Biofilme subgengival, conteúdo vaginal, âmnio e parênquima placentários foram obtidos de 93 puérperas. Os periodontopatógenos (BPPG) P.g., A.a, F.n e T.f foram identificadas por PCR, corioamnionite e vilosite por histopatologia e analisados estatisticamente. Roturas de membranas (22,2%), cesáreas (65,6%), pretermo (36,6%), baixo peso (34,4%), morte perinatal (5,4%), CAM (34,4%) e vilosite (5,5%) foram observados. Periodontite agressiva (62,4%) e cáries (83,9%). Periodontite ou BPPG em qualquer sitio não se associou com maior freqüência ou com maior risco de corioamnionite ou de desfecho reprodutivo ruim. No biofilme observou-se Aa em 2 (2,1%), Fn em 16 (17,20%), Pg em 30 (32,30%) e Tf em 29 (31.2%); na vagina, Aa em 3 (3,2%), Fn em 2 (2,1%), Pg em 16 (17,2%) e Tf em 3 (3,2%); no âmnio, Fn em 4 (4,2%) e Pg em 9 (9,7%); na placenta, Fn em 1 (1,07%), Pg em 4 (4,3%) e Tf em 1 (1,1%). P.g e F.n foram observados simultaneamente: 6/30 casos de Pg na boca estavam na vagina, 3 no âmnio e 1 na placenta; dos 16 Fn na boca, 1 foi encontrado na placenta. Esta taxa de disseminação sugere que as BPPG na vagina, âmnio ou placenta não se originaram na boca das puérperas. / Subgingival biofilm and buccal samples, vaginal contents, amnion and placental parenchyma were obtained from 93 pregnant. The periodontopathogens (PPG) Pg, Aa, Fn, and Tf were identified by PCR, the diagnosis of chorioamnionitis (CAM) and villitis by histopathology methods and its relationships with adverse perinatal outcome (APO) statically analyzed. Rupture of membranes (22.2%), cesarean (65.6%), preterm (36.6%), low fetal weight (34.4%), perinatal death (5.4%), CAM (34.4%), and villitis (5.5%) were observed. Aggressive periodontitis (62,4%), and 83.9% had caries. Periodontitis or PPG (Aa, Fn, Pg, and Tf) in any site not associated with greater frequency or at greater risk of CAM or APO. In the subgingival biofilm Aa was observed in 2 (2.1%), Fn in 16 (17.20%), Pg in 30 (32.30%) and Tf in 29 (31.2%); in the vagina, 3 in Aa (3.2%), Fn 2 (2.1), Pg 16 (17.2%) and Tf 3 (3.2%); amnion, Fn in 4 (4.2%) and Pg 9 (9.7%); in the placenta, Fn 1 (1.07%), Pg 4 (4.3%) and Tf 1 (1.1%). Only Fn and Pg were observed simultaneously: 30 mothers with Pg in the mouth, 6 were detected in the vagina, 3 in amnion and 1 in the placenta; Fn 16 with the mouth, 1 was found in the placenta. This low rate of spread suggests that most of periodontopathogens present in vagina, amnion or placenta did not belong to the pregnant mouth.

"December, 2002" Includes bibliographical references (leaves 211-238)

Die chronisch entzündliche Erkrankung des Zahnhalteapparates, die Parodontitis, hat die Karies als Hauptursache für Zahnverlust in Deutschland abgelöst. Um Krank-heitsentstehung und Krankheitsverlauf zu verstehen und Therapiemöglichkeiten zu finden, wurden Tiermodelle für die Parodontitis entwickelt. In der vorliegenden Arbeit sollte durch orale Gabe des humanen parodonthopatho-genen Keims P. gingivalis bei Mäusen eine Parodontitis erzeugt werden. Hierzu wurden WT- und DDR1-KO-Mäuse über mehrere Wochen mit diesem Keim behandelt. Durch den immunhistochemischen Nachweis von Kollagen Typ I und Kollagen Typ III sollten die potenziellen strukturellen Veränderungen im PDL dargestellt werden. Mit den Entzündungsmarkern CD 11b und MMP-13 sollten die Entzündungsreaktionen des PDLs auf die Gabe von P. gingivalis, die dem Alveolarknochenverlust vorausgehen, nachgewiesen werden. Die immunhistochemischen Ergebnisse zeigten, dass weder bei WT- noch bei DDR1-KO-Mäusen eine Parodontitis entstanden war. Das hier angewandte Pardontitismodell scheint nicht verlässlich und reproduzierbar zu sein. Die DDR1-KO-Maus ist für eine Parodontitis nicht empfänglicher und kann somit nicht als praktikables Parodontitismodell dienen.

Thesis (Ph. D.)--Virginia Commonwealth University, 1997. / Prepared for: Dept. of Microbiology and Immunology. eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references.

Thesis (M.S.)--University of Michigan, 2004. / Includes bibliographical references.

Thesis (M.S.)--University of Michigan, 1994.

Thesis (Ph. D.)--Virginia Commonwealth University, 1997. / Prepared for: Dept. of Microbiology and Immunology. eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references.

Orientador: Ana Lia Anbinder / Banca: Maria Aparecida Neves Jardini / Banca: Débora Pallos / Resumo: Os tratamentos mais usados para periodontite são a raspagem e aplainamento radicular, tratamento não cirúrgico, associado ou não ao uso de antimicrobianos. No entanto, novas terapias têm sido testadas com foco na modulação da resposta do hospedeiro. Alguns micro-organismos têm efeitos benéficos na saúde dos seres humanos, pois produzem efeitos antimicrobianos e anti-inflamatórios, os chamados probióticos. O presente trabalho avaliou o efeito antimicrobiano de Lactobacillus reuteri sobre Porphyromonas gingivalis e a influência deste probiótico em sua forma viva, morta (paraprobiótico) e sobrenadante em modelo de invertebrado Galleria mellonella, infectado por P. gingivalis. Posteriormente, foi determinada a viabilidade celular, níveis de óxido nítrico e de interleucina (IL)-1βb, IL-6, IL-17 e fator de necrose tumoral (TNF)- α, através do ensaio de ELISA em osteoblastos infectados por LPS de P. gingivalis in vitro. Os dados foram submetidos ao teste estatístico ANOVA, Kruskal-Wallis ou Log-rank (Mantel-Cox), com nível de significância de 5%.L. reuteri e seu sobrenadante possuem a mesma atividade antimicrobiana. O probiótico viável e o morto apresentaram efeitos iguais na sobrevivência de G. mellonella e L. reuteri vivo foi o único que aumentou densidade hemocitária das lagartas. O probiótico e o paraprobiótico reduziram igualmente os níveis IL-1β, IL-6, TNF-α e IL-17, sendo que o paraprobiótico, diferentemente do lactobacilo vivo, reduziu significantemente as quantidades de IL-... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The most used treatments for periodontitis are scaling and non-surgical root planing, associated or not to the use of antimicrobials. However, new therapies have been tested with a focus on host response modulation. Some microorganisms have beneficial effects on human health because they produce antimicrobial and antiinflammatory effects, called probiotics. The present study evaluated the antimicrobial effect of Lactobacillus reuteri on Porphyromonas gingivalis and the influence of this probiotic in its live, inactivated (paraprobiotic) form and supernatant on Galleria mellonella invertebrate model, after infection by P. gingivalis. Later, the cell viability, nitric oxide levels and interleukin (IL)-1b, IL-6, IL-17 and tumor necrosis factor (TNF)- α, by the Elisa assay, were evaluated in osteoblasts infected with P. gingivalis LPS in vitro. Data were submitted to ANOVA, Kruskal-Wallis or Log-rank (Mantel-Cox) statistical test, with a significance level of 5%. L. reuteri and its supernatant have the same antimicrobial activity. The viable and inactivated probiotic had equal effects in G. mellonella survival and L. reuteri alive was the only one that increased the hemocyte density in the invertebrate model. Probiotics and paraprobiotics also reduced levels of IL-1β, IL-6, TNF-α and IL-17 cytokines, whereas paraprobiotic, unlike living lactobacillus, significantly reduced the amounts of IL-6 and TNF-α, compare to the LPS control group. The highest reductions of the studied cytok... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O objetivo do presente estudo foi testar a hipótese de que polimorfismo na região que codifica o sistema de dois componentes FimSR e seus níveis de transcrição influenciaria expressão de fímbrias e a capacidade de adesão de Porphyromonas gingivalis. Foram avaliadas 21 cepas clínicas e as cepas de referência 33277 (fimbriada) e W83 (não fimbriada). A presença de cápsula foi determinada em 13/21 cepas e de fímbrias em 15/21. Todas as cepas foram capazes de aderir às células (eficiência de 1,2 a 6,1%). Não houve correlação entre os genótipos fimA, presença de fímbrias / cápsula e perfis de macrorestrição por PFGE. Diferenças na transcrição de fimA não podem ser atribuídas a diferenças na região promotora de fimSR. fimA foi regulado positivamente após interação com células epiteliais na maioria das cepas. Os dados indicam que a regulação de fimA é cepa específica. Cepas não-fimbriadas podem apresentar outras estratégias para aderir às células, sugerindo que, além das fímbrias, outras estruturas poderiam desempenhar um papel na interação dessa espécie com as células. / The aim of this study was to test the hypothesis that polymorphism in genes encoding the two-component system FimSR and their transcription levels would influence the expression of fimbriae and adhesion of Porphyromonas gingivalis. We evaluated 21 clinical strains and reference strains 33277 (fimbriate) and W83 (non fimbriated). The presence of a capsule was determined in 13/21 strains and the presence of fimbriae in 15/21. All strains were able to adhere to the cells (efficiency from 1.2 to 6.1%). There was no correlation between genotypes fimA, presence of fimbriae / capsule and macrorestriction profiles by PFGE. Differences in transcription of fimA could not be attributed to differences in the promoter region of fimS. fimA was upregulated after interaction with epithelial cells in most strains. The data indicate that regulation of fimA is strain specific. Non-fimbriated strains may have other strategies to adhere to epithelial cells, suggesting that in addition to fimbriae, other structures could play a role in the interaction of that specie with cells.

