Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2013. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2013-11-21T19:07:28Z No. of bitstreams: 1 2013_ClarissaCalaisRomez.pdf: 1504430 bytes, checksum: 4766ff473691c29620666cd2b96ea51b (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-11-25T11:14:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_ClarissaCalaisRomez.pdf: 1504430 bytes, checksum: 4766ff473691c29620666cd2b96ea51b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-25T11:14:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_ClarissaCalaisRomez.pdf: 1504430 bytes, checksum: 4766ff473691c29620666cd2b96ea51b (MD5) / Introdução: A literatura tem demonstrado que células diferenciadas, por exemplo, fibroblastos, podem, por meio de transfecção mediada por retrovírus, adquirir cópias extras de genes cuja expressão está associada à pluripotência e voltarem assim a um estado de indiferenciação, similar ao encontrado em células-tronco embrionárias. Entretanto, a transfecção de genes mediada por retrovírus tem potencial restrito para uso em terapias humanas, pois, além de ser de baixíssima eficiência, pode ocorrer a inserção de genes virais no genoma das células com pluripotência induzida por essa técnica. Nesse sentido, diversos estudos têm sido desenvolvidos de modo a reverter essas células diferenciadas a um estado similar ao embrionário sem utilizar a transfecção de genes. O restabelecimento da pluripotência de células diferenciadas poderia também ser induzido por alterações na expressão de genes envolvidos na pluripotência celular sem afetar a sequência do DNA, ou seja, por mecanismos epigenéticos, como a inibição por algumas substâncias da ação de enzimas que desacetilam histonas ou metilam o DNA. Dentre as substâncias capazes de inibir a ação de enzimas com atividade Histona Desacetilase, ou seja, favorecer a expressão gênica situa-se o butirato de sódio, um ácido graxo de cadeia curta. A inibição da metilação do DNA ocorre por meio da inibição da atividade de enzimas DNA metiltransferases (DNMTs). Uma das drogas que inibe a ação de DNMTs é a hidralazina, um potente vasodilatador arterial. Objetivo: O presente estudo se propôs a avaliar o efeito da hidralazina e do butirato de sódio na desdiferenciação de células de polpa dental hígida e inflamada. Métodos: Células de polpa dental hígida (PN) e inflamada (PI) foram analisadas quanto à sua viabilidade celular, ensaio MTT e coloração por azul de tripano, quanto à sua morfologia, microscopia de luz e citometria de fluxo, e quanto à sua expressão gênica, RT-qPCR, na presença ou não de butirato de sódio ou hidralazina. Resultados: Seis subculturas de polpa dental hígida e inflamada não tiveram sua viabilidade alterada quando tratadas com butirato de sódio (10 mM) e hidralazina (30 μM). O tratamento com butirato de sódio (10 mM) induziu alterações discretas na morfologia das células, como o aumento do tamanho e da granulosidade celular. Células tratadas com hidralazina não mostraram alterações quanto a sua morfologia com relação às células não tratadas. O tratamento com butirato de sódio (10 mM) não alterou a expressão relativa dos genes OCT-4 (PN-3; PI-1; PI-2; PI-3); colágeno tipo I (PN-1; PN-3; PI-2; PI-3). O tratamento com butirato de sódio diminuiu a expressão relativa dos genes OCT- 4 (PN-1; PN-2); colágeno tipo III (PN-1; PN-2; PN-3; PI-1; PI-2; PI-3); colágeno tipo I (PI-1) e aumentou a expressão relativa do gene colágeno tipo I (PN-2). O tratamento com hidralazina (30 μM) não alterou a expressão relativa dos genes OCT-4 (PN-2; PN-3; PI-1; PI- 2; PI-3); colágeno tipo I (PN-2; PN-3; PI-1; PI-2; PI-3); colágeno tipo III (PN-1; PN-2; PN-3; PI-1; PI-2; PI-3). O tratamento com hidralazina (30 μM) diminuiu a expressão relativa do gene OCTOCT-4-4 (PN-1); e aumentou a expressão relativa do gene colágeno tipo I (PN-1). Conclusão: O butirato de sódio e a hidralazina não induziram a desdiferenciação celular de células de polpa dental hígida e inflamada. _____________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introduction: The literature has demonstrated that differentiated cells, such as fibroblasts, may, by retrovirus-mediated transfection, gain extra copies of genes whose expression is associated with pluripotency and thus return to an undifferentiated state, similar to the state found in embryonic stem cells. However, the transfection of genes mediated by retrovirus has limited potential for use in human therapy, because, besides being very low efficiency, may occur the insert of viral genes into the genome of the cells with induced pluripotent by this technique. In this regard, various studies have been conducted in order to reverse these differentiated cells to an embryonic-like state without using the gene transfection. The restoration of pluripotency could be achived by changes in the expression of genes involved in cell pluripotency without affecting the DNA sequence, in other words, by