Copaifera langsdorffii Desf., popularmente conhecida como \"copaíba\", distribui-se abundantemente no cerrado brasileiro, sendo que diversas atividades biológicas já foram descritas na literatura para o seu oleorresina. Contudo, nos últimos anos, nosso grupo de pesquisa vem estudando as partes aéreas desta espécie e verificou-se que o extrato hidroalcoólico das folhas de C. langsdorffii apresentava atividade antilitiásica. Com a intenção de descobrir quais são os compostos relacionados a esta atividade, foi realizado o estudo fitoquímico das folhas. Com o auxílio de análises cromatográficas foi possível verificar o perfil de cada fração e, assim, escolher as mais promissoras para isolamento de compostos. A partir da fração em acetato de etila obtiveram-se os flavonoides quercetina-3-O-?-L-ramnopiranosídeo (quercitrina) e canferol-3-O-?-L-ramnopiranosídeo (afzelina), isolados por cromatografia contra-corrente (HSCCC), seguida de purificação por cromatografia líquida de alta eficiência preparativa (CLAE-preparativa). Já a partir da fração aquosa obtiveram-se os derivados galoilquínicos 5\'\'-O-metil-3,4-di-O-galoilquínico e 5\',5\'\'-di-O-metil-3,4-di-O-galoilquínico por cromatografia de filtração em gel (Sephadex), seguida de purificação em CLAE-preparativa. Nos testes farmacocinéticos, o extrato hidroalcoólico, quercitrina e o galoilquínico 5\',5\'\'-di-O-metil-3,4-di-O-galoilquínico foram os compostos selecionados para serem estudados. Para ambos os compostos, métodos analíticos foram validados em plasma e em salina para a realização dos estudos farmacocinéticos. Realizou-se também a calibração da sonda de microdiálise in vitro por retrodiálise, para se determinar as condições a serem empregadas in vivo. De maneira geral, quercitrina se ajustou ao modelo farmacocinético de dois compartimentos e, após administração intravenosa de 1 mg/kg, apresentou meia vida curta (t1/2 = 0,40 ± 0,07 h), uma rápida (? = 11,32 ± 1,90 h-1) e boa (Vdss = 2,10 ± 0,52 L/kg) distribuição tecidual e alta depuração (CL = 6,85 ± 0,62 L/h/kg). Por análise dos microdialisados renais, a fração livre de quercitrina nos rins foi 13 vezes maior do que a concentração livre no plasma. O composto galoilquínico, por se tratar de um composto inédito, foi estudado farmacocineticamente por via intravenosa em três concentrações (1 mg/kg, 1,5 mg/kg e 2 mg/kg) e se ajustou bem ao modelo de dois compartimentos com eliminação por Michaelis-Menten, apresentando comportamento não linear (ASC0-? 103,85 ± 23,90; 273,7 ± 81,6 e 363,6 ± 142,32 ?g h/mL, respectivamente). Não foi possível quantificar a concentração livre nos rins por microdiálise para o galoilquínico, pois o mesmo se ligava a sonda. Dessa maneira, o estudo de distribuição tecidual foi realizado, demonstrando que tanto quercitrina quanto o galoilquínico apresentavam alta penetrabilidade nos rins, com uma razão tecido renal/plasma de 23,7 e 12,4, respectivamente. Com relação ao perfil farmacocinético do extrato hidroalcoólico de C. langsdorffii e da fração butanólica após administração por via oral, verificou-se que não foi possível detectar nenhum dos isolados no plasma, sugerindo que tais substâncias foram metabolizadas e, provavelmente, tornaram-se ainda mais hidrossolúveis para posterior eliminação por via renal. Frente aos resultados, conclui-se que quercitrina e galoilquínico são substâncias de rápida eliminação e que podem estar relacionadas à atividade antilitiásica descrita para o extrato das folhas de C. langsdorffii. / Copaifera langsdorffii Desf., popularly known as \"copaíba\" is abundantly distributed in the Brazilian cerrado, with several biological activities that have been described in the literature for its oleoresin. However, since few years ago, our research group has been studying the aerial parts of this species, and it was found that the hydroalcoholic extract of its leaves display antilithiatic activity. Aiming to identify the compounds related to this activity, the phytochemical study of the leaves hydroalcoholic extract was undertaken. By using chromatography techniques, it was possible to choose the most promising fractions to isolate compounds. From the ethyl acetate fraction, it was isolated by countercurrent chromatography (HSCCC) followed by preparative HPLC purification, the flavonoids quercetin-3-O-?-L-rhamnopyranoside (quercitrin) and kaempferol-3-O-?