti-NSV IgA antiliggame in reaksie op mukosale immunisering. Resultate het getoon dat lewendige La Sota entstof IgA produksie stimuleer en dus tot mukosale-immuniteit in volstruiskuikens lei. In die tweede gedeelte van hierdie proefskrif is volstruismikoplasmas geïsoleer en geïdentifiseer met behulp van 16S rRNA geenopeenvolgingsbepalings. Hierdie volgordes het getoon dat drie unieke mikoplasmas in volstruise voorkom wat filogeneties verskillend blyk te wees. Die 16S rRNA geenopeenvolgings van die volstruismikoplasmas is gebruik vir die ontwikkeling van spesifieke inleiers vir die PKR identifisering en diagnose van mikoplasmainfeksies in volstruise. Die laaste gedeelte van hierdie proefskrif fokus op voëlmalaria in die Afrika pikkewyn en die bestuur van hierdie siekte gedurende rehabilitasie. Die 'South African Foundation for the Conservation of Coastal Birds' (SANCCOB) is 'n seevoëlreddingsen rehabilitasie-sentrum vir siek, beseerde en ge-oliede pikkewyne. Hierdie sentrum het egter aansienlike vrektes as gevolg van voëlmalaria. In hierdie studie is 'n ELISA ontwikkel vir die bepaling van natuurlike anti-Plasmodium antiliggaamvlakke van pikkewyne by aankoms en tydens rehabilitasie by SANCCOB. Resultate het 'n toename in anti-Plasmodium antiliggaamvlakke getoon na toelating wat nie beïnvloed is deur olie nie. Hierdie toename kan toegeskryf word aan nuwe malariainfeksies en nie 'n heruitbraak van bestaande infeksies nie wat daarop dui dat pikkewyne aan voëlmalaria blootgestel word by die SANCCOB-sentrum.

Bifenilos policlorados (PCBs) e pesticidas organoclorados são compostos que não ocorrem naturalmente no ambiente e não são facilmente degradados química ou microbiologicamente. Seu estudo no ambiente é importante devido à sua persistência, toxicidade, lipossolubilidade e conseqüente biomagnificação. Por isso, representam a maioria dos poluentes orgânicos persistentes (POPs) considerados prioritários pela UNEP (United Nations Environmental Programme) e banidos ou restritos pela Convenção de Estocolmo, de maio de 2001. Tais poluentes podem ser facilmente emitidos para a atmosfera, atingindo áreas remotas como a Antártida, integrando um processo cíclico de contaminação conhecido como destilação global. No presente trabalho otimizou-se uma metodologia analítica capaz de detectá-los em ovos gorados de pingüins e indivíduos de krill coletados na Baía do Almirantado, Ilha Rei Jorge, Antártida. Tal metodologia foi avaliada e enquadrou-se em critérios internacionais de controle de qualidade. Os compostos mais presentes foram, de um modo geral, os PCBs, DDTs e o HCB e a ocorrência pareceu ser espécie-específica dentro do gênero Pygoscelis. Em todos os casos, o teor dos compostos não foi superior ao de aves árticas em nível trófico semelhante. A análise do krill permitiu estimar a biomagnificação dos compostos encontrados nos ovos, cuja única fonte de contaminação é a transferência fêmea-filhote. / Polychlorinated biphenyls (PCBs) and organochlorine pesticides are compounds that do not occur naturally in the environment and are not easily degraded by chemical or microbiological action. Their study in the environment is important due to persistence, toxicity, liposolubility and consequent biomagnification. For these reasons, they represent the majority of the persistent organic pollutants (POPs), considered to have priority by the UNEP (United Nations Environmental Programme) and banished and/or restricted by the Stockholm Convention of May, 2001. Such pollutants can be easily ejected into the atmosphere and reach areas as remote as Antarctica, integrating a cyclical contamination process known as ?global distillation?. In the present work an analytical methodology capable of detecting such compounds in unhatched penguin eggs and whole krill was optimized. The samples were collected in Admiralty Bay, King George Island, Antarctica. This methodology was evaluated and fitted international quality control criteria. The compounds found in higher levels were, in most of the samples, the PCBs, DDTs and HCB and the occurrence seemed to be species-specific for the Pygoscelis genus. In all of the cases, the levels found were not higher than the ones in arctic birds in a similar trophic level.The krill samples analysis made it possible to estimate the biomagnification of the compounds found in eggs, whose only source of contamination is the female-offspring transfer.

