Resumo: O presente trabalho teve por objetivo determinar o ciclo de cultivo de yacon ( Polymnia sonchifolia Poep. Endl.), em função do conteúdo de frutanos nos órgãos subterrâneos e estabelecer condições de armazenamento das raízes tuberosas para prolongar sua conservação pós-colheita. Para tanto, foram realizados dois experimentos na Fazenda Experimental Lageado, Departamento de Produção Vegetal, FCA - UNESP, Botucatu. No primeiro, analisaram-se os teores de frutanos totais, açúcares redutores e massa fresca durante dez meses. No segundo, raízes colhidas aos oito meses foram armazenadas durante 0, 3, 6, 9, 12 e 15 dias, na condição ambiente, sem embalagem plástica, sob refrigeração a 4 0C, com e sem embalagem, e a -18 0C com embalagem. Foram analisados os teores de frutanos totais, açúcares redutores e a atividade da peroxidase nas diferentes condições de armazenamento. De acordo com os resultados das análises, o maior conteúdo de frutanos totais, tanto em raízes como em rizóforos, foram obtidos entre oito e nove meses de cultivo. Foi também nesta fase que se observou a maior produtividade de raízes tuberosas, mostrando ser essa a melhor época de colheita. A temperatura de armazenamento -18 0C mostrou maior eficiência na manutenção do conteúdo de frutanos durante os quinze dias. A atividade da peroxidase não apresentou alterações significativas quando as raízes foram armazenadas a -18 0C e a 4 0C, independentemente da embalagem. / Abstract: The present work had as its aim to determine the yacon cultivation cycle according to the fructan content on underground organs and establish storage condition of the tuberous roots in order to extend its post-harvest conservation. To do so, two experiments were carried out at Lageado Experimental Farm, Vegetable Production Departament, FCA-UNESP, Botucatu. In the first one, the total fructan contents, reducing sugar and fresh mass were analysed for ten months. In the second one, roots harvested whith eight-months old were stored for 0,3,6,9,12 and 15 days, on the regular environmental condition, without plastic packing under 4 0C of refrigeration, with and without packing, and at -18 0C with packing. The total fructans, reducing sugars and the peroxidase activity over the different storage condition were measured. According to the results of the analysis, the highest content of total fructans, both in roots and rizophores, was obtained between eight and nine months of cultivation. It was also during this period that it was observed the highest tuberous roots yield, proving this to be best one for harvesting. The -18 0C storage temperature showed higher afficiency one the keeping of the fructans content during the fifteen days. The peroxidase did not show significant changes when the roots were stored at - 18 0C and at 4 0C, regardless of packing. / Orientador: Francisco Luiz Araújo Câmara / Coorientador: Giuseppina P. P. Lima / Doutor

Orientador: Antonio Carlos Maringoni / Coorientador: Kátia Regina F. Schawan Estrada / Banca: Ricardo Gioria / Banca: Marcelo Agenor Pavan / Banca: Julio Rodrigues Neto / Resumo: O presente trabalho teve por objetivo avaliar em condições de casa-de-vegetação e de campo a ação de alguns fungicidas e antibiótico no controle da mancha bacteriana (Xanthomonas perforans) do tomateiro e na ativação de enzimas relacionadas à indução de resistência. A sensibilidade in vitro foi avaliada utilizando os produtos acibenzolar-S-metil; piraclostrobina e piraclostrobina + methiran, oxicloreto de cobre, oxicloreto de cobre + mancozeb, fluazinam e oxitetraciclina nas concentrações de 0; 5; 10; 50; 100; 500; 1000 e 5000 μg.mL-1. Acibenzolar- S-metil e piraclostrobina não inibiram o crescimento de X. perforans em todas as concentrações avaliadas e para os demais produtos, o crescimento bacteriano variou em função da concentração ensaiada. Para avaliação da severidade e atividade enzimática em casa-devegetação, foram utilizadas as cultivares de tomateiro Santa Clara e Gisele e o híbrido AP 529 inoculadas com X. perforans. Os tratamentos consistiram da pulverização com acibenzolar-Smetil (2,5 g i.a./100 L), fluazinam (25 g i.a./100 L), piraclostrobina (8 g i.a./100 L), piraclostrobina + methiran (20 g + 220 g i.a./100L), oxicloreto de cobre (150 g i.a./100 L), oxicloreto de cobre + mancozeb (88 g + 60 g i.a./100 L) e oxitetraciclina (40 g i.a./100 L), além de uma testemunha inoculada e uma testemunha não inoculada. Com os dados de severidade foi calculada a área abaixo da curva de progresso da doença (AACPD). Todos os tratamentos apresentaram redução da AACPD em relação à testemunha. Os fungicidas