-L-rhamnopyranoside (afzelin). From the aqueous fraction, it was isolated the galloylquinic acid derivatives 5\'\'-O-methyl-3,4-di-O-galloylquinic and 5\',5\'\'-di-O-methyl-3,4-O-di-galloylquinic by using gel filtration chromatography (Sephadex) followed by preparative HPLC purification. For the pharmacokinetic assays, the hydroalcoholic extract, quercitrin and 5\', 5\'\'-di-O-methyl-3,4-di-O-galloylquinic acid were chosen to be studied. For both compounds, it was validated analytical methods in plasma and saline, to perform pharmacokinetic studies. It was also held the microdialysis probe calibration in vitro by retrodialysis, to determine the conditions to be employed in vivo. In general, quercitrin fitted to a two-compartmental pharmacokinetic model and after intravenous administration of 1 mg/kg, it presented a short half-life (t1/ 2 = 0.40 ± 0.07 h) a fast (? = 11.32 ± 1.90 h-1) and good (Vdss = 2.10 ± 0.52 L/kg) tissue distribution and high clearance (CL = 6.85 ± 0.62 L/h/kg). In the kidney microdialisates analyses, the free renal fraction of quercitrin was 13 times greater than the free plasma concentration. The galloylquinic compound, which is a new isolated one, was studied intravenously in three concentrations (1 mg/kg, 1.5 mg/kg and 2 mg/kg) and fitted to a two-compartmental model with Michaelis-Menten elimination, presenting the non-linear behavior (ASC0-? 103.85 ± 23.90, 273.7 ± 81.6 and 363.6 ± 142.32 ?g h/mL, respectively). It was not possible to quantify the free concentration of galloylquinic in the kidney by microdialysis, because it bound to the probe. Thus, the study of tissue distribution was performed, in which it was demonstrated that both quercitrin and galloylquinic showed high penetration in the kidneys, with a tissue/plasma ratio of 23.7 and 12.4, respectively. With regard to the pharmacokinetic profile of the hydroalcoholic extract of C. langsdorffii and n-butanol fraction after oral administration, it was found that it was not possible to detect any of the isolated compounds in plasma, suggesting that these compounds were metabolized and probably become even more water soluble for disposal renally. Based on the results, it is concluded that quercitrin and galloylquinic are rapidly eliminated and may be related to antilithiatic activity of the leaves of C. langsdorffii.

Copaifera langsdorffii Desf., popularmente conhecida como \"copaíba\", distribui-se abundantemente no cerrado brasileiro, sendo que diversas atividades biológicas já foram descritas na literatura para o seu oleorresina. Contudo, nos últimos anos, nosso grupo de pesquisa vem estudando as partes aéreas desta espécie e verificou-se que o extrato hidroalcoólico das folhas de C. langsdorffii apresentava atividade antilitiásica. Com a intenção de descobrir quais são os compostos relacionados a esta atividade, foi realizado o estudo fitoquímico das folhas. Com o auxílio de análises cromatográficas foi possível verificar o perfil de cada fração e, assim, escolher as mais promissoras para isolamento de compostos. A partir da fração em acetato de etila obtiveram-se os flavonoides quercetina-3-O-?-L-ramnopiranosídeo (quercitrina) e canferol-3-O-?-L-ramnopiranosídeo (afzelina), isolados por cromatografia contra-corrente (HSCCC), seguida de purificação por cromatografia líquida de alta eficiência preparativa (CLAE-preparativa). Já a partir da fração aquosa obtiveram-se os derivados galoilquínicos 5\'\'-O-metil-3,4-di-O-galoilquínico e 5\',5\'\'-di-O-metil-3,4-di-O-galoilquínico por cromatografia de filtração em gel (Sephadex), seguida de purificação em CLAE-preparativa. Nos testes farmacocinéticos, o extrato hidroalcoólico, quercitrina e o galoilquínico 5\',5\'\'-di-O-metil-3,4-di-O-galoilquínico foram os compostos selecionados para serem estudados. Para ambos os compostos, métodos analíticos foram validados em plasma e em salina para a realização dos estudos farmacocinéticos. Realizou-se também a calibração da sonda de microdiálise in vitro por retrodiálise, para se determinar as condições a serem empregadas in vivo. De maneira geral, quercitrina se ajustou ao modelo farmacocinético de dois compartimentos e, após administração intravenosa de 1 mg/kg, apresentou meia vida curta (t1/2 = 0,40 ± 0,07 h), uma rápida (? = 11,32 ± 1,90 h-1) e boa (Vdss = 2,10 ± 0,52 L/kg) distribuição tecidual e alta depuração (CL = 6,85 ± 0,62 L/h/kg). Por análise dos microdialisados renais, a fração livre de quercitrina nos rins foi 13 vezes maior do que a concentração livre no plasma. O composto galoilquínico, por se tratar de um composto inédito, foi estudado farmacocineticamente por via intravenosa em três concentrações (1 mg/kg, 1,5 mg/kg e 2 mg/kg) e se ajustou bem ao modelo de dois compartimentos com eliminação por Michaelis-Menten, apresentando comportamento não linear (ASC0-? 