Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-05-04T18:21:40Z No. of bitstreams: 1 Natasha Pavin ok.pdf: 478428 bytes, checksum: 248a3efadd02d2695494d5e6ef077e2b (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Dias (vanessa.dias@unipampa.edu.br) on 2016-05-04T18:34:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Natasha Pavin ok.pdf: 478428 bytes, checksum: 248a3efadd02d2695494d5e6ef077e2b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-04T18:34:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Natasha Pavin ok.pdf: 478428 bytes, checksum: 248a3efadd02d2695494d5e6ef077e2b (MD5) Previous issue date: 2016 / A ciclofosfamida (CP) é um agente antineoplásico e imunossupressor. É uma droga utilizada no tratamento de diversos tipos de tumores, usada para evitar a rejeição em transplante de órgãos e em doenças autoimunes, como artrite reumática e lúpus eritematoso. A CP é um pró-fármaco que sofre biotransformação no fígado pelo citocromo P450 para gerar metabólitos ativos como a mostarda fosfaramida e a acroleína. Seus metabólitos podem ocasionar um quadro de estresse oxidativo causando danos a diversos órgãos, entre eles o sistema reprodutor. A Tribulus terrestris (TT) faz parte da família das Zygophyllaceae, é uma erva rasteira perene com uma distribuição generalizada no Mediterrâneo, climas subtropicais e no deserto de todo o mundo. Na medicina popular tradicional, tem sido utilizada desde a antiguidade como um afrodisíaco, para energizar, vitalizar e melhorar a função sexual e desempenho físico em homens, bem como para tratar infecções urinárias, inflamações, edemas e outras doenças. Apesar de estudos experimentais e clínicos confirmarem parcialmente o fato de alguns efeitos da TT sobre a libido e a produção de esperma estarem envolvidos com o componente majoritário desta planta, a protodioscina, ainda há muito debate a respeito dos possíveis mecanismos de ação, bem como da sua aplicação terapêutica. Considerando o potencial antioxidante e esteroidogênico da TT, este estudo possui como objetivo investigar o potencial protetor do extrato seco da TT contra o dano testicular induzido pela ciclofosfamida em camundongos machos. Os camundongos Swiss machos receberam o extrato seco de TT como pré-tratamento por gavagem, durante 14 dias, na dose de 11 mg/Kg. No 14 ° dia, receberam uma única injeção intraperitoneal de ciclofosfamida na dose de 100 mg/Kg. Após 24 horas, esses animais foram anestesiados e eutanasiados, e o sangue, os testículos e os epidídimos foram retirados para posteriores análises bioquímicas, avaliação espermática e histopatológica. A presença e quantificação de protodioscina no vii extrato de TT foram avaliadas por HPLC (Cromatografia Líquida de Alta Eficiência), onde foi verificada uma concentração de 1,48% no extrato seco. A CP causou um desequilíbrio no sistema reprodutor destes animais, através do aumento das espécies reativas (ER), peroxidação lipídica (TBARS) e carbonilação de proteínas, bem como uma alteração nas enzimas antioxidantes: superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx), glutationa S-transferase (GST) e glutationa redutase (GR). O pré tratamento com TT foi eficaz em proteger contra esses danos. Além disso, foi verificado uma redução na atividade da enzima 17β-hidroxiesteróide desidrogenase (17β-HSD), corroborando com a redução do nível de testosterona sérica verificado neste trabalho. Ao mesmo tempo, ao analisarmos a histopatologia dos testículos destes animais, verificamos uma moderada desorganização do epitélio espermatogenico, bem como, uma congestão dos vasos sanguíneos intersticiais. Estes achados corroboraram com os resultados encontrados na avaliação seminal dos animais tratados com CP, onde foi possível verificar uma diminuição da motilidade (41,07%), do vigor (23,52%), da integridade de membrana (43,44%) e da velocidade curvo-retilinea (25,43%), e o pré tratamento com TT foi eficaz em proteger contra esses danos. Em conclusão, este trabalho visou demonstrar pela primeira vez o potencial protetor do extrato seco de TT contra os danos ao sistema reprodutor masculino de camundongos expostos ao quimioterápico CP. À melhora dos parâmetros avaliados pode estar relacionada ao potencial antioxidante e