Os fibroblastos são atualmente considerados componentes ativos da resposta imune porque estas células expressam receptores do tipo Toll (TLRs), são capazes de reconhecer padrões moleculares associados a patógenos e mediar a produção de citocinas e quimiocinas durante a inflamação. A resposta imune inata do hospedeiro a lipopolissacarídeos (LPS) de Porphyromonas gingivalis é incomum, já que diferentes estudos relataram que este LPS pode ser um agonista para TLR2 e um antagonista ou agonista para TLR4. A sinalização por TLRs envolve proteínas adaptadoras, como MyD88 e TRAM, que são necessárias para a transdução do sinal até o núcleo para que ocorra a transcrição de RNAm para os mediadores da inflamação. O objetivo deste estudo foi investigar e comparar se a sinalização por meio de TLR2 ou TLR4 poderia afetar a produção de Interleucina (IL)-6, IL-8 e CXCL12 em fibroblastos humanos gengivais (HGF) e fibroblastos humanos de ligamento periodontal (HPLF). Objetivamos também comparar a participação das moléculas adaptadoras MyD88 e TRAM na expressão do RNAm dos mesmos alvos. Material e Métodos: Após silenciamento mediado por RNA de interferência de TLR2, TLR4, MyD88 ou TRAM, confirmado por RT-qPCR, HGF e HPLF, provenientes de três dadores voluntários, foram estimulados com LPS de Porphyromonas gingivalis ou com dois agonistas sintéticos de TLR2, Pam2CSK4 e Pam3CSK4, por 6 horas. A expressão do RNAm e das proteínas IL-6, IL-8, e CXCL12 foram avaliados por qRT-PCR e ELISA, respectivamente. Resultados: A expressão do RNAm de TLR2 foi regulada em HGF, mas não em HPLF por todos os estímulos. O silenciamento de TLR2 diminuiu IL-6 e IL-8 em resposta ao LPS de P. gingivalis, Pam2CSK4 e Pam3CSK4 de maneira semelhante, em ambas as subpopulações de fibroblastos (p<0,05). Por outro lado, a produção de CXCL12 permaneceu inalterada pelo silenciamento de TLR2 ou TLR4. No caso do silenciamento de MyD88 e TRAM, em ambos os subtipos de fibroblastos, o RNAm para os mesmos alvos também teve sua expressão diminuída (p<0,05). Já a expressão constitutiva de CXCL12 foi aumentada com o silenciamento de MyD88 ou TRAM (p<0,05). Conclusão: Estes resultados sugerem que a sinalização por meio de TLR2, por fibroblastos, as células residentes mais numerosas em gengiva e ligamento periodontal, pode controlar a produção de IL-6 e IL-8, que por sua vez contribuem para a patogênese periodontal, mas não interfere nos níveis de CXCL12, uma quimiocina importante no processo de reparação. Concluímos também que o silenciamento de MyD88 ou TRAM é capaz de diminuir o aumento da transcrição gênica de IL-6 e IL-8 provocado por LPS de P. gingivalis, embora a expressão constitutiva de CXCL12 seja regulada positivamente. / Fibroblasts are now seen as active components of the immune response because these cells express Toll-like receptors (TLRs), recognize pathogen associated molecular patterns and mediate the production of cytokines and chemokines during inflammation. The innate host response to lipopolysaccharide (LPS) from Porphyromonas gingivalis is unusual in that different studies have reported that it can be an agonist for TLR2 and an antagonist or agonist for TLR4. TLRs signaling pathway involves adaptor proteins, like MyD88 and TRAM, which are crucial for signal transduction to the nucleus and mRNA expression of inflammatory mediators. This study investigated and compared whether signaling through TLR2 or TLR4 could affect the production of IL-6, IL-8 and CXCL12 in both human gingival fibroblasts (HGF) and human periodontal ligament fibroblasts (HPLF). The role of MyD88 and TRAM on the mRNA expression of the same targets were also evaluated. Methods: After small interfering RNA-mediated silencing of TLR2, TLR4, MyD88 or TRAM, confirmed by RT-qPCR, HGF and HPLF from three volunteer donors were stimulated with P. gingivalis LPS or with two synthetic ligands of TLR2, Pam2CSK4 and Pam3CSK4, for 6 hours. IL-6, IL-8, and CXCL12 mRNA expression and protein production were evaluated by RT-qPCR and ELISA, respectively. Results: TLR2 mRNA expression was upregulated in HGF but not in HPLF by all the stimuli applied. Knockdown of TLR2 decreased IL-6 and IL-8 in response to P. gingivalis LPS, Pam2CSK4 and Pam3CSK4 in a similar manner in both fibroblasts subpopulations. Conversely, CXCL12 remained unchanged by TLR2 or TLR4 silencing. For MyD88 or TRAM silencing, IL-6 and IL-8 mRNA were also decreased, in both fibroblasts subtypes. However CXCL12 mRNA constitutive expression was increased by siMyD88 or siTRAM. Conclusion: These results suggest that signaling through TLR2 by fibroblasts, the most numerous resident cells in gingiva and periodontal ligament, may control the production of IL-6 and IL-8, which in turn contribute to periodontal pathogenesis, but does not interfere with CXCL12 levels, an important chemokine in the repair process. Also, MyD88 or TRAM knockdown may decrease the IL-6 and IL-8 LPS-induced upregulation and increase the constitutive CXCL12 mRNA.