epigenetic mechanisms, using certain substances that inhibit the action of histone deacetylases enzymes or DNA methyltransferase enzymes. Among the substances capable of inhibiting the action of enzymes with histone deacetylase activity, or promote gene expression is situated sodium butyrate, a fatty acid short-chain. Inhibition of DNA methylation occurs through inhibition of the enzyme DNA methyltransferase (DNMTs). A drug that inhibits the action of DNMTs is hydralazine, a potent arterial vasodilator. Objective: This study aims to analyze the effect of hydralazine and sodium butyrate on cell dedifferentiation of healthy and inflamed dental pulp cells. Methods: Cells from healthy (NP) and inflamed dental pulp (IP) were analyzed for cell viability, MTT assay and trypan blue staining, for cell morphology, light microscopy and flow cytometry, and gene expression, RT-qPCR, in the presence or absence of sodium butyrate or hydralazine. Results: Six subcultures of healthy and inflamed dental pulp did not have their viability altered when treated with sodium butyrate (10 mM) and hydralazine (30 μM). Treatment with sodium butyrate (10 mM) led to subtle changes in cell morphology, such as increased cell size and granularity. hydralazine treated cells showed no change in their morphology as compared to untreated cells. Treatment with sodium butyrate (10 mM) did not alter the relative expression of the genes OCT-4 (NP-3, IP-1, IP-2, IP-3); collagen type I (NP- 1, PN-3; PI-2, PI-3). Treatment with sodium butyrate decreased the relative expression of genes: OCT-4 (NP-1, NP-2), collagen III (NP-1, NP-2, NP-3, IP-1, IP-2, IP-3), collagen type I (IP-1) and increased the relative expression of collagen type I gene (NP-2). Treatment with hydralazine (30 mM) did not alter the relative expression of genes: Oct-4 (NP-2, NP-3, IP-1, IP-2, IP-3); collagen type I (NP-2, NP-3, IP-1, IP-2, IP-3), type III collagen (NP-1, NP-2, NPix 3, IP-1, IP-2, IP-3). Treatment with hydralazine (30 mM) decreased the relative expression of OCT-4 gene (NP-1) and increased the relative expression of type I collagen gene (NP-1). Conclusion: Sodium butyrate and hydralazine did not induce cellular dedifferentiation of cells from inflamed and healthy dental pulp.

Submitted by Etelvina Domingos (etelvina.domingos@ufpe.br) on 2015-04-08T19:47:51Z No. of bitstreams: 2 TESE Talita Ribeiro Tenório de França.pdf: 2159437 bytes, checksum: a09cf062950b6f3702406267ef2fb752 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T19:47:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Talita Ribeiro Tenório de França.pdf: 2159437 bytes, checksum: a09cf062950b6f3702406267ef2fb752 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / Introdução: Os principais fatores de risco locais para o desenvolvimento da osteonecrose associada ao uso bisfosfonatos (OABF) são a extração dentária e a presença de doença periodontal. Lesões periapicais crônicas são comuns na clínica odontológica, mas ainda não está totalmente esclarecido se a presença destas lesões pode ser um fator de risco para o desenvolvimento de OABF. O objetivo deste estudo foi determinar se lesões periapicais são fatores de risco para o desenvolvimento de osteonecrose em animais tratados com zolendronato. Métodos: Foram utilizados 40 ratos Wistar machos. Para induzir lesões periapicais, as polpas dos primeiros molares inferiores foram expostas usando uma broca esférica ½ acoplada a um motor de alta rotação. Em seguida, foram formados 8 grupos com 5 animais em cada um: G1- indução da lesão periapical (LP) e a administração intraperitoneal semanal (AIS) de solução salina (NaCl 0,9 %) durante 4 semanas; G2- indução LP e AIS de zolendronato (0,15 mg/kg/semana) durante 4 semanas; G3- indução da LP e AIS de solução salina por 8 semanas; G4- indução da LP e AIS de zolendronato por 8 semanas; G5- AIS de solução salina durante 4 semanas e posterior indução da LP; G6- AIS de zolendronato durante 4 semanas e posterior indução da LP; G7- AIS de solução salina durante 8 semanas e posterior indução da LP; G8- AIS de zolendronato durante 8 semanas e posterior indução da LP. Para mensurar o tamanho da LP foram realizadas tomografia computadorizada de feixe cônico (TCFC). Também foi realizada uma análise histomorfológica para determinar a intensidade do infiltrado inflamatório e a presença de necrose óssea. As análises estatísticas usadas foram o teste ANOVA e o Kruskal-Wallis. Resultados: Os grupos tratados com zolendronato mostraram tamanho da LP significativamente menor que o grupo tratado com NaCl 0,9% (p < 0,05). As lesões periapicais eram compostas por inflamação crônica variando de leve a moderada, sem diferença entre os grupos. Não foi observada necrose mandibular em todas as amostras analisadas. Conclusão: A presença de LP não representa um fator de risco importante para o desenvolvimento de OABF. Além disso, o tratamento com zolendronato não alterou a população de células de LP.

