Orientador: José Renato Zanini / Banca: Luiz Fabiano Palaretti / Banca: Antonio Baldo Geraldo Martins / Banca: Olegário Pinheiro de Souza / Banca: José Geanini Peres / Resumo: Analisou-se a produtividade, distribuição do sistema radicular, qualidade do fruto e eficiência do uso da água do abacaxizeiro cv. Smooth Cayenne. O experimento foi realizado no Instituto Federal do Triângulo Mineiro, campus Uberaba, MG, constituído por cinco lâminas de irrigação (25, 50, 75, 100 e 125% da evapotranspiração da cultura) e duas posições do tubogotejador: superficial e subsuperficial (10 cm de profundidade). Utilizou-se o método da trincheira para a quantificação das raízes por meio de imagens digitais com o programa SAFIRA® 1.1. Avaliaram-se as variáveis massa média de fruto, com e sem coroa (PMCC, PMSC), diâmetro médio do fruto, pedúnculo e caule (DMF, DMP e DMC), resistência do fruto com casca (RFCC) e sem casca (RFSC), rendimento de suco (RS), sólidos solúveis (SS), potencial hidrogeniônico (pH), acidez titulável (AT), ratio e eficiência do uso de água (EUA). O tratamento irrigado por gotejamento superficial apresenta produtividade 6,13 t ha-1 maior que o tratamento subsuperficial e promove área e comprimento de raízes com 53 e 54% maiores em relação, ao gotejamento subsuperficial, respectivamente. Com relação à profundidade, as raízes apresentaram maior área e comprimento na camada de 0 a 10 cm, com valores de 49 e 52% maiores que os obtidos na camada de 10 a 20 cm. Para a massa média do fruto, com e sem coroa, verifica-se que não houve diferença significativa entre as lâminas de irrigação aplicadas, porém, quanto à posição de instalação do tubogotejador a irrigação por gotejamento superficial apresentou diferença significativa obtendo massa média de fruto, com e sem coroa maior que o tratamento subsuperficial. As lâminas de reposição da evapotranspiração e posição do tubogotejador não influenciaram o DMF, DMP, DMC, RFCC, RFSC, RS, SS, pH, AT e ratio. A lâmina de reposição de 25% da evapotranspiração da cultura proporcionou maior eficiência do uso da água ... / Abstract: This research aimed to analyze productivity, root distribution, fruit quality and water use efficiency of the pineapple cv. Smooth Cayenne. The experiment was conduct at the Instituto Federal do Triângulo Mineiro, campus of Uberaba, city, MG state Brazil, consisting of five irrigation (25, 50, 75, 100 and 125% of crop evapotranspiration) and two positions of drips: surface and subsurface (10 cm depth). It was use the trench method for quantification of the root system by digital images with the SAFIRA® 1.1 software. It was evaluated the following parameters: average fruit weight with and without crown (AFWWC, AFWOC), average fruit, stalk and stem diameter (AFD, AAD and AED), fruit resistance with and without shell (FRWC, FROC), juice yield (JY), total soluble solids (TSS), pH, total titratable acidity (TTA), ratio (TSS / TTA) and water use efficiency (WUE). The surface drip irrigated productivity features 6.13 t ha-1 higher than the subsurface drip and promotes area and root length with 53 and 54% higher than the subsurface, respectively. As to the roots depth showed larger area and length at the 0 to 10 cm layer, with values 49 and 52% higher than those obtained in the 10 to 20 cm layer. As to the average fruit weight with and without crown, there is no significant difference between irrigation depths applied, however, the surface drip line irrigation showed significant difference obtained with average fruit weight higher than the subsurface drip. The depth and the position of the drip line don't influenced AFD, AAD, AED, FRWC, FROC, JY, TSS, pH, TTA, SST / ATT. The depth replacement of 25% of crop evapotranspiration provided greater efficiency of water use for pineapple production / Doutor

Orientador: José Renato Zanini / Banca: Reges Eduardo Franco Teodoro / Banca: Antônio Carlos Barreto / Banca: Carlos Ruggiero / Banca: José Eduardo Pitelli Turco / Resumo: Com este trabalho o objetivo foi avaliar o desempenho do abacaxizeiro cultivar Smooth Cayenne submetido a níveis e frequências de reposição de água no solo, sobre a produtividade, qualidade do fruto e eficiência do uso da água. O trabalho foi realizado no Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Triângulo Mineiro (IFTM), Campus Uberaba, no período de outubro de 2009 a dezembro de 2010. O experimento foi conduzido no delineamento em blocos casualizados, esquema fatorial 4 x 2, constituído por quatro níveis de reposição de água no solo (50%, 75%, 100% e 125% da evapotranspiração da cultura (ETc)) e duas frequências de irrigação (1 dia = F1 e 3 dias = F2) e quatro repetições. A ETo foi estimada a partir da evaporação diária da água do tanque "Classe A". As lâminas de irrigação foram