Apesar de a monogamia social ser dominante entre as aves, análises genéticas revelaram relações de parentesco inesperadas, evidenciando diferentes estratégias de reprodução, como a paternidade extra-par e o parasitismo de ninho. Espécies de passeriformes estão entre as mais promíscuas, com altas taxas de paternidade extra-par, enquanto em aves marinhas esse comportamento demonstrou ser menos frequente. Pinguins (Família Spheniscidae) compõem um grupo de 18 espécies de aves marinhas pelágicas e que tem em comum a filopatria, fidelidade a um parceiro e intenso cuidado biparental. Portanto, espera-se que apresentem um comportamento estritamente monogâmico e taxas de paternidade extra-par insignificantes. Avaliamos pela primeira vez o sistema reprodutivo dos Pinguins-de-Magalhães através de uma abordagem genética, buscando investigar a existência e frequência de paternidade extra-par e parasitismo de ninho. O parentesco de 88 filhotes de 44 ninhos de uma colônia na Ilha Quiroga (Argentina) foi determinado com base em análises de 9 marcadores microssatélites. Encontramos baixas taxas de parasitismo de ninho (6%), mas altas taxas de paternidade extra-par (31% e 48% dos ninhos com pelo menos 1 filhote extra-par). Entre os dois anos coletados, encontramos uma pequena diferença na incidência de infidelidade (29% em 2010; 32% em 2011), mas não houve relação com as condições climáticas do período de reprodução da espécie. Além disso, apesar da alta taxa de filhotes extra-par, não encontramos diferença significativa na diversidade genética e nem viés da razão sexual secundária. Acreditamos que a alta taxa de paternidade extra-par encontrada possa ter relação com o comportamento reprodutivo em colônia, a densidade populacional, o sincronismo reprodutivo, ou que parte da paternidade que não correspondeu aos pais sociais seja resultado de troca de parceiros antes da definição final dos casais em cada estação reprodutiva. Nosso estudo pode ajudar a melhor entender e caracterizar o sistema reprodutivo dos Pinguins-de-Magalhães e indica que a espécie é socialmente, mas não geneticamente monogâmica. / Despite the social monogamy being dominant among birds, genetic analysis revealed unexpected kinship relations, showing different reproductive strategies, such as extra-pair paternity and brood parasitism. Passerine species are among the most promiscuous, with high extra-pair paternity rates, while in seabirds this behavior is typically rather less frequent. Penguins (Spheniscidae Family) are a group of 18 species of pelagic seabirds that have in common philopatric behavior, faithfulness to one partner and intense biparental care. Therefore, they are expected to have a strictly monogamous behavior and insignificant rates of extra-pair paternity. For the first time, we evaluated the reproductive system of Magellanic Penguins (Spheniscus magellanicus) through genetic analysis in order to investigate the existence and frequency of extra-pair paternity and brood parasitism. The kinship of 88 offspring of 44 nests from a colony on Quiroga Island (Argentina) was determined based on the analyses of 9 microsatellite markers. We found low rates of brood parasitism (6%), but high extra-pair paternity rates (31% and 48% of nests with at least one extra-pair offspring). Between the two years sampled, we found a small difference in the incidence of infidelity (29% in 2010; 32% in 2011), but no connection with the climatic conditions of each breeding season. In addition, despite the high rate of extra-pair offspring, we found no significant difference in the genetic diversity and no bias in the secondary sex ratio. We believe that the high rate of extra-pair paternity found in our study may be a result of their reproductive behavior of nesting in colonies, breeding synchrony, density, or that part of the mismatching paternity is due mate switching. Our study may help to better understand and characterize the reproductive system of Magellanic penguins and indicates that this species is socially but not sexually monogamous.

