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FAK and Pyk2 regulate the intracellular signaling networks required for integrin-mediated migration and phagocytosis by macrophagesOwen, Katherine Anne. January 2007 (has links)
Thesis (Ph. D.)--University of Virginia, 2008. / Title from title page. Includes bibliographical references. Also available online through Digital Dissertations.
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Aspectos da relação parasito-hospedeiro durante a infecção com linhagem selvagem e atenuada de Corynebacterium pseudotuberculosis em diferentes linhagens de camundongosFraga, Ricardo Evangelista 12 July 2013 (has links)
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Tese _ICS_Ricardo Evangelista Fraga.pdf: 5154897 bytes, checksum: af2af2c3bb0b0542ad0b616f2fd0beb9 (MD5) / O presente trabalho trata de estudos relacionados à Corynebacterium pseudotuberculosis (Cp), agente etiológico da linfadenite caseosa. Tem como finalidade estabelecer o perfil da resposta imune durante o percurso da infecção por estirpe atenuada (T1), relacionado ao primeiro experimento, ou selvagem (C57), segundo experimento, de Cp, em diferentes linhagens de camundongos, e desta forma estabelecer o padrão de resposta imune em animais susceptíveis e resistentes, além de avaliar o envolvimento do óxido nítrico, INF-gama e da citocina IL-10 no início do processo infeccioso. Uma comparação entre as respostas imunes a estas duas estirpes foi feita no terceiro experimento. Na metodologia empregada, para o primeiro e segundo experimento, foram utilizados 133 animais de diferentes linhagens, por experimento, sendo: de linhagem heterogênea - 28 Swiss; de linhagem isogênica - 28 Balb/c, 35 C57Black/6 selvagem, 14 C57Black/6 knockout (KO) para óxido nítrico (ON), 14 C57Black/6-KO-IFN-gama e 14 C57Black/6 knockout-KO-IL-10. Cada linhagem estudada foi dividida em dois grupos (controle e teste). Para o terceiro experimento foram utilizados 15 animais Balb/c divididos em três grupos. Os animais do grupo teste foram infectados com a estirpe T1 com 107/ml (1° experimento), a C57 com 102/ml (2° experimento) ou 104/ml das duas estirpes (T1 ou C57), no 3° experimento. Após a infecção os animais Swiss, Balb/c e C57Black/6 selvagens, foram avaliados aos 07, 30, 60 e 120 dias, enquanto que os animais C57Black/6 selvagens e knockout, foram analisados aos 07 e 14 dias (1° e 2° experimentos). Os animais referentes ao 3° experimento foram avaliados aos 70 dias após a infecção. Foi realizada a construção da curva de mortalidade; avaliação morfológica, que constava da identificação de granulomas, bem como dos locais de acometimento e avaliação do peso do baço; avaliação do direcionamento celular para o local da infecção, que corresponde a avaliação total e diferencial das células da cavidade peritoneal; produção das citocinas IL-1α, TNF-α, INF-γ, GMC-SF, IL-10, IL-6, IL-2, IL-17 por células aderentes da cavidade peritoneal estimuladas com antígenos secretados ou com bactéria viva (1° e 2° experimento); imunofenotipagem, avaliando as células T CD4+ e T CD8+; bem como a mensuração das citocinas IL-1α, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-13, IL-17, IL-21, IL-22, IL-27, INF-γ e TNF-α no homogenato do baço, em todos os experimentos. Os resultados obtidos mostram uma diferença entre as linhagens Balb/c, C57Black/6 e Swiss no tipo de resposta imune estabelecida durante infecção com T1 e com C57, onde os animais C57Black/6 demonstraram ser mais resistentes. Dentre os animais nocauteados, aqueles KO-IL-10 demonstraram ser mais resistentes, enquanto que os animais KO-ON e KO-INF-γ foram mais sensíveis à infecção. No 3° experimento foi possível visualizar que a estirpe C57 induziu alterações morfológicas mais acentuadas e maior direcionamento de células para o local da infecção, quando comparada com tais induções feitas pela estirpe T1. Com os experimentos realizados e resultados obtidos, pretendeu-se fornecer subsídios para uma melhor compreensão da relação parasito-hospedeiro no modelo murino, em infecções experimentais que confrontam duas estirpes desta bactéria com diferentes linhagens de camundongos. Estes conhecimentos poderão orientar a construção de protocolos de imunização/desafio visando o desenvolvimento de vacinas ou/e imunoterapias. / Salvador
