Atualmente, a má qualidade da água continua a representar uma grande ameaça para a saúde humana, causando doenças graves, como diarreias, e diversos tipos de câncer devido a ingestão de compostos aromáticos e metais pesados. Estima-se que 88% dos casos dessas doenças sejam atribuídos ao abastecimento de água inseguro, saneamento e higiene. Este fato, em grande parte, deve-se ao mal controle de qualidade das águas tratadas. Assim, atualmente, uma das principais preocupações no estabelecimento de índices de qualidade de água, seja em base biológica ou através de métodos físico-químicos e matemáticos, é tornar as avaliações ecológicas com fins de rotina aplicáveis para pessoal não especializado. O presente trabalho, visando oferecer à sociedade subsídios para a adoção de tecnologias alternativas de tratamento e monitoramento de qualidade de águas, realizou uma análise sobre os potenciais dos Grãos de kefir e da planta kalanchoe pinnata como elementos bioindicadores de qualidade de águas tratadas, por meio de biorremediação com o micro-organismo Bacillus subtilis, e águas tratadas na Unidade de beneficiamento de águas (UPIBA). Os resultados dos experimentos evidenciaram que os grãos de kefir geraram respostas biológicas distintas, quando submetidos a diferentes concentrações de benzeno, presente em águas biorremediadas com o B. subtilis. E os ensaios aplicando a K. pinnata como agente bioindicador de qualidade de águas pluviais e SABESP, sugeriram que a mesma pode ser uma excelente bioindicadora em águas eutrofizadas, isto é, ricas em matéria orgânica / Currently, poor quality water continues to pose a major threat to human health, causing serious illnesses such as diarrhea and various types of cancer due to the ingestion of aromatic compounds and heavy metals. It is estimated that 88% of these diseases\' cases are caused by unsafe water supply, sanitation and hygiene. This is largely due to poor quality control of treated water. Thus, currently, one of the major concerns in establishing water quality indicators, whether on a biological basis or through physical-chemical and mathematical methods, is to make routine ecological assessments applicable to non-specialized personnel. The present paper, aiming to offer society subsidies for the adoption of alternative technologies for treating and monitoring water quality, carried out an analysis on the potentials of kefir grains and the kalanchoe pinnata plant as bioindicators of the quality of water treated by means of Bioremediation with the microorganism Bacillus subtilis and treated water in the UPIBA. The experiments\' results showed that the kefir grains generated different biological responses when submitted to different concentrations of benzene, present in bioremediated waters with B. subtilis. And trials applying K. pinnata as a bioindicator of rainwater quality and SABESP, have suggested that it may be an excellent bioindicator in eutrophic waters, that is, rich in organic matter.

Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers. (Crassulaceae) é uma espécie muito empregada na medicina tradicional no Brasil e em outras partes do mundo, especialmente Índia, países da África e China. É indicada popularmente para diversos fins incluindo o tratamento de úlceras gástricas. A análise fitoquímica revelou a presença de vários constituintes, em especial os flavonoides. O tratamento de úlcera gástrica convencional apresenta diversos efeitos colaterais e, na maioria das vezes, não evita a recidiva da lesão. Dessa maneira, é interessante encontrar uma terapêutica mais segura e efetiva. Com o objetivo de avaliar a segurança, foi realizado ensaio de citotoxicidade do extrato bruto, in vitro, com valor de IC50 igual a 0,926 mg/mL, sendo possível predizer um valor de LD50 (1341,46 mg/kg). Já em relação ao ensaio de citotoxicidade, in vitro, da fração acetato de etila não foi encontrado um valor de IC50. Resultados de fototoxicidade, in vitro, mostraram que o extrato bruto e fração acetato de etila de K. pinnata não possuem potencial fototóxico. A contagem microbiana na droga vegetal para bactérias aeróbias/mesófilas foi de 6,9 x 104 UFC/g e a contagem de bolores e leveduras foi de 2,4 x 103 UFC/g, ambos valores dentro do limite estabelecido pela OMS. Análise de endotoxinas também foi realizada para o extrato bruto (<4,0.105 UE/kg) e fração acetato de etila (<2,7.105 EU/kg) de K. pinnata. Referente à fitoquímica, diversos flavonoides foram identificados no extrato bruto e fração acetato de etila de K. pinnata. Paralelamente ao estudo fitoquímico foi verificado que a atividade gastroprotetora do extrato bruto envolve a ação das prostaglandinas e grupamentos sulfidrila. Já o mecanismo de gastroproteção da fração acetato de etila é dependente de prostaglandinas e óxido nítrico. A atividade cicatrizante do extrato bruto de K. pinnata também foi avaliada. De acordo com os resultados macroscópicos, as doses de 200mg/kg e 400 mg/kg reduziram a área de lesão, com uma taxa de 33% e 39%, respectivamente, após 