Orientador: Glaucia Maria Bovi Ambrosano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-26T02:52:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Duz_Sergio_M.pdf: 2921729 bytes, checksum: b07f79128c98890fe5a8788baa6ddd32 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Desde 1949, quando BARR e BERTRAM descobriram incidentalmente, ao examinarem os neurônios de gatos, que havia um grânulo heteropicnótico, cujos estudos posteriores levaram à descoberta de que o cromocentro era peculiar ao núcleo neural das remeas, vários estudos foram desenvolvidos para investigar a presença da cromatina sexual em outros animais e no homem. Esta descoberta tem sido de inegável importância para a clínica e a prática médica. Assim considerada, sua contribuição à Odontologia Legal não poderia ser menosprezada, visto que a identificação sexual é um O escopo da presente pesquisa foi o de procurar determinar, tópico relevante para essa Ciência. através de exames histológicos da polpa dentária em dentes íntegros e hígidos, de pacientes jovens com idade entre 10 e 30 anos de idade, a existência de uma diferenciação quantitativa e qualitativa significante de cromatina sexual em pessoas de ambos os sexos, de tal modo que fosse possível determinar o sexo pelo exame desse material. As pessoas das quais foram colhidas as polpas dentárias eram clinicamente saudáveis e, aparentemente, sem qualquer evidência para desvio sexual. Assim, foram examinadas 50 polpas dentárias de pessoas do sexo masculino e 50 polpas dentárias oriundas de pessoas do sexo feminino, retiradas de pré-molares e terceiros molares que, por indicação ortodôntica, foram submetidos à extração. Os cortes histológicos dessas polpas dentárias, depois de fixados, foram corados pela hematoxilina férrica de HENDENHAIN. Um número de 100 células foi contado em cada preparo, determinando-se a presença de fibroblastos que continham ou não a presença de cromatina sexual. Os resultados encontrados pennitiram concluir que é possível a determinação do sexo em seres humanos, através da frequência da incidência da cromatina sexual pelo exame microscópico de fibroblastos da polpa dentária, tomando-se mais um dado pericial a ser adicionado aos procedimentos de identificação do indivíduo / Abstract: In 1949, BARR and BERTRAM accidentally discovered the presence of heteropycnotic granules in neurones of cats. Further studies revealed that chromo center was peculiar to the neural nucleus of females. Since then, several studies were made to investigate the presence of sex chromatin in other animals and in human beings. Such findings have been of utmost importance to medical practice. The contribution of such investigations to Forensic Odontology should not be underestimated, given the relevance of sex identification to this Science. The present study had the scope of determining the existence of significant qualitative and quantitative differentiation in the sex chromatin in a sample of white male and female subjects. The ultimate objective was to determine sex through analysis of that material. Histological tests were performed in the dental pulp of 50 male subjects and 50 female subjects, of ages between 10 and 30. The subjects in this sample were in good medical condition, without any visible sign of sexual abnormality. The teeth ITom which the pulp was extracted were in perfect condition. The pulp was extracted ITom premolars and third molars removed after orthodontic evaluation. Histological samples of the pulps, after fixation, were stained with HERDENHAIN'S ferric hematoxylin. One hundred cells were counted in each slide. In these cells the presence or absence of sex chromatin in fibroblasts was determined. Results allow the conclusion that human sex determination is possible when the incidence of sex chromatin in fibroblasts of dental pulp is analyzed in the microscope / Mestrado / Mestre em Odontologia Legal e Deontologia

A idéia de se proteger e manter a vitalidade pulpar não é recente. Vários materiais têm sido preconizados com tal finalidade, no entanto, nenhum ainda pode ser considerado o material ideal, por este motivo compreende-se a importância e o interesse sempre crescente pela evolução dos estudos em torno deste assunto. Levando-se em consideração alguns relatos sobre a semelhança de composição química entre o agregado trióxido mineral (MTA) e o cimento de Portland, foi objetivo deste estudo desenvolver novas estratégias de tratamento na terapia da polpa vital, analisando o comportamento da polpa dentária de dentes de cão após pulpotomia e proteção direta do remanescente pulpar com o MTA Ângelus, ProRoot MTA, cimento Portland e cimento Portland branco. Foram utilizados 76 dentes, divididos de maneira aleatória para cada material. Após o período de 120 dias os animais foram sacrificados, os espécimes removidos e preparados para análise histológica para verificação do reparo do complexo dentino-pulpar. Os resultados obtidos demonstraram que os efeitos sobre o complexo dentino-pulpar após pulpotomia em dentes de cães e