aplicadas por meio de um sistema de irrigação por gotejamento, com gotejadores espaçados a cada 30 cm e vazão de 3,75 L h-1. A parcela experimental foi constituída de duas linhas duplas, com 4 m de comprimento, 2,80 m de largura, densidade de 52 plantas por parcela, sendo consideradas 20 plantas para avaliação. No plantio foi usado o espaçamento em linhas duplas de 0,90 x 0,50 x 0,30 m. A produtividade dos frutos, diâmetro médio do caule, peso médio dos frutos com coroa, diâmetro médio do pedúnculo, número de mudas tipo filhote, filhote rebentão, ácido ascórbico, rendimento de suco e resistência média dos frutos sem casca não foram influenciados pelas lâminas de reposição da ETc e frequência de irrigação. Número médio de folhas, mudas tipo rebentão, sólidos solúveis totais, acidez total titulável, relação de SST/ATT, resistência média dos frutos com casca, potencial hidrogeniônico de suco e diâmetro médio dos frutos foram influenciado pelas lâminas de reposição... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: With this research the objective was to evaluate the performance of the cultivar Smooth Cayenne pineapple subject to levels and frequencies of water reposition on soil by dripping, about productivity and quality of the fruit and water use efficiency. The research was performed at Federal Institute of Triângulo Mineiro (IFTM), Uberaba Campus, Brazil, from October 2009 to December 2010. The experiment was carried out on randomized block design, factorial 4x2, consisting of four levels of water reposition on soil (50%, 75%, 100% and 125%), of the crop evapotranspiration (ETc) and two irrigation frequencies (1 day = F1 and 2 days = F2), with four repetitions. The ETc was estimated from the daily water evaporation on the "Class A" reservoir. The depths were applied through a dripping irrigation system, with drip emitters spaced every 30 cm, flow of 3,75 L h-1. The experimental plot was constituted of double rows, with 4 m of length, 2,80 m wide and density of 3,3 plants per meter, with 52 plants per plot. At planting, it was used spacing double lines measuring 0,90 x 0,50 x 0,30 m. The results showed that the increase on the ETc reposition and on the irrigation frequency did not produce a decrease in fruit productivity, average stem diameter, average fruits weight with crown, stalk diameter, number of slips, suckers, ascorbic acid, hydrogen potential of juice, juice yield and average unshelled fruit hardness. Bigger ETc reposition depths cause the increase on the average leafs number, the reduction of sucker slips, the increase of soluble solids (TSS), decreased acidity (TTA), increased the ratio of TSS/TTA, hardness rating of unpeeled fruits and decreased average of fruit diameter. Depths of 50% reposition... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Apesar de sua importÃncia como grande produtor mundial, o Brasil tem participaÃÃo inexpressiva no mercado internacional de frutas. Parte da produÃÃo que nÃo atende aos critÃrios de qualidade mÃnimos para exportaÃÃo sÃo perdidos apÃs a colheita. Desta forma, estas frutas poderiam ser desidratadas para preservar parte da produÃÃo que nÃo à consumida ou exportada, aumentando desta forma a vida de comercializaÃÃo da fruta, reduzindo o peso para transporte e provendo maior renda ao produtor. A procura por alimentos de baixa caloria e adoÃantes nÃo calÃricos vem aumentando a cada dia. Os indivÃduos, que por diversas razÃes precisam substituir a sacarose por adoÃantes nÃo calÃricos, procuram por produtos que sejam dotados de gosto e caracterÃsticas prÃximas Ãs da sacarose, em virtude disso, o presente trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos do ultrassom e da desidrataÃÃo osmÃtica como prÃ-tratamento ao processo de secagem, bem como a otimizaÃÃo deste para a produÃÃo de abacaxi (Ananas comosus) desidratado com valor calÃrico reduzido. Quando o abacaxi, na proporÃÃo 3:1 de Ãgua para fruta (p/p), sofreu aÃÃo do ultrassom de ponteira (200W), em Ãgua destilada como meio lÃquido, por 5 minutos, observou-se os maiores valores para, perda de Ãgua, perda de sÃlidos e difusividade efetiva. Nessa condiÃÃo a difusividade do abacaxi pÃrola aumentou 2,8 vezes, quando comparado ao abacaxi sem prÃ-tratamento (in natura), levando a uma reduÃÃo de 49,66% do tempo necessÃrio para remover 90% da Ãgua inicial dessa fruta, reduzindo o tempo total da secagem. Com a otimizaÃÃo dos dados do processo (proporÃÃo Ãgua/fruta 3:1 (p/p), por 20 minutos sobre ultrassom) seguido de impreguinaÃÃo em soluÃÃo de estÃvia a 10%, foi possÃvel reduzir o valor energÃtico do abacaxi em 17,97%, mantendo as cores da fruta in natura apÃs processamento. O que torna a utilizaÃÃo do ultrassom uma eficiente tecnologia na reduÃÃo de tempo de processamento de frutas secas e na participaÃÃo