ALMEIDA, J. G. L. Constituintes Químicos dos Zoantídeos Palythoa caribaeorum (Duchassaing & Michelotti, 1860) e Protopalythoa Variabilis (Duerden, 1898). 2011. 218 f. Tese (Doutorado em Química) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2011. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2014-11-17T19:21:17Z No. of bitstreams: 1 2011_tese_jglalmeida.pdf: 21887790 bytes, checksum: fa43b8669c440a1a4d888d165e1681f2 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2016-03-22T15:49:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_tese_jglalmeida.pdf: 21887790 bytes, checksum: fa43b8669c440a1a4d888d165e1681f2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-22T15:49:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_tese_jglalmeida.pdf: 21887790 bytes, checksum: fa43b8669c440a1a4d888d165e1681f2 (MD5) Previous issue date: 2011 / This work describes the chemical composition of the marine species Palythoa caribaeorum and Protopalythoa variabilis, both collected at Paracuru beach, state of Ceará. The cromatographic fractionation of the hexane extract from P. caribaeorum resulted in the isolation of four tetracyclic sterols possessing the ergostan skeleton: 24(R)-ergost-5-en-3b-ol (P-1); 5 a,8a-epidioxy-24(R)-ergost-6-en-3b-ol (P-2); 24(R)- ergost-5-en-3b,7a-diol (P-4) and 24(R)-7a-hydroperoxy-ergost-5-en-3b-ol (P-7), a glycerol derivative, 1-O-hexadecylglycerol (P-3) and four ceramides: N- (2S,3R,4E,8E,1,3-dihydroxy-4,8-octadecadienyl)hexadecanamide (P-5); N- (2S,3R,4E,1,3-dihydroxy-4-octadecenyl)hexadecanamide (P-6); N-[2S,3R,4E,8E,1-(2”- methylamino-ethanosulfonyl)-3-hydroxy-4,8-octadecaenyl]hexadecanamide (P-8) and N-[2S,3R,4E,1-(2”-methylaminoethano-sulfonyl)-3-hydroxy-4-octadecenyl]hexadecanamide (P-9). The cromatographic fractionation of the ethanol extract permited the isolation of a steroid, 24(R)-ergost-7-en-3b,5a,6b-triol (P-10) and a nucleoside 2- methyltimidine (P-11). Column chromatography of the hexane extract of P. variabilis led to the isolation of nonyl hexadecanoate (P-12), the sterol 24(R)-B-norergostan-3b- 5b-diol-6b-carboxylic acid (P-13) and the same chemical constituents previously isolated from P. caribaeorum (P-1, P-2, P-3 e P-4) including the four ceramides (P-5, P-6, P-8 e P-9). The citotoxic and antifungal properties of all ceramides were evaluated, nevertheless none of them showed any activity. All compounds were isolated through adsorption column cromatography over silica gel followed by high performance liquid chromatography. The structures of the isolated compounds were elucidated using spectrometric techniques, such as: GC/MS, HRESIMS, IR and NMR (1H, 13C and 15N) through 1D and 2D pulse sequences and, whenever the case, comparison with literature data / Este trabalho descreve a composição química das espécies marinha Palythoa caribaeorum e Protopalythoa variabilis, coletadas no município de Paracuru-CE. O fracionamento cromatográfico do extrato hexânico de P. caribaeorum, resultou no isolamento de quatro esteróides tetracíclico de esqueleto ergostano: 24(R)-ergost-5-en-3-ol (P-1); 5,8-epidioxi-24(R)-ergost-6-en-3-ol (P-2); 24(R)-ergost-5-en-3,7-diol (P-4) e 24(R)-7-hidroperoxi-ergost-5-en-3-ol (P-7), um derivado do glicerol, 1-O-hexadecilglicerol (P-3) e quatro ceramidas: N-(2S,3R,4E,8E,1,3-dihidroxi-4,8-octadecadieno)hexadecanamida (P-5); N-(2S,3R,4E,1,3-dihidroxi-4-octadeceno)-hexadecanamida (P-6), N-[2S,3R,4E,8E,1-(2”-metilamino-etanosulfonila)-3-hidroxi-4,8-octadeca¬dieno]hexadecanamida (P-8) e N-[2S,3R,4E,1-(2”-metilaminoetano-sulfonila)-3-hidroxi-4-octadeceno]hexadecanamida (P-9). Do fracionamento cromatográfico do extrato etanólico, foi possível isolar o esteróide 24(R)-ergost-7-en-3,56-triol (P-10) e o nucleosídeo 2-metil-timidina (P-11). Do estudo químico do extrato hexânico de P. variabilis obteve-se os mesmos constituintes químicos isolados de P. caribaeorum (P-1, P-2, P-3 e P-4) e as quatro ceramidas (P-5, P-6, P-8 e P-9). Além destes compostos foi isolado um éster de cadeia alifática, hexadecanoato de nonila (P-12) e o esteróide ácido 24(R)-B-norergostan-3-5-diol-6-carboxílico (P-13). O potencial citotóxico e antifúngico das ceramidas foi avaliado, entretanto, estas não apresentaram atividade. Os compostos foram isolados através de cromatografia de adsorção em gel de sílica e cromatografia líquida de alta eficiência. As estruturas dos compostos obtidos foram elucidadas utilizando técnicas espectroscópicas e espectrométricas, tais como: espectrometria de massa acoplada a cromatografia gasosa (CG/EM); espectrometria de massa de alta resolução (EMAR); espectroscopia na região do infravermelho (IV) e Ressonância Magnética Nuclear (RMN 1H, 13C e 15N) através de sequências de pulsos uni e bidimensionais e comparação com dados de RMN na literatura.

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-04-13T13:19:50Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Érica Patricia de Lima.pdf: 1787249 bytes, checksum: e0335492c8da48600443bd92bee0525e (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-13T13:19:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Érica Patricia de Lima.pdf: 1787249 bytes, checksum: e0335492c8da48600443bd92bee0525e (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014-04-29 / FACEPE / Zoantídeos são cnidários comuns de águas rasas em todo o mundo e no Brasil compõe a maioria das comunidades de ambiente recifal, principalmente no nordeste brasileiro. Apesar de abundantes são ainda pouco estudados. Apresentam história taxonômica confusa e com descrições vagas. Dentre os gêneros mais comuns se destaca Protopalythoa (Zoanthidea: Sphenopidae) cujas espécies são abundantes dos recifes pernambucanos. O objetivo desse estudo é realizar a identificação das espécies do gênero Protopalythoa utilizando a integração de dados morfológicos, moleculares e ecológicos, para o esclarecimento de sua taxonomia. Foram realizadas coletas em oito praias de Pernambuco, entre 2012 e 2013, e uma amostra do Arquipélago de São Pedro e São Paulo, coletada no ano de 2009, também foi analisada. No momento das coletas foram feitas fotografias das colônias e foi realizada a anotação de todas as características ecológicas e abióticas, como proximidade com outros organismos, profundidade das colônias e local onde foram coletadas. Foram mensuradas as dimensões dos pólipos (altura, diâmetro e quantidade de tentáculos), foram produzidas lâminas histológicas para análise da musculatura e foi realizado o cnidoma a partir dos tentáculos, da faringe e dos filamentos dos pólipos. Para análise molecular, foi realizada a extração, amplificação e sequenciamento do DNA das amostras utilizando os marcadores 12S, 16S e COI, a fim de construir relações filogenéticas entre os organismos. Os resultados moleculares e morfológicos revelaram a existência de três morfotipos