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Estudo de moléculas efetoras da resposta imune celular e humoral em pequenos ruminantes contra Corynebacterium pseudotuberculosis como marcadores em ensaios de imunodiagnósticoRebouças, Miriam Flores 14 August 2013 (has links)
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Dissertação_ICS_ Miriam Flores.pdf: 1077091 bytes, checksum: b0adcded73dce2647872382d21f4a4be (MD5) / FAPEX;CNPq / Corynebacterium pseudotuberculosis is the etiologic agent of caseous lymphadenitis (CLA), a chronic disease that affects goats and sheep, characterized by granuloma formation in subcutaneous and internal lymph nodes. CLA causes significant economic losses in commercial goat herds; the best procedure to avoid spread of this disease is elimination of infected animals. Secreted antigens from T1 strain bacteria grown in brain heart infusion (BHI) broth were tested in an indirect ELISA system to determine if this system could be used to identify specific immunoglobulins against C. pseudotuberculosis. The electrophoretic profile of the BHI antigen was analyzed, as well as the recognition pattern by CLA infected sheep sera. The ELISA results were compared to Multiplex PCR assay and IFN-gamma production. The ELISA was able to discriminate between negative and positive animals, with a sensitivity of 89% and a specificity of 99%, and a large difference between positive and negative optical density values. When this assay was compared with other immunological and molecular methods, it was found only two discrepant results among thirty-two samples. We concluded that an ELISA using secreted antigens from C. pseudotuberculosis T1 strain growth in BHI broth culture would be a reliable tool for the serodiagnosis of caseous ymphadenitis in sheep. / Salvador
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CHARACTERIZATION OF LYMPHOID CELLS IN GOATS WITH CASEOUS LYMPHADENITIS (LECTINS).Hedden, Jane Ann. January 1985 (has links)
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Aspectos da resposta imune de camundongos BALB/c infectados com duas linhagens de Corynebacterium pseudotuberculosis.Tavares, Igor Farias January 2012 (has links)
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Dissertação Igor.pdf: 1540006 bytes, checksum: 333c9da080a2bb906e1bfea7082e9aae (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-26T12:28:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Dissertação Igor.pdf: 1540006 bytes, checksum: 333c9da080a2bb906e1bfea7082e9aae (MD5) / A linfadenite caseosa, causada por Corynebacterium pseudotuberculosis
(C.p) é considerada uma doença crônica que acomete caprinos e ovinos, causando
perdas econômicas graves no Nordeste do Brasil. Neste trabalho buscou-se avaliar
aspectos da resposta imunológica de camundongos BALB/c durante a infecção com
duas diferentes linhagens de Corynebacterium pseudotuberculosis (T1 e C57) que
apresentam graus de virulência diferentes: a cepa T1 caracteriza-se por apresentar
infecções mais brandas, ao passo que a C57 um comprometimento maior dos
animais infectados. A infecção experimental de camundongos reproduz os
principais aspectos observados em caprinos e ovinos. Para este experimento foram
utilizados 15 camundongos da linhagem BALB/c subdivididos em três grupos: grupo
controle (n=5), grupo infectado com 104/ml da linhagem T1(n=5) e um grupo
infectado com 104/ml da linhagem C57(n=5). Após 70 dias de infecção esses
animais foram eutanasiados. Realizou-se também a avaliação morfológica (presença
de granulomas e peso do baço). A resposta imune inata foi avaliada através do
padrão de migração celular para a cavidade peritoneal, através da quantificação total
e diferencial de células presentes nesta cavidade. A avaliação da resposta imune
adaptativa foi realizada através da mensuração da população de linfócitos TCD4+ e
TCD8+ presentes no baço de cada camundongo BALB/c, através da
imunofenotipagem por citometria de fluxo, bem como a mensuração das citocinas