acibenzolar-S-metil, piraclostrobina e piraclostrobina + methiran tiveram a maior redução da severidade da mancha bacteriana em tomateiro em condições de casa-de-vegetação. Os produtos à base de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to evaluate in greenhouse and in field the action of fungicides and antibiotics against tomato's bacterial spot (Xanthomonas perforans) and the activation of enzymes related to the resistance. The sensitivity was evaluated in vitro using the products acibenzolar-Smethyl, pyraclostrobin, pyraclostrobin + methiran, copper oxychloride, copper oxychloride + mancozeb, oxytetracycline at concentrations of 0, 5, 10, 50, 100, 500, 1000 and 5000 μg.mL- 1. Acibenzolar-S-methyl and pyraclostrobin did not inhibit the growth of X. perforans in all concentrations tested and for other products, the bacterial growth varied depending on the concentration tested. To assess the severity and enzyme activity in greenhouse, we used the tomato cultivars Santa Clara, Gisele and AP529 inoculated with X. perforans. The treatments consisted of pulverization with: acibenzolar-S-methyl (2.5 g a.i./100 L), fluazinam (25 g a.i./100 L), pyraclostrobin (8 g a.i./100 L) methiran + pyraclostrobin (20 g + 220 g i.a./100 L), copper oxychloride (150 g ai/100 L), copper oxychloride + mancozeb (88 g + 60 g a.i./100 L), oxytetracycline (40 g a.i./100 L), and in addition an inoculated and non inoculated as control. The area under the disease progress curve (AUDPC) was calculated using the assessments data of the severity disease. All treatments had reduced the AUDPC compared to the control. The fungicides acibenzolar-S-methyl, pyraclostrobin, and pyraclostrobin + methiran had the highest reduction in the severity of bacterial spot on tomato plants under greenhouse experiments conditions. The acibenzolar-S-methyl... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Peroxidases atuam catalisando a redução do peróxido de hidrogênio à água a fim de minimizar o dano celular e modular, direta ou indiretamente, respostas celulares dependentes da sinalização operada por esta espécie reativa de oxigênio. Análises prévias, feitas em bancos de dados de sequências genômicas, permitiram a identificação de uma nova heme peroxidase não-animal (ascorbato peroxidase-relacionada ou APx-R), a qual foi descrita pela primeira vez em 2011 em um estudo publicado pelo nosso grupo de pesquisa. O trabalho detalhado nos próximos capítulos desta tese teve como objetivo caracterizar a participação de APx-R no metabolismo antioxidante vegetal através de abordagens filogenéticas e funcionais. Os resultados apresentados nos capítulos dois e três mostram que APx-R é uma peroxidase de classe I, filogeneticamente relacionada à ascorbato peroxidase, citocromo-c peroxidase e catalase peroxidase. Em Arabidopsis thaliana, APx-R codifica uma proteína cloroplastídica que atua regulando os processos de germinação e maturação da semente. A superexpressão de APx-R in planta afetou drasticamente a viabilidade das sementes, sugerindo que os níveis de expressão deste gene devem ser rigorosamente controlados para permitir o desenvolvimento da planta. Além disso, as análises filogenéticas aqui apresentadas levaram à identificação de uma nova família de peroxidases (intitulada ascorbato peroxidase-like ou APx-L), adicionando um novo componente ao complexo sistema antioxidante vegetal. / Peroxidases act reducing hydrogen peroxide into water, minimizing cell injury and modulating cell responses through hydrogen peroxide signaling. From analysis in public genome databases, we identified a non-animal heme-peroxidase (ascorbate peroxidase-related or APx-R) present from basal to vascular plants, which was initially described in a study published by our group in 2011. The work described hereafter aimed to characterize APx-R participation in the antioxidant metabolism through phylogenetic and functional approaches. The results presented on chapters two and three showed that APx-R is a class I peroxidase, phylogenetically related to ascorbate peroxidase, cytochrome-c peroxidase and catalase peroxidase. In Arabidopsis thaliana, APx-R gene encodes a chloroplast protein which acts regulating germination and seed maturation processes. The overexpression of APx-R in planta impaired seed viability, showing that APx-R expression level must be tightly controlled in order to enable plants to develop properly. In addition, the phylogenetic analysis here presented allowed the identification of a new peroxidase family, called ascorbate peroxidase-like (APx-L), which adds a new component into plant antioxidant metabolism.