O Platelia® Aspergillus EIA é um teste de ELISA sanduíche para diagnóstico precoce de aspergilose em pacientes neutropênicos que se baseia na detecção de um antígeno (galactomanana) da parede celular de Aspergillus spp. O trabalho objetivou avaliar a eficácia deste teste em outros hospedeiros suscetíveis à aspergilose e ainda, avaliar a interferência de potenciais falso-positivos no Platelia® Aspergillus EIA, como outras micoses sistêmicas e um antimicrobiano produzido a partir de fungos (piperacilina-tazobactam). Quatro experimentos foram realizados para contemplar os objetivos propostos. Amostras de lavado broncoalveolar de 60 pacientes transplantados de pulmão provenientes da Santa-Casa Complexo Hospitalar de Porto Alegre foram colhidas durante um período de aproximadamente 2 anos e testadas para detecção de galactomanana. Os pacientes foram classificados em aspergilose comprovada, provável e possível, colonização ou exame de vigilância de acordo com critérios do EORTC. Utilizando os casos comprovados (5) e prováveis (6) como positivos, foi calculada a curva ROC que demonstrou valores de sensibilidade de 90,9% e especificidade de 90,6% em um ponto de corte de 1,5. A eficácia do Platelia® Aspergillus EIA foi avaliada também em pingüins em cativeiro. Soros de 35 animais foram incluídos no estudo, 9 com aspergilose, 3 com malária, 2 com caquexia e 21 saudáveis. Os soros foram testados por imunodifusão dupla e ELISA sanduíche, resultando em valores de sensibilidade de 33% e 100% e especificidade de 96% e 0, respectivamente. A reação cruzada de outras micoses sistêmicas no Platelia® Aspergillus EIA foi avaliada a partir de 120 amostras de soro de pacientes com paracoccidioidomicose, histoplasmose, criptococose por Cryptococcus neoformans e criptococose por C. gattii. Todas as micoses foram responsáveis por resultados falso-positivos no ELISA sanduíche, sendo de 50%, 67%, 66% e 36,6% a taxa de positividade de cada micose, respectivamente. Em adição, 5 lotes de piperacilina-tazobactam foram testados em concentração de uso clínico (45mg/ml) para avaliação de interferência no Platelia® Aspergillus EIA. Destas, apenas uma resultou em valores maiores do que o ponto de corte (0,5), sendo submetida a sucessivas diluições até mimetizar concentrações plasmáticas do fármaco alcançáveis no soro humano, as quais resultaram em valores menores que 0,5, sendo consideradas negativas. Concluindo, utilizando um ponto de corte maior do que indicado pelo fabricante para uso em neutropênicos, a eficácia do teste foi comprovada para utilização em amostras de lavado broncoalveolar de pacientes transplantados de pulmão. Por outro lado, no hospedeiro animal testado, pingüins, o teste apresentou especificidade nula, não possuindo aplicabilidade como ferramenta diagnóstica para aspergilose neste grupo. Quanto aos fatores de interferência no Platelia® Aspergillus EIA avaliados, a alta taxa de resultados falso-positivos referentes à infecção por outras micoses sistêmicas reflete na necessidade de interpretar um teste positivo dentro do contexto epidemiológico do paciente. Por outro lado, as piperacilinas-tazobactam disponíveis no mercado brasileiro não interferiram no resultado do Platelia® Aspergillus EIA. No entanto como a variabilidade de galactomanana existe entre lotes, ainda é aconselhável que as amostras para realização do ELISA sanduíche sejam colhidas antes da próxima administração do fármaco. / Platelia® Aspergillus EIA is a sandwich ELISA to the diagnostic of aspergillosis in neutropenic patients. It detects an antigen (galactomannan) from Aspergillus cell wall. Here it was evaluated the performance of this test in other susceptible hosts and the interference of potentials false-positives factors in Platelia® Aspergillus EIA. Systemic mycosis and an antimicrobial produced from molds (piperacillin-tazobactam) were tested. Four experiments were executed to study conduce. Bronchoalveolar samples from 60 lung transplant recipients from Santa Casa-Complexo Hospitalar de Porto Alegre were collected during almost two years and tested for galactomannan detection. Patients were classified in proven, probable or possible aspergillosis according to EORTC criteria, or in colonization or surveillance. Considering proven (5) and probable (6) as true positive cases, ROC curve was calculated and showed 90.9% of sensitivity and 90.6% of specificity with 1.5 as optimal cutoff. Platelia® Aspergillus EIA efficacy was also tested in captive penguins. Sera from 35 animals were included in the study, 9 with aspergillosis, 3 with malaria, 2 with cachexia and 21 healthy. Samples were tested by double immunodiffusion and sandwich ELISA, resulting in sensitivity values of 33% and 100% and specificity of 96% and 0, respectively. Cross reaction in Platelia® Aspergillus EIA was evaluated with 120 serum samples of patients with paracocciddioidomicosis, histoplasmosis, criptococosis due to Cryptococcus neoformans and criptococosis due to C. gattii. False-positive results were observed in all mycosis, with rates of 50%, 67%, 66% and 36,6%, respectively. In addition, 5 piperacillin-tazobactam batches were tested, in a concentration of clinical use (45mg/ml), to evaluate it interference in Platelia® Aspergillus EIA. Those, only one showed positive value, and had been retest after serial dilutions until plasmatic concentration, resulting in value lower than 0.5, negative. In conclusion, with a higher cut-off than the indicated from the manufacturer, the efficacy of bronchoalveolar samples tested in Platelia® Aspergillus EIA for the diagnostic of aspergillosis in lung transplant recipients was proved. Controversially, in penguins, the test specificity was zero, showing non applicability as a diagnostic method for aspergillosis in this group of risk. Interference in Platelia® Aspergillus EIA due to other systemic mycoses shows the necessity to interpret a positive result after the evaluation of patient epidemiologic context. Finally, piperacillin-tazobactam available in the Brazilian market did not correspond to false-positive results in Platelia® Aspergillus EIA. However, given that variability occurs between distinct batches, still is indicating to collect samples for galactomannan detection before the next administration of the drug.