103,85 ± 23,90; 273,7 ± 81,6 e 363,6 ± 142,32 ?g h/mL, respectivamente). Não foi possível quantificar a concentração livre nos rins por microdiálise para o galoilquínico, pois o mesmo se ligava a sonda. Dessa maneira, o estudo de distribuição tecidual foi realizado, demonstrando que tanto quercitrina quanto o galoilquínico apresentavam alta penetrabilidade nos rins, com uma razão tecido renal/plasma de 23,7 e 12,4, respectivamente. Com relação ao perfil farmacocinético do extrato hidroalcoólico de C. langsdorffii e da fração butanólica após administração por via oral, verificou-se que não foi possível detectar nenhum dos isolados no plasma, sugerindo que tais substâncias foram metabolizadas e, provavelmente, tornaram-se ainda mais hidrossolúveis para posterior eliminação por via renal. Frente aos resultados, conclui-se que quercitrina e galoilquínico são substâncias de rápida eliminação e que podem estar relacionadas à atividade antilitiásica descrita para o extrato das folhas de C. langsdorffii. / Copaifera langsdorffii Desf., popularly known as \"copaíba\" is abundantly distributed in the Brazilian cerrado, with several biological activities that have been described in the literature for its oleoresin. However, since few years ago, our research group has been studying the aerial parts of this species, and it was found that the hydroalcoholic extract of its leaves display antilithiatic activity. Aiming to identify the compounds related to this activity, the phytochemical study of the leaves hydroalcoholic extract was undertaken. By using chromatography techniques, it was possible to choose the most promising fractions to isolate compounds. From the ethyl acetate fraction, it was isolated by countercurrent chromatography (HSCCC) followed by preparative HPLC purification, the flavonoids quercetin-3-O-?-L-rhamnopyranoside (quercitrin) and kaempferol-3-O-?-L-rhamnopyranoside (afzelin). From the aqueous fraction, it was isolated the galloylquinic acid derivatives 5\'\'-O-methyl-3,4-di-O-galloylquinic and 5\',5\'\'-di-O-methyl-3,4-O-di-galloylquinic by using gel filtration chromatography (Sephadex) followed by preparative HPLC purification. For the pharmacokinetic assays, the hydroalcoholic extract, quercitrin and 5\', 5\'\'-di-O-methyl-3,4-di-O-galloylquinic acid were chosen to be studied. For both compounds, it was validated analytical methods in plasma and saline, to perform pharmacokinetic studies. It was also held the microdialysis probe calibration in vitro by retrodialysis, to determine the conditions to be employed in vivo. In general, quercitrin fitted to a two-compartmental pharmacokinetic model and after intravenous administration of 1 mg/kg, it presented a short half-life (t1/ 2 = 0.40 ± 0.07 h) a fast (? = 11.32 ± 1.90 h-1) and good (Vdss = 2.10 ± 0.52 L/kg) tissue distribution and high clearance (CL = 6.85 ± 0.62 L/h/kg). In the kidney microdialisates analyses, the free renal fraction of quercitrin was 13 times greater than the free plasma concentration. The galloylquinic compound, which is a new isolated one, was studied intravenously in three concentrations (1 mg/kg, 1.5 mg/kg and 2 mg/kg) and fitted to a two-compartmental model with Michaelis-Menten elimination, presenting the non-linear behavior (ASC0-? 103.85 ± 23.90, 273.7 ± 81.6 and 363.6 ± 142.32 ?g h/mL, respectively). It was not possible to quantify the free concentration of galloylquinic in the kidney by microdialysis, because it bound to the probe. Thus, the study of tissue distribution was performed, in which it was demonstrated that both quercitrin and galloylquinic showed high penetration in the kidneys, with a tissue/plasma ratio of 23.7 and 12.4, respectively. With regard to the pharmacokinetic profile of the hydroalcoholic extract of C. langsdorffii and n-butanol fraction after oral administration, it was found that it was not possible to detect any of the isolated compounds in plasma, suggesting that these compounds were metabolized and probably become even more water soluble for disposal renally. Based on the results, it is concluded that quercitrin and galloylquinic are rapidly eliminated and may be related to antilithiatic activity of the leaves of C. langsdorffii.

