Memoria para optar al título de Bioquímico / Las proteínas dulces Taumatina (Tau) y Brazeina (Bra), son proteínas no tóxicas, las cuales son 2.000 a 3.000 veces más dulces que la sacarosa y 10 veces más dulces que la Stevia, pero con la ventaja de tener un sabor similar a la sacarosa. En la actualidad, se han utilizado como edulcorantes y potenciadores naturales del sabor en diferentes alimentos. Al igual que la Stevia, no aporta calorías y es un alimento apto para diabéticos. Por estas razones, la expresión de Tau y Bra, podría ser una estrategia útil para mejorar el sabor de frutos, haciéndolos más dulces, sin añadir calorías y carbohidratos. Además, también se ha descrito que estas proteínas son similares a proteínas con actividad anti patógenos (taumatina) o a péptidos antimicrobianos (brazeina) en plantas, lo que las hace también atractivas para ésta aplicación biotecnológica. En el contexto de este trabajo y con el fin de expresar los genes tau y bra en frutos, se generaron los vectores pPG-taubra, pPG-tau, pPG-bra, 35SCaMV-tau y 35SCaMV-bra, tres con promotor fruto específico y dos con promotor constitutivo. En la presente memoria de título, se analizó la funcionalidad de los vectores a través de la transformación transitoria de frutos de tomate y hojas de tabaco. Se obtuvo que 4 de los 5 vectores son funcionales para expresar el transgen. Luego, se prosiguió con la transformación estable de tomate y tabaco, con dichos vectores de expresión. Durante esta memoria de título, se estandarizó con éxito la transformación de tomate usando hojas como explantes y se comparó con la transformación estable a partir de explantes de cotiledón. La correcta transformación y expresión de los transgenes tau y bra fue evaluada por PCR y RT-PCR, respectivamente en líneas de tomate y tabaco, se obtuvo 5 y 2 líneas de tomate transgénicas (por PCR) para taubra y bra, respectivamente. En tabaco se obtuvo 4 líneas transgénicas que expresan el transgen tau y 4 líneas transgénicas que expresan bra / The sweet proteins Thaumatin (Tau) and Brazzein (Bra), are non-toxic proteins, of 2,000 to 3,000 fold sweeter than sucrose and 10 times sweeter than stevia but with the advantage of having a more similar flavor to sucrose. At present, they have been used as sweeteners and natural flavor enhancers in different foods. As proteins they do not provide calories and are suitable for diabetics. For these reasons, the expression of Tau and Bra could be a useful strategy to improve fruit flavor, making it sweeter, without adding calories and carbohydrates. In addition, these proteins are similar to proteins with anti-pathogenic activity (thaumatin) or antimicrobial peptides (brazeine) in plants, which makes them also attractive for biotechnological applications in this field. In the context of this work and in order to express the tau and bra genes, they were generated five expression vectors for these proteins, pPG-taubra, pPG-tau, pPG-bra, 35SCaMV-tau and 35SCaMV-bra, were generated. Three of them with a fruit specific promoter and two with a constitutive promoter. In the present thesis, the functionality of these vectors was achieved through the transient transformation of tomato fruits and tobacco leaves. We obtained that four of the five vectors were functional permitting the expression of the transgene. Then, the stable transformation of tomato and tobacco was carried out to express the transgenes in fruits and leaves, respectively. During this thesis, tomato transformation using leaves as explants was successfully standardized and compared with stable transformation from cotyledon explants. The correct transformation and expression of the tau and bra transgenes was evaluated by PCR and RT-PCR, respectively. In conclusion five and two transgenic tomato plants for the fusion protein taubra and bra were obtained (by PCR). Also, four transgenic tobacco lines each, for tau and bra which express the transgene (by RT-PCR), were obtained

Objetivos: 1- Determinar la localización subcelular de las proteínas de cubierta de CPsV y MiLBVV e interacciones CP-CP homólogas y heterólogas. 2- Identificar la/s proteínas virales involucradas en el mecanismo de supresión del PTGS. 3- Identificar y caracterizar cuál/es de la/s proteínas de CPsV y MiLBVV poseen la función de movimiento viral célula-a-célula. 4- Aportar evidencias que permitan conocer el mecanismo que poseen los ophiovirus MiLBVV y CPsV para el movimiento célula-a-célula.