Peroxidases são enzimas amplamente distribuídas nos organismos, sendo de fundamental importância para o seu desenvolvimento. Atuam reduzindo o peróxido de hidrogênio à água, minimizando, assim, o dano celular em condições de estresse e modulando as respostas celulares que utilizam o peróxido de hidrogênio como molécula sinalizadora. Através de análises em bancos de depósito de genomas, uma provável nova heme-peroxidase (ascorbate peroxidase-related ou APx-R) foi identificada. APx-R é uma proteína exclusiva de plantas e está presente desde organismos basais, como algas, até angiospermas. Diferentemente de outras peroxidases, geralmente codificadas por pequenas famílias gênicas originadas a partir de eventos de duplicação, APx-R se apresenta como um gene cópia-única em todos os genomas de plantas já sequenciados e disponibilizados. Apesar de haver grande similaridade de estrutura proteica entre APx e APx-R, APx-R possui um grande número de substituições conservadas em domínios críticos, sugerindo que esta proteína provavelmente se originou de algum membro da família das ascorbato peroxidases, mas acumulou mutações suficientes de forma que não pode mais ser considerado um membro desta família. Para verificar a localização subcelular de APx-R, protoplastos de arroz foram transfectados com uma construção de fusão traducional APx-R::YFP, sob o controle do promotor 35S. A visualização da florescência foi feita através de microscopia confocal e revelou que APx-R é uma proteína de dupla-localização, a qual pode localizar-se tanto nas mitocôndrias quanto nos cloroplastos. Análises de BiFC mostraram que APx-R pode interagir com as APx presentes nos mesmos compartimentos subcelulares, indicando que estas proteínas podem estar atuando de forma sinérgica no metabolismo de detoxificação do peróxido de hidrogênio. Para caracterizar APx-R funcionalmente, mutantes de arroz superexpressando RNA de interferência objetivando silenciar o gene OsAPx-R foram obtidos através de transformação via Agrobacterium tumefaciens. As plantas RNAi-OsAPx-R apresentaram alterações no metabolismo do peróxido de hidrogênio quando comparadas às plantas não-transformadas, mostrando diferenças nas atividades de SoD. Cat e APx, suportando a provável participação de APx-R na defesa contra o estresse. Assim, estes resultados mostraram que OsAPx-R codifica uma proteína funcional, a qual está relacionada com o sistema antioxidante e é requerida na resposta a estresses, provavelmente atuando na proteção dos cloroplastos e mitocôndrias, ambas organelas com intensa formação de espécies reativas de oxigênio. / Peroxidases are widely distributed in all organisms, being of fundamental importance for their development. These enzymes act reducing hydrogen peroxide into water, minimizing cellular damage in stressful conditions and modulating cell responses through hydrogen peroxide signaling. From analysis in public genomic databases, a putative new heme-peroxidase (ascorbate peroxidase-related or APx-R) was identified. APx-R is exclusive of plants and present from basal to vascular organisms. Unlike other peroxidases, usually encoded by large genic families originated from duplication events, APx-R is present as a single-copy gene in all available plant genomes. Despite the high structure similarity between APx and APx-R proteins, APx-R presents a great number of conserved substitutions in critical domains, suggesting that this protein probably emerged from the family of ascorbate peroxidases, but accumulated enough mutations so it cannot be grouped in this family anymore. To access subcellular localization, rice protoplasts were transfected with a translational fusion of yellow fluorescent protein (YFP) to APx-R protein under the control of the 35S promoter. Fluorescence visualization was performed by confocal microscopy and revealed that APx-R is a dual-target protein targeted to chloroplasts and mitochondrias. BiFc analysis showed that APx-R can interact with APx proteins which are present in the same subcellular compartments, indicating that these proteins may be acting synergistically in hydrogen peroxide scavenging metabolism. To further characterize APx-R in antioxidant metabolism, rice mutants expressing interference RNA for APx-R gene were obtained through Agrobacterium tumefaciens transformation. RNAi-silenced plants presented a disturbed hydrogen peroxide metabolism in comparison to non-transformed plants, with differences in SoD, Cat and APx activity, supporting the participation of APx-R in stress defense. Altogether, these results showed that OsAPx-R encodes a functional protein, which is related to the antioxidant system and required in stress response, probably acting in chloroplast and mitochondria protection, both organelles with intense reactive oxygen species formation.