deste no desenvolvimento de novos produtos. / Despite its importance as a major world producer, Brazil has a minimal share in the international market of fruit. Part of the production that does not meet minimum quality standards for export is lost after harvest. Thus, these fruits could be dried to preserve part of production that is not consumed or exported, thereby increasing the shelf life of fruit, reducing shipping weight and provide more income to the producer. The demand for low-calorie foods and non-caloric sweeteners is increasing every day. Individuals, who for many reasons need to replace sucrose with non-caloric sweeteners, look for products that are provided with taste and characteristics similar to those of sucrose, as a result, the present study was to evaluate the effects of osmotic dehydration and ultrasound as pretreatment to drying process and the optimization for the production of dehydrated pineapple (Ananas comosus) reduced calorie. When the pineapple in the proportion 3:1 to fruit water (w / w), has the action of the ultrasound probe (200w) in distilled water as liquid medium for 5 minutes, there was the highest value, loss of water, loss of sound and effective diffusivity. In this condition the diffusivity of pineapple increased 2.8 fold when compared to non-pretreated pineapple (fresh), leading to a reduction of 49.66% of the time required to remove 90% of the fruit of the initial water, reducing the total drying time. By optimizing the process data (ratio water / fruit 3:1 (w / w) for 20 minutes on ultrasound) followed by impreguinaÃÃo stevia solution 10% was possible to reduce the energy value of the pineapple 17.97 %, keeping the colors of fresh fruit after processing. What makes the use of ultrasound technology in an efficient reduction of processing time of dried fruit and participation in the development of new products. Thus, the sonication figure as an alternative technology for obtaining reducing the processing time of fresh fruits of dried fruit and participation in the development of new products.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / The development of analytical methods for multiresidue determination of pesticides in food is essential for the efficient monitoring of these compounds in products consumed by the population, enabling regulators to obtain faster and reliable results. This study aimed to the development and validation of a method based on techniques modified QuEChERS-citrate and gas chromatography-mass spectrometry (GC/MS) for the multiresidue determination of 45 pesticides in fruits of pineapple. The method was validated by determining the selectivity, linearity, limit of detection (LOD), limit of quantification (LOQ), precision and accuracy, being configured with detection based on electron impact ionization (EI) and selected ion monitoring (SIM). The method was satisfactory selectivity for all target compounds, except chloroneb. Limits of detection ranged from 0.005 mg/kg and 0.05 mg/kg and limits of quantification between 0.015 mg/kg and 0.09 mg/kg. The linearity was adequate for most analytes at a range of concentration of 0.01 to 0.75 mg/kg with correlation coefficients ranged from 0.9593 to 0.9996. Of pineapple samples analyzed, applying the developed method, were detected the pesticides fenpropathrin, pyraclostrobin, ametryn, triflumizole and trifluralin. / O desenvolvimento de mÃtodos analÃticos para a determinaÃÃo multirresÃduos de agrotÃxicos em alimentos à fundamental para o monitoramento eficiente desses compostos nos produtos consumidos pela populaÃÃo, possibilitando aos ÃrgÃos reguladores a obtenÃÃo de resultados mais rÃpidos e confiÃveis. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento e validaÃÃo de um mÃtodo fundamentado nas tÃcnicas QuEChERS-citrato modificada e cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (CG/EM), para a determinaÃÃo multirresÃduo de 45 agrotÃxicos em frutos de abacaxi. O mÃtodo foi validado determinando-se a seletividade, a linearidade, limite de detecÃÃo (LD), limite de quantificaÃÃo (LQ), precisÃo e exatidÃo, sendo configurado com detecÃÃo baseada em ionizaÃÃo por impacto de elÃtrons (IE) e monitoramento de Ãons selecionados (MIS). O mÃtodo apresentou seletividade satisfatÃria para todos os compostos alvo, com exceÃÃo do cloroneb. Os limites de detecÃÃo variaram entre 0,005 mg/kg e 0,05 mg/kg e os limites de quantificaÃÃo entre 0,015 mg/kg e 0,09 mg/kg. A linearidade foi adequada para a maioria dos analitos na faixa de concentraÃÃo de 0,01 a 0,75 mg/kg, com coeficientes de correlaÃÃo variando entre 0,9593 a 0,9996. Das amostras de abacaxi analisadas, aplicando-se o mÃtodo desenvolvido, foram detectados os agrotÃxicos fenpropatrina, piraclostrobina, ametrina, triflumizol e trifluralina.