IL-1α, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-13, IL-17, IL-21, IL-22, IL-27, INF-γ e TNF-α no
homogenato do baço. A linhagem C57 induziu alterações morfológicas (presença de
granulomas e peso do baço) mais acentuadas, que a linhagem T1. Foi possível
também identificar que durante a infecção com a linhagem C57 ocorreu um maior
direcionamento celular para o local da infecção e um aumento dos linfócitos TCD4+
e TCD8+. Observou-se também que as citocinas do perfil inflamatório IL-1 alfa e IL-6
e regulatório IL-13 e IL-10 apresentaram diferença significativa, demonstrando um
aumento no grupo dos animais infectados com a linhagem T1. As citocinas TNF-α e
IL-17 são difíceis de serem padronizadas, uma vez que não foi observado a
produção detectável destas citocinas. As citocinas IL-2, IL-4, INF-γ, IL-22, IL-21 e IL-
27 não apresentaram diferenças significativas entre os grupos. Pode-se concluir que
diferentes linhagens de C.pseudotuberculosis (T1 e C57) podem apresentar graus
de virulência diferentes, que por sua vez, podem interferir no processo de
estabelecimento da doença. Os resultados encontrados contribuem para uma
melhor compreensão do tipo de resposta e dos mecanismos imunológicos
envolvidos durante a infecção com diferentes linhagens de C. pseudotuberculosis.
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Avaliação da influência do interferon gama durante a infecção por Corynebacterium pseudotuberculosis em modelo murinoSantos, Heidiane Alves dos 13 August 2013 (has links)
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Dissertação_ICS_Heidiane Alves dos Santos.pdf: 1654611 bytes, checksum: d1c1496a80a371c6d05868103f946b63 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-13T16:46:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Dissertação_ICS_Heidiane Alves dos Santos.pdf: 1654611 bytes, checksum: d1c1496a80a371c6d05868103f946b63 (MD5) / A linfadenite caseosa é uma doença infecto-contagiosa crônica, de ocorrência mundial que acomete pequenos ruminantes, causando grandes perdas econômicas. Esta doença tem como agente etiológico a bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis e caracteriza-se pela formação de granulomas em gânglios linfáticos superficiais, podendo também acometer órgãos e linfonodos internos, como forma de resposta do sistema imune do hospedeiro à penetração deste agente que resiste a ação bactericida das células fagóciticas. Este patógeno se relaciona filogeneticamente ao Mycobacterium tuberculosis. A avaliação da resposta imune é uma importante ferramenta para localização de animais possivelmente infectados, dificultando desta forma a disseminação do agente. Estudos têm demonstrado a importância de citocinas na defesa de patógenos intracelulares facultativos, inclusive para C. pseudotuberculosis, destacando-se o interferon-gama (IFN-) citocina característica de células Th1, que pode está envolvida na proteção à patógenos intracelulares. O presente estudo avaliou aspectos da resposta imunológica de camundongos da linhagem C57Black/6 selvagem e knockout para IFN-gama, durante a infecção por Corynebacterium pseudotuberculosis. Os grupos foram acompanhados ao longo de 7 e 14 dias após infecção intraperitoneal com 107 UFC, durante os quais foram avaliados a disseminação bacteriana, a frequência de granulomas, a variação de peso do baço, o padrão de migração celular para a cavidade peritoneal, além da resposta imune humoral através da dosagem de IgG e subclasses e resposta imune celular através da dosagem de citocinas e imunofenotipagem. Os camundongos knockout para IFN-gama se mostraram mais susceptíveis à infecção por Corynebacterium pseudotuberculosis apresentando maior disseminação bacteriana nos linfonodos mesentéricos, maior frequência de granulomas, aumento considerável no peso do baço, intensa migração celular para a cavidade peritoneal, principalmente neutrófilos e macrófagos e expressão de linfócitos T CD8+ nas células esplênicas, e consequentemente menor expressão de citocinas pró-inflamatórias e regulatórias. Estes achados apontam para a importância do IFN-γ na resposta imune a patógenos intracelulares a exemplo de C. pseudotuberculosis, ao tempo em que demonstra a resposta deficiente do sistema imune dos animais nocauteados à infecção. / Salvador
