Thesis (M. Sc.)--Université Laval, 1999. / eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references.

Thesis (Ph. D.)--University of Washington, 1998. / eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references.

Thesis (M. Sc.)--Université Laval, 1999. / eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references.

Thesis (Ph. D.)--University of Washington, 1998. / Includes bibliographical references.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento / Introducción: La periodontitis crónica es una infección de naturaleza episódica y sitio específica, en donde distintos modelos de progresión en la pérdida de inserción se han descrito para explicar la ocurrencia de la enfermedad. La importancia de determinar el momento exacto en que la destrucción ocurre e identificar los componentes asociados con la progresión, es sin duda la meta de muchos investigadores. El objetivo de este estudio es identificar y cuantificar Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis y Tannerella forsythia en pacientes con actividad en la pérdida de inserción (sitios activos e inactivos) en periodontitis crónica. Material y métodos: Fueron seleccionados 37 pacientes con periodontitis crónica progresiva. La progresión de la periodontitis fue determinada mediante el método de la tolerancia. Los pacientes fueron monitoreados a intervalos de 2 meses hasta que al menos 2 sitios exhibieran ≥ 2mm de pérdida de inserción. En aquellos sitios que demostraban progresión se tomó una muestra microbiológica con cono de papel (sitio activo). Se seleccionó como control un sitio con las mismas características clínicas que las que presenta el sitio activo, pero que no evidencia pérdida de inserción en los meses de seguimiento (sitio inactivo). Mediante cultivo y PCR, se determinaron los niveles y presencia de A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis y T. forsythia respectivamente, en sitios activos e inactivos de cada sujeto. El análisis estadístico fue realizado usando el programa computacional STATA versión 10. Resultados: No hubo diferencias significativas en la distribución de presencia entre sitios activos y controles para ninguno de estos tres patógenos (p  0.05). Sin embargo, la frecuencia de P. gingivalis en asociación principalmente con T. forsythia, aumenta en sitios activos en comparación con sitios inactivos (p  0.05), en donde predomina P. gingivalis sola. Por otro lado, altos niveles de P. gingivalis fueron encontrados en sitios activos (p  0.05) versus sitios inactivos. La diferencia en los niveles de T. forsythia y A. actinomycetemcomitans entre sitios activos e inactivos no fue significativa (p  0.05). Conclusiones: La detección de estas bacterias periodontopatógenas en sitios activos e inactivos y sus distintas asociaciones, podrían contribuir a explicar parcialmente el mecanismo mediante el cual se produce la destrucción tisular.