Orientador: Benedito Carlos Benedetti / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Agricola / Made available in DSpace on 2018-08-06T12:24:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Eduardo_MarisadePaula_M.pdf: 932445 bytes, checksum: c54a412323f66b902628af1a376b11fe (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O objetivo deste projeto foi avaliar a ação do cálcio na manutenção da textura de abacaxi minimamente processado em fatias. O trabalho foi dividido em dois experimentos distintos, porém complementares. Frutos do cultivar 'Smooth Cayenne¿ foram submetidos a: seleção, lavagem, sanitização, resfriamento, descasque, fatiamento, imersão em solução de sais de cálcio, embalagem e armazenagem refrigerada a 5oC. No Experimento I, o objetivo foi avaliar a textura de fatias de abacaxi minimamente processados quando tratadas com diferentes sais de cálcio (cloreto, sulfato e lactato) em duas concentrações (1% e 3%), analisando parâmetros químicos como pH e sólidos solúveis totais (SST). Para análise da textura, duas ponteiras de penetração (esmagamento e cisalhamento) foram utilizadas, visando escolher o melhor método de avaliação. Os resultados mostraram que os tratamentos com sulfato de cálcio aumentaram o índice da textura do abacaxi em até 28% em relação à testemunha. A ponteira de penetração por esmagamento foi selecionada com base na menor variabilidade dos resultados. O Experimento II foi elaborado com o objetivo de avaliar somente o efeito do sulfato de cálcio nos parâmetros pH, SST, acidez total titulável, textura e composição gasosa do abacaxi minimamente processado ao longo do armazenamento. Análises microbiológicas mostraram que não houve contaminação por coliformes fecais durante o período testado. Na análise sensorial realizada os consumidores potenciais não perceberam a presença do cálcio nas amostras testadas. Concluiu-se que a aplicação de cálcio interferiu positivamente na manutenção das propriedades de textura do produto e não influiu nas propriedades organolépticas / Abstract: The objective of the dissertation was to evaluate the effect of calcium on the texture maintenance of minimally processed pineapple slice. The research was divided into two distinct but complementary experiments. 'Smooth Cayenne¿ fruits were submitted to: selection, pre-washing, cooling, peeling, slicing, immersion in the solution of calcium salt, packing and storing at 5oC. In Experiment I the objective was evaluated the texture of minimally processed pineapple slice when treated with different calcium sources in two concentrations (1% and 3%) analysing chemical parameters such as pH and total dissolve solids (TDS). Two penetration tips (crushing and shearing) were used to measure the texture aiming to choose the best tip. The results showed that the treatments with calcium sulphate increased the maintenance of pineapples slices up to 28% in comparison to the control. The crushing penetration tip was selected based on the lower variability of obtained results. Experiment II was conducted to determine the calcium sulphate effect on several physical and chemical parameters such as pH, TDS, total titulavel acidity, texture and gaseous composition of the minimally processed pineapple slices along storage period. Microbiological analyses showed that no contamination by faecal coli forms occurred during the test period. Sensorial analyse performed with potential consumers did not indicate the perception of calcium. It was concluded that the calcium application acted positively on the texture maintenance of the product and did not interfere in organoleptic properties / Mestrado / Tecnologia Pós-Colheita / Mestre em Engenharia Agrícola

Orientador: Helena Maria Andre Bolini / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-04T15:54:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcellini_PauloSergio_D.pdf: 535926 bytes, checksum: b4405840378a849fc660544c350f8d25 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: As frutas tropiacais por seu aroma e sabor caracteristicos são apreciadas no mundo inteiro. Entre as frutas de maior destaque encontra-se o abacaxi, com qualidade sensorial diferenciada e potencial de exportação em expansão. O Brasil, quarto maior produtor mundial, exportou em 2004 uma quantidade de suco de abacaxi cerca de 5 vezes maior em compração à 2002. Os edulcorantes são uma alternativa para adoçar sucos e alimentos, o interesse no estudo do comportamento desses compostos deve-se a preocupação com a saúde e aos padrões estéticos vinculados ao baixo peso corpóreo. O objetivo deste trabalho foi realizar análises fisico-químicas, determinação da doçura ideal e da doçura equivalente, análise de aceitação, perfil livre e análise tempo-intensidade de suco de abacaxi industrializado, reconstituido e adoçado com sucralose, aspartame, estévia, ciclamato/sacrina e sacarose. Os dados obtidos pelo perfil livre foram analisados através da Análise Procrustes Generalizada. Os parâmetros da curva tempo-intensidade foram avaliados através da Análise de Variância (ANOVA), testes de médias de Tukey e Análise de Componentes Principais (ACP). Todas as análises estatisticas foram realizadas utilizando o programa SAS. A concentração ideal de sacarose na amostra de suco de abacaxi foi de 8,5%, apenas a estévia ultrapssou os limites máximos de legislação brasileira na concentração ideal e quivalente à scarose 8,5%. Os resultados dos métodos de doçura ideal e doçura equivalente de edulcorantes foram diferentes, sendo constatado que quanto menor a potência edulcorante mais distintos são os valores. O ordem de potência edulcorante estabelecida foi: estévia, aspartame, ciclamato/sacarina 2:1 e sucralose. As amostras mais aceitas pelos consumidores foram com sucralose, aspartame e sacarose. A intenção de compra revelou uma certeza maior de aquisição do produto para a amostra com sucralose. O perfil livre levantou 16 atributos nas amostras