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Caracterização biofísica da interação entre o flavonoide Morina e a proteína Transaldolase isolada de Corynebacterium pseudotuberculosis / Biophysical characterization of the interaction between the flavonoid Morin and the Transaldolase protein isolated from Corynebacterium pseudotuberculosisPrado, Ana Karla Miranda [UNESP] 31 March 2017 (has links)
Submitted by ANA KARLA MIRANDA PRADO null (karlinhamprado@hotmail.com) on 2017-04-24T20:41:26Z
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DissertaçãoAnaCorrecao final.pdf: 2950511 bytes, checksum: 267c66c96725c6306041b2f73554ba8d (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-26T13:59:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2017-03-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Corynebacterium pseudotuberculosis é uma bactéria gram-positiva causadora da Linfadenite Caseosa (LC) em caprinos e ovinos. A LC é uma doença infectocontagiosa crônica que prejudica a produção de carne, leite e lã em vários países, incluindo o Brasil. Uma vez que o tratamento da doença é muitas vezes inviável e ineficaz, a eliminação dos animais infectados no rebanho tem sido uma das principais medidas de contenção da enfermidade. Vários grupos de pesquisa vem se dedicando ao estudo de C. pseudotuberculosis visando a identificação de fatores moleculares envolvidos na virulência e patogenicidade durante a infecção. Embora alguns destes componentes já tenham sido descritos, como a fosfolipase D, novos estudos são necessários para que seja possível compreender as diversas interações regulatórias que são intrínsecas a esse microrganismo, assim muitos grupos de pesquisas produzem de forma recombinante a enzima transaldolase de C. pseudotuberculosis, envolvida na glicólise e no metabolismo das pentoses-fosfato a fim de buscar inibidores que possam controlar sua ação enzimática. Nesse contexto, os flavonoides são compostos polifenólicos encontrados nas plantas e, em alguns casos, atuam como inibidores de infecções por microrganismos. Assim, a motivação deste trabalho consistiu em identificar e quantificar uma possível interação do flavonoide morina com a enzima transaldolase, a fim de bloquear a atividade de replicação e infecção de LC. Deste modo os objetivos desse estudo foram realizar a expressão, purificação, a caracterização da estrutura secundária e estabilidade térmica por dicroísmo circular e verificação de interação entre transaldolase e morina por espectroscopia de fluorescência da proteína transaldolase. Os resultados da expressão mostram que a proteína transaldolase com 40kDa foi purificada em cromatografia de afinidade seguida de cromatografia de exclusão molecular. A sua estrutura secundária apresentou 74% de alfa hélice, 0% de folha beta, 7,9% de alças e 18,1 % de estruturas aleatórias. A análise da desnaturação térmica mostrou que a temperatura de melting foi de 48°C, indicando que a proteína é estável. A interação entre Morina e Transaldolase apresentou mecanismo de supressão estáticodinâmico, com uma constante de associação moderada e um sítio de interação. A análise termodinâmica mostrou que o processo de interação é espontâneo ∆G<0, endotérmico ∆H>0 e entrópico ∆S<0. Assim, sabendo-se que a proteína Transaldolase é a proteína chave no processo das infecções por Corynebacterium pseudotuberculosis e considerando as propriedades antibacterianas e antiproliferativas do flavonoide morina, sugere-se que este composto possa ser investigado para os seus usos específicos. Sugere-se que a interação da transaldolase com a Morina possa exercer um papel de carreador ou seja, uma forma pela qual a proteína leva a molécula para o local que ela atua, e, assim, a Morina consiga realizar sua função antiproliferativa e bloquear as infecções. / Corynebacterium pseudotuberculosis is a gram-positive bacterium which causes Caseous Lymphadenitis (CL) in small ruminants. CL is a chronic infectious disease which impairs meat, whool and milk production in many countries including