recobrimento pulpar com ProRoot MTA, MTA Angelus, cimento Portland e cimento Portland branco foram semelhantes entre si, permitindo a neoformação de tecido mineralizado e a manutenção da vitalidade do tecido conjuntivo pulpar subjacente. / The success of the pulpotomy is related to preserving vitality and function of the dental pulp after complete removal of its coronary portion and protection of the radicular pulp. Several materials have been used with such purpose, however, none of them present all physical, chemical and biologic properties desired, thus stimulating a search for alternative materials. Considering some reports about the similarity in composition of the mineral trioxide aggregate (MTA) and Portland cement, the purpose of this study was to develop new treatment strategies in vital pulp therapy, analyzing the behavior of the dental pulp of dog’s teeth after pulpotomy and direct protection of the radicular pulp with MTA Angelus, ProRoot MTA, Portland cement and white Portland cement. Seventy six teeth were divided ramdomly for each material. After a period of 120 days the animals were sacrificed, the samples were removed and prepared for histologic evaluation to verify reparation of the dentin-pulp complex. The results demonstrated that the effects on the dentin-pulp complex after pulpotomy and pulp protection with ProRoot MTA, MTA Angelus, Portland cement and white Portland cement in dog’s teeeth were very similar, allowing formation of mineralized tissue and preservation of the vitality of the pulpal connective tissue below.

Orientadores: Sérgio Roberto Peres Line, Alexandre Augusto Zaia / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-19T14:41:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Frozoni_MarcosRobertodosSantos_D.pdf: 22284992 bytes, checksum: f3df32a5434f64642e63697df5e27202 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Na polpa saudável, os odontoblastos pós-mitóticos responsáveis pela secreção de dentina primária e secundária sobrevivem durante a toda a vida do dente e são responsáveis pelas respostas às injúrias externas através da produção de dentina terciária focalmente abaixo do local da agressão. Os odontoblastos sobreviventes à injúria secretam uma matriz de dentina reacional, entretanto, os irreversivelmente danificados, são substituídos por uma segunda geração de células com as mesmas características morfofisiológicas. Estas células são derivadas do recrutamento, proliferação e diferenciação de células pulpares que possuam propriedades de células tronco, para formar uma nova matriz de dentina reparativa como parte do processo de reparo do complexo dentino pulpar. O mecanismo de reparo que segue após uma injúria dental é fundamental para a sobrevivência da polpa e envolve uma série de processos que precisam ser completamente esclarecidos mais precisamente a origem das células precursoras da nova geração de odontoblastos que irão secretar dentina reparativa. Embora evidências sugiram que esta nova geração de odontoblastos tenha origem de células do tecido conjuntivo pulpar, a exata origem destas células ainda não está completamente esclarecida. O objetivo deste estudo foi utilizar camundongos transgênicos que expressam green fluorecent protein (GFP) em todas as células do corpo, com exceção dos eritrócitos, e a técnica cirúrgica de parabiose para unir dois camundongos isogênicos, um GFP e outro não-GFP de maneira a formar um par parabiótico, que possa compartilhar a mesma circulação sanguínea cruzada (células marcadas do camundongo GFP passam para a corrente circulatória do camundongo não-GFP). Após a parabiose foi realizada uma exposição pulpar, devidamente capeada, nos molares dos camundongos não-GFP para estimular a produção de dentina terciária reparativa e conseqüentemente a diferenciação de novos odontoblastos. Os animais foram sacrificados e os molares dos camundongos não-GFP, processados para análise em microscopia de fluorescência. Foi observada a presença de células GFP (células verdes ao microscópio de fluorescência), originárias do sangue periférico (SP) de camundongos GFP, participando do processo de dentinogênese reparativa nos molares de camundongos não-GFP. Este estudo sugere a primeira evidência da participação de células troco mesenquimais do sangue periférico (CTM-SP) no processo de diferenciação de novos odontoblastos durante a dentinogênese reparativa / Abstract: In the healthy pulp, the post-mitotic odontoblasts responsible for secretion of primary and secondary dentin survives during the tooth life and are able to respond to injuries with the production of tertiary dentin focally beneath the site of the injury. If the odontoblast survives the injury it secrets a reactionary dentin matrix but if it is irreversibly damaged, it is replaced by a second generation of odontoblast-like cells, with the same morphophysiological profile. Those cells are derived from recruitment, proliferation, and differentiation of pulp cells, which can have stem cell properties to form a new reparative dentin matrix as