7 dias de tratamento (p<0,05). Análise histológica dos grupos tratados com o extrato bruto (200 e 400 mg/kg) indicou melhor recuperação da lesão, verificada pela regeneração da mucosa gástrica e pelo restabelecimento da arquitetura glandular. As enzimas antioxidantes (catalase, superóxido dismutase e glutationa peroxidase) e a expressão de VEGF foram avaliadas no mecanismo de cicatrização de úlceras gástricas. Os resultados mostraram que a atividade antiulcerogênica foi mediada pela ação antioxidante da enzima SOD. Não foi evidenciado in vivo o aumento da expressão de VEGF e nem o sequestro do radical peroxil nos animais tratados com o extrato bruto. Os resultados dos ensaios in vitro (ORAC) mostraram uma maior capacidade de sequestro de radicais peroxil da fração acetato de etila (1192,35 ± 112,61 &#181;mol equivalente de Trolox/g de amostra seca) quando comparado com o extrato bruto (431,32 ± 7,17 &#181;mol equivalente de Trolox/g de amostra seca). A atividade anti Helicobacter pylori também foi avaliada, no entanto, o extrato bruto não apresentou atividade anti H.pylori. Ademais, o extrato bruto demonstrou um potencial anti-inflamatório, pois foi observada uma redução nos níveis de TNF-&#945; e L-selectina, após o tratamento em neutrófilos estimulados com LPS. Analisando os resultados sugere-se que K. pinnata possui um potencial terapêutico no combate de úlceras gástricas e possivelmente, anti-inflamatório, sendo que os flavonoides podem estar relacionados com o efeito biológico observado. / Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers. (Crassulaceae) is a commonly used species in traditional medicine in Brazil and in other parts of the world, especially India, Africa and China, for the treatment of various diseases, including gastric ulcers. Phytochemical analysis revealed the presence of several constituents in this plant, especially flavonoids. The available pharmaceutical products to treat peptic ulcer have several side effects and, in most cases, do not prevent recurrence of the gastric lesions. Therefore, it is important to find a safer and more effective therapy. In order to evaluate safety, the in vitro cytotoxicity assay of crude extract from K. pinnata was performed. The IC50 value was 0,926 mg/mL corresponding to LD50 value (1341, 46 mg/kg). It was not determined IC50 value in vitro cytotoxicity assay for ethyl acetate fraction from K. pinnata. Neither the crude extract nor ethyl acetate fraction from K. pinnata showed phototoxicity. Microbial counting was performed on the K. pinnata-based drug in order to investigate microbiological contamination. The microbial count for aerobic / mesophilic bacteria was 6.9 x 104 CFU/g, and yeast count was 2.4 x 103 CFU/g, both values in agreement with the limits established by WHO. Endotoxin analysis was also performed for the crude extract (<4,0.105 UE/kg) and for ethyl acetate fraction (<2,7.105 UE/kg) from K. pinnata. In the phytochemical analysis several flavonoids were identified in the crude extract and ethyl acetate fraction of K. pinnata. In parallel to the phytochemical study, it was verified that the gastroprotective activity of the crude extract of K. pinnata involved prostaglandins and sulfhydril compounds. On the other hand, the mechanism of gastroprotection of the ethyl acetate fraction of K. pinnata is dependent on prostaglandins and nitric oxide. The healing activity of the crude extract of K. pinnata was also evaluated. According to the macroscopic results the dose of 200 mg/kg and 400mg/kg reduced the injury area, with a rate of 33% and 39%, respectively, after 7 days of treatment (p <0.05). Histological analysis showed regeneration of the gastric mucosa and re-establishment of the glandular architecture in groups treated with the crude extract (200 and 400 mg/kg). Antioxidant enzymes (catalase, superoxide dismutase and glutathione peroxidase) and VEGF expression were evaluated in the mechanism of gastric ulcer healing. The results showed that the antiulcerogenic activity was mediated by SOD. It was not demonstrated an increase in VEGF expression and nor in the in vivo sequestration of the peroxyl radical in the animals treated with crude extract. The results of in vitro assay (ORAC) showed a greater sequestering of peroxyl radical to the ethyl acetate fraction (1192,35 ± 112,61 &#181;mol equivalent of Trolox/g of ethyl acetate fraction) when compared to the crude extract (431,32 ± 7,17 &#181;mol equivalent of Trolox/g of crude extract) of K. pinnata. The anti Helicobacter pylori activity was also evaluated; however, the crude extract did not show anti H. pylori activity. However, the crude extract of K. pinnata demonstrated an anti-inflammatory potential, because TNF-&#945; and L-selectin levels were reduced after treatment in LPS-stimulated neutrophils. The analysis of the results suggests that K. pinnata has a therapeutic potential against gastric ulcers and possible anti-inflammatory properties, and the flavonoids may be linked to the biological effect.

Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers. (Crassulaceae) é uma espécie muito empregada na medicina tradicional no Brasil e em outras partes do mundo, especialmente Índia, países da África e China. É indicada popularmente para diversos fins incluindo o tratamento de úlceras gástricas. A análise fitoquímica revelou a presença de vários constituintes, em especial os flavonoides. O tratamento de úlcera gástrica convencional apresenta diversos efeitos colaterais e, na maioria das vezes, não evita a recidiva da lesão. Dessa maneira, é interessante encontrar uma terapêutica mais segura e efetiva. Com o objetivo de avaliar a segurança, foi realizado ensaio de citotoxicidade do extrato bruto, in vitro, com valor de IC50 igual a 0,926 mg/mL, sendo possível predizer um valor de LD50 (1341,46 mg/kg). Já em relação ao ensaio de citotoxicidade, in vitro, da fração acetato de etila não foi encontrado um valor de IC50. Resultados de fototoxicidade, in vitro, mostraram que o extrato bruto e fração acetato de etila de K. pinnata não possuem potencial fototóxico. A contagem microbiana na droga vegetal para bactérias aeróbias/mesófilas foi de 6,9 x 104 UFC/g e a contagem de bolores e leveduras foi de 2,4 x 103 UFC/g, ambos valores dentro do limite estabelecido pela OMS. Análise de endotoxinas também foi realizada para o extrato bruto (<4,0.105 UE/kg) e fração acetato de etila (<2,7.105 EU/kg) de K. pinnata. Referente à fitoquímica, diversos flavonoides foram identificados no extrato bruto e fração acetato de etila de K. pinnata. Paralelamente ao estudo fitoquímico foi verificado que a atividade gastroprotetora do extrato bruto envolve a ação das prostaglandinas e grupamentos sulfidrila. Já o mecanismo de gastroproteção da fração acetato de etila é dependente de prostaglandinas e óxido nítrico. A atividade cicatrizante do extrato bruto de K. pinnata também foi avaliada. De acordo com os resultados macroscópicos, as doses de 200mg/kg e 400 mg/kg reduziram a área de lesão, com uma taxa de 33% e 39%, respectivamente, após 7 dias de tratamento (p<0,05). Análise histológica dos grupos tratados com o extrato bruto (200 e 400 mg/kg) indicou melhor recuperação da lesão, verificada pela regeneração da mucosa gástrica e pelo restabelecimento da arquitetura glandular. As enzimas antioxidantes (catalase, superóxido dismutase e glutationa peroxidase) e a expressão de VEGF foram avaliadas no mecanismo de cicatrização de úlceras gástricas. Os resultados mostraram que a atividade antiulcerogênica foi mediada pela ação antioxidante da enzima SOD. Não foi evidenciado in vivo o aumento da expressão de VEGF e nem o sequestro do radical peroxil nos animais tratados com o extrato bruto. Os resultados dos ensaios in vitro (ORAC) mostraram uma maior capacidade de sequestro de radicais peroxil da fração acetato de etila (1192,35 ± 112,61 &#181;mol equivalente de Trolox/g de amostra seca) quando comparado com o extrato bruto (431,32 ± 7,17 &#181;mol equivalente de Trolox/g de amostra seca). A atividade anti Helicobacter pylori também foi avaliada, no entanto, o extrato bruto não apresentou atividade anti H.pylori. Ademais, o extrato bruto demonstrou um potencial anti-inflamatório, pois foi observada uma redução nos níveis de TNF-&#945; e L-selectina, após o tratamento em neutrófilos estimulados com LPS. Analisando os resultados sugere-se que K. pinnata possui um potencial terapêutico no combate de úlceras gástricas e possivelmente, anti-inflamatório, sendo que os flavonoides podem estar relacionados com o