Salmonella is one of the most important enteropathogenic bacteria. It is responsible for about 5000 reported cases of human gastroenteritis each year in Sweden. Salmonellosis is a zoonotic disease, and the bacterium has the ability to infect a variety of both domestic and wild animal species. In studies of Swedish wild bird populations, we found that Black-headed gull may be the main reservoir for Salmonella in birds, and that Salmonella infection is expressed as carriage with no obvious disease manifestations. Black-headed gull is a migratory bird and can transport strains of Salmonella with virulence traits like antibiotic resistance, from sources outside Sweden. Genetic molecular methods, PFGE and IS200, also demonstrate that Black-headed gull play a role in the transmission chain of Salmonella in Sweden. In a study of the Swedish Peregrine Falcon population, Salmonella amager and Campylobacter jejuni were found. There were indications, based on serotyping of Salmonella and genetical typing by PFGE of Campylobacter that these isolates were transmitsted to the falcons from a human or domestic animal source. This bird of prey has sparse contact with humans but may be infected by Salmonella of human origin by feeding on other birds, like gull. Salmonella was found in penguins, albatrosses and mainly in seals in a study in Antarctica. Several features of the Salmonella serotypes found indicate a human source for Salmonella infection in these animals, and also a spread of Salmonella within and between animal species in Antarctica. / <p>Diss. (sammanfattning) Umeå : Umeå universitet, 2002</p> / digitalisering@umu

O Platelia® Aspergillus EIA é um teste de ELISA sanduíche para diagnóstico precoce de aspergilose em pacientes neutropênicos que se baseia na detecção de um antígeno (galactomanana) da parede celular de Aspergillus spp. O trabalho objetivou avaliar a eficácia deste teste em outros hospedeiros suscetíveis à aspergilose e ainda, avaliar a interferência de potenciais falso-positivos no Platelia® Aspergillus EIA, como outras micoses sistêmicas e um antimicrobiano produzido a partir de fungos (piperacilina-tazobactam). Quatro experimentos foram realizados para contemplar os objetivos propostos. Amostras de lavado broncoalveolar de 60 pacientes transplantados de pulmão provenientes da Santa-Casa Complexo Hospitalar de Porto Alegre foram colhidas durante um período de aproximadamente 2 anos e testadas para detecção de galactomanana. Os pacientes foram classificados em aspergilose comprovada, provável e possível, colonização ou exame de vigilância de acordo com critérios do EORTC. Utilizando os casos comprovados (5) e prováveis (6) como positivos, foi calculada a curva ROC que demonstrou valores de sensibilidade de 90,9% e especificidade de 90,6% em um ponto de corte de 1,5. A eficácia do Platelia® Aspergillus EIA foi avaliada também em pingüins em cativeiro. Soros de 35 animais foram incluídos no estudo, 9 com aspergilose, 3 com malária, 2 com caquexia e 21 saudáveis. Os soros foram testados por imunodifusão dupla e ELISA sanduíche, resultando em valores de sensibilidade de 33% e 100% e especificidade de 96% e 0, respectivamente. A reação cruzada de outras micoses sistêmicas no Platelia® Aspergillus EIA foi avaliada a partir de 120 amostras de soro de pacientes com paracoccidioidomicose, histoplasmose, criptococose por Cryptococcus neoformans e criptococose por C. gattii. Todas as micoses foram responsáveis por resultados falso-positivos no ELISA sanduíche, sendo de 50%, 67%, 66% e 36,6% a taxa de positividade de cada micose, respectivamente. Em adição, 5 lotes de piperacilina-tazobactam foram testados em concentração de uso clínico (45mg/ml) para avaliação de interferência no Platelia® Aspergillus EIA. Destas, apenas uma resultou em valores maiores do que o ponto de corte (0,5), sendo submetida a sucessivas diluições até mimetizar concentrações plasmáticas do fármaco alcançáveis no soro humano, as