part of repair process in the dentin-pulp organ. The repair mechanism that follows a tooth injury is critical to the pulp survival and involves a series of processes that need to be completely understood more precisely the origin of the odontoblast-like cells that will secrete reparative dentin. Although evidences suggesting that odontoblast-like cells originate from cells within dental pulp connective tissue the exact origin of these odontoblast-like cells is not clearly defined. The aim of this study was to use transgenic mice expressing green fluorescent protein (GFP) in all body cells except erythrocytes and parabiosis surgical technique for joining two inbred mice, a GFP and other non-GFP to form one parabiotic pair, who can share the same cross-circulation (labeled cells from GFP mice move into the bloodstream of non-GFP mice After parabiosis a pulp exposure, properly capped, was performed on the molar of the recipient non-GFP mice to stimulate the production of tertiary reparative dentin and hence differentiation of odontoblastlike cells. The animals were sacrificed and the molars of the non-GFP mice processed for fluorescence microscopy. It was observed the presence of GFP cells (green cells to the fluorescence microscope), originating from peripheral blood (PB) from GFP mice, participating in the reparative dentinogenesis process in the molars of non-GFP mice. This study suggests the first evidence of the participation of mesenchymal stem cells from PB (MSC-PB) in the differentiation process of odontoblast-like cells during reparative dentinogenesis / Doutorado / Endodontia / Doutor em Clínica Odontológica

Orientador: Rogério de Castilho Jacinto / Banca: João Eduardo Gomes Filho / Banca: Paulo Carvalho Tobias Duarte / Resumo: Este estudo teve como objetivo comparar quantitativamente a diferença de expressão proteica na progressão da patogênese pulpar, bem como correlacionar as funções biológicas das proteínas identificadas no tecido pulpar normal, inflamado ou necrótico. As amostras foram obtidas de pacientes atendidos na Clínica Endodôntica da Faculdade de Odontologia de Araçatuba para tratamento endodôntico, sendo divididos em três grupos: grupo de polpa normal, com amostras do tecido pulpar obtidas a partir de dentes extraídos por indicação ortodôntica (n = 2); grupo de polpa inflamada, com amostras obtidas de pacientes com diagnóstico de pulpite irreversível (n = 2) e grupo de polpa necrótica, cujas amostras foram obtidas de pacientes com diagnóstico de periodontite apical crônica (n = 2). Após o preparo proteômico prévio, as amostras de polpa dentária foram processadas para análise proteômica quantitativa livre de marcadores em um sistema nanoACQUITY UPLC-Xevo QTof MS. A diferença na expressão entre os grupos de polpa normal e inflamada e grupos de polpa inflamada e necrótica foi calculada com o software Protein Lynx Global Service, usando o algoritmo Monte-Carlo, e expressa como p <0,05 para proteínas presentes em menor abundância e 1-p> 0,95 para proteínas presentes em maior abundância. Um total de 465 proteínas humanas foram identificadas em todos os grupos. Nos grupos normal, inflamado e necrótico, foram encontradas 241, 240 e 124 proteínas, respectivamente. Na análise quantitativa, as pr... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to quantitatively compare the difference in protein expression in the progression of pulp pathogenesis, as well as to correlate the biological functions of proteins identified in normal, inflamed or necrotic pulp tissue. The samples were obtained from patients treated at the Endodontic Clinic of the Araçatuba Dental School for endodontic treatment, and were divided into three groups: normal pulp group with pulp tissue samples obtained from orthodontic teeth (n = 2) ; inflamed pulp group, whose samples were obtained from patients diagnosed with irreversible pulpitis (n = 2) and necrotic pulp group, whose samples were obtained from patients diagnosed with chronic apical periodontitis (n = 2). After previous proteomic preparation, dental pulp samples were processed for label-free quantitative proteomic analysis in a nanoACQUITY UPLC-Xevo QTof MS system. The difference in expression between the normal and inflamed pulp groups and groups of inflamed and necrotic pulp was calculated using the Protein Lynx Global Service software using the Monte Carlo algorithm and expressed as p <0.05 for proteins present in lower abundance and 1-p> 0.95 for proteins present in greater abundance. A total of 465 human proteins were identified in all groups. In the normal, inflamed and necrotic groups, 241, 240 and 124 proteins were found, respectively. In the quantitative analysis, the most expressed proteins were hemoglobin, peroxiredoxins and immunoglobulins, whereas the less expressed were the tubulins in the inflamed pulp group in relation to the normal pulp group. Expression of albumins, immunoglobulins and alpha-2-macroglobulin were increased in the necrotic pulp group when compared to normal pulp, whereas hemoglobin and actin were less expressed. As for the qualitative analysis, the proteins identified in the normal... (Complete abstract electronic access below) / Mestre