esteroidogênico, bem como pela quantidade de protodioscina observada neste extrato. / Cyclophosphamide (CP) is an antineoplastic and immunosuppressive agent. It is a drug used to treat various tumours types, and also to prevent rejection in organ transplantation and autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis and lupus erythematosus. The CP is a prodrug which is biotransformed in the liver by cytochrome P450 enzymes to generate active metabolites phosphoramide mustard and acrolein. Its metabolites can cause oxidative stress state, leading to damage in various organs, including the reproductive system. Tribulus terrestris (TT) is part of the family of Zygophyllaceae, it is a perennial creeping herb with a widespread distribution in the Mediterranean, subtropical climates and desert around the world. In traditional folk medicine, it has been used since ancient times as an aphrodisiac, to energize, vitalize and improve sexual function and physical performance in men and to treat urinary infections, inflammation, edema and other diseases. Although experimental and clinical studies partly confirm that some effects of TT on libido and sperm production are involved with the major component of this plant, protodioscin, there is still much debate about the possible mechanisms of action, as well as their therapeutic application. Considering the antioxidant and steroidogenic potential of TT, this study has the objective of investigating the protective potential of TT dry extract against testicular damage induced by cyclophosphamide in male mice. The male Swiss mice received the TT dry extract as pretreatment by gavage for 14 days at a dose of 11 mg kg-1. On day 14, animals received a single intraperitoneally injection of cyclophosphamide at a dose of 100 mg kg-1. After 24 hours, the animals were anesthetized and euthanized, and blood, testes and epididymis were removed for further biochemical analyzes, sperm and histological evaluation. The presence and quantification of protodioscin in TT extract were analyzed by HPLC (High Performance Liquid Chromatography), where a concentration of 1.48% of dry extract was verified. CP caused an imbalance in the reproductive system of these animals by increasing the reactive species (RS), ix lipid peroxidation (TBARS) and protein carbonylation, as well as change in antioxidant enzymes: superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GPx), glutathione S-transferase (GST) and glutathione reductase (GR). The pre-treatment with TT was effective in protecting against this damage. Furthermore, a reduction in the activity of 17β-hydroxysteroid dehydrogenase (17β-HSD) was found, confirming the reduction of serum testosterone levels observed in this study. Additionally, when analyzing the histopathology of the animals’ testes, we perceived a moderate disruption of spermatogenesis epithelium, as well as a congestion of interstitial blood vessels. These findings corroborate the results found in seminal evaluation of the animals treated with CP, where we observed a decrease in motility (41.07%), vigor (23.52%), membrane integrity (43,44%) and curved-straight speed (25.43%), and the pre-treatment with TT was effective in protecting against this damage. In conclusion, this study aimed to demonstrate for the first time the protective potential of TT dry extract against damage to the male reproductive system of mice exposed to CP chemotherapy. Improvement of these parameters may be related to antioxidant and steroidogenic potential as well as the amount of protodioscin observed in this extract.

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-05-02T13:45:06Z No. of bitstreams: 1 Natasha Pavin.pdf: 478428 bytes, checksum: 248a3efadd02d2695494d5e6ef077e2b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-02T13:45:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Natasha Pavin.pdf: 478428 bytes, checksum: 248a3efadd02d2695494d5e6ef077e2b (MD5) Previous issue date: 2016-04-02 / A ciclofosfamida (CP) é um agente antineoplásico e imunossupressor. É uma droga utilizada no tratamento de diversos tipos de tumores, usada para evitar a rejeição em transplante de órgãos e em doenças autoimunes, como artrite reumática e lúpus eritematoso. A CP é um pró-fármaco