Brazil. Once the treatment for CL is not efficient, removing affected animals from herds represents one of the major strategies to prevent the disease from spreading. Many research groups have been looking for molecular components in C. pseudotuberculosis that are involved in virulence and infection, among which phospholipase D stands out as the major one described so far. However, new studies are necessary for the understanding of the microorganism’s biology, including its intrinsic regulation mechanisms. The object of study of this work was the enzyme transaldolase involved in glycolysis and in the metabolism of pentoses-phosphate, necessary for the formation of nucleic acids that the bacterium uses to replicate in order to find inhibitors that can control its enzymatic action. In this context, flavonoids are polyphenolic compounds found in plants and, in some cases, act as inhibitors of infections by microorganisms. Thus, the purpose of this work is to identify and quantify a possible interaction of the flavonoid morin with the enzyme transaldolase, in order to block LC´s replication activity and infection. The objectives of this study included expression and purification of C. pseudotuberculosis´s transaldolase protein, the characterization of the secondary structure and thermal stability by circular dichroism and the study of the interaction between transaldolase and morin by fluorescence spectroscopy. The transaldolase protein, with approximately 40kDa, was purified on affinity chromatography followed by molecular exclusion chromatography. Its secondary structure had 74% of alpha helix, 0% of beta sheet, 7.9% of loops (turn) and 18.1% of random structures. The thermal denaturation analysis showed that the melting temperature is 48 °C, indicating that the protein is stable. The interaction between Morina and Transaldolase presented a static-dynamic suppression mechanism, with a moderate association constant and one interaction site. The thermodynamic analysis showed that the interaction process is spontaneous ΔG <0, endothermic ΔH> 0 and entropic ΔS <0. Thus, with the knowledge that Transaldolase protein is the key protein in the process of Corynebacterium pseudotuberculosis infections and considering the antibacterial and antiproliferative properties of the flavonoid morine, it is suggested that this compound can be investigated for its specific uses. It is suggested that the interaction of transaldolase with Morina may play a role of carrier, that is, a way in which the protein takes the molecule to the place it acts, and thus Morina can perform its antiproliferative function and block the Infections.
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Loss of the Lipopolysaccharide Core Biosynthesis rfaD Gene Increases Antimicrobial Chemokine Binding and Bacterial Susceptibility to CCL28 and Polymyxin: A Model for Understanding the Interface of Antimicrobial Chemokines and Bacterial Host Defense Avoidance MechanismsLew, Cynthia S. 24 August 2012 (has links) (PDF)
In order to better understand the mechanism of antimicrobial chemokine activity, including binding to and killing of bacteria, random transposon mutagenesis was performed in Yersinia pseudotuberculosis. Resulting mutants were screened for increased binding to chemokine and high binding clones were selected for further study. One mutant, designated mutant 27, was found to have a single insertion mutation in the rfaD gene. The rfaD gene product is involved in heptose biosynthesis, one of the sugars of the inner core oligosaccharide of Gram- negative lipopolysaccharide (LPS). Mutant 27 was found to bind both CCL25 and CCL28, two antimicrobial chemokines, more efficiently than the wild type bacteria. This clone was also found to be more susceptible to CCL28- mediated killing and polymyxin activity. Complementation with a plasmid bearing the full rfaDFC operon restored the wild type phenotype in both regards. These data suggest that normal LPS expression by Y. pseudotuberculosis serves to protect the bacteria from the antimicrobial function of chemokines and other antimicrobial proteins of the mammalian innate immune system.