Peroxidases atuam catalisando a redução do peróxido de hidrogênio à água a fim de minimizar o dano celular e modular, direta ou indiretamente, respostas celulares dependentes da sinalização operada por esta espécie reativa de oxigênio. Análises prévias, feitas em bancos de dados de sequências genômicas, permitiram a identificação de uma nova heme peroxidase não-animal (ascorbato peroxidase-relacionada ou APx-R), a qual foi descrita pela primeira vez em 2011 em um estudo publicado pelo nosso grupo de pesquisa. O trabalho detalhado nos próximos capítulos desta tese teve como objetivo caracterizar a participação de APx-R no metabolismo antioxidante vegetal através de abordagens filogenéticas e funcionais. Os resultados apresentados nos capítulos dois e três mostram que APx-R é uma peroxidase de classe I, filogeneticamente relacionada à ascorbato peroxidase, citocromo-c peroxidase e catalase peroxidase. Em Arabidopsis thaliana, APx-R codifica uma proteína cloroplastídica que atua regulando os processos de germinação e maturação da semente. A superexpressão de APx-R in planta afetou drasticamente a viabilidade das sementes, sugerindo que os níveis de expressão deste gene devem ser rigorosamente controlados para permitir o desenvolvimento da planta. Além disso, as análises filogenéticas aqui apresentadas levaram à identificação de uma nova família de peroxidases (intitulada ascorbato peroxidase-like ou APx-L), adicionando um novo componente ao complexo sistema antioxidante vegetal. / Peroxidases act reducing hydrogen peroxide into water, minimizing cell injury and modulating cell responses through hydrogen peroxide signaling. From analysis in public genome databases, we identified a non-animal heme-peroxidase (ascorbate peroxidase-related or APx-R) present from basal to vascular plants, which was initially described in a study published by our group in 2011. The work described hereafter aimed to characterize APx-R participation in the antioxidant metabolism through phylogenetic and functional approaches. The results presented on chapters two and three showed that APx-R is a class I peroxidase, phylogenetically related to ascorbate peroxidase, cytochrome-c peroxidase and catalase peroxidase. In Arabidopsis thaliana, APx-R gene encodes a chloroplast protein which acts regulating germination and seed maturation processes. The overexpression of APx-R in planta impaired seed viability, showing that APx-R expression level must be tightly controlled in order to enable plants to develop properly. In addition, the phylogenetic analysis here presented allowed the identification of a new peroxidase family, called ascorbate peroxidase-like (APx-L), which adds a new component into plant antioxidant metabolism.

