Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2778_1.pdf: 2467213 bytes, checksum: 266474e44dd114081ad37ccb2d4e5ff1 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Estímulos atuantes durante períodos fetal e neonatal desencadeiam modificações fisiológicas e metabólicas permanentes no indivíduo, fenômeno bastante estudado em Nutrição através de manipulação nutricional. Para pesquisa de alterações biomoleculares, o soro sanguíneo é fonte potencial de biomarcadores protéicos. Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da desnutrição protéica neonatal sobre o perfil proteômico do soro sanguíneo de ratos adultos. Foram utilizados 8 ratos Wistar, machos, adultos, que foram divididos em 2 grupos, de acordo com a dieta disponibilizada do 1º ao 21º dia de vida (período de lactação): grupo nutrido (GN), formado por filhotes cujas mães receberam dieta com 17 % de caseína e grupo desnutrido (GD), no qual as mães alimentaram-se de dieta com 8 % de caseína. No período de reposição nutricional, a partir do desmame (22º dia), os filhotes passaram a receber dieta padrão normoprotéica. Os animais foram pesados diariamente durante aleitamento e, posteriormente, em dias alternados. Na idade adulta, a partir do 90º dia de vida, os animais foram anestesiados e submetidos à punção cardíaca para coleta de sangue (4mL). Após coagulação, este foi centrifugado, a camada de soro coletada e acondicionada a -20ºC. Alíquotas foram inicialmente diluídas (1:10) para análise eletroforética monodimensional pela tecnologia lab-on-a-chip, utilizando os kits Agilent Protein 80 e 230. Para análise bidimensional, proteínas presentes em 50 &#956;L de soro foram precipitadas em acetona, ressolubilizadas em solução (200 &#956;L) contendo uréia (7 M), tiouréia (2 M) e CHAPS (2 %), sendo 100 &#956;L da solução de proteínas reservados para 1ª dimensão (fitas de 13 cm, pH 3-10). A 2ª dimensão foi realizada em géis de poliacrilamida (10 %) que foram corados com Azul de Coomassie. Os spots detectados foram analisados em software específico. Para análise dos dados, utilizaram-se os testes t-Student e Mann-Whitney, considerando-se p&#8804;0,05. Animais GD apresentaram valores de peso corporal menores do que GN a partir do 5º dia de vida (GN: 12,55±3,35g e GD: 10,41±2,03g, p=0,0262), condição que permaneceu até o 90º dia (p<0,0007). Além disso, na idade adulta, apresentaram menor quantidade de faixas de pesos moleculares detectadas e aumento de concentração de proteínas de peso 32,92 a 32,34 kDa (GN: 6,3 ng/&#956;L e GD: 7,45 ng/&#956;L, p=0,041) no perfil monodimensional. Na análise bidimensional, observaram-se alterações aparentes nos tipos e intensidade de alguns spots. A desnutrição protéica neonatal ocasionou déficit permanente de peso corporal até 90º dia de vida e, no animal adulto, provocou modificações nos perfis proteômicos das amostras de soro analisadas. Em decorrência da administração de uma dieta hipoprotéica durante período crítico de desenvolvimento, modificações no proteoma podem ser correlacionadas a alterações metabólicas que, potencialmente, estejam associadas ao desenvolvimento de patologias no indivíduo adulto

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-04-10T13:40:20Z No. of bitstreams: 1 fabianotouzdjianpinheirotavora.pdf: 2717332 bytes, checksum: ef7258702d1bc7c43c78dae666bfb284 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-04-11T11:35:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 fabianotouzdjianpinheirotavora.pdf: 2717332 bytes, checksum: ef7258702d1bc7c43c78dae666bfb284 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-11T11:35:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fabianotouzdjianpinheirotavora.pdf: 2717332 bytes, checksum: ef7258702d1bc7c43c78dae666bfb284 (MD5) Previous issue date: 2017-03-03 / A bactéria fitopatogênica Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc) consiste no agente causal da podridão negra que acomete todas as variedades comerciais do gênero Brassica, sendo responsável por