We have studied the inhibitory effect of five polyphenols namely, resveratrol, piceatannol, quercetin, quercetrin, and quercetin-3-β-d glucoside on Escherichia coli ATP synthase. Recently published X-ray crystal structures of bovine mitochondrial ATP synthase inhibited by resveratrol, piceatannol, and quercetin, suggest that these compounds bind in a hydrophobic pocket between the γ-subunit C-terminal tip and the hydrophobic inside of the surrounding annulus in a region critical for rotation of the γ-subunit. Herein, we show that resveratrol, piceatannol, quercetin, quercetrin, or quercetin-3-β-d glucoside all inhibit E. coli ATP synthase but to different degrees. Whereas piceatannol inhibited ATPase essentially completely (∼0 residual activity), inhibition by other compounds was partial with ∼20% residual activity by quercetin, ∼50% residual activity by quercetin-3-β-d glucoside, and ∼60% residual activity by quercetrin or resveratrol. Piceatannol was the most potent inhibitor (IC50 ∼14 μM) followed by quercetin (IC50 ∼33 μM), quercetin-3-β-d glucoside (IC50 ∼71 μM), resveratrol (IC50 ∼94 μM), quercitrin (IC50 ∼120 μM). Inhibition was identical in both F1Fo membrane preparations as well as in isolated purified F1. In all cases inhibition was reversible. Interestingly, resveratrol and piceatannol inhibited both ATPase and ATP synthesis whereas quercetin, quercetrin or quercetin-3-β-d glucoside inhibited only ATPase activity and not ATP synthesis.

We have studied the inhibitory effect of natural and structurally modified polyphenols on Escherichia coli ATP synthase to test (I) if the beneficial dietary effects of polyphenols are related to their inhibitory actions on ATP synthase, (II) if inhibitory effects of polyphenolic compound could be augmented through structural modifications, and (III) if they can act as antimicrobial agent through their actions on ATP synthesis. X-ray crystal structures of polyphenol binding sites suggested that polyphenols bind at a distinct polyphenol binding pocket, at the interface of α,β,γ-subunits. We found that both natural and modified polyphenols inhibit E. coli ATP synthase to varying degrees and structural modifications resulted in augmented inhibition. Inhibition was reversible in all cases. Both natural and modulated compounds inhibited E. coli cell growth to varying degrees. We conclude that dietary benefits of polyphenols may be in part due to the inhibition of ATP synthase.