para a espécie Protopalythoa variabilis na costa de Pernambuco e uma nova espécie Protopalythoa mínima nov. sp. descrita para o Arquipélago de São Pedro e São Paulo. Variação intraespecífica foi observada dentro da espécie P. variabilis, confirmada por dados moleculares, além de ampla distribuição, já que os morfotipos se mostraram presente em quase todas as praias e ao longo de toda a costa pernambucana. As análises integradas se revelam eficientes na capacidade de identificar e descrever espécies de zoantídeos.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O cÃncer à um dos principais problemas mundiais de saÃde e uma das causas mais importantes de morbidade e mortalidade em crianÃas e adultos. Apesar do sucesso no tratamento de diversos tipos de tumor, ainda nÃo se chegou ao fÃrmaco ideal e as terapias existentes nem sempre alcanÃam resultados satisfatÃrios alÃm de induzir muitos efeitos colaterais. A pesquisa em produtos naturais marinhos (PNM), embora recente, tem revelado uma enorme diversidade de estruturas quÃmicas, muitas vezes inÃditas e com potente atividade biolÃgica. MolÃculas citotÃxicas, com potencial aplicaÃÃo na quimioterapia do cÃncer, sÃo freqÃentemente isoladas dos organismos marinhos e dos quatro fÃrmacos oriundos de PNM comercializados atualmente, dois sÃo utilizados na quimioterapia do cÃncer. AlÃm dos metabÃlitos secundÃrios, o estudo de polissacarÃdeos modificadores da resposta biolÃgica para imunoterapia adjuvante tambÃm vem surgindo como uma Ãrea bastante promissora. Os cnidÃrios juntamente com esponjas, ascÃdias, moluscos e algas compÃem o grupo de representantes marinhos quimicamente mais prolÃficos. O zoantÃdeo Protopalythoa variabilis (Cnidaria, Anthozoa) à encontrado no litoral do mundo inteiro, porÃm o seu potencial farmacolÃgico nunca foi investigado anteriormente. O potencial antitumoral de substÃncias obtidas do P. variabilis encontrado no litoral cearense foi avaliado neste trabalho. O fracionamento guiado pela citotoxicidade de 4 linhagens de cÃlulas tumorais (HL-60, leucemia; HCT-8, cÃlon; SF-295, sistema nervoso central e MDA-MB-435, melanoma) do extrato hidroalcoÃlico bruto (EHB) rendeu uma mistura de alfa-aminoÃcidos lipÃdicos (1a/1b) inÃditos a partir da fraÃÃo hexano e 5 fraÃÃes (AcOEt-P-1-5) contendo sinais compatÃveis com esterÃides da fraÃÃo acetato de etila. Os 1a/1b apresentaram uma mÃdia de concentraÃÃo inibitÃria mÃdia (CI50) nas linhagens testadas de 85 ng/mL, enquanto a AcOEt-P-4, mais ativa dentre as derivadas da AcOEt exibiu uma mÃdia de CI50 de 117,5 ng/mL. Essa foi a primeira vez que alfa-aminoÃcidos lipÃdicos foram obtidos de uma fonte natural e tambÃm que o potencial citotÃxico de compostos dessa classe à demonstrado. O estudo da citotoxicidade dos 1a/1b e da AcOEt-P-4, na linhagem leucÃmica HL-60, revelou que estas amostras devem sua atividade à induÃÃo de apoptose com via intrÃnseca desempenhando um importante papel. A partir do resÃduo do EHB do P. variabilis, foram obtidos polissacarÃdeos sulfatados ligados a proteÃnas (PPV). O PPV nÃo apresentou citotoxicidade contra as cÃlulas tumorais in vitro, porÃm induziu 50% de inibiÃÃo do crescimento tumoral em camundongos transplantados com a linhagem B-16 (melanoma). As anÃlises dos parÃmetros bioquÃmicos, hematolÃgicos e histopatolÃgicos indicaram que o PPV nÃo apresentou toxicidade nos animais e aumentou a proliferaÃÃo de monÃcitos. Estudos adicionais com macrÃfagos peritoneais in vitro confirmaram que o PPV à um modificador da resposta biolÃgica. A ativaÃÃo dos macrÃfagos pelo PPV induziu a produÃÃo de Ãxico nÃtrico, e das citocinas IL-1 e IL-6, mas nÃo TNF-alfa. O presente trabalho mostrou que a espÃcie P. variabilis à uma rica e profÃcua fonte de compostos com potencial antitumoral a ser explorada, possuindo tanto metabÃlitos citotÃxicos capazes de induzir apoptose em cÃlulas tumorais diretamente, quanto macromolÃculas imunomoduladoras com atividade antitumoral in vivo. / Cancer is one of the biggest health problems in all over the world and causes a great amount of death of children and adults. Despite success of several cancer therapies, the ideal anticancer drug is not available yet and the numerous side effects are a limiting point. The natural products research, although recent, has shown often a variety of new chemical structures and potent biological activities. Cytotoxic compounds with possible cancer chemotherapy application are commonly isolated from marine organisms. Two within four marketed drugs from marine sources are used for cancer chemotherapy. Besides small weight molecules, the polysaccharides biological response modifiers also have showing to be a promising field as adjuvant in traditional chemotherapy. Cnidarians together with sponges, ascidians, mollusks and algae form the most promising marine group. The zoanthid Protopalythoa variabilis (Cnidaria, Anthozoa) is found in coastline of whole world, however its pharmacological potential have never been investigated before. The antitumor potential of compounds from P. variabilis from Cearà coast was evaluated in this work. The chemical fractionation guided by the cytotoxicity on four tumor cell lines (HL-60, leukemia; HCT-8, colon; SF-295, central nervous system and MDA-MB-435, melanoma) from crude hydroalcoholic extract yield two new lipidic -amino acids (1a/1b) in mixture from hexane fraction and five fractions (EtOAc-P-1-5) containing sterols signals from ethyl acetate fraction. 1a/1b showed a mean inhibitory concentration mean (IC50) of 85 ng/mL against cell lines tested, whereas EtOAc-P-4, the most powerful of EtOAc derivatives fractions, showed a mean IC50 of 117.5 ng/mL. This was the first report of lipidic amino acids obtained from natural sources and also the first cytotoxic data for this class of compounds. The cytotoxic investigation of 1a/1b and EtOAc-P-4 on HL-60 cells showed treated-cells dead by apoptosis with critical involvement of intrinsic pathway. Protein-bound sulfated polysaccharides (PPV) with high molecular mass were obtained from residue of the hydroalcoholic extract. PPV did not showed cytotoxicity on tumor cell lines in vitro, however it induced 50% of tumor growth inhibition on melanoma B-16 bearing-mice. No toxic evidences were observed in histopathology analysis as well as in biochemical and hematological parameters, however circulating monocytes increased with PPV treatment. In addition peritoneal macrophages investigated in vitro confirmed that PPV is a biological response modifier. The PPV-induced macrophage activation stimulated the release of nitric oxide and cytokines IL-1 and IL-6, but did not do TNF-. This work showed that P. variabilis is a rich source of antitumor compounds, having both small cytotoxic molecules and polysaccharides biological response modifiers with antitumor activity in vivo.

