Made available in DSpace on 2015-04-11T13:38:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cynthia Ferreira.pdf: 1778547 bytes, checksum: ba2b6be94cabf06f34f677dac25cf356 (MD5) Previous issue date: 2013-11-01 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / In the legal Amazon, the Amazon state registered 180.290 malaria cases in 2006, that fact carries in huge economic and social impact for the region. The diagnosis is traditionally performed by the method of the giemsa stained thick blood smear, however low-level parasitemias and mixed infections are frequently not detected. These disadvantages justify the use of more sensitive and specific methodologies as the Polimerase Chain Reaction (PCR). The elevated cost of this method is one of the factors that prevent your utilization as routine in the different endemic regions. The PCR method is a technic that has been already implemented alternatively for drug monitoring, detections of mixed infections and genotyping studies. The present work had for goal the molecular characterization of Plasmodium falciparum and P. vivax field isolates of 12 endemic areas in Amazon state: Manaus, Careiro, Borba, Autazes, Itacoatira, Presidente Figueiredo, Barcelos, São da Cachoeira, Coari, Tefé, Guajará and Humaitá. The samples were obtained by microscopy diagnosis and the study of mixed infections was done through nested-PCR. Additionally was standardized methodology in real time to hasten and to give more reliability to the samples diagnosis used in studies developed by the malaria management of the Fundação de Medicina Tropical do Amazonas (FMTAM). The genes used to P. falciparum´s characterization were pfcrt and pfatp6, and for P. vivax was used the gene pvmdr, using the automatic sequencing and for genotiping assays using Real Time probes detection. All P. falciparum samples analyzed for the gene pfcrt demonstrated similar genetic profile to 7G8 strain control, which has the mutation K76T, proving the resistant phenotype observed in previous studies. For the gene pfatp6 were described 3 distinct haplotypes, with mutations identified in the positions 1204, 1888 and 2694. The analysis of the gene pvmdr in P. vivax identified mutations in codons 976 and 1076 in 11 samples of 100 total analyzed, distributed among four areas, Autazes, Coari, Manaus and Tefé. The identification of Plasmodium population´s genetic profile circulating in Amazon region is an important tool to understand the transmission dynamics of malaria and essential for constant monitoring the disease control actions / Na Amazônia legal, o estado do Amazonas registrou 180.290 casos de malária no ano de 2006, fato que acarreta em grande impacto econômico e social para a região. O diagnóstico é tradicionalmente realizado pela técnica da gota espessa (G.E.), no entanto fatores como a redução de sensibilidade em baixas parasitemias e dificuldade no diagnóstico de infecções mistas justificam a adoção de metodologias com maior sensibilidade e especificidade. Através da técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) esses objetivos podem ser alcançados, no entanto, o elevado custo ainda é um fator que impede sua utilização como rotina nas diferentes regiões endêmicas. Alternativamente, para monitoramento da resposta terapêutica, identificação de infecções mistas e estudos de genotipagem, esta técnica já é implementada. Este trabalho teve por objetivo a caracterização molecular de isolados de Plasmodium falciparum e P. vivax de 12 localidades endêmicas do estado do Amazonas: Manaus, Careiro, Borba, Autazes, Itacoatira, Presidente Figueiredo, Barcelos, São Gabriel da Cachoeira, Coari, Tefé, Guajará e Humaitá. As amostras foram obtidas segundo diagnóstico da G.E. no entanto foi feito o estudo de infecções mistas, não detectadas, através de PCR, e adicionalmente foi padronizada metodologia em tempo real para agilizar e dar maior confiabilidade aos diagnósticos de amostras utilizadas em estudos desenvolvidos pela gerência de malária da Fundação de Medicina Tropical do Amazonas (FMTAM). Os genes utilizados para caracterização do P. falciparum foram o pfcrt e pfatp6, e para o estudo de P. vivax utilizou-se o gene pvmdr. Como metodologia adotou-se o sequenciamento automático e a genotipagem utilizando sondas em sistema de PCR em Tempo Real. Todas as amostras de P. falciparum analisadas para o gene pfcrt demonstraram perfil genético semelhante à cepa 7G8, que contem a mutação K76T, comprovando o fenótipo resistente observado em estudos anteriores. Para o gene pfatp6 foram descritos 3 haplótipos distintos, com mutações identificadas nas posições 1204, 1888 e 2694. A análise do gene mdr de P. vivax identificou mutações nos códons 976 e 1076 em 11 amostras de um total de 100 analisadas, distribuídas entre os munícipios de Autazes, Coari, Manaus e Tefé. A identificação do perfil genético de populações de Plasmodium circulantes na Amazônia é uma importante ferramenta para o entendimento da dinâmica de transmissão da malária e para o constante monitoramento das ações de controle da doença