Es propósito del presente trabajo aportar al conocimiento en relación a los posibles usos medicinales de especies de bromeliáceas autóctonas de nuestro país no estudiadas aún para dichos fines. Bajo la suposición de que las proteasas de Bromelia hieronymi, B balansae y Pseudananas macrodontes, por pertenecer al mismo tipo catalítico y a la misma subfamilia vegetal, podrían mostrar actividades biológicas similares a las proteasas de Ananas comosus, nos planteamos como objetivo general de la presente tesis la búsqueda de posibles efectos farmacológicos de extractos ricos en cisteínendopeptidasas obtenidos de frutos de Bromelia hieronymi, B. balansae y Pseudananas macrodontes y su comparación con bromelina. Y como objetivos específicos: - Evaluar el efecto antiinflamatorio de los extractos de B. hieronymi, B. balansae y P. macrodontes. - Evaluar los efectos de los extractos de B. hieronymi, B. balansae y P. macrodontes sobre algunos de los componentes de la hemostasia. - Evaluar los extractos de B. hieronymi, B. balansae y P. macrodontes como posibles agentes antitumorales. - Tratar de establecer la posible relación entre los efectos medidos y la actividad proteolítica de las cisteínendopeptidasas estudiadas.

El sector acuícola es una de las actividades industriales con mas demanda de harinas y aceites de pescado. Sin embargo, debido al estancamiento de las pesquerías a nivel mundial, la actividad piscícola no puede estar basada únicamente en las reservas finitas de pescado. Por tanto, la sustitución de harinas y aceites de pescado por fuentes alternativas de materias primas resulta ineludible. Para abordar esta problemática, se analizó el efecto de dietas basadas en una sustitución conjunta de proteínas y aceites de pescado por ingredientes vegetales sobre el crecimiento y el perfil de ácidos de pescado por ingredientes vegetales sobre el crecimiento y el perfil de ácidos grasos de doradas (Sparus aurata). El diseño de las dietas se realizó sustituyendo el aceite de pescado por una mezcla de aceites vegetales (17:58:25 de colza:linaza:palma) en un 0% (FO), 33% (33VO), 66% (66VO), 100% (VO). Todas las dietas se formularon con alta proporción de proteínas vegetales y se suplementaron con 1% de lecitina de soja y 0,55% de L-lisina. No se encontraton diferencias en el crecimiento de los animales alimentados con las dietas FO, 33VO y 66VO. Sin embargo, los peces alimentados con la dieta VO mostraron un leve pero significativo descenso de la biomasa y una menor ingesta del alimento. La dieta VO produjo una reducción en los niveles circulantes de somatomedina (IGF-I) y en la expresión IGF a nivel hepático y muscular. Los niveles más altos de IGF-I se encontraron en los peces alimentados con la dieta 33VO, mientras que los alimentados con las dietas FO y 66VO mostratron niveles intermedios. La tendencia de los niveles circulantes de hormona del crecimento (GH) fue opuesta a la de la IGF-I, posiblemente como resultado de la retroalimentación negariva. En los peces alimentados con las dietas FO y 66VO, se observó una regulación compensatoria entre los componentes del eje somatotropico, mediada a nivel local por la IGF-II y el receptor de la GH tipo II. / Benedito Palos, L. (2010). Sustitución de aceites de pescado en dietas de engorde de dorada (Sparus aurata) ricas en proteínas vegetales. Efectos sobre el crecimiento y los perfiles de ácidos grasos [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/9032 / Palancia