que sofre biotransformação no fígado pelo citocromo P450 para gerar metabólitos ativos como a mostarda fosfaramida e a acroleína. Seus metabólitos podem ocasionar um quadro de estresse oxidativo causando danos a diversos órgãos, entre eles o sistema reprodutor. A Tribulus terrestris (TT) faz parte da família das Zygophyllaceae, é uma erva rasteira perene com uma distribuição generalizada no Mediterrâneo, climas subtropicais e no deserto de todo o mundo. Na medicina popular tradicional, tem sido utilizada desde a antiguidade como um afrodisíaco, para energizar, vitalizar e melhorar a função sexual e desempenho físico em homens, bem como para tratar infecções urinárias, inflamações, edemas e outras doenças. Apesar de estudos experimentais e clínicos confirmarem parcialmente o fato de alguns efeitos da TT sobre a libido e a produção de esperma estarem envolvidos com o componente majoritário desta planta, a protodioscina, ainda há muito debate a respeito dos possíveis mecanismos de ação, bem como da sua aplicação terapêutica. Considerando o potencial antioxidante e esteroidogênico da TT, este estudo possui como objetivo investigar o potencial protetor do extrato seco da TT contra o dano testicular induzido pela ciclofosfamida em camundongos machos. Os camundongos Swiss machos receberam o extrato seco de TT como pré-tratamento por gavagem, durante 14 dias, na dose de 11 mg/Kg. No 14 ° dia, receberam uma única injeção intraperitoneal de ciclofosfamida na dose de 100 mg/Kg. Após 24 horas, esses animais foram anestesiados e eutanasiados, e o sangue, os testículos e os epidídimos foram retirados para posteriores análises bioquímicas, avaliação espermática e histopatológica. A presença e quantificação de protodioscina no vii extrato de TT foram avaliadas por HPLC (Cromatografia Líquida de Alta Eficiência), onde foi verificada uma concentração de 1,48% no extrato seco. A CP causou um desequilíbrio no sistema reprodutor destes animais, através do aumento das espécies reativas (ER), peroxidação lipídica (TBARS) e carbonilação de proteínas, bem como uma alteração nas enzimas antioxidantes: superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx), glutationa S-transferase (GST) e glutationa redutase (GR). O pré tratamento com TT foi eficaz em proteger contra esses danos. Além disso, foi verificado uma redução na atividade da enzima 17β-hidroxiesteróide desidrogenase (17β-HSD), corroborando com a redução do nível de testosterona sérica verificado neste trabalho. Ao mesmo tempo, ao analisarmos a histopatologia dos testículos destes animais, verificamos uma moderada desorganização do epitélio espermatogenico, bem como, uma congestão dos vasos sanguíneos intersticiais. Estes achados corroboraram com os resultados encontrados na avaliação seminal dos animais tratados com CP, onde foi possível verificar uma diminuição da motilidade (41,07%), do vigor (23,52%), da integridade de membrana (43,44%) e da velocidade curvo-retilinea (25,43%), e o pré tratamento com TT foi eficaz em proteger contra esses danos. Em conclusão, este trabalho visou demonstrar pela primeira vez o potencial protetor do extrato seco de TT contra os danos ao sistema reprodutor masculino de camundongos expostos ao quimioterápico CP. À melhora dos parâmetros avaliados pode estar relacionada ao potencial antioxidante e esteroidogênico, bem como pela quantidade de protodioscina observada neste extrato. / Cyclophosphamide (CP) is an antineoplastic and immunosuppressive agent. It is a drug used to treat various tumours types, and also to prevent rejection in organ transplantation and autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis and lupus erythematosus. The CP is a prodrug which is biotransformed in the liver by cytochrome P450 enzymes to generate active metabolites phosphoramide mustard and acrolein. Its metabolites can cause oxidative stress state, leading to damage in various organs, including the reproductive system. Tribulus terrestris (TT) is part of the family of Zygophyllaceae, it is a perennial creeping herb with a widespread distribution in the Mediterranean, subtropical climates and desert around the world. In traditional folk medicine, it has been used since ancient times as an aphrodisiac, to energize, vitalize