Made available in DSpace on 2017-07-24T19:38:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lorna Hosoya.pdf: 1605005 bytes, checksum: 33dbf88d17832648889b1afef098f57a (MD5) Previous issue date: 2014-03-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This research work aimed to study, chemically, the leaves of Calea hispida Baker, Asteraceae, that grows in natura in the Second Plateau of Paraná State by assessing the potential bioactivity of its secondary metabolites. This research was carried out because this is a poorly studied plant species and due to the occurrence of several classes of bioactive compounds in plants of this genus, although this plant is not recognized as medicinal. The leaves were hydrodistilled, in triplicate, to obtain the essential oils and analyze their chemical composition by GC/MS/FID standard techniques. This was the first chemical study of the essential oil from C. hispida, allowing the identification of several oxygenated monoterpenes in low proportions, such as terpineol, cis-sabinol, verbenone, and bornylacetate, not oxygenated sesquiterpenes in individual percentages below 5.2%, such as cubebene, germacrene D, and -selinene, and oxygenated sesquiterpenes that totaled between 7.86 to 11.46% in the replicates, such as (E)-nerolidol, spathulenol, and viridiflorol. Additionally, three compounds containing an aromatic ring in their chemical structures totaled between 31.43 and 56.20% of essential oils: 2,6-dibutyl-4-methylphenol (0.39 to 1.44%), (Z)-3-hexenyl benzoate (0.40 to 0.43%), and a major compound found in proportions between 30.21 and 54.76% which could not be identified by GC/MS. The major volatile unidentified substance was isolated by fractionation of the essential oil by means of a chromatography column. Its chemical structure was assessed by UV-Vis, FT-IR, 1H and 13C NMR spectra, which allowed the identification of 6-acetyl-7-hydroxy-2,2-dimethylchromene. In parallel, the isolated chromene was provided for studies of its crystal structure by X-ray diffraction methods. Extractions with chloroform from aqueous solutions that remained after hydrodistillation of leaves aimed to remove less polar substances, so extracts containing phenolic compounds could be obtained. Thus, ethyl acetate and ethyl acetate/methanol 30% extracts were obtained at pH 8 to achieve extracts containing solid neutral phenolic substances, as well as at pH 4 (for acidic phenolic compounds). An ethyl acetate/methanol extract at pH 8 presented only one main phenolic substance which was identified as quercetin-3-O-rhamnopyranoside by analysis of its UV, FT-IR, and 1H and 13C NMR spectra. Preliminary analyzes of extracts obtained at pH 4 showed that the acidic phenolic compounds are an important class of substances in C. hispida, consisting mainly of caffeic acid derivatives, such as 3,5-dicaffeoylquinic and 4,5-dicaffeoylquinic. This work also allowed the determination of the bioactivity profile of the secondary metabolites from leaves of C. hispida by providing extracts and isolated compounds for biological tests, such as antioxidant capacity against DPPH radical, protection of leukocytes in a medium that causes lysis, and evaluation of fungitoxic, allelopathic, antimicrobial, and inhibitory acetylcholinesterase activities. / O presente trabalho de pesquisa teve como objetivo estudar quimicamente as folhas de Calea hispida Baker, Asteraceae que cresce in natura no Segundo Planalto do Paraná, avaliando a bioatividade potencial dos seus metabólitos secundários. Esta pesquisa foi realizada por tratar-se de uma espécie vegetal pouco estudada e devido à ocorrência de compostos bioativos de diversas classes neste gênero botânico, embora esta não seja conhecida como planta medicinal. As folhas foram hidrodestiladas em triplicata para a obtenção e análise de óleos essenciais por técnicas de CG/EM/DIC. Este foi o primeiro estudo químico do óleo essencial de C. hispida, permitindo identificar diversos monoterpenos oxigenados em baixas proporções (como terpineol, cis-sabinol, verbenona e bornilacetato), sesquiterpenos não-oxigenados em porcentagens individuais abaixo de 5,2% (como cubebeno, germacreno D e -selineno), e sesquiterpenos oxigenados que totalizaram entre 7,86 a 11,46% nas replicatas (como (E)-nerolidol, espatulenol e viridiflorol). Além destes, três compostos contendo anel aromático em suas estruturas químicas totalizaram entre 31,43 e 56,20% dos óleos essenciais: 2,6-dibutil-4-metilfenol (0,39 a 1,44%), (Z)-3-hexenilbenzoato (0,40 a 0,43%) e um componente majoritário encontrado em proporções entre 30,21 e 54,76%, mas que não pode ser identificado por CG/EM. A substância volátil majoritária não identificada foi isolada por fracionamento do óleo essencial numa coluna cromatográfica, obtendo-se quantidade suficiente para a realização de testes biológicos e para estudo detalhado sobre sua estrutura química através da análise de seus espectros de UV-Vis, IV e RMN de 1H e 13C, que permitiram identificá-la como 6-acetil-7-hidroxi-2,2-dimetilcromeno. Paralelamente, o cromeno isolado foi fornecido para estudos da sua estrutura cristalina por métodos de difração de Raios-X. Extrações com clorofórmio das soluções aquosas restantes após as hidrodestilações, destinadas a eliminar substâncias menos polares, precederam a obtenção de extratos contendo substâncias fenólicas. Assim, foram realizadas extrações com acetato de etila e com acetato de etila/metanol 30% em pH 8 (para obter concentrados de substâncias fenólicas neutras) e em pH 4 (para obter substâncias fenólicas ácidas). Um extrato obtido com acetato de etila/metanol em pH 8 apresentou uma substância principal, a qual foi identificada como quercetina-3-O-ramnopiranosídeo por meio da análise de seus espectros de UV-Vis, IV e RMN de 1H e 13C. Análises preliminares de extratos obtidos em pH 4 permitiram concluir que as substâncias fenólicas ácidas são uma importante classe de compostos em C. hispida, constituídas principalmente por derivados do ácido cafeico, como os ácidos 3,5-dicafeoilquínico e 4,5-dicafeoilquínico. Este trabalho permitiu também traçar um perfil da bioatividade dos metabólitos secundários das folhas de C. hispida através do fornecimento de extratos e compostos isolados para a realização de testes biológicos por outros grupos de pesquisa, tais como medidas do poder antioxidante contra o radical DPPH e da proteção de leucócitos num meio que provoca lise, e avaliação das atividades fungitóxica, alelopática, antimicrobiana e inibitória da acetilcolinesterase.