As proteínas são importantes componentes da matriz extracelular da polpa dentária e possuem diferentes funções nos tecidos. A literatura odontológica não relata como os proteoglicanos se distribuem e agem na matriz extracelular de dentes decíduos durante o processo fisiológico de rizólise. Foi objetivo do trabalho analisar as expressões dos proteoglicanos biglican e decorin e relacioná-las com as diversas fases do processo de rizólise. Para isso foram utilizados dentes decíduos humanos extraídos e livres de lesões de cárie, apresentando vários estágios de reabsorção radicular, divididos em três grupos: com dois terços ou mais do comprimento radicular médio, um terço ou mais do comprimento radicular médio e menos de um terço do comprimento radicular médio. Foi utilizada a técnica da imunoistoquímica, com o método da estreptavidina-biotina-peroxidase, e anticorpos contra as proteínas anteriormente citadas. Os resultados mostraram que os proteoglicanos estudados apresentaram imunorreatividade na matriz extracelular da polpa e da dentina dos dentes nas três fases de reabsorção. Foi possível concluir que houve diferença na distribuição e no padrão de expressão dos proteoglicanos biglican e decorin apenas na área de reabsorção, nos dentes decíduos hígidos nas três fases de rizólise o que sugere um papel regulador destes proteoglicanos no processo de reabsorção fisiológica nos dentes decíduos hígidos. / Proteins are important components in pulp extracellular matrix and perform several different roles in the body tissues. The distribution and functions of some proteins have already been described but there aren?t studies showing how the proteoglycans are distributed and act in the extracellular matrix of deciduous teeth at the physiological resorption process. The aim of the present work was to study the expression and distribution of the following non-collagenous components of the extracellular matrix: biglycan and decorin in deciduous teeth dental tissues at the physiological root resorption. Hygid human deciduous teeth that were extracted for orthodontic reasons were grouped together according to root length: group I - two thirds or more of average length root, group II - one third or more of average length root and group III ? less than one third of average length root. The streptavidin-biotinperoxidase method of immunohistochemistry was used with antibodies against the antigens previously quoted. The results showed that the proteoglycans had been found in pulp and dentin extracellular matrix in all groups. In conclusion, biglycan and decorin were differentially found only in the resorption area, between tissues in resorption process and its adjacent zone, which make us believe that these proteoglycans act regulating the physiological resorption process in hygid deciduous teeth.

O objetivo deste estudo foi avaliar histologicamente a reação inflamatória do tecido pulpar de molares de ratos após pulpotomia com MTA branco e Sulfato Férrico à 15,5%, nos períodos de 24, 48 e 72 horas e a resposta clínica, radiográfica e histológica do complexo dentino-pulpar de dentes decíduos humanos até 18 meses da realização de pulpotomias com os mesmos agentes capeadores. Foram utilizados 26 ratos Wistar, distribuídos aleatoriamente em 2 grupos (MTA e Sulfato Férrico) e divididos em 3 subgrupos, conforme o tempo experimental (24, 48 e 72 horas). Os dentes foram preparados e posteriormente corados com Hematoxilina e Eosina (HE) para realização da análise histológica. Todos os dentes avaliados mantiveram vitalidade pulpar no remanescente radicular. Em ambos os grupos observou-se a presença de vasos sanguíneos hiperêmicos e neutrófilos em concentrações variadas, caracterizando diferentes graus de inflamação no terço cervical da polpa radicular. O infiltrado inflamatório foi maior no período de 24 horas, havendo uma regressão no período de 48 e 72 horas após o tratamento. Para o estudo em humanos, 31 molares decíduos inferiores ou superiores de 19 crianças com idades entre 6 e 9 anos de idade foram selecionados, distribuídos randomicamente em dois grupos (MTA e Sulfato Férrico) e avaliados clínica e radiograficamente nos períodos de 3, 6, 12 e 18 meses. Os dentes que estavam no período de esfoliação foram extraídos e preparados e corados para análise histológica. Todos os dentes tratados com MTA apresentaram sucesso clínico e radiográfico ao longo do período experimental. Um dente tratado com Sulfato Férrico apresentou lesão interradicular aos 18 meses. Nenhum dente mostrou sinais de mobilidade, fístula, inflamação ou inchaço nos tecidos gengivais. Histologicamente, os dentes tratados com MTA apresentaram formação de barreira dentinária e tecido conjuntivo subjacente com características de normalidade. Alguns dentes tratados com Sulfato Férrico apresentaram necrose tecidual, inflamação crônica e estenose radicular; outros apresentaram um tecido conjuntivo