estudadas, porém os unicos com 100% de alta correlação no componente principal 1 foram: o gosto amargoe o gosto amargo residual. O perfil livre também demonstrou que as amostras com a mistura ciclamato/sacarina e com estévia se caracterizam principalmente pelos gostos amargo e amargo residual, enquanto as asmostras com sucralose, aspartame e sacarose se caracterizam pelo sabor de abacaxi, aroma de abacaxi e acidez, atributos comuns do suco "in natura". Na análise tempo-intensidade verificou-se a semelhança temporal antre os sucos adoçados com sacarose, sucralose e aspartame, além desse método confirmar a descaracterização das amostras pelos edulcorantes estévia e ciclamato/sacarina, provavelmente devido ao amargor. O conjunto dos testes sensoriais e fisico-quimicos sugerem que a substituição da sacarose por aspartame e sucralose não implica em diferenças significativas nas amostras de suco de abacaxi / Abstract: The tropiacais fruits for its caracteristicos aroma and flavor are appreciated in the entire world. It enters the fruits of bigger prominence meets the pineapple, with differentiated and potential sensorial quality of exportation in expansion. Brazil, world-wide bigger room producing, exported in 2004 an amount of juice of pineapple about 5 times bigger in compração to the 2002. The edulcorantes are an alternative to sweeten juices and foods, the interest in the study of the behavior of these composites it must concern with the health and to the aesthetic standards tied with the low corporeal weight. The objective of this work was to carry through analyses fisico-chemistries, determination of the ideal doçura and the doçura equivalent, analysis of acceptance, free profile and analysis juice time-intensity of industrialized, reconstituido pineapple and sweetened with sucralose, aspartame, estévia, ciclamato/sacrina and sacarose. The data gotten for the free profile had been analyzed through Generalized the Procrustes Analysis. The parameters of the curve time-intensity had been evaluated through the Analysis of Variância (ANOVA), tests of averages of Tukey and Análise de Main Componentes (the ACP). All the estatisticas analyses had been carried through using program SAS. The ideal concentration of sacarose in the pineapple juice sample was of 8,5%, only the estévia ultrapssou the maximum limits of Brazilian legislation in the ideal concentration and quivalente to scarose 8,5%. The results of the methods of ideal doçura and doçura equivalent of edulcorantes had been different, being evidenced that how much lesser the edulcorante power more distinct is the values. The order of established edulcorante power was: estévia, aspartame, ciclamato/sacarina 2:1 and sucralose. The samples most accepted for the consumers had been with sucralose, aspartame and sacarose. The purchase intention disclosed a bigger certainty of acquisition of the product for the sample with sucralose. The free profile raised 16 attributes in the studied samples, however the unicos with 100% of high correlation in main component 1 had been: the taste amargoe the taste residual bitter taste. The free profile also demonstrated that the samples with the ciclamato/sacarina mixture and estévia if mainly characterize for the gostos bitter taste and residual bitter taste, while asmostras with sucralose, aspartame and sacarose if characterize for the flavor of pineapple, aroma of pineapple and acidity, common attributes of the juice "in natura". In the analysis time-intensity it was verified secular similarity antre the juices sweetened with sacarose, sucralose and aspartame, beyond this method confirming the descaracterização of the samples for the edulcorantes estévia and ciclamato/sacarina, probably had to the bitter taste. The set of the sensorial and fisico-quimicos tests suggests that the substitution of sacarose for aspartame and sucralose does not imply in significant differences in the pineapple juice samples / Doutorado / Consumo e Qualidade de Alimentos / Doutor em Alimentos e Nutrição

The purpose of this study was to determine the uptake and distribution of nutrients during the growth of the Cayenne cultivar of Ananas comosus (L) Merr under field conditions in the Eastern Cape. The study was also done to help explain the apparent drop in the nutrient levels in the basal section of the "D"- leaf of the pineapple plant during the winter months and to determine the best part or parts of the plant to sample in order to measure the nutrient status of the pineapple plant at any stage of its growth. The investigation was conducted by selecting a plot within a production land on two farms in the pineapple growing region of the Eastern Cape. Plants were sampled from each plot at regular intervals from planting of the pineapple tops until the harvesting of the fruit of the first plant crop. Plant growth was measured and the nutrient concentrations in each section of the plant were determined. The total amounts of nutrients for each plant part were calculated and the nutrient uptake was compared and plotted on distribution diagrams.

The earliest reference to investigations of "black spot" in pineapples is made by Tryon (1898), who refers to the work of Dr A. A. Brown (1896) of the stock Branch, Victoria (Aus.), who sectioned diseased areas of pineapples and found fungal spores and hyphae in the tissues. The symptoms of this socalled "fruitlet core rot," are described by Tryon as: "well defined dark brown markings immediately beneath the surface, and passing inwards to a depth of 1/4" to 1/2"- the malady commencing in separate fruitlets, the central core of the fruit remaining quite healthy." (This description agrees with the symptoms referred to as "black spot" 1n this country). Subsequent culture of the spores (found by Brown) on slices of healthy fruit resulted in growth of Mucor racemosus. Brown regarded an invasion by this fungus as a primary cause of the disease. Intro. p. 1.