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Desenvolvimento de ensaio imunoenzimático (ELISA) indireto na detecção de anticorpos anti-Corynebacterium pseudotuberculosis em ovinos (Ovis aries, Linnaeus, 1758) / Development of indirect enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) for detection of antibodies against Corynebacterium pseudotuberculosis in sheep (Ovis aries, Linnaeus, 1758)Nassar, Alessandra Figueiredo de Castro 25 May 2012 (has links)
A linfadenite caseosa é uma doença infectocontagiosas, de ocorrência mundial, que acomete caprinos e ovinos, caracterizada pela formação de abscessos em gânglios linfáticos superficiais, e alguns casos órgãos e linfonodos internos. É uma enfermidade causada pelo Corynebacterium pseudotuberculosis, responsável por grandes perdas econômicas na caprinocultura e ovinocultura. O presente trabalho teve por objetivo desenvolver um teste sorológico sensível e específico para detectar anticorpos anti-C. pseudotuberculosis em ovinos. Os animais foram classificados em dois grupos, com sintomatologia aparente para linfadenite caseosa (n=103) colhidos a campo, onde foram coletados amostras de soro e punção de linfonodos aumentados; e animais sem sintomatologia aparente (n=50) dos quais as amostras de soro e fragmentos de pulmão e linfonodo mediastínico foram colhidos em frigorífico. Em ambas as amostras a confirmação da presença e ausência da doença foi realizada através das provas de cultivo microbiológico e PCR, considerados nesse estudo como padrão para classificação dos animais. O resultado do cultivo microbiológico dos animais com sintomatologia aparente foi 53,5% (55/103) identificadas como C. pseudotuberculosis através de provas bioquímicas, e com a utilização da PCR, 46,5% (48/103) das amostras foram positivas para C. pseudotuberculosis. Com relação aos animais sem sintomatologia aparente, todas as amostras foram negativas no cultivo microbiológico e PCR (0/50). Na padronização do ELISA indireto foram utilizados 42 soros positivos e 43 soros negativos confirmados no cultivo microbiológico e PCR para linfadenite caseosa. A média de absorbância foi 1,88 com desvio padrão de 0,43, para as amostras positivas e, para as amostras negativas a média de 0,71 e desvio padrão 0,18. Dessa forma foram consideradas positivas, as amostras que apresentaram na reação de ELISA valor da DO> 1,1 e negativas de <1,1. A análise gráfica empregada no presente trabalho, curva ROC, permitiu encontrar o valor do ponto de corte associado à combinação dos parâmetros de sensibilidade e especificidade, assim, a acurácia do teste pôde descriminar indivíduos doentes de não doentes. A utilização de técnicas sorológicas no diagnóstico da linfadenite caseosa permitirá o controle epidemiológico da doença, porém não substitui o cultivo microbiológico, técnica considerada padrão ouro, e pode ser utilizada como teste de triagem ou mesmo na comercialização de animais, visto que a doença muitas vezes é de caráter inaparente, o que inviabiliza o diagnóstico clínico e microbiológico. / Caseous lymphadenitis is an infectious disease of worldwide occurrence that affects sheep and goats, characterized by the formation of abscesses in superficial lymph nodes, and sometimes internal organs and lymph nodes. It is caused by Corynebacterium pseudotuberculosis, responsible for great economic losses in goat and sheepproduction. This study aimed to develop a sensitive and specific serological test to detect anti- C. pseudotuberculosis in sheep. The animals were divided into two groups, the first one encompassing the ones with apparent caseous lymphadenitis symptoms (n = 103), where serum samples and puncture of enlarged lymph nodes were collected, and the second one with animals with no apparent symptoms (n = 50) of which samples (lung fragments, serum and and mediastinal lymph nodes) were inspected and harvested in the slaughterhouse. In both groups the presence and absence of the disease was carried through the evidence of microbiological culture and PCR, considered as the standard for the groups classification. Microbiological culture results of animals with apparent symptoms was 53.5% (55/103) identified as C. pseudotuberculosis by biochemical tests, and allied to PCR, 46.5% (48/103) of the samples were positive for C. pseudotuberculosis. Regarding animals without apparent symptoms, all samples were negative in microbiological culture and PCR (0/50). For the standardization of indirect ELISA we used 42 positive sera and 43 negative sera confirmed by microbiological culture and PCR for caseous lymphadenitis. The mean absorbance was 1.88 with standard deviation of 0.43 for the positive samples, and for negative samples the average was 0.71 and standard deviation 0.18. Thus we considered as positive, the samples with DO value > 1.1 and negative <1.1. The graphical analysis employed in this study, ROC curve, allowed us to find the cutoff value allied to the association of sensitivity and specificity parameters, thus the test accuracy was able to discriminate sick from not sick individuals. The use of serological techniques for the diagnosis of caseous lymphadenitis will allow the epidemiological control of the disease, but does not replace the microbiological culture, considered as the gold standard technique, and can be used as a screening test or animals trade, since the disease condition often is unapparent, which derails the clinical diagnosis and microbiological.