Plantas medicinais são utilizadas tradicionalmente pela população para a prevenção e tratamento da úlcera gástrica. A úlcera gástrica é uma patologia heterogênea de etiologia multifatorial. É uma doença que acomete pessoas em todo mundo tendo como consequência a elaboração de fármacos com a finalidade de amenizar os sintomas e possibilitar a cura. Entretanto, o tratamento prolongado com os recursos terapêuticos disponíveis pode ocasionar vários efeitos colaterais. Extrato de folhas de Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers. (Crassulaceae) é utilizado pela população para o tratamento de problemas gástricos. Esta espécie está incluída na Relação Nacional de Plantas com Interesse ao SUS (RENISUS). Com a finalidade de investigar a atividade antiúlcera foram ensaiados dois modelos de lesões gástricas em animais. No modelo de indução por etanol acidificado, o extrato bruto de K. pinnata apresentou diminuição das lesões gástricas em 74% na dose de 200 mg/kg (p<0.05) e de 98% (p<0.01) na dose de 400 mg/kg. A fração acetato de etila, quando experimentada nas doses de 100 mg/kg, 200 mg/kg e 400 mg/kg, exibiu significante redução nas lesões gástricas (p<0.001), em 77%, 95% e 96%, respectivamente. O ensaio com a fração aquosa também mostrou gastroproteção visualizada pela diminuição das úlceras gástricas em 69% e 91% nas doses de 200 mg/kg (p<0.05) e 400 mg/kg (p<0.01), respectivamente. Em modelo de indução por ácido acético não houve diferença estatística na redução da lesão gástrica nas doses (100 mg/kg, 200 mg/kg e 400 mg/kg) analisadas de extrato bruto de K. pinnata, após 7 dias de tratamento. No entanto, foi observado uma tendência na redução da lesão gástrica nas doses de 200 mg/kg e 400 mg/kg. Células polimorfonucleares, células mononucleares, fibroblastos e matriz extracelular foram quantificadas pela técnica de estimativa de volume celular, para verificação do processo de cicatrização. Foi constatado que nas doses de 200 mg/kg e 400 mg/kg ocorreu uma redução da fração de volume ocupada por leucócitos polimorfonucleares, favorecendo a promoção do reparo da mucosa gástrica. Paralelamente aos estudos farmacológicos, foi efetuada a padronização do extrato e frações, a obtenção do perfil cromatográfico por Cromatografia em Camada Delgada (CCD) do extrato bruto e frações (clorofórmica, acetato de etila e aquosa) e também por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) das frações acetato de etila e aquosa. O cromatograma resultante da fração acetato de etila evidenciou dois picos de maior intensidade e o perfil cromatográfico da fração aquosa apresentou um composto majoritário. Os compostos majoritários foram isolados e caracterizados como pertencentes à classe dos flavonoides. Quercitrina foi isolada da fração acetato de etila e quercetina 3-O-&#945;-L-arabinopiranosil (1&#8594;2) &#945;- L-ramnopiranosídeo foi isolada em ambas as frações. Os resultados da quantificação de flavonoides, da quantificação de substâncias fenólicas e da atividade antioxidante estão em consonância com os resultados biológicos apresentados, sugerindo uma possível relação dos flavonoides presentes no extrato com a atividade gastroprotetora e com a facilitação da cicatrização de úlceras gástricas. / Traditionally medicinal plants have been used to prevent and to treat gastric ulcer. Gastric ulcer is a heterogeneous disease of mutifactorial etiology. This illness affects a considerable number of people in the world. The clinical importance about this pathology resulted in the development of pharmaceutical products. However, these pharmaceutical products are not completely effective and produce many adverse effects. Extract of leaves of Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers. (Crassulaceae) is often used for treating gastric ulcer by the population. K. pinnata is included in RENISUS. So, two distinct ulcer models in rats were performed. For this were realized two distinct ulcer models in rats. In acidified