nÃo hà / Este trabalho descreve a composiÃÃo quÃmica das espÃcies marinha Palythoa caribaeorum e Protopalythoa variabilis, coletadas no municÃpio de Paracuru-CE. O fracionamento cromatogrÃfico do extrato hexÃnico de P. caribaeorum, resultou no isolamento de quatro esterÃides tetracÃclico de esqueleto ergostano: 24(R)-ergost-5-en-3-ol (P-1); 5,8-epidioxi-24(R)-ergost-6-en-3-ol (P-2); 24(R)-ergost-5-en-3,7-diol (P-4) e 24(R)-7-hidroperoxi-ergost-5-en-3-ol (P-7), um derivado do glicerol, 1-O-hexadecilglicerol (P-3) e quatro ceramidas: N-(2S,3R,4E,8E,1,3-dihidroxi-4,8-octadecadieno)hexadecanamida (P-5); N-(2S,3R,4E,1,3-dihidroxi-4-octadeceno)-hexadecanamida (P-6), N-[2S,3R,4E,8E,1-(2â-metilamino-etanosulfonila)-3-hidroxi-4,8-octadecaÂdieno]hexadecanamida (P-8) e N-[2S,3R,4E,1-(2â-metilaminoetano-sulfonila)-3-hidroxi-4-octadeceno]hexadecanamida (P-9). Do fracionamento cromatogrÃfico do extrato etanÃlico, foi possÃvel isolar o esterÃide 24(R)-ergost-7-en-3,56-triol (P-10) e o nucleosÃdeo 2-metil-timidina (P-11). Do estudo quÃmico do extrato hexÃnico de P. variabilis obteve-se os mesmos constituintes quÃmicos isolados de P. caribaeorum (P-1, P-2, P-3 e P-4) e as quatro ceramidas (P-5, P-6, P-8 e P-9). AlÃm destes compostos foi isolado um Ãster de cadeia alifÃtica, hexadecanoato de nonila (P-12) e o esterÃide Ãcido 24(R)-B-norergostan-3-5-diol-6-carboxÃlico (P-13). O potencial citotÃxico e antifÃngico das ceramidas foi avaliado, entretanto, estas nÃo apresentaram atividade. Os compostos foram isolados atravÃs de cromatografia de adsorÃÃo em gel de sÃlica e cromatografia lÃquida de alta eficiÃncia. As estruturas dos compostos obtidos foram elucidadas utilizando tÃcnicas espectroscÃpicas e espectromÃtricas, tais como: espectrometria de massa acoplada a cromatografia gasosa (CG/EM); espectrometria de massa de alta resoluÃÃo (EMAR); espectroscopia na regiÃo do infravermelho (IV) e RessonÃncia MagnÃtica Nuclear (RMN 1H, 13C e 15N) atravÃs de sequÃncias de pulsos uni e bidimensionais e comparaÃÃo com dados de RMN na literatura. / This work describes the chemical composition of the marine species Palythoa caribaeorum and Protopalythoa variabilis, both collected at Paracuru beach, state of CearÃ. The cromatographic fractionation of the hexane extract from P. caribaeorum resulted in the isolation of four tetracyclic sterols possessing the ergostan skeleton: 24(R)-ergost-5-en-3b-ol (P-1); 5 a,8a-epidioxy-24(R)-ergost-6-en-3b-ol (P-2); 24(R)- ergost-5-en-3b,7a-diol (P-4) and 24(R)-7a-hydroperoxy-ergost-5-en-3b-ol (P-7), a glycerol derivative, 1-O-hexadecylglycerol (P-3) and four ceramides: N- (2S,3R,4E,8E,1,3-dihydroxy-4,8-octadecadienyl)hexadecanamide (P-5); N- (2S,3R,4E,1,3-dihydroxy-4-octadecenyl)hexadecanamide (P-6); N-[2S,3R,4E,8E,1-(2â- methylamino-ethanosulfonyl)-3-hydroxy-4,8-octadecaenyl]hexadecanamide (P-8) and N-[2S,3R,4E,1-(2â-methylaminoethano-sulfonyl)-3-hydroxy-4-octadecenyl]hexadecanamide (P-9). The cromatographic fractionation of the ethanol extract permited the isolation of a steroid, 24(R)-ergost-7-en-3b,5a,6b-triol (P-10) and a nucleoside 2- methyltimidine (P-11). Column chromatography of the hexane extract of P. variabilis led to the isolation of nonyl hexadecanoate (P-12), the sterol 24(R)-B-norergostan-3b- 5b-diol-6b-carboxylic acid (P-13) and the same chemical constituents previously isolated from P. caribaeorum (P-1, P-2, P-3 e P-4) including the four ceramides (P-5, P-6, P-8 e P-9). The citotoxic and antifungal properties of all ceramides were evaluated, nevertheless none of them showed any activity. All compounds were isolated through adsorption column cromatography over silica gel followed by high performance liquid chromatography. The structures of the isolated compounds were elucidated using spectrometric techniques, such as: GC/MS, HRESIMS, IR and NMR (1H, 13C and 15N) through 1D and 2D pulse sequences and, whenever the case, comparison with literature data