quais resultaram em valores menores que 0,5, sendo consideradas negativas. Concluindo, utilizando um ponto de corte maior do que indicado pelo fabricante para uso em neutropênicos, a eficácia do teste foi comprovada para utilização em amostras de lavado broncoalveolar de pacientes transplantados de pulmão. Por outro lado, no hospedeiro animal testado, pingüins, o teste apresentou especificidade nula, não possuindo aplicabilidade como ferramenta diagnóstica para aspergilose neste grupo. Quanto aos fatores de interferência no Platelia® Aspergillus EIA avaliados, a alta taxa de resultados falso-positivos referentes à infecção por outras micoses sistêmicas reflete na necessidade de interpretar um teste positivo dentro do contexto epidemiológico do paciente. Por outro lado, as piperacilinas-tazobactam disponíveis no mercado brasileiro não interferiram no resultado do Platelia® Aspergillus EIA. No entanto como a variabilidade de galactomanana existe entre lotes, ainda é aconselhável que as amostras para realização do ELISA sanduíche sejam colhidas antes da próxima administração do fármaco. / Platelia® Aspergillus EIA is a sandwich ELISA to the diagnostic of aspergillosis in neutropenic patients. It detects an antigen (galactomannan) from Aspergillus cell wall. Here it was evaluated the performance of this test in other susceptible hosts and the interference of potentials false-positives factors in Platelia® Aspergillus EIA. Systemic mycosis and an antimicrobial produced from molds (piperacillin-tazobactam) were tested. Four experiments were executed to study conduce. Bronchoalveolar samples from 60 lung transplant recipients from Santa Casa-Complexo Hospitalar de Porto Alegre were collected during almost two years and tested for galactomannan detection. Patients were classified in proven, probable or possible aspergillosis according to EORTC criteria, or in colonization or surveillance. Considering proven (5) and probable (6) as true positive cases, ROC curve was calculated and showed 90.9% of sensitivity and 90.6% of specificity with 1.5 as optimal cutoff. Platelia® Aspergillus EIA efficacy was also tested in captive penguins. Sera from 35 animals were included in the study, 9 with aspergillosis, 3 with malaria, 2 with cachexia and 21 healthy. Samples were tested by double immunodiffusion and sandwich ELISA, resulting in sensitivity values of 33% and 100% and specificity of 96% and 0, respectively. Cross reaction in Platelia® Aspergillus EIA was evaluated with 120 serum samples of patients with paracocciddioidomicosis, histoplasmosis, criptococosis due to Cryptococcus neoformans and criptococosis due to C. gattii. False-positive results were observed in all mycosis, with rates of 50%, 67%, 66% and 36,6%, respectively. In addition, 5 piperacillin-tazobactam batches were tested, in a concentration of clinical use (45mg/ml), to evaluate it interference in Platelia® Aspergillus EIA. Those, only one showed positive value, and had been retest after serial dilutions until plasmatic concentration, resulting in value lower than 0.5, negative. In conclusion, with a higher cut-off than the indicated from the manufacturer, the efficacy of bronchoalveolar samples tested in Platelia® Aspergillus EIA for the diagnostic of aspergillosis in lung transplant recipients was proved. Controversially, in penguins, the test specificity was zero, showing non applicability as a diagnostic method for aspergillosis in this group of risk. Interference in Platelia® Aspergillus EIA due to other systemic mycoses shows the necessity to interpret a positive result after the evaluation of patient epidemiologic context. Finally, piperacillin-tazobactam available in the Brazilian market did not correspond to false-positive results in Platelia® Aspergillus EIA. However, given that variability occurs between distinct batches, still is indicating to collect samples for galactomannan detection before the next administration of the drug.