O nitrato é uma das principais fontes de nitrogênio disponível para as plantas, sendo a nitrato redutase (NR) a enzima responsável pela sua redução a nitrito. O nitrito é considerado tóxico em altas concentrações e, por esse motivo, a atividade da NR possui uma regulação complexa, principalmente em nível transcricional e pós-traducional. Trabalhos anteriores do nosso grupo, utilizando plantas de abacaxizeiro cultivadas in vitro, demonstraram que, em condições de termoperíodo de 28ºC dia/15ºC noite, as raízes apresentaram um estímulo positivo de atividade da NR na ausência de luz quando comparado às plantas crescidas em temperatura constante de 28ºC, associado posteriormente à atividade da NR de membrana plasmática (NRPM). Baseado nesses resultados questionou-se qual seria a influência da aplicação do estímulo de frio associado ou não à presença de luz na atividade da NR em folhas e raízes de abacaxizeiro. Este trabalho teve como objetivos investigar os efeitos do frio na atividade da NR em folhas e raízes de abacaxizeiro em diferentes tempos de exposição, na presença ou ausência da luz e em diferentes fases do ciclo de 24 horas (claro/escuro). Buscou-se averiguar qual NR estaria envolvida nessas respostas: a NR citossólica (NRc) ou de membrana plasmática (NRPM), assim como verificar o envolvimento do NO na sinalização pela baixa temperatura. O ritmo diário de atividade da NR também foi avaliado, logo após a exposição ao frio, em diferentes fases do ciclo de claro/escuro. As plantas foram expostas a 1, 3, 6 ou 9 horas a 10ºC ou 25ºC (controle) na luz ou no escuro. A NR foi avaliada pelo método in vitro. O estímulo positivo na atividade da NR pelo frio ocorreu principalmente após 6 horas no claro, para as folhas, e após 6 horas no escuro, para as raízes. Novas plantas foram submetidas às mesmas condições para o fracionamento celular, mostrando que, tanto em folhas como em raízes, o incremento de atividade da NR observado a 10ºC foi associado à NR citossólica (NRc). Em ambos os casos, o estímulo ocorreu utilizando-se o NADPH como doador de elétrons, sugerindo o possível envolvimento de uma isoforma NAD(P)H biespecífica. A quantificação do NO foi realizada por leitura em espectrofluorímetro, apontando uma maior emissão induzida pelo frio para as folhas tanto na presença da luz (após 1 e 3 horas) como em sua ausência (1 e 9 horas) e em raízes apenas no escuro (9 horas), sugerindo o envolvimento do NO na sinalização da baixa temperatura. Para verificar a influência do frio em diferentes fases do dia, 4 horários foram selecionados (início da fase clara, meio da fase clara, início da fase escura, meio da fase escura) para início de cada experimento. A NR foi medida logo após a exposição ao frio (6 horas a 10ºC), pelo método in vitro e durante 24 horas em reaquecimento (25ºC), quantificada a cada 3 horas pelo método in vivo. As raízes apresentaram aumento da atividade da NR apenas quando o estímulo da baixa temperatura foi aplicado na fase escura, enquanto as folhas sofreram incremento da atividade da NR independente da condição luminosa. Em reaquecimento, a NR das folhas teve seu ritmo atrasado em todas as situações, com exceção quando o frio foi aplicado no início da fase escura, na qual houve perda quase completa de variação ao longo do dia. As raízes não mostraram grandes alterações no ritmo diário da NR. Este trabalho mostrou que a temperatura de 10ºC tem efeitos diferentes sobre folhas e raízes, sendo que as modificações na atividade da NR, em curto prazo, parecem ocorrer por alterações na NRc. O NO parece estar envolvido na sinalização do frio, mas não se determinou sua origem biossintética. As raízes tiveram um aumento da atividade da NR pela baixa temperatura, que foi dependente do escuro, enquanto as respostas das folhas dependeram da fase do ciclo na qual foram submetidas a 10ºC / Nitrate is the main nitrogen source available to plants, and nitrate reductase (NR) is the enzyme responsible for its reduction to nitrite. Because of its toxicity in high concentrations, nitrite production by NR has a complex regulation, especially at transcriptional and post-translational level. A previous work from our group, using pineapple plants cultivated in vitro, showed that, under thermoperiod of 28ºC day/15ºC night, NR activity increased in roots during absence of light compared to activity in plants grown under constant temperature of 28ºC. Based on these results it was questioned what would be the effect of cold stimulus application with or without light on NR activity in leaves and roots of pineapple plants. This study aimed to investigate the effects of low temperature on NR activity in leaves and roots of pineapple plants at different exposure times in the presence or absence of light and at different phases of a 24 hour cycle (light/darkness). We also investigated which NR was involved in these responses: cytosolic (cNR) or plasma membrane NR (PMNR), as well as verifying the role of nitric oxide (NO) signaling at low temperature. Furthermore, the NR daily rhythm activity was measured after cold exposure, in different phases of the light/dark cycle. Plants were exposed to 10ºC or 25ºC (control group) during 1, 3, 6 or 9 hours. NR was quantified by in vitro method. In the leaves, the increase of NR activity by low temperature (10ºC) occurred mainly after 6 hours in the presence of light, while in the