Periodontitis affects 10 to 15 percent of most adult populations and can contribute to numerous systemic diseases. Porphyromonas gingivalis, a gram-negative anaerobic bacterium, is a recognized prime causative agent in periodontitis. Studies have shown a number of small non-coding RNAs (sRNAs) have been related to bacterial virulence. Many of these sRNAs require the facilitation of the bacterial Sm-like protein, Hfq, for optimum function. Hfq is a RNA chaperone involved in RNA stability, sRNA function, and polyadenylation. Mutants lacking in Hfq often show pleiotropic phenotypes, although the extent and severity of hfq null phenotypes is often species-specific. Hfq has been encoded by nearly half of eubacteria, including pathogens. Based on a standard BLAST search, hfq has not been detected in P. gingivalis. It is highly likely, however, that the bacterium possesses an Hfq homologue due to its importance as an overall RNA cofactor. The P. gingivalis hypothetical protein, PG0228, possesses the Sm-like protein motif, thus we believe it is an excellent Hfq candidate. Our goal was to characterize PG0228 so we can gain a better insight into the function of this hypothetical protein and determine if it indeed behaves like Hfq. Microarray analysis, growth studies, and a survival study were done on a Δ0228 mutant to determine the biological role of the protein encoded by PG0228. PG0228 was also tagged in vivo in order to determine if the protein binds to RNA. Our results show P. gingivalis deficient in PG0228 show significant similarities to other bacterium deficient in hfq. The Δ0228 strain showed significant sensitivity to host defense mechanisms and an overall gene regulation in 15% of the genome. In addition, the mutant is viable but produces a lower final cell density. Thus, we believe PG0228 is an excellent Hfq candidate, and suggest further studies will show PG0228 is an Hfq homologue.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento / ntroducción: La periodontitis crónica es una enfermedad inflamatoria iniciada por patógenos específicos como Porphyromonas gingivalis (Pg), que activan la respuesta inmune del hospedero. IL-17 es una citoquina pro-inflamatoria asociada con la destrucción periodontal, TGF-β1, es una citoquina asociada a la regulación de la respuesta inmune. El objetivo de este estudio fue evaluar la síntesis de IL-17 y TGF-β1 en tejido gingival inflamado estimulado con Pg. Materiales y métodos: Se seleccionaron 10 sujetos con diagnóstico de periodontitis crónica, de acuerdo a estrictos criterios de inclusión y exclusión. Se identificó el sitio periodontalmente más afectado en cada individuo y se tomó una muestra de placa subgingival; se realizó un cultivo microbiológico y se contaron las unidades formadoras de colonias (UFC/ml) de bacterias pigmentadas de negro (BPN). Se recolectó una biopsia de tejido gingival (del mismo diente de donde se tomó la muestra microbiológica), esta fue seccionada en fragmentos de 1mm aproximadamente, luego el total de la muestra se dividió en tres partes. Una parte fue estimulada con Pg ATCC 33277 por 24 horas, la cantidad de Pg utilizada para estimular se calculó basada en las UFC/ml de BPN obtenidas anteriormente. Otra parte se estimuló con Fitohemaglutinina como control positivo y la parte restante se dejó sin estímulo. Se determinaron los niveles de IL-17 y TGF-β1 mediante ELISA. Los niveles de cada citoquina en tejido estimulado con Pg y sin estimular se compararon mediante t-test no pareado, considerando un p < 0,05 como estadísticamente significativo Resultados: Se detectó IL-17 y TGF-β1 en todas las muestras de tejido gingival de los individuos en el estudio. Los niveles de IL-17 fueron mayores en el tejido estimulado con Pg (0,28±0,10 pg/mg) respecto al tejido sin estímulo (0,17±0,07 pg/mg) al normalizar los valores por peso de tejido (p=0,014). Al normalizar los valores por cantidad de proteínas en el tejido, los niveles de IL-17 estaban aumentados en tejido estimulado con Pg (0,012±0,007 pg/µg) respecto al tejido sin estimular (0,017±0,006 pg/µg) (p=0,053). Los niveles de TGF-β1 fueron mayores en el tejido estimulado con Pg (0,25±0,12 pg/mg) respecto al tejido sin estímulo 3 3 (0,12±0,07 pg/mg) al normalizar los valores por peso (p=0,017). Al normalizar por cantidad de proteínas en el tejido, los niveles de TGF-β1 estaban aumentados en tejido estimulado con Pg (0,019 pg/µg) respecto al tejido sin estimular (0,012±0,009 pg/µg) (p=0,035). Conclusiones: IL-17 y TGF-β1 están presentes en el tejido gingival de individuos con periodontitis crónica. Pg induce un aumento en los niveles de IL-17 y TGF-β1 en tejido gingival de pacientes con periodontitis crónica.

BIOCHEMICAL ANALYSIS OF PUTATIVE RNA-BINDING PROTEINS IN PORPHYROMONAS GINGIVALIS By Jacob Mirpanah Bachelor of Arts in Biology, University of Virginia, 2015 A thesis submitted in partial fulfillment of the requirements for the degree of Master of Science in Physiology and Biophysics at Virginia Commonwealth University Virginia Commonwealth University, 2018 Major Director: Janina P. Lewis, Ph.D., Philips Institute for Oral Health Research RNA-Binding Proteins (RBPs) play important regulatory roles in countless cellular processes. Often via the induction of a structural change in RNA’s secondary structure, RBPs are known to modulate protein expression through post-transcriptional regulation. In Escherichia coli, such RBPs have been thoroughly studied and shown to display differential expression throughout the bacterial life cycle; suggesting their importance in prompting different events in the bacterial cell. Further, RNA- and DNA-recognition domains have been characterized in proteins Hub as well as RBP in E.coli and their nucleic acid ligands sequenced. It was our aim to extend this level of information to Hub and RBP as they exist in a main etiological agent in periodontal disease; Porphyromonas gingivalis. Using quantitative PCR expression analysis, we saw a general upregulation of both proteins in the logarithmic phase as compared to the stationary phase. This upregulation was most pronounced in PG0627, the putative analog of E. coli RBP in P. gingivalis. Further, Electrophoretic Mobility Shift Assays suggest sequence specific interaction of PG0627 to RNA. Uninhibited and Inhibited mobility assays seem to confirm that PG0627 binds with great specificity to a conserved RNA sequence. Quantitative measure of interaction came in the form of fluorescence anisotropy, which produced a Dissociation Constant (Kd) of approximately 53 nM; suggesting a high degree of affinity. Lastly, a mutant was generated in order to produce high quality RNA libraries to be sequenced through the Illumina MiSeq system. Sequencing data is still incoming.

Thesis (Ph. D.)--Virginia Commonwealth University, 2007. / Prepared for: Dept. of Microbiology and Immunology. Bibliography: leaves 182 - 209. Also available online via the Internet.