Peroxidases são enzimas amplamente distribuídas nos organismos, sendo de fundamental importância para o seu desenvolvimento. Atuam reduzindo o peróxido de hidrogênio à água, minimizando, assim, o dano celular em condições de estresse e modulando as respostas celulares que utilizam o peróxido de hidrogênio como molécula sinalizadora. Através de análises em bancos de depósito de genomas, uma provável nova heme-peroxidase (ascorbate peroxidase-related ou APx-R) foi identificada. APx-R é uma proteína exclusiva de plantas e está presente desde organismos basais, como algas, até angiospermas. Diferentemente de outras peroxidases, geralmente codificadas por pequenas famílias gênicas originadas a partir de eventos de duplicação, APx-R se apresenta como um gene cópia-única em todos os genomas de plantas já sequenciados e disponibilizados. Apesar de haver grande similaridade de estrutura proteica entre APx e APx-R, APx-R possui um grande número de substituições conservadas em domínios críticos, sugerindo que esta proteína provavelmente se originou de algum membro da família das ascorbato peroxidases, mas acumulou mutações suficientes de forma que não pode mais ser considerado um membro desta família. Para verificar a localização subcelular de APx-R, protoplastos de arroz foram transfectados com uma construção de fusão traducional APx-R::YFP, sob o controle do promotor 35S. A visualização da florescência foi feita através de microscopia confocal e revelou que APx-R é uma proteína de dupla-localização, a qual pode localizar-se tanto nas mitocôndrias quanto nos cloroplastos. Análises de BiFC mostraram que APx-R pode interagir com as APx presentes nos mesmos compartimentos subcelulares, indicando que estas proteínas podem estar atuando de forma sinérgica no metabolismo de detoxificação do peróxido de hidrogênio. Para caracterizar APx-R funcionalmente, mutantes de arroz superexpressando RNA de interferência objetivando silenciar o gene OsAPx-R foram obtidos através de transformação via Agrobacterium tumefaciens. As plantas RNAi-OsAPx-R apresentaram alterações no metabolismo do peróxido de hidrogênio quando comparadas às plantas não-transformadas, mostrando diferenças nas atividades de SoD. Cat e APx, suportando a provável participação de APx-R na defesa contra o estresse. Assim, estes resultados mostraram que OsAPx-R codifica uma proteína funcional, a qual está relacionada com o sistema antioxidante e é requerida na resposta a estresses, provavelmente atuando na proteção dos cloroplastos e mitocôndrias, ambas organelas com intensa formação de espécies reativas de oxigênio. / Peroxidases are widely distributed in all organisms, being of fundamental importance for their development. These enzymes act reducing hydrogen peroxide into water, minimizing cellular damage in stressful conditions and modulating cell responses through hydrogen peroxide signaling. From analysis in public genomic databases, a putative new heme-peroxidase (ascorbate peroxidase-related or APx-R) was identified. APx-R is exclusive of plants and present from basal to vascular organisms. Unlike other peroxidases, usually encoded by large genic families originated from duplication events, APx-R is present as a single-copy gene in all available plant genomes. Despite the high structure similarity between APx and APx-R proteins, APx-R presents a great number of conserved substitutions in critical domains, suggesting that this protein probably emerged from the family of ascorbate peroxidases, but accumulated enough mutations so it cannot be grouped in this family anymore. To access subcellular localization, rice protoplasts were transfected with a translational fusion of yellow fluorescent protein (YFP) to APx-R protein under the control of the 35S promoter. Fluorescence visualization was performed by confocal microscopy and revealed that APx-R is a dual-target protein targeted to chloroplasts and mitochondrias. BiFc analysis showed that APx-R can interact with APx proteins which are present in the same subcellular compartments, indicating that these proteins may be acting synergistically in hydrogen peroxide scavenging metabolism. To further characterize APx-R in antioxidant metabolism, rice mutants expressing interference RNA for APx-R gene were obtained through Agrobacterium tumefaciens transformation. RNAi-silenced plants presented a disturbed hydrogen peroxide metabolism in comparison to non-transformed plants, with differences in SoD, Cat and APx activity, supporting the participation of APx-R in stress defense. Altogether, these results showed that OsAPx-R encodes a functional protein, which is related to the antioxidant system and required in stress response, probably acting in chloroplast and mitochondria protection, both organelles with intense reactive oxygen species formation.