sadio e estenose radicular. Com base nos resultados deste estudo podemos concluir que ambos os materiais foram eficazes para pulpotomias em dentes decíduos e a reação inflamatória gerada foi similar e regrediu com o passar do tempo em molares de ratos. / The purpose of the present study was to evaluate histologically the inflammatory reaction of rat molar pulp tissue after pulpotomy performed with white MTA and 15.5% Ferric Sulfate, at 24, 48 and 72 hours, as well as the clinic, radiographic and histological response of the dentin-pulp complex of human primary molars until 18 months after pulpotomy with the same capping agents. Twenty six Wistar rats were used, randomly distributed into 2 groups (MTA and Ferric Sulfate) and divided into 3 subgroups, according to the experimental period (24, 48 and 72 hours). The teeth were prepared and subsequently stained with hematoxylin and eosin (HE) to perform histological analysis. All the teeth evaluated preserved the vitality of the remaining radicular pulp. Hyperemic blood vessels and variable concentrations of neutrophils were observed in both groups, which characterized different levels of inflammation in the cervical third of the radicular pulp. Larger inflammatory infiltrate was detected at 24 hours, which decreased after 48 and 72 hours. For the human study, 31 lower or upper primary molars from 19 children aging between 6 and 9 years old were selected, randomly distributed into two groups (MTA and Ferric Sulfate) and clinically and radiographically evaluated at 3, 6, 12 and 18 months. The teeth at the exfoliation period underwent surgical removal and were prepared and stained for histology. All of the teeth treated with MTA presented clinical and radiographic success over the experimental period. One tooth treated with Ferric Sulfate presented interradicular lesion at 18 months. None of the teeth had mobility, fistula, inflammation or swelling in the gingival tissue. Histologically, the teeth treated with MTA presented dentin barrier formation and subjacent connective tissue with normal features. Some teeth treated with Ferric Sulfate had tissue necrosis, chronic inflammation and radicular stenosis; other teeth presented normal connective tissue and radicular stenosis. Taken together, our results allow us to conclude that both materials were effective for pulpotomy of primary teeth and caused similar inflammatory reaction, decreasing over time in rat molars. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Avaliou-se a proliferação das células tronco da polpa de dentes decíduos esfoliados humanos (SHED) após aplicação única do laser de baixa potência. Foi realizada a análise da viabilidade das SHED cultivadas sob déficit nutricional e em condições ideais após irradiação com o laser de baixa potência vermelho de Indio Gálio Alumínio e Fósforo - InGaAlP (660nm, 40mW e 10J/cm2) e infravermelho (780nm, 40mW e 10J/cm2) durante 4 e 8 segundos, nos períodos de 24, 48 e 72 horas através dos ensaios de redução do MTT e do ensaio colorimétrico de Busatti e Gomes. Para análise estatística utilizou-se o teste ANOVA complementado pelo teste de Tukey com nível de significância de 5% (p< 0,05). Observou-se tanto com o MTT quanto com o ensaio colorimétrico de Busatti e Gomes uma tendência de aumento da proliferação celular diretamente relacionada à dose do LBP, estatisticamente significante nos períodos de 24, 48 e 72 horas. Ao analisar os resultados e considerando os parâmetros utilizados e o protocolo de LBP, pode-se concluir que o LBP promoveu a proliferação das SHED tanto a 660 nm quanto a 780nm, pode influenciar a viabilidade e a proliferação das SHED nas doses e comprimentos de onda utilizados e os ensaios do MTT e colorimétrico de Busati e Gomes demonstraram dentro de suas limitações ser eficientes para determinar a viabilidade e proliferação das SHED. / It was evaluated the proliferation of stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED) after a single application of low power laser. The viability of SHED grown under ideal conditions and under nutritional deficit after irradiation with red laser (660/780nm, 10J/cm2 and 40mW) during periods of 4 and 8 seconds was analyzed through the MTT reduction assays and rapid colorimetric assay of Busatti and Gomes. Statistical analysis was performed using the ANOVA and Tukey´s multiple comparisons test with a significance level of 5% (p < 0.05). It was observed with the MTT assay and Busatti and Gomes assay a trend of cell proliferation increase directly releated to the irradiation dose, statistically significant. After 24, 48 and 72 hours, all the groups showed higher cell proliferation when compared to control. Analyzing the results and considering the used parameters and LBP protocol, it can be concluded that LBP promoted the proliferation of SHED both 660nm and 780nm according to the dosage and wavelengths used, and MTT assay and colorimetric Busatti and Gomes demonstrated within their limitations to be effective in determining the viability and proliferation of SHED.