O Platelia® Aspergillus EIA é um teste de ELISA sanduíche para diagnóstico precoce de aspergilose em pacientes neutropênicos que se baseia na detecção de um antígeno (galactomanana) da parede celular de Aspergillus spp. O trabalho objetivou avaliar a eficácia deste teste em outros hospedeiros suscetíveis à aspergilose e ainda, avaliar a interferência de potenciais falso-positivos no Platelia® Aspergillus EIA, como outras micoses sistêmicas e um antimicrobiano produzido a partir de fungos (piperacilina-tazobactam). Quatro experimentos foram realizados para contemplar os objetivos propostos. Amostras de lavado broncoalveolar de 60 pacientes transplantados de pulmão provenientes da Santa-Casa Complexo Hospitalar de Porto Alegre foram colhidas durante um período de aproximadamente 2 anos e testadas para detecção de galactomanana. Os pacientes foram classificados em aspergilose comprovada, provável e possível, colonização ou exame de vigilância de acordo com critérios do EORTC. Utilizando os casos comprovados (5) e prováveis (6) como positivos, foi calculada a curva ROC que demonstrou valores de sensibilidade de 90,9% e especificidade de 90,6% em um ponto de corte de 1,5. A eficácia do Platelia® Aspergillus EIA foi avaliada também em pingüins em cativeiro. Soros de 35 animais foram incluídos no estudo, 9 com aspergilose, 3 com malária, 2 com caquexia e 21 saudáveis. Os soros foram testados por imunodifusão dupla e ELISA sanduíche, resultando em valores de sensibilidade de 33% e 100% e especificidade de 96% e 0, respectivamente. A reação cruzada de outras micoses sistêmicas no Platelia® Aspergillus EIA foi avaliada a partir de 120 amostras de soro de pacientes com paracoccidioidomicose, histoplasmose, criptococose por Cryptococcus neoformans e criptococose por C. gattii. Todas as micoses foram responsáveis por resultados falso-positivos no ELISA sanduíche, sendo de 50%, 67%, 66% e 36,6% a taxa de positividade de cada micose, respectivamente. Em adição, 5 lotes de piperacilina-tazobactam foram testados em concentração de uso clínico (45mg/ml) para avaliação de interferência no Platelia® Aspergillus EIA. Destas, apenas uma resultou em valores maiores do que o ponto de corte (0,5), sendo submetida a sucessivas diluições até mimetizar concentrações plasmáticas do fármaco alcançáveis no soro humano, as quais resultaram em valores menores que 0,5, sendo consideradas negativas. Concluindo, utilizando um ponto de corte maior do que indicado pelo fabricante para uso em neutropênicos, a eficácia do teste foi comprovada para utilização em amostras de lavado broncoalveolar de pacientes transplantados de pulmão. Por outro lado, no hospedeiro animal testado, pingüins, o teste apresentou especificidade nula, não possuindo aplicabilidade como ferramenta diagnóstica para aspergilose neste grupo. Quanto aos fatores de interferência no Platelia® Aspergillus EIA avaliados, a alta taxa de resultados falso-positivos referentes à infecção por outras micoses sistêmicas reflete na necessidade de interpretar um teste positivo dentro do contexto epidemiológico do paciente. Por outro lado, as piperacilinas-tazobactam disponíveis no mercado brasileiro não interferiram no resultado do Platelia® Aspergillus EIA. No entanto como a variabilidade de galactomanana existe entre lotes, ainda é aconselhável que as amostras para realização do ELISA sanduíche sejam colhidas antes da próxima administração do fármaco. / Platelia® Aspergillus EIA is a sandwich ELISA to the diagnostic of aspergillosis in neutropenic patients. It detects an antigen (galactomannan) from Aspergillus cell wall. Here it was evaluated the performance of this test in other susceptible hosts and the interference of potentials false-positives factors in Platelia® Aspergillus EIA. Systemic mycosis and an antimicrobial produced from molds (piperacillin-tazobactam) were tested. Four experiments were executed to study conduce. Bronchoalveolar samples from 60 lung transplant recipients from Santa Casa-Complexo Hospitalar de Porto Alegre were collected during almost two years and tested for galactomannan detection. Patients were classified in proven, probable or possible aspergillosis according to EORTC criteria, or in colonization or surveillance. Considering proven (5) and probable (6) as true positive cases, ROC curve was calculated and showed 90.9% of sensitivity and 90.6% of specificity with 1.5 as optimal cutoff. Platelia® Aspergillus EIA efficacy was also tested in captive penguins. Sera from 35 animals were included in the study, 9 with aspergillosis, 3 with malaria, 2 with cachexia