Resumo: Mieloperoxidase (MPO) é uma enzima derivada de leucócitos que cataliza a formação de numerosas espécies reativas oxidantes. Além de integrante da resposta imune inata, evidências têm comprovado a contribuição destes oxidantes para o dano tecidual durante inflamação. A MPO participa de atividades biológicas pro-aterogências relacionadas à evolução da doença cardiovascular; incluindo iniciação, propagação e as fases de complicação aguda do processo aterosclerótico. Desta forma, MPO e sua cascata inflamatória representam um alvo atrativo para investigação prognóstica e terapêutica na doença aterosclerótica cardiovascular. Nesta revisão, apresentamos o estado da arte no entendimento das ações biológicas às evidências clínicas da relação entre MPO e doença arterial coronariana.

Resumo não disponível

Orientadores: Lauro Tatsuo Kubota, Graciliano de Oliveira Neto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-26T20:56:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rosatto_SimoneSoares_D.pdf: 3157619 bytes, checksum: 9b21fe720d057892a20d96c762a5c091 (MD5) Previous issue date: 2000 / Doutorado

Orientadores: Fernanda Ramos Gadelha, Luis Eduardo Soares Netto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-27T10:57:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_RenataVilela_M.pdf: 5015994 bytes, checksum: 1edbb85678d6958681c2f20e5bc88952 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi caracterizar e comparar a atividade enzimática da triparedoxina peroxidase (TXNp) em duas cepas de T. cruzi que apresentam diferentes resistências ao estresse oxidativo. A identificação da TXNp foi feita em extratos celulares totais da forma epimastigota de T. cruzi das cepas Y e Tulahuen 2. De um modo geral, a cepa Tulahuen 2 tem uma concentração maior desta enzÍma do que a Y. Variações na concentração da TXNp dentro de uma mesma cepa com origens geográficas diferentes também foi observada. A TXNp obtida em extratos celulares totais de T. cruzi epimastigotas possui função antioxidante, protegendo a glutamina sintetase (GS) contra as espécies reativas de oxigênio (EROs) produzidas pelo sistema oxidante DTT/Fe3+/02. Parece não estar envolvida com a proliferação celular, uma vez que uma correlação não pôde ser estabelecida através da análise por Western blotting entre os diferentes dias de crescimento e a quantidade desta proteína. A triparedoxina (TXN) também foi encontrada nos mesmos extratos e variações em sua concentração foram observadas quando as cepas e seus diferentes dias de crescimento foram comparados. Neste caso também as células Tulahuen 2 apresentaram uma maior concentração da TXN. Uma maior resistência às EROs geradas pelo sistema DTT/Fe3+/02 pode ser explicada pela maior concentração de TXN e TXNp encontradas. Isto levaria a um metabolismo de hidroperóxidos mais efetivo, quando comparado à cepay. Os "sheddings" de T. cruzi de ambas as formas (epimastigota e tripomastigota) mostraram a liberação de TXNp para o meio extracelular / Abstract: The objective of this work was to charactetize and compare the tryparedoxin peroxidase (TXNp) enzymatic activity in two strains of T. cruzi that have different resistances to oxidative stress. TXNp identification was made in total ceIlular extracts ITom epimastigote of Y and Tulahuen 2 strain. In a broad sense, Tulauen 2 strain has a higher concentration of this enzyme when compared to the Y strain. Differences in TXNp concentration into a same strain with different geographic origins were also observed. TXNp present in total ceIlular extracts ITom T. cruzi epimastigote has an antioxidant function, protecting glutamine synthetase (GS) against reactive oxygen species (ROS) produced by the DTTlFe3+/02 oxidant system. lt appears not to be involved with cellular proliferation, since a correlation could not be stablished using Westem Blot analysis, between the different growth days and the amount of this protein. Tryparedoxin (TXN) was also found in the same extracts and variation in its concentration were observed when strains and different growth days were compared. Also in this case, Tulahuen 2 ceIls had a higher concentration of TXN. The higher resistance observed in the Tulahuen 2 strain against ROS generated by DTTlFe3+/02 system can be explained by the higher concentration of TXN and TXNp found. This would led to a hydroperoxide metabolism system more effective, when compared to the Y strain. T. cruzi sheddings of both forms (epimastigote and trypomastigote) showed liberation ofTXNp to the extraceIlular environrnent / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular