Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-09-23T12:09:04Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 703627 bytes, checksum: 193b0cc47fc6514482df37f3b075f580 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-23T12:09:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 703627 bytes, checksum: 193b0cc47fc6514482df37f3b075f580 (MD5) Previous issue date: 2000-07-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os processos que regulam a alocação de carbono para os órgãos vegetais e as sementes em desenvolvimento são muito importantes no desenvolvimento das plantas. Na maioria dos vegetais, o nutriente translocado mais importante é a sacarose, e a compreensão da biologia molecular, da bioquímica e da fisiologia de seu transporte é um problema central na biologia vegetal. Recentemente, foi isolado, em um laboratório da Universidade Federal de Viçosa, Viçosa-MG, um cDNA de uma biblioteca de expressão de sementes de soja que codifica um homólogo da proteína de ligação à sacarose (SBP), denominado S-64. Para analisar a função desse homólogo de SBP, tabacos transgênicos foram obtidos, introduzindo-se genes quiméricos que continham a região codificadora do gene s-64, ligado ao promotor 35S-CaMV, na orientação senso ou anti-senso via transformação mediada por Agrobacterium sp. O acúmulo do homólogo de SBP aumentou em tabacos que superexpressaram o gene s-64, assim como a expressão anti-senso do gene s-64 levou ao decréscimo nos níveis da proteína endógena. As plantas anti-senso desenvolveram sintomas característicos de uma inibição do transporte de sacarose à longa distância e apresentaram crescimento e desenvolvimento vegetal reduzidos. Em contraste, as plantas que continham a construção senso revelaram tendência de crescimento mais rápido e aceleração do desenvolvimento floral. O desempenho no desenvolvimento das plantas transgênicas foi correlacionado com a taxa fotossintética, sob condições normais de irradiância. Enquanto a taxa de fotossíntese nas linhagens anti-senso diminuiu, nas linhagens senso ela aumentou. Além disto, tanto a repressão anti-senso quanto a superexpressão senso do homólogo de SBP alteraram o particionamento de carboidratos em folhas maduras. Na geração seguinte, as plantas transgênicas senso e anti-senso revelaram diferentes padrões de expressão do gene s-64. Enquanto nas plantas senso não foi observado aumento no acúmulo da proteína, nas plantas anti-senso uma forte inibição de S-64/SBP persistiu. Além disto, as plantas transgênicas anti-senso R1 tiveram um reduzido crescimento vegetativo e radicular, acompanhado de um florescimento tardio. Seguindo esse padrão, a taxa fotossintética das folhas jovens e maduras diminuiu, o que evidencia uma possível diminuição no carregamento e, ou, descarregamento do floema. Um reduzido peso seco total e radicular, assim como experimentos de enxertia, forneceu evidências de que o gene s-64 está diretamente envolvido no descarregamento do floema. Coletivamente, esses resultados indicam que a proteína S-64 é funcionalmente análoga à proteína de ligação à sacarose e representa um importante componente da via de translocação de sacarose em plantas. / The processes that regulate carbon allocation to various organs in the developing seed is very important in plant development. In most plants, the morg important translocated nutrient is sucrose and, thus, understanding the molecular biology, biochemistry, and physiology of sucrose transport is a central problem in plant biology. A sucrose binding protein (SBP) homologue, designated S-64, was isolated and transgenic tobacco plants were obtained by introducing chimeric genes containing the S-64 coding region linked to the 35S CaMV promoter, either in the sense or antisense orientation, via Agrobacterium tumefaciens- mediated transformation. The accumulation of the SBP homologue was increased in transgenic plants expressing the heterologous sbp gene, whereas those expressing the antisense construct had reduced levels of the protein. The antisense transgenic plants developed symptoms characteristic of an inhibition of sucrose translocation and displayed a reduction in plant growth and development. In contrast, overexpression of the protein accelerated plant growth and the onset of flowering induction. The overall developmental performance of the transgenic plants was correlated with their photosynthetic rate under normal conditions. While photosynthesis in the antisense lines was decreased, in the sense lines photosynthetic rates were increased. Furthermore, both antisense repression and overexpression of the SBP homologue in transgenic lines altered carbohydrate partitioning in mature leaves. On the following generation, both sense and antisense plants revealed different S-64 expression patterns. While the sense plants had no overexpression when compared to control plants, the antisense plants was significantly inhibited by the SBP homologue gene. According to previous results, the antisense plants have a reduced vegetative growth accompanied by a late flowering. The photosynthesis was reduced on young and mature leaves from antisense plants supporting a possible decrease on loading and/or unloading of the phloem. A reduced root growth and dry weight, associated with grafting experiments showed strong evidences that gene is directly involved on phloem unloading. Taken together, these results indicate that S-64 protein is functionally analogous to sucrose binding protein, representing an important component of the sucrose translocation pathway in plants. / Não foi localizado o cpf do autor.

Compreender a função das diferentes proteínas e citocinas durante a vigência de alterações inflamatórias pode contribuir para um melhor conhecimento do sistema imunológico dos mamíferos marinhos e sua relação com os processos patológicos. A toninha, Pontoporia blainvillei, é um cetáceo costeiro e o único golfinho brasileiro considerado ameaçado de extinção devido às atividades antrópicas. O objetivo desse trabalho foi avaliar as imunoexpressões das citocinas TGF-β, TNF-α e IL-12 e proteínas S-100 e lisozima em amostras pulmonares e esplênicas de 34 espécimes de P. blainvillei. Com base nas alterações histopatológicas, os animais foram divididos em dois grupos: G1 (n = 8) - animais sem doença inflamatória pulmonar; G2 (n = 26) - animais com doenças inflamatórias pulmonares. Os fragmentos de pulmão e baço foram processados de acordo com os protocolos de rotina. A padronização das reações de imuno-histoquímica e análise morfométrica foram realizadas conforme procedimentos descritos na literatura. Os nossos dados demonstram que as P. blainvillei pertencentes ao G2 apresentam imunoexpressão pulmonar das citocinas TGF-β, TNF-α e IL-12 e proteínas S-100 e lisozima significativamente maior que os animais do G1. Tais resultados corroboram os dados disponíveis na literatura, indicando que a P. blainvillei apresenta citocinas com funções semelhantes às encontradas em outros mamíferos.Evidenciamos também, que as P. blainvillei pertencentes ao G2 não apresentam imunoexpressão esplênica das citocinas TGF-β, TNF-α e IL-12 e da proteína lisozima significativamente maior que os animais do G1. Estudos mais detalhados, incluindo aqueles relacionados com os métodos utilizados, são necessários para a adequada compreensão destes resultados. E finalmente, apesar de tratar-se de dados ainda preliminares, observou-se uma possível associação entre elevadas concentrações de organoclorados no tecido adiposo subcutâneo de parcela dos exemplares de P. blainvillei estudados na presente investigação e a ocorrência de depleção linfóide esplênica nestes animais. Tais dados ratificam a importância do desenvolvimento de análise mais detalhada sobre estes tópicos em futuras investigações científicas. / The understanding of the role of different proteins and cytokines during the inflammatory diseases could lead to better knowledge of the marine mammal immune system and its relation to pathological process. Franciscana dolphin, Pontoporia blainvillei, is a coastal cetacean and the only Brazilian dolphin considered threatened with extinction, due to the human activities. The aim of the current study was to investigate the immunoexpression of TGF-β, TNF-α and IL-12 cytokines, and S-100 and Lysozyme proteins in pulmonary and splenic samples of 34 Pontoporia blainvillei. Based on histopathological examination, the animals were divided in two groups: G1 (n = 8) animals without pulmonary inflammatory disease; G2 (n = 26) animals with pulmonary inflammatory diseases. Fragments of lung and spleen were processed according to routine protocols. The immunohistochemistry and morphometric procedures were tested and optimized according to proceedings described in literature. Our results showed that P. blainvillei from G2 presented significant increase in the pulmonary immunoexpression of TGF-β, TNF-α and IL-12 cytokines, and S-100 and Lysozyme proteins in comparison with animals from G1. These results are according to the literature and suggest that P. blainvillei presents same cytokines observed in other mammals. We evidenced also that the P. blainvillei belonging to the G2 did not show splenic immunoexpression to TGF-β, TNF-α and IL- 12 cytokines and Lysozyme protein significantly higher than animals from G1. Further studies, including those related to the methods used, are necessary for the proper understanding of these results. And finally, although these are still preliminary data, we observed a possible association between high concentrations of organochlorines in subcutaneous adipose tissue of a portion of P. blainvillei studied in this research and the occurrence of splenic lymphoid depletion in these animals. These data confirm the importance of developing more detailed analysis on these topics in future scientific investigations.

Compreender a função das diferentes proteínas e citocinas durante a vigência de alterações inflamatórias pode contribuir para um melhor conhecimento do sistema imunológico dos mamíferos marinhos e sua relação com os processos patológicos. A toninha, Pontoporia blainvillei, é um cetáceo costeiro e o único golfinho brasileiro considerado ameaçado de extinção devido às atividades antrópicas. O objetivo desse trabalho foi avaliar as imunoexpressões das citocinas TGF-β, TNF-α e IL-12 e proteínas S-100 e lisozima em amostras pulmonares e esplênicas de 34 espécimes de P. blainvillei. Com base nas alterações histopatológicas, os animais foram divididos em dois grupos: G1 (n = 8) - animais sem doença inflamatória pulmonar; G2 (n = 26) - animais com doenças inflamatórias pulmonares. Os fragmentos de pulmão e baço foram processados de acordo com os protocolos de rotina. A padronização das reações de imuno-histoquímica e análise morfométrica foram realizadas conforme procedimentos descritos na literatura. Os nossos dados demonstram que as P. blainvillei pertencentes ao G2 apresentam imunoexpressão pulmonar das citocinas TGF-β, TNF-α e IL-12 e proteínas S-100 e lisozima significativamente maior que os animais do G1. Tais resultados corroboram os dados disponíveis na literatura, indicando que a P. blainvillei apresenta citocinas com funções semelhantes às encontradas em outros mamíferos.Evidenciamos também, que as P. blainvillei pertencentes ao G2 não apresentam imunoexpressão esplênica das citocinas TGF-β, TNF-α e IL-12 e da proteína lisozima significativamente maior que os animais do G1. Estudos mais detalhados, incluindo aqueles relacionados com os métodos utilizados, são necessários para a adequada compreensão destes resultados. E finalmente, apesar de tratar-se de dados ainda preliminares, observou-se uma possível associação entre elevadas concentrações de organoclorados no tecido adiposo subcutâneo de parcela dos exemplares de P. blainvillei estudados na presente investigação e a ocorrência de depleção linfóide esplênica nestes animais. Tais dados ratificam a importância do desenvolvimento de análise mais detalhada sobre estes tópicos em futuras investigações científicas. / The understanding of the role of different proteins and cytokines during the inflammatory diseases could lead to better knowledge of the marine mammal immune system and its relation to pathological process. Franciscana dolphin, Pontoporia blainvillei, is a coastal cetacean and the only Brazilian dolphin considered threatened with extinction, due to the human activities. The aim of the current study was to investigate the immunoexpression of TGF-β, TNF-α and IL-12 cytokines, and S-100 and Lysozyme proteins in pulmonary and splenic samples of 34 Pontoporia blainvillei. Based on histopathological examination, the animals were divided in two groups: G1 (n = 8) animals without pulmonary inflammatory disease; G2 (n = 26) animals with pulmonary inflammatory diseases. Fragments of lung and spleen were processed according to routine protocols. The immunohistochemistry and morphometric procedures were tested and optimized according to proceedings described in literature. Our results showed that P. blainvillei from G2 presented significant increase in the pulmonary immunoexpression of TGF-β, TNF-α and IL-12 cytokines, and S-100 and Lysozyme proteins in comparison with animals from G1. These results are according to the literature and suggest that P. blainvillei presents same cytokines observed in other mammals. We evidenced also that the P. blainvillei belonging to the G2 did not show splenic immunoexpression to TGF-β, TNF-α and IL- 12 cytokines and Lysozyme protein significantly higher than animals from G1. Further studies, including those related to the methods used, are necessary for the proper understanding of these results. And finally, although these are still preliminary data, we observed a possible association between high concentrations of organochlorines in subcutaneous adipose tissue of a portion of P. blainvillei studied in this research and the occurrence of splenic lymphoid depletion in these animals. These data confirm the importance of developing more detailed analysis on these topics in future scientific investigations.

O objetivo do presente estudo foi avaliar a diferença de resultados maternos e neonatais em gestações complicadas por trombofilias hereditárias em pacientes com e sem tromboembolismo venoso. Apesar do aumento de evidências, na literatura, sobre a associação de trombofilias congênitas e resultados obstétricos adversos, há ainda dúvida se pacientes trombofílicas com tromboembolismo venoso apresentam resultados maternos e neonatais piores que as pacientes trombofílicas sem tromboembolismo venoso. O estudo analisou 66 gestantes com trombofilias hereditárias, de forma retrospectiva observacional e comparativa, das quais 33 apresentavam tromboembolismo venoso e 36 o não apresentavam. Os principais desfechos relacionados a resultados maternos e neonatais adversos foram: pré-eclâmpsia grave, descolamento prematuro de placenta, restrição de crescimento fetal, natimortalidade, prematuridade e complicações hemorrágicas maternas. As trombofilias congênitas incluídas no estudo foram o fator V de Leiden (FVL), mutação da protrombina G20210A, mutação C677T do gene da 5,10-metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR), deficiência de proteína S, deficiência de proteína C e deficiência de antitrombina. Ambos os grupos apresentaram características populacionais similares. A ocorrência de complicações maternas e fetais/neonatais foi similar nos dois grupos: pré-eclâmpsia grave (P=0,097), descolamento prematuro de placenta (P=0,478), restrição de crescimento fetal (P=0,868), natimortalidade (P=0,359), prematuridade (P=0,441) e complicações hemorrágicas maternas (P=0,478). Este estudo concluiu que a presença de tromboembolismo venoso em gestantes com trombofilia hereditária apresenta resultados maternos e neonatais semelhantes àquelas com trombofilias hereditárias sem tromboembolismo venoso. / The aim of this study was to evaluate differences in maternal and neonatal outcomes in pregnancies complicated by inherited thrombophilias between patients with and without venous thromboembolism. Despite increasing evidence in the literature indicating an association between inherited thrombophilias and adverse obstetric outcomes, doubts remain whether thrombophilic patients with venous thromboembolism present poorer maternal and neonatal outcomes than thrombophilic patients without venous thromboembolism. In this retrospective, observational and comparative study, 66 pregnant women with inherited thrombophilias, including 33 with venous thromboembolism and 36 without thromboembolism, were investigated. The main end-points analyzed were severe pre-eclampsia, placental abruption, fetal growth restriction, stillbirth, preterm delivery, and maternal hemorrhagic complications. The congenital thrombophilias included in this study were factor V Leiden (FVL), prothrombin G20210A mutation, C677T mutation in the 5,10-methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) gene, protein S deficiency, protein C deficiency, and antithrombin deficiency. The two groups were similar in terms of population characteristics. The frequency of maternal and fetal/neonatal complications was similar in the two groups: severe pre-eclampsia (P=0.097), placental abruption (P=0.478), fetal growth restriction (P=0.868), stillbirth (P=0.359), preterm delivery (P=0.441), and maternal hemorrhagic complications (P=0.478). This study concluded that venous thromboembolism in thrombophilic patients does not worsen maternal or neonatal outcomes when compared to thrombophilic patients without venous thromboembolism.

O objetivo do presente estudo foi avaliar a diferença de resultados maternos e neonatais em gestações complicadas por trombofilias hereditárias em pacientes com e sem tromboembolismo venoso. Apesar do aumento de evidências, na literatura, sobre a associação de trombofilias congênitas e resultados obstétricos adversos, há ainda dúvida se pacientes trombofílicas com tromboembolismo venoso apresentam resultados maternos e neonatais piores que as pacientes trombofílicas sem tromboembolismo venoso. O estudo analisou 66 gestantes com trombofilias hereditárias, de forma retrospectiva observacional e comparativa, das quais 33 apresentavam tromboembolismo venoso e 36 o não apresentavam. Os principais desfechos relacionados a resultados maternos e neonatais adversos foram: pré-eclâmpsia grave, descolamento prematuro de placenta, restrição de crescimento fetal, natimortalidade, prematuridade e complicações hemorrágicas maternas. As trombofilias congênitas incluídas no estudo foram o fator V de Leiden (FVL), mutação da protrombina G20210A, mutação C677T do gene da 5,10-metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR), deficiência de proteína S, deficiência de proteína C e deficiência de antitrombina. Ambos os grupos apresentaram características populacionais similares. A ocorrência de complicações maternas e fetais/neonatais foi similar nos dois grupos: pré-eclâmpsia grave (P=0,097), descolamento prematuro de placenta (P=0,478), restrição de crescimento fetal (P=0,868), natimortalidade (P=0,359), prematuridade (P=0,441) e complicações hemorrágicas maternas (P=0,478). Este estudo concluiu que a presença de tromboembolismo venoso em gestantes com trombofilia hereditária apresenta resultados maternos e neonatais semelhantes àquelas com trombofilias hereditárias sem tromboembolismo venoso. / The aim of this study was to evaluate differences in maternal and neonatal outcomes in pregnancies complicated by inherited thrombophilias between patients with and without venous thromboembolism. Despite increasing evidence in the literature indicating an association between inherited thrombophilias and adverse obstetric outcomes, doubts remain whether thrombophilic patients with venous thromboembolism present poorer maternal and neonatal outcomes than thrombophilic patients without venous thromboembolism. In this retrospective, observational and comparative study, 66 pregnant women with inherited thrombophilias, including 33 with venous thromboembolism and 36 without thromboembolism, were investigated. The main end-points analyzed were severe pre-eclampsia, placental abruption, fetal growth restriction, stillbirth, preterm delivery, and maternal hemorrhagic complications. The congenital thrombophilias included in this study were factor V Leiden (FVL), prothrombin G20210A mutation, C677T mutation in the 5,10-methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) gene, protein S deficiency, protein C deficiency, and antithrombin deficiency. The two groups were similar in terms of population characteristics. The frequency of maternal and fetal/neonatal complications was similar in the two groups: severe pre-eclampsia (P=0.097), placental abruption (P=0.478), fetal growth restriction (P=0.868), stillbirth (P=0.359), preterm delivery (P=0.441), and maternal hemorrhagic complications (P=0.478). This study concluded that venous thromboembolism in thrombophilic patients does not worsen maternal or neonatal outcomes when compared to thrombophilic patients without venous thromboembolism.