perdas significativas na brassicultura nacional e mundial. O objetivo deste trabalho consistiu em traçar o perfil proteômico de dois isolados de Xcc, distintos quanto à virulência, utilizando um sistema in vitro para a identificação de proteínas diferencialmente abundantes relacionadas aos mecanismos de virulência. Inicialmente, curvas de crescimento bacteriano foram desenvolvidas afim de se determinar o momento apropriado para a coleta e extração de proteínas. Os isolados Xcc51 e XccY21 foram cultivados em dois meios de cultura distintos, sendo um nutricionalmente rico (NYG) e outro capaz de induzir a transcrição de genes relacionados à virulência (meio mínimo – XVM1), até atingirem a fase exponencial máxima de crescimento bacteriano (OD600nm = 0,8 em meio NYG e OD600nm = 0,58 em meio XVM1). As proteínas totais dos isolados foram extraídas usando fenol, precipitadas com acetato de amônio em metanol, digeridas com tripsina e analisadas pela técnica 2DnanoUPLC/MSE, utilizando a plataforma de identificação e quantificação de proteínas Protein Lynx Global Server (PLGS). Os dados obtidos foram comparados com sequências depositadas no banco de dados XGB (The Xanthomonas Genome Browser). Foram identificadas mais de 600 proteínas no proteoma total de ambos os isolados de Xcc, revelando a expressão de proteínas exclusivas, bem como um perfil diverso de proteínas aumentadas e diminuídas entre os isolados durante o cultivo nos dois meios. Com o auxílio do software BLAST2GO, foi realizada uma análise baseada na ontologia dos produtos gênicos. Os resultados obtidos evidenciam que durante a condição de indução de genes de patogenicidade, o isolado mais virulento Xcc51 se destacou pela abundância de importantes proteínas relacionadas à infecção bacteriana, como bfeA, TonB, ompP6, clpB, tig, acvB, quando comparado à quantidade exibida no isolado XccY21. Os dados proteômicos gerados pelo presente estudo apresentaram um interessante rol de proteínas diferencialmente aumentadas e supostamente relacionadas à patogenicidade e virulência de Xcc, o qual poderá nortear futuras investigações quanto aos mecanismos moleculares envolvidos na patogênese dessa fitobactéria. / The phytopathogenic bacterium Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc) consist in the black rot disease causal agent, which affects all Brassica genus commercial varieties. This disease results in significant losses for brassicultures worldwide. The present study aimed to analyze the proteomic profile of two distinct Xcc isolates, employing an in vitro system for the identification of differentially abundant proteins, related to pathogenicity and virulence mechanisms. Initially, bacterial growth curves were assessed to determine the appropriate stage for protein extraction. Xanthomonas isolates Xcc51 and XccY21 were cultured in two distinct mediums, a nutritionally rich medium (NYG) and a minimal medium - XVM1, capable of inducing the transcription of pathogenicity genes, until they reached maximum exponential growth phase (OD600nm = 0.8 A. and OD600nm = 0.52 A., respectively). Total proteins were extracted using phenol/ammonium acetate, trypsin digested and analyzed by 2DnanoUPLC/MSE, coupled with Protein Lynx Global Server (PLGS). Xanthomonas Genome Browser database was used, leading to the identification of more than 600 proteins and revealing the expression of unique proteins as well as diverse profiles of increased and decreased proteins. Blast2GO software was applied to analyze gene ontology. Results suggest that during pathogenicity inducing condition, the isolate Xcc51 increases the abundance of crucial infection-related proteins such as bfeA, TonB, ompP6, clpB, acvB, when compared to XccY21 which could explain its higher virulence. The proteomic data showed by the present study delivered a list of interesting proteins presumably related with pathogenicity and virulence of Xcc, which could guide future investigations on molecular mechanisms involved in this phytobacterium pathogenesis.