and 21 healthy. Samples were tested by double immunodiffusion and sandwich ELISA, resulting in sensitivity values of 33% and 100% and specificity of 96% and 0, respectively. Cross reaction in Platelia® Aspergillus EIA was evaluated with 120 serum samples of patients with paracocciddioidomicosis, histoplasmosis, criptococosis due to Cryptococcus neoformans and criptococosis due to C. gattii. False-positive results were observed in all mycosis, with rates of 50%, 67%, 66% and 36,6%, respectively. In addition, 5 piperacillin-tazobactam batches were tested, in a concentration of clinical use (45mg/ml), to evaluate it interference in Platelia® Aspergillus EIA. Those, only one showed positive value, and had been retest after serial dilutions until plasmatic concentration, resulting in value lower than 0.5, negative. In conclusion, with a higher cut-off than the indicated from the manufacturer, the efficacy of bronchoalveolar samples tested in Platelia® Aspergillus EIA for the diagnostic of aspergillosis in lung transplant recipients was proved. Controversially, in penguins, the test specificity was zero, showing non applicability as a diagnostic method for aspergillosis in this group of risk. Interference in Platelia® Aspergillus EIA due to other systemic mycoses shows the necessity to interpret a positive result after the evaluation of patient epidemiologic context. Finally, piperacillin-tazobactam available in the Brazilian market did not correspond to false-positive results in Platelia® Aspergillus EIA. However, given that variability occurs between distinct batches, still is indicating to collect samples for galactomannan detection before the next administration of the drug.

Bifenilos policlorados (PCBs) e pesticidas organoclorados são compostos que não ocorrem naturalmente no ambiente e não são facilmente degradados química ou microbiologicamente. Seu estudo no ambiente é importante devido à sua persistência, toxicidade, lipossolubilidade e conseqüente biomagnificação. Por isso, representam a maioria dos poluentes orgânicos persistentes (POPs) considerados prioritários pela UNEP (United Nations Environmental Programme) e banidos ou restritos pela Convenção de Estocolmo, de maio de 2001. Tais poluentes podem ser facilmente emitidos para a atmosfera, atingindo áreas remotas como a Antártida, integrando um processo cíclico de contaminação conhecido como destilação global. No presente trabalho otimizou-se uma metodologia analítica capaz de detectá-los em ovos gorados de pingüins e indivíduos de krill coletados na Baía do Almirantado, Ilha Rei Jorge, Antártida. Tal metodologia foi avaliada e enquadrou-se em critérios internacionais de controle de qualidade. Os compostos mais presentes foram, de um modo geral, os PCBs, DDTs e o HCB e a ocorrência pareceu ser espécie-específica dentro do gênero Pygoscelis. Em todos os casos, o teor dos compostos não foi superior ao de aves árticas em nível trófico semelhante. A análise do krill permitiu estimar a biomagnificação dos compostos encontrados nos ovos, cuja única fonte de contaminação é a transferência fêmea-filhote. / Polychlorinated biphenyls (PCBs) and organochlorine pesticides are compounds that do not occur naturally in the environment and are not easily degraded by chemical or microbiological action. Their study in the environment is important due to persistence, toxicity, liposolubility and consequent biomagnification. For these reasons, they represent the majority of the persistent organic pollutants (POPs), considered to have priority by the UNEP (United Nations Environmental Programme) and banished and/or restricted by the Stockholm Convention of May, 2001. Such pollutants can be easily ejected into the atmosphere and reach areas as remote as Antarctica, integrating a cyclical contamination process known as ?global distillation?. In the present work an analytical methodology capable of detecting such compounds in unhatched penguin eggs and whole krill was optimized. The samples were collected in Admiralty Bay, King George Island, Antarctica. This methodology was evaluated and fitted international quality control criteria. The compounds found in higher levels were, in most of the samples, the PCBs, DDTs and HCB and the occurrence seemed to be species-specific for the Pygoscelis genus. In all of the cases, the levels found were not higher than the ones in arctic birds in a similar trophic level.The krill samples analysis made it possible to estimate the biomagnification of the compounds found in eggs, whose only source of contamination is the female-offspring transfer.