Orientadora: Cristiane Duque / Banca: Ana Claudia Okamoto / Banca: Vivien Thiemy Sakai / Resumo: Terapias biológicas tem buscado novas substâncias/protocolos que promovam a eliminação microbiana e induzam ou estimulem a regeneração pulpa r e o desenvolvimento completo radicular d e dente s permanente s jove ns com processos patológicos pulpares. Os objetivos do estudo foram avaliar a a tividade antimicrobiana /antibiofilme de algumas combinações de antibióticos sobre microrganismos de interesse endodôntico e analisar o efeito da combinação de antibióticos com melhor ação antimicrobiana associada à sinvastatina na expressão de marcadores o dontoblásticos em células da polpa dental humana (CPDH) . A atividade antimicrobiana dos seguintes antibióticos : Metronidazol (ME), C iprofloxacina (CI), Minociclina (MI), Doxicilina (DO) e F osfomicina (FO), isolados ou em combinação dupla (ME+CI, ME+MI, ME+DO, ME+FO, CI+MI, CI+DO, CI+FO, DO+FO, MI+FO) ou tripla (ME+CI+MI, ME+CI+FO, ME+MI+FO, ME+CI+DO, ME+DO+FO, CI+DO+FO, CI+MI+FO) foram testados contra Streptococcus mutans, Enterococcus faecalis, Actinomyces israelii e Candida albicans em condições planctônicas. Biofilmes mono - espécie de E. faecalis e biofilmes em dual - espécies de E. faecalis and C. albicans fora m prepara dos em bloc os de dentina para testar a atividade anti biofilme das combinações de antibióticos com os melhores result ados microbiológicos. O efeito antibiofilme das combinações antibióticas sobre biofilme de E. faecalis dentro dos túbulos dentinários foi também avaliada por microscopia confocal. Culturas de CPDH foram expostas à combinação antibiótica com melhor resultad o microbiol ógico e sinvastatina e determinada a viabilidade celular, atividade da f osfatase alcalina (ALP), deposição de nódulos de mineralização e expressão de DSPP (sialofosfoproteína dentinária), importante marcador odontoblástico... / Abstract: Biological therapies have searching for substances/protocols, which promote microbial elimination and induce or sti mulate pulp regeneration and completion of apical root development in young perm anent teeth wi th pulp pa thological processes . The objective s of this study were to evaluate the anti microbial /anti - biofilm activity of some antibiotics combinations on endodontic microorgan isms and the effect of the combina tion of anti biotics with the best anti microbial action associated with simvastatin on expression of odontoblast markers by human dental pulp cells (HDPC) . The antimicrobial activity of the following antibiotics : Metronidazole ( ME ), Ciprofloxacin ( CI), Minocycline (MI), Doxycycline (DO) and Fosfomycin ( FO), either alone or in double (ME+CI, ME+MI, ME+DO, ME+FO, CI+MI, CI+DO, CI+FO, DO+FO, MI+FO) or triple combinations (ME+CI+MI, ME+CI+FO, ME+MI+FO, ME+CI+DO, ME+DO+FO, CI+DO+FO, CI+MI+FO ) were tested against Streptococcus mutans, Enterococcus faecalis, Actinomyces israelii and Candida albicans in planktonic conditions . Mono - species biofilm of E. faecalis and dual - species biofilms of E. faecalis and C. albicans were prepared in dentin blocks to test the anti - biofilm activity of antibiotic combi nations with the best microbiolo gical results . Antibiofilm effect of antibiotic combination on E. faecalis biofilm inside dentin tubules was also evaluated by confocal microscopy . Culture s of HDPC were exposed to the antibiotic combination with the best antimicrobial effect and simvastatin and determined cell viability, alkaline phosphatase activity, deposition of mineralization nodules and expression of Dspp (dentin sialophosphoprotein), important odontoblast markers of dentin mineralization. Data were analyzed statistically, considering p<0.05 . All antibiotic combina tions reduced statistically the growth of bacteria... / Mestre