efeito biológico observado. / Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers. (Crassulaceae) is a commonly used species in traditional medicine in Brazil and in other parts of the world, especially India, Africa and China, for the treatment of various diseases, including gastric ulcers. Phytochemical analysis revealed the presence of several constituents in this plant, especially flavonoids. The available pharmaceutical products to treat peptic ulcer have several side effects and, in most cases, do not prevent recurrence of the gastric lesions. Therefore, it is important to find a safer and more effective therapy. In order to evaluate safety, the in vitro cytotoxicity assay of crude extract from K. pinnata was performed. The IC50 value was 0,926 mg/mL corresponding to LD50 value (1341, 46 mg/kg). It was not determined IC50 value in vitro cytotoxicity assay for ethyl acetate fraction from K. pinnata. Neither the crude extract nor ethyl acetate fraction from K. pinnata showed phototoxicity. Microbial counting was performed on the K. pinnata-based drug in order to investigate microbiological contamination. The microbial count for aerobic / mesophilic bacteria was 6.9 x 104 CFU/g, and yeast count was 2.4 x 103 CFU/g, both values in agreement with the limits established by WHO. Endotoxin analysis was also performed for the crude extract (<4,0.105 UE/kg) and for ethyl acetate fraction (<2,7.105 UE/kg) from K. pinnata. In the phytochemical analysis several flavonoids were identified in the crude extract and ethyl acetate fraction of K. pinnata. In parallel to the phytochemical study, it was verified that the gastroprotective activity of the crude extract of K. pinnata involved prostaglandins and sulfhydril compounds. On the other hand, the mechanism of gastroprotection of the ethyl acetate fraction of K. pinnata is dependent on prostaglandins and nitric oxide. The healing activity of the crude extract of K. pinnata was also evaluated. According to the macroscopic results the dose of 200 mg/kg and 400mg/kg reduced the injury area, with a rate of 33% and 39%, respectively, after 7 days of treatment (p <0.05). Histological analysis showed regeneration of the gastric mucosa and re-establishment of the glandular architecture in groups treated with the crude extract (200 and 400 mg/kg). Antioxidant enzymes (catalase, superoxide dismutase and glutathione peroxidase) and VEGF expression were evaluated in the mechanism of gastric ulcer healing. The results showed that the antiulcerogenic activity was mediated by SOD. It was not demonstrated an increase in VEGF expression and nor in the in vivo sequestration of the peroxyl radical in the animals treated with crude extract. The results of in vitro assay (ORAC) showed a greater sequestering of peroxyl radical to the ethyl acetate fraction (1192,35 ± 112,61 &#181;mol equivalent of Trolox/g of ethyl acetate fraction) when compared to the crude extract (431,32 ± 7,17 &#181;mol equivalent of Trolox/g of crude extract) of K. pinnata. The anti Helicobacter pylori activity was also evaluated; however, the crude extract did not show anti H. pylori activity. However, the crude extract of K. pinnata demonstrated an anti-inflammatory potential, because TNF-&#945; and L-selectin levels were reduced after treatment in LPS-stimulated neutrophils. The analysis of the results suggests that K. pinnata has a therapeutic potential against gastric ulcers and possible anti-inflammatory properties, and the flavonoids may be linked to the biological effect.