and improve sexual function and physical performance in men and to treat urinary infections, inflammation, edema and other diseases. Although experimental and clinical studies partly confirm that some effects of TT on libido and sperm production are involved with the major component of this plant, protodioscin, there is still much debate about the possible mechanisms of action, as well as their therapeutic application. Considering the antioxidant and steroidogenic potential of TT, this study has the objective of investigating the protective potential of TT dry extract against testicular damage induced by cyclophosphamide in male mice. The male Swiss mice received the TT dry extract as pretreatment by gavage for 14 days at a dose of 11 mg kg-1. On day 14, animals received a single intraperitoneally injection of cyclophosphamide at a dose of 100 mg kg-1. After 24 hours, the animals were anesthetized and euthanized, and blood, testes and epididymis were removed for further biochemical analyzes, sperm and histological evaluation. The presence and quantification of protodioscin in TT extract were analyzed by HPLC (High Performance Liquid Chromatography), where a concentration of 1.48% of dry extract was verified. CP caused an imbalance in the reproductive system of these animals by increasing the reactive species (RS), ix lipid peroxidation (TBARS) and protein carbonylation, as well as change in antioxidant enzymes: superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GPx), glutathione S-transferase (GST) and glutathione reductase (GR). The pre-treatment with TT was effective in protecting against this damage. Furthermore, a reduction in the activity of 17β-hydroxysteroid dehydrogenase (17β-HSD) was found, confirming the reduction of serum testosterone levels observed in this study. Additionally, when analyzing the histopathology of the animals’ testes, we perceived a moderate disruption of spermatogenesis epithelium, as well as a congestion of interstitial blood vessels. These findings corroborate the results found in seminal evaluation of the animals treated with CP, where we observed a decrease in motility (41.07%), vigor (23.52%), membrane integrity (43,44%) and curved-straight speed (25.43%), and the pre-treatment with TT was effective in protecting against this damage. In conclusion, this study aimed to demonstrate for the first time the protective potential of TT dry extract against damage to the male reproductive system of mice exposed to CP chemotherapy. Improvement of these parameters may be related to antioxidant and steroidogenic potential as well as the amount of protodioscin observed in this extract.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2017-07-17T11:35:24Z No. of bitstreams: 2 Tese - Daniel Silva Goulart -2017.pdf: 3553497 bytes, checksum: 6ec13ae3cfbad63a4fdfdcf4e9b0dab1 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-07-18T10:31:42Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Daniel Silva Goulart -2017.pdf: 3553497 bytes, checksum: 6ec13ae3cfbad63a4fdfdcf4e9b0dab1 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-18T10:31:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Daniel Silva Goulart -2017.pdf: 3553497 bytes, checksum: 6ec13ae3cfbad63a4fdfdcf4e9b0dab1 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-03-02 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The genus Brachiaria has provided important forage species to the countries located in tropical regions. However, this genus of grass is associated with photosensitization and poisoning in animal production. Thus, the aim of this study was to establish the standard for collection, processing, and conservation of Brachiaria brizantha for protodioscin quantification and spore count from Pithomyces chartarum and the evaluation of guinea pig (Cavia porcellus) as an experimental model of poisoning by diosgenin. For Brachiaria brizantha evaluation, samples were collected from eight pastures, which were subdivided into young leaves, mature leaves, old leaves, and whole plant. After that, the samples were submitted to nine different drying and conservation treatments. After separation and treatment of the samples, saponins were quantified and spores were counted. In