RODRIGUES, Richelle Soares. Prevalência de Porphyromonas gingivalis, genótipo fima II de Porphyromonas gingivalis e Aggregatibacter actinomycetemcomitans em indivíduos com periodontite agressiva generalizada. 2014. 44 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-04-04T13:13:32Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_rsrodrigues.pdf: 909297 bytes, checksum: 47ad16e66062d057016963a13334a1f2 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-04-04T13:16:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_rsrodrigues.pdf: 909297 bytes, checksum: 47ad16e66062d057016963a13334a1f2 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-04T13:16:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_rsrodrigues.pdf: 909297 bytes, checksum: 47ad16e66062d057016963a13334a1f2 (MD5) Previous issue date: 2014 / Porphyromonas gingivalis and Aggregatibacter actinomycetemcomitans are periodontal pathogens associated with aggressive periodontitis. The fimbriae, a structure related to adhesion and invasion of cells, is one of the major virulence factors of P. gingivalis. Based on the nucleotide sequence, six genotypes(fimA) encoding the major fimbriae of these bacteria were identified, and the fimA II is the most commonly associated with periodontal destruction. The objective of this study was to evaluate, by polymerase chain reaction in subgingival plaque samples from sites with highest probing depth in patients with aggressive periodontitis, the prevalence of P. gingivalis, P. gingivalis genotype fimA II and A. actinomycetemcomitans, and relate the presence of these pathogens or genotype to age and clinical periodontal parameters (plaque index, gingival bleeding index, probing depth and clinical attachment level) in these patients. We selected 45 patients with generalized aggressive periodontitis, aged from 15 to 40 years. 64.4% of these patients harbored P. gingivalis and 28.8% harbored A. actinomycetemcomitans in their subgingival microbiota. In patients positive for P. gingivalis, 82.6 % presented the genotype fimA II. In relation to the presence or absence of bacteria or gene to clinical data and age, a statistically significant difference between clinical attachment level was observed in the selected sites of patients with the presence of P. gingivalis and its genotype fimA II when compared to patients negative for these bacteria and genotype, with periodontal loss significantly higher in patients harboring P. gingivalis and in patients harboring genotype fimA II. In addition, the average age in patients positives for P. gingivalis was significantly higher than in negative ones. It is therefore concluded that P. gingivalis and its genotype fimA II are present in high prevalence in patients with aggressive periodontitis, A. actinomycetemcomitans is present in a smaller proportion of individuals in the studied population and P. gingivalis seems to be more commonly found in deeper sites and older individuals. / Porphyromonas gingivalis e Aggregatibacter actinomycetemcomitans são periodontopatógenos associados à periodontite agressiva. A fímbria, uma estrutura relacionada à adesão e à invasão de células, é um dos principais fatores de virulência de P. gingivalis. Baseado na sequência de nucleotídeos, seis genótipos(fimA) que codificam a fímbria principal dessas bactérias foram identificados, sendo o fimA II mais comumente relacionado à destruição periodontal. O objetivo deste trabalho foi avaliar, por meio de reação em cadeia da polimerase em amostras de placa subgengival dos sítios com maior profundidade de sondagem de pacientes com periodontite agressiva, a prevalência de P. gingivalis, do genótipo fimA II de P. gingivalis e de A. actinomycetemcomitans, assim como relacionar a presença desses patógenos ou genótipo à idade e aos parâmetros clínicos periodontais (índice de placa, índice de sangramento gengival, profundidade de sondagem e nível de inserção) encontrados nesses pacientes. Foram selecionados 45 pacientes com periodontite agressiva generalizada, com idade entre 15 e 40 anos. Nessa população, 64,4% apresentaram P. gingivalis e 28,8% apresentaram A. actinomycetemcomitans em sua microbiota subgengival. Dos pacientes positivos para P. gingivalis, 82,6% apresentaram o genótipo fimA II. Ao se relacionar a presença ou ausência das bactérias ou genótipo aos dados clínicos e idade, foi observada diferença estatisticamente significante entre o nível clínico de inserção do sítio coletado de pacientes com presença de P. gingivalis e seu genótipo fimA II quando comparados aos pacientes negativos para essa bactéria e genótipo, sendo a perda de inserção significativamente maior em pacientes que apresentaram P. gingivalis e em paciente com seu genótipo fimA II. Além disso, foi encontrada média de idade significativamente mais elevada em pacientes positivos para P. gingivalis que em pacientes negativos para essa bactéria. Concluiu-se, assim, que P. gingivalis e seu genótipo fimA tipo II estão presentes em alta prevalência em pacientes com periodontite agressiva, que A. actinomycetemcomitans está presente em menor proporção de indivíduos na população estudada e que P. gingivalis parece ser mais comumente encontrada em bolsas mais profundas e em indivíduos mais velhos.