ethanol model, the crude extract from leaves of K. pinnata showed a protection of about 74% (p<0.05) at the dose of 200 mg/kg and 98% (p<0.01) at the dose of 400 mg/kg. Significant inhibition (p<0.001) of gastric ulcer by 77%, 95% and 96% was observed in pretreatment with ethyl acetate fraction at all the doses (100 mg/kg, 200 mg/kg and 400 mg/kg), respectively. The aqueous fraction reduced gastric lesions about 69% (p<0.05) and 91% (p<0.01) at the doses of 200 mg/kg and 400 mg/kg (p<0.01), respectively. In acid acetic model a statistic difference in reduction of gastric ulcer for all doses of the crude extract, after 7 days of treatment, wasn\'t observed. Nevertheless, the tendency about healing ulcer was verified for doses of 200 mg/kg and 400 mg/kg. Polymorphonuclear cells, mononuclear cells, fibroblasts and extracellular matrix were quantified by the technique of volume estimation to detect healing effects on gastric ulcer. These doses of 200 mg/kg and 400 mg/kg reduced the volume fraction occupied by polymorphonuclear cells. This fact contributes to healing of gastric ulcer. In parallel with the pharmacological studies, the standardization of the extract and fractions was made. The chemical analysis was performed through TLC (thin layer chromatography) and HPLC (high-performance liquid chromatography). The HPLC assay showed the presence of two major components in ethyl acetate fraction and one major presence of a component in aqueous fraction. These compounds were isolated and identified as flavonoids. Quercitrin was isolated from ethyl acetate fraction and quercetin 3-O-&#945;-L-arabinopyranosyl (1&#8594;2) &#945;-L-rhamnopyranoside was identified in the both fractions. The results of flavonoid quantification, phenolic quantification and antioxidant activity are probably correlated with the pharmacologic activity presented. These results suggest that the flavonoids present in the extract can promote gastroprotection and facilitate the healing of gastric ulcer.

Plantas medicinais são utilizadas tradicionalmente pela população para a prevenção e tratamento da úlcera gástrica. A úlcera gástrica é uma patologia heterogênea de etiologia multifatorial. É uma doença que acomete pessoas em todo mundo tendo como consequência a elaboração de fármacos com a finalidade de amenizar os sintomas e possibilitar a cura. Entretanto, o tratamento prolongado com os recursos terapêuticos disponíveis pode ocasionar vários efeitos colaterais. Extrato de folhas de Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers. (Crassulaceae) é utilizado pela população para o tratamento de problemas gástricos. Esta espécie está incluída na Relação Nacional de Plantas com Interesse ao SUS (RENISUS). Com a finalidade de investigar a atividade antiúlcera foram ensaiados dois modelos de lesões gástricas em animais. No modelo de indução por etanol acidificado, o extrato bruto de K. pinnata apresentou diminuição das lesões gástricas em 74% na dose de 200 mg/kg (p<0.05) e de 98% (p<0.01) na dose de 400 mg/kg. A fração acetato de etila, quando experimentada nas doses de 100 mg/kg, 200 mg/kg e 400 mg/kg, exibiu significante redução nas lesões gástricas (p<0.001), em 77%, 95% e 96%, respectivamente. O ensaio com a fração aquosa também mostrou gastroproteção visualizada pela diminuição das úlceras gástricas em 69% e 91% nas doses de 200 mg/kg (p<0.05) e 400 mg/kg (p<0.01), respectivamente. Em modelo de indução por ácido acético não houve diferença estatística na redução da lesão gástrica nas doses (100 mg/kg, 200 mg/kg e 400 mg/kg) analisadas de extrato bruto de K. pinnata, após 7 dias de tratamento. No entanto, foi observado uma tendência na redução da lesão gástrica nas doses de 200 mg/kg e 400 mg/kg. Células polimorfonucleares, células mononucleares, fibroblastos e matriz extracelular foram quantificadas pela técnica de estimativa de volume celular, para verificação do processo de cicatrização. Foi constatado que nas doses de 200 mg/kg e 400 mg/kg ocorreu