most of treatments, the young leaves presented larger amounts of protodioscin than the old leaves and the whole plant. The treatments that maintained the highest amounts of protodioscin were room temperature, oven, and oven with forced air circulation. No fungal spores were found in the pasture samples. Thus, we concluded that the concentration of protodioscin varies with the maturation stage of the leaves; drying at room temperature, in an oven, or in an oven with forced air circulation are the best methods, and freezing plants for preservation of protodioscin is not recommended. In the guinea pigs evaluation, 14 guinea pigs were divided into two groups, the treatment group (TG) and the control group (CG). The TG received 480 mg/kg of diosgenin and the CG received only vegetable oil. Both groups received the treatment for 30 days. Blood samples were collected on day 0 (M0) and day 30 (M30) for blood cell count and biochemical analyzes. In clinical biochemistry, the analyzes were performed for alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, gamma glutamyl trasferase, alkaline phosphatase, urea, creatinine, glucose, cholesterol, HDL, triglycerides, lactate, cholinesterase, and calcium. Hematology and biochemistry did not present alterations, which could not be related to hepatic disease caused by saponins. In histology, only one animal had bile duct hyperplasia, the other alterations observed were generally nonspecific. Therefore, we concluded that the administration of 480 mg/kg of diosgenin to guinea pigs did not produce significant hepatic lesions or hematological and biochemical alterations related to liver disease. / O gênero Brachiaria possui importantes espécies de forrageiras utilizadas em países localizados em regiões tropicais. No entanto, esse gênero de gramíneas está associado à fotossensibilização e intoxicações em animais de produção. Deste modo, objetivou-se com este estudo estabelecer o padrão para colheita, processamento e conservação de amostras de Brachiaria brizantha para quantificação de protodioscina e contagem de esporos de Pithomyces chartarum e a avaliação da Cavia porcellus (cobaias) como modelo experimental na intoxicação por diosgenina. Para a avaliação da Brachiaria brizantha, amostras foram colhidas de oito pastagens as quais foram subdivididas em folhas jovens, folhas maduras, folhas velhas e planta inteira e submetidas a nove diferentes métodos de processamento. Após separação e tratamento das amostras foi realizada a quantificação de saponinas e a contagem de esporos. Observou-se que na maioria dos tratamentos as folhas jovens apresentaram quantidades maiores de protodioscina que as folhas velhas e a planta inteira. Os tratamentos que mantiveram as maiores quantidades de protodioscina foram temperatura ambiente, estufa e estufa com ventilação forçada. Nas amostras das pastagens não foram encontrados esporos do fungo. Desta forma, conclui-se que a concentração de protodioscina é maior nas folhas jovens; a secagem em temperatura ambiente, em estufa ou em estufa de ventilação forçada são os melhores métodos para preservação de protodioscina e o congelamento de plantas para a quantificação de protodioscina não é recomendado. Para a avaliação das cobaias como modelos experimentais na intoxicação por diosgenina foram utilizadas 14 cobaias, divididas em dois grupos, o grupo tratado (GT) e o grupo controle (GC). O GT recebeu 480 mg/kg de diosgenina diluída em óleo vegetal e o GC recebeu somente o óleo vegetal, ambos por 30 dias. Para avaliação do hemograma e análises bioquímicas foram colhidas amostras sanguíneas no dia 0 (M0) e no dia 30 (M30). Na bioquímica plasmática foram realizadas análises para ALT, AST, GGT, ALP, ureia, creatinina, glicose, colesterol, HDL, triglicerídeos, lactato, colinesterase e cálcio. A hematologia e a bioquímica não apresentaram alterações relacionadas à doença hepática causada por saponinas. Na histologia apenas um animal apresentou hiperplasia de ductos biliares, as outras alterações observadas foram de forma geral inespecíficas. Conclui-se que, na dose utilizada, a administração da diosgenina a cobaias não produz lesões hepáticas expressivas nem alterações hematológicas e bioquímicas relacionadas a hepatopatia.