Atualmente, a má qualidade da água continua a representar uma grande ameaça para a saúde humana, causando doenças graves, como diarreias, e diversos tipos de câncer devido a ingestão de compostos aromáticos e metais pesados. Estima-se que 88% dos casos dessas doenças sejam atribuídos ao abastecimento de água inseguro, saneamento e higiene. Este fato, em grande parte, deve-se ao mal controle de qualidade das águas tratadas. Assim, atualmente, uma das principais preocupações no estabelecimento de índices de qualidade de água, seja em base biológica ou através de métodos físico-químicos e matemáticos, é tornar as avaliações ecológicas com fins de rotina aplicáveis para pessoal não especializado. O presente trabalho, visando oferecer à sociedade subsídios para a adoção de tecnologias alternativas de tratamento e monitoramento de qualidade de águas, realizou uma análise sobre os potenciais dos Grãos de kefir e da planta kalanchoe pinnata como elementos bioindicadores de qualidade de águas tratadas, por meio de biorremediação com o micro-organismo Bacillus subtilis, e águas tratadas na Unidade de beneficiamento de águas (UPIBA). Os resultados dos experimentos evidenciaram que os grãos de kefir geraram respostas biológicas distintas, quando submetidos a diferentes concentrações de benzeno, presente em águas biorremediadas com o B. subtilis. E os ensaios aplicando a K. pinnata como agente bioindicador de qualidade de águas pluviais e SABESP, sugeriram que a mesma pode ser uma excelente bioindicadora em águas eutrofizadas, isto é, ricas em matéria orgânica / Currently, poor quality water continues to pose a major threat to human health, causing serious illnesses such as diarrhea and various types of cancer due to the ingestion of aromatic compounds and heavy metals. It is estimated that 88% of these diseases\' cases are caused by unsafe water supply, sanitation and hygiene. This is largely due to poor quality control of treated water. Thus, currently, one of the major concerns in establishing water quality indicators, whether on a biological basis or through physical-chemical and mathematical methods, is to make routine ecological assessments applicable to non-specialized personnel. The present paper, aiming to offer society subsidies for the adoption of alternative technologies for treating and monitoring water quality, carried out an analysis on the potentials of kefir grains and the kalanchoe pinnata plant as bioindicators of the quality of water treated by means of Bioremediation with the microorganism Bacillus subtilis and treated water in the UPIBA. The experiments\' results showed that the kefir grains generated different biological responses when submitted to different concentrations of benzene, present in bioremediated waters with B. subtilis. And trials applying K. pinnata as a bioindicator of rainwater quality and SABESP, have suggested that it may be an excellent bioindicator in eutrophic waters, that is, rich in organic matter.

Submitted by Celso Magalhaes (celsomagalhaes@ufrrj.br) on 2017-06-21T11:22:42Z No. of bitstreams: 1 2016 - Raquel Teixeira Ferreira.pdf: 4123117 bytes, checksum: d2271c63e8c851f1e25afd9a0bd8cf91 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-21T11:22:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016 - Raquel Teixeira Ferreira.pdf: 4123117 bytes, checksum: d2271c63e8c851f1e25afd9a0bd8cf91 (MD5) Previous issue date: 2016-03-30 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Kalanchoe pinnata (KP) is popularly used for treating inflammatory diseases. This study investigated the antinociceptive and anti-inflammatory potential of the KP flower aqueous extract (KPFE), the ethyl acetate (EtOAcF), butanol (BuOHF) and aqueous (AqF) fractions and the main flavonoid [quercetin 3-O-?-L-arabinopyranosyl (1??) ?