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Papel das Yops de yersinia pseudotuberculosis na modulação da resposta imune celular durante infecção experimental /Monnazzi, Luis Gustavo Silva. January 2007 (has links)
Orientador: Beatriz Maria Machado de Medeiros / Banca: Alexandrina Sartori / Banca: Cleni Mara Marchocchi Machado / Banca: Leonilda Maria Barbosa dos Santos / Banca: Phileno Pinge Filho / Resumo: As três espécies patogênicas do gênero Yersinia, Y. pestis, Y. enterocolitica e Y. pseudotuberculosis, compartilham um tropismo pelos tecidos linfóides e um plasmídeo de 70-kb que é essencial para a virulência. O plasmídeo codifica um sistema de secreção do tipo III e proteínas efetoras chamadas Yops (Yersinia outer proteins). Este sistema de secreção é responsável por translocar as Yops para dentro das células do hospedeiro, onde elas interagem com alvos específicos e alteram as funções destas células. As Yops são capazes de modular a resposta imune do hospedeiro, permitindo à bactéria se replicar extracelularmente nos tecidos e órgãos linfóides. Embora haja muita informação sobre os mecanismos usados pela Yersinia para evadir do sistema imune inato de defesa, pouco se sabe sobre como ela afeta a resposta imune adaptativa in vivo. O objetivo deste trabalho foi analisar a influência das Yops E, H e M, translocadas pela Y. pseudotuberculosis, na colonização e persistência da bactéria no baço e fígado dos animais infectados, nas quantidades de LT-CD4 e LT-CD8 durante a infecção e na produção das principais citocinas Th1 e Th2 por estas subpopulações de linfócitos. Além disso, foi verificado o papel destas Yops sobre a ativação do fator nuclear κB (NF-κB) e sobre a atividade citotóxica dos LT-CD8. Para isso, camundongos BALB/c fêmeas foram infectados intravenosamente com a amostra selvagem de Y. pseudotuberculosis (WT), ou com amostras mutantes incapazes de secretar as Yops E, H e M (YopE-, YopH- e YopM-), ou ainda com a amostra curada do plasmídeo de virulência (YpIII). No 5°, 7°, 14° e 21° dia pós-infecção (pi), os animais foram sacrificados e as células esplênicas foram obtidas de camundongos infectados e de camundongos não infectados (grupo controle). Os níveis de colonização no baço e no fígado foram determinados por... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The three pathogenic species of the genus Yersinia, Y. pestis, Y. enterocolitica and Y. pseudotuberculosis, share a tropism for lymphoid tissues and a 70-kb plasmid essential for virulence. The plasmid encodes a type III secretion system and effector proteins called Yops (Yersinia outer proteins). This secretion system is responsible for translocating the Yops into the host cells, where they interact with specific host targets and alter the functions of these cells. Yops are able to modulate the host immune defenses allowing the bacteria to replicate extracellularly in lymphoid tissues and organs. Although there is ample information on the mechanisms used by Yersinia to evade the innate immune system, very little is known about how it affects the adaptive immune response in vivo. The aim of this research was to analyze the influence of translocated Yops E, H and M of Y. pseudotuberculosis on the colonization and persistence of the bacterium in the spleen and liver of infected animals, on the quantities of CD4 and CD8 T cells during the infection and on the production of the main Th1 and Th2 cytokines by these lymphocyte subpopulations. In addition, it was verified the role of these same Yops on the activation of nuclear factor κB (NF- κB) and on the CD8 T cells cytotoxic activity. To this end, female BALB/c mice were infected intravenously with the wild type Y. pseudotuberculosis (WT), or with the mutant strains unable to secrete the Yops E, H and M (YopE-, YopH- and YopM-) or with the plasmid-cured strain (YpIII). On the 5th, 7th, 14th and 21st days post-infection (pi), the animals were sacrificed and the spleen cells were isolated from infected and uninfected mice (control group). The levels of colonization in the spleen and liver were determined by counting the number of colony-forming units. Both the phenotypic analysis of lymphocytes and the intracellular... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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