uma redução da fração de volume ocupada por leucócitos polimorfonucleares, favorecendo a promoção do reparo da mucosa gástrica. Paralelamente aos estudos farmacológicos, foi efetuada a padronização do extrato e frações, a obtenção do perfil cromatográfico por Cromatografia em Camada Delgada (CCD) do extrato bruto e frações (clorofórmica, acetato de etila e aquosa) e também por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) das frações acetato de etila e aquosa. O cromatograma resultante da fração acetato de etila evidenciou dois picos de maior intensidade e o perfil cromatográfico da fração aquosa apresentou um composto majoritário. Os compostos majoritários foram isolados e caracterizados como pertencentes à classe dos flavonoides. Quercitrina foi isolada da fração acetato de etila e quercetina 3-O-&#945;-L-arabinopiranosil (1&#8594;2) &#945;- L-ramnopiranosídeo foi isolada em ambas as frações. Os resultados da quantificação de flavonoides, da quantificação de substâncias fenólicas e da atividade antioxidante estão em consonância com os resultados biológicos apresentados, sugerindo uma possível relação dos flavonoides presentes no extrato com a atividade gastroprotetora e com a facilitação da cicatrização de úlceras gástricas. / Traditionally medicinal plants have been used to prevent and to treat gastric ulcer. Gastric ulcer is a heterogeneous disease of mutifactorial etiology. This illness affects a considerable number of people in the world. The clinical importance about this pathology resulted in the development of pharmaceutical products. However, these pharmaceutical products are not completely effective and produce many adverse effects. Extract of leaves of Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers. (Crassulaceae) is often used for treating gastric ulcer by the population. K. pinnata is included in RENISUS. So, two distinct ulcer models in rats were performed. For this were realized two distinct ulcer models in rats. In acidified ethanol model, the crude extract from leaves of K. pinnata showed a protection of about 74% (p<0.05) at the dose of 200 mg/kg and 98% (p<0.01) at the dose of 400 mg/kg. Significant inhibition (p<0.001) of gastric ulcer by 77%, 95% and 96% was observed in pretreatment with ethyl acetate fraction at all the doses (100 mg/kg, 200 mg/kg and 400 mg/kg), respectively. The aqueous fraction reduced gastric lesions about 69% (p<0.05) and 91% (p<0.01) at the doses of 200 mg/kg and 400 mg/kg (p<0.01), respectively. In acid acetic model a statistic difference in reduction of gastric ulcer for all doses of the crude extract, after 7 days of treatment, wasn\'t observed. Nevertheless, the tendency about healing ulcer was verified for doses of 200 mg/kg and 400 mg/kg. Polymorphonuclear cells, mononuclear cells, fibroblasts and extracellular matrix were quantified by the technique of volume estimation to detect healing effects on gastric ulcer. These doses of 200 mg/kg and 400 mg/kg reduced the volume fraction occupied by polymorphonuclear cells. This fact contributes to healing of gastric ulcer. In parallel with the pharmacological studies, the standardization of the extract and fractions was made. The chemical analysis was performed through TLC (thin layer chromatography) and HPLC (high-performance liquid chromatography). The HPLC assay showed the presence of two major components in ethyl acetate fraction and one major presence of a component in aqueous fraction. These compounds were isolated and identified as flavonoids. Quercitrin was isolated from ethyl acetate fraction and quercetin 3-O-&#945;-L-arabinopyranosyl (1&#8594;2) &#945;-L-rhamnopyranoside was identified in the both fractions. The results of flavonoid quantification, phenolic quantification and antioxidant activity are probably correlated with the pharmacologic activity presented. These results suggest that the flavonoids present in the extract can promote gastroprotection and facilitate the healing of gastric ulcer.