-L-rhamnopyranoside] (KPFV) of KP, as well as possible mechanisms of action. Swiss albino mice, male (25-35g) were pretreated with KPFE (30-300 mg/kg, s.c.) producing dose-related inhibition of acetic acid-induced writhing (ID50 164.8 mg/kg), and the subcutaneous administration of KPFE (300 mg/kg), EtOAcF (12 mg/kg), BuOHF (15 mg/kg) or AqF (210 mg/kg) reduced leukocyte migration on carrageenan-induced pleurisy in mice at 56.1%, 47.3%, 39.6% and 43.1%, respectively. At doses of up to 240 times smaller than KPFE, KPFV (0.3-3.0 mg/kg, s.c.), also inhibited leukocyte migration (ID50 1.78 mg/kg). In croton oil-induced ear edema in mice, KPFE (3-30 mg/kg, s.c.) and KPFV (0.3-3.0 mg/kg, s.c.) presented dose-related antiedematogenic activity (KPFE - ID50 4.3 mg/kg, KPFV - ID50 0.76 mg/kg). Treatment with KPFE reduced the MPO and TNF-? concentration in the pleural exudates on carrageenaninduced pleurisy test, while KPFV inhibited both isoforms of cyclooxygenase (COX), with IC50 3.8 x 10-5 M (22.1 ?g/mL) for COX-1 and a maximum COX-2 inhibition of 43.5% (IC50 >8.4 x10-5M or 50 ?g/mL). The selectivity index (COX-1 IC50/COX-2 IC50) was <0.44. These results indicate that KPFE and KPFV produced anti-inflammatory and antinociceptive activity through the COX inhibition and TNF-? reduction. This study reveals that the main flavonoid in KP flowers and leaves plays an important role in the ethnomedicinal use of this species for healing inflammatory processes / Kalanchoe pinnata (KP) ? popularmente utilizada para tratamento de doen?as inflamat?rias. Este estudo investigou o potencial antinociceptivo e anti-inflamat?rio do extrato aquoso das infloresc?ncias de KP (EAFL), a fra??o acetato de etila (FAcOEt), a fra??o butan?lica (FBuOH), a fra??o aquosa (FAq) e o flavonoide majorit?rio [quercetina 3-O-?-Larabinopiranosil (1??) ?-L-ramnopiranos?deo] (KPFV) de KP, assim como poss?veis mecanismos de a??o. Camundongos albinos, machos (25-35g) foram pr?-tratados com EAFL (30-300 mg/kg, s.c.), produzindo inibi??o dose dependente das contor??es induzidas por ?cido ac?tico (DI50 164,8 mg/kg), e a administra??o subcut?nea de EAFL (300 mg/kg), FAcOEt (12 mg/kg) ou FBuOH (15 mg/kg) reduziu a migra??o leucocit?ria na pleurisia induzida por carragenina em camundongos em 56,1%, 47,3%, 39,6% e 43,1%, respectivamente. Em doses at? 240 vezes menores que o EAFL, KPFV (0,3-3,0 mg/kg, s.c.), tamb?m foi capaz de inibir a migra??o leucocit?ria (DI50 1,78 mg/kg). No teste do edema de orelha induzido por ?leo de cr?ton em camundongos, EAFL (3-30 mg/kg, s.c.) e KPFV (0,3-3,0 mg/kg, s.c.) apresentaram atividade antiedematog?nica dose dependente (EAFL - DI50 4,3 mg/kg, KPFV - DI50 0,76 mg/kg). O tratamento com EAFL reduziu a concentra??o de MPO e de TNF-? no exsudato pleural obtido do teste da pleurisia induzida por carragenina, enquanto o KPFV inibiu ambas as isoformas de cicloxigenase (COX), com CI50 3,8 x 10-5M (22,1 ?g/mL) para COX-1 e um m?ximo de inibi??o da COX-2 de 43,5% (CI50 >8,4 x10-5M ou 50 ?g/mL). O ?ndice de seletividade (COX-1 CI50/COX-2 CI50) foi < 0,44. Estes resultados indicam que EAFL e KPFV produziram atividade anti-inflamat?ria e antinociceptiva envolvendo a inibi??o da COX e a redu??o de TNF-?. Este estudo revela que o principal flavonoide presente nas infloresc?ncias e folhas de KP possui papel importante no uso etnomedicinal desta esp?cie nos processos de natureza inflamat?ria

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-01-15T22:12:26Z No. of bitstreams: 1 EdilaneRodriguesDantasDeAraujo_DISSERT.pdf: 4618681 bytes, checksum: 5ed4bc7a898bcd1ef47ef38661580242 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-01-18T13:59:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 EdilaneRodriguesDantasDeAraujo_DISSERT.pdf: 4618681 bytes, checksum: 5ed4bc7a898bcd1ef47ef38661580242 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-18T13:59:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EdilaneRodriguesDantasDeAraujo_DISSERT.pdf: 4618681 bytes, checksum: 5ed4bc7a898bcd1ef47ef38661580242 (MD5) Previous issue date: 2017-06-30 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Kalanchoe brasiliensis e Kalanchoe pinnata (Crassulaceae), conhecidas como ?sai?o? e ?coirama?, t?m amplo uso popular no tratamento de ?lceras p?pticas e inflama??es cut?neas. Vale destacar que K. pinnata est? presente na Rela??o Nacional de Plantas de Interesse do Sistema ?nico de Sa?de - RENISUS (2009). Dentro deste contexto, o objetivo