roots the highest NR activity occurred after 6 hours at 10ºC in darkness. Based on these results, other groups of plants were subjected to the same conditions for cell partitioning, showing that in both leaves and roots the increase of NR activity by cold was associated with cytosolic NR (NRc). In both cases, the positive stimulation occurred with NADPH as the electron donor, suggesting the possible involvement of a NAD(P)H bispecific isoform. NO quantification, measured by spectrofluorimetry, indicated a greater emission induced by cold in the leaves both in the presence (after 1 and 3 hours) and absence (1 and 9 hours) of light and in roots only in darkness (9 hours), suggesting an involvement of NO in low temperature signaling. To evaluate the influence of cold at different day phases, we performed 4 experiments beginning at different times of the 24-hour cycle (beginning of light phase, middle of light phase, beginning of dark phase, middle of dark phase). NR activity was measured immediately after cold exposure (6 hours at 10°C) by in vitro method and after rewarming at 25°C during 24 hours, quantified by in vivo method every 3 hours. In roots, NR activity showed an increase only when the cold stimulus was applied at dark phase, while in leaves, NR was independent of the light condition. Upon rewarming, leaves presented a delay in NR daily behavior in all situations, except when low temperature was applied at the beginning of dark phase, showing almost no variation throughout the day. This study demonstrated that the temperature of 10ºC affected leaves and roots differently, and the changes in NR activity after short exposure time could be associated with NRc. NO seemed to be involved in cold signaling, but its biosynthetic origin has not been determined yet. Roots showed an increment of NR activity by low temperature dependent of the dark condition, while the responses of leaves depended on the phase of the 24-hour cycle in which they were subjected to 10ºC

A nitrato redutase (NR) atua juntamente com a nitrito redutase (NiR) catalisando a primeira etapa da redução do nitrato. A NR, no citossol, é ativada, principalmente, pela luz e reduz o nitrato a nitrito. Em seguida, este é reduzido a amônio. Trabalhos anteriores demonstraram que a isoforma citossólica da NR está presente nas folhas e raízes do abacaxizeiro; já as associadas à membrana plasmática (NRMP) ainda não se tem registro. Sabe-se, no entanto, que a NRMP apresenta modos diferentes de ativação, como já constatados para outras espécies. Dentre os fatores que afetam sua atividade pode-se citar a temperatura. Pesquisas realizadas no Laboratório de Fisiologia Vegetal do IBUSP, acerca da influência do termoperíodo sobre os metabolismos nitrogenado e fotossintético de plantas de abacaxizeiro, aventaram a hipótese de que haveria uma nitrato redutase específica de membrana plasmática presente nas células radiculares, a qual seria regulada por termoperíodo, diferindo, portanto, da isoforma citossólica presente nas folhas. Assim, o presente trabalho teve como objetivo principal demonstrar a existência de uma isoforma da NR associada à membrana plasmática, a qual seria responsável pelo incremento da atividade dessa enzima registrada nas raízes de Ananas comosus, quando plantas cultivadas in vitro são submetidas ao termoperíodo (28°C dia/ 15°C noite). Para tanto, determinou-se o tempo mínimo de exposição das plantas de abacaxizeiro ao termoperíodo, necessário à indução da nitrato redutase radicular. Além disso, estudou-se a influência da idade das plantas na resposta ao tratamento com baixa temperatura noturna. Plantas cultivadas in vitro com 90 dias de idade ou com idades variadas foram transferidas para câmaras de crescimento com temperatura constante (28°C dia/noite controle experimental) ou com termoperíodo (28°C dia/ 15°C noite), fotoperíodo de 16 horas e intensidade luminosa de 55 moles m-2 s -1. Elas permaneceram nessas condições por 1, 3, 5, 7, 15, 30, 40, 50 ou 60 dias. Após cada período, a atividade in vivo da NR foi analisada durante a fase de ausência de luz. Para que fosse possível identificar uma possível NRMP nas células radiculares de abacaxizeiro, um método de ensaio in vitro foi padronizado e a melhor técnica de isolamento de frações de membrana plasmática foi selecionada. Após as plantas com 60 dias de idade serem submetidas por 30 dias ao tratamento termoperiódico ou à temperatura constante, as frações de membrana plasmática das células radiculares foram isoladas e o ensaio in vitro da NR foi realizado, utilizando-se NADH, NADPH ou succinato como doadores de elétrons. Os resultados indicaram que o tempo mínimo de exposição das plantas de abacaxizeiro ao termoperíodo foi de 30 dias. O método de ensaio enzimático in vitro foi padronizado para as plantas de abacaxizeiro e a técnica de isolamento de frações de membrana plasmática que se mostrou mais adequada para essa bromélia foi a de fracionamento por sistema de duas fases com Dextran T-500 e PEG 3350. O grau de pureza das frações, avaliado pela detecção da atividade da enzima citoplasmática malato desidrogenase (MDH), foi em média de 95%, evidenciando a eficácia da pradronização do método. Os resultados obtidos para as frações de membranas plasmáticas, extraídas das raízes das plantas que estiveram sob o tratamento termoperiódico, mostraram que a baixa temperatura noturna influenciou positivamente a atividade da nitrato redutase. O aumento da atividade foi observado quando NADH, NADPH ou succinato foram utilizados como doadores de elétrons. Isso significa que, provavelmente, mais de uma isoforma da NRMP está presente nas raízes de abacaxizeiro. Além disso, há indícios de que a isoforma que está ligada externamente à membrana por uma âncora glicosídica (que utiliza succinato como doador de elétrons) está presente nas células radiculares do abacaxizeiro e respondeu positivamente ao estímulo da baixa temperatura noturna. Em contrapartida, nenhuma diferença pôde ser observada quando as atividades da NR foram medidas nas frações de citoplasma das plantas controle e daquelas que foram tratadas com termoperíodo. Não foi detectada atividade nas frações citossólicas quando succinato foi oferecido como poder redutor da NR. Concluiu-se, portanto, que o incremento na atividade da NR, verificado nas plantas que foram tratadas com termoperíodo, deveu-se à indução pela baixa temperatura noturna da NRMP. Esta pesquisa trouxe contribuições importantes acerca da existência de uma nitrato redutase associada à membrana plasmática em abacaxizeiro, nunca antes detectada em uma bromélia e muito pouco estudada nos demais vegetais. As padronizações realizadas serão essenciais para aplicação em outras pesquisas do Laboratório de Fisiologia Vegetal do IBUSP, abrindo oportunidades para se aprofundar ainda mais o tema sobre o controle da ativação da NR. / The nitrate reductase (NR) acts together with the nitrite reductase (NiR) to catalyze the first step of the nitrate reduction. The NR localized in the cytosol is activated mainly by light and reduces nitrate to nitrite, followed by its reduction to ammonium. Previous work demonstrated that the cytosolic isoform of NR is present in leaves and roots of Ananas comosus, although the isoform associated with the plasma membrane (PM-NR) has not yet been registered in this species. The PM-NR has different modes of activation in comparison to the cytosolic NR, as already demonstrated in other species. Among the factors that affect its activity can be mentioned the temperature. Experiments developed in the Laboratory of Plant Physiology of IBUSP hypothesized that exists a specific plasma membrane NR in plant roots regulated by thermoperiod, differing from the cytosolic isoform present in leaves. The present work aimed to demonstrate the existence of this isoform of NR present in the plasma membrane, which would be responsible for the increase of its activity in Ananas comosus roots when plants were cultivated in vitro under thermoperiod of 28°C day/ 15°C night. Initially, it was important to determine the minimum time of exposure to thermoperiod necessary for the induction of nitrate reductase in roots of pineapple plants. Furthermore, it was analyzed the influence of age in the response of plants to low night temperature treatment. For this purpose, plants with different ages cultivated in vitro were transferred to growth chambers either with constant temperature (28°C day/night experimental control) or with thermoperiod (28°C day/ 15°C night). The plants were cultivated in these conditions during 1, 3, 5, 7, 15, 30, 40, 50 or 60 days and then the in vivo NR activity was analyzed in the shoot and root tissues during the dark period. In order to identify a probable PM-NR in the pineapple root cells, it was also necessary to develop a NR in vitro assay protocol specific for Ananas comosus and the appropriate technique for plasma membrane isolation (Dextran T-500 and PEG 3350). The purity of the fractions, determined by the activity of cytoplasmic enzyme malate dehydrogenase (MDH), was on average 95%, indicating the effectiveness of the method. The next step was to evaluate the NR activity in citoplasmic and plasma membrane fractions of root tissues of Ananas comosus. Using 60 daysold plants exposed either to 30 days under the thermoperiodic treatment or to constant temperature, the plasma membrane fractions of roots were isolated and the in vitro NR assay was performed using NADH, NADPH or succinate as electron donators. The results indicated that the minimum thermoperiod exposure time necessary to induce NR activity was 30 days. Furthermore, it was demonstrated that low temperatures during the dark period positively influenced the activity of nitrate reductase in plasma membrane fractions and that the increase in its activity was observed when NADH, NADPH or succinate were used as electron donors. On the other hand, no difference in NR activity was observed in the cytoplasmic fraction of control plants and those which were treated with thermoperiod. Moreover, no NR activity was detected in cytosolic fractions when succinate was provided as electron donor. All together, this results showed that probably diferents isoforms are presents in pineapple roots. The extracellular isoform that is attached to the plasma membrane by a lipophilic anchor (using succinate as electron donor) can be present in root cells of pineapple and responded positively to the low night temperature stimulus. This study has made important contributions to the knowledge of the metabolism and physiology of Ananas comosus. This is the first time that the existence of a nitrate reductase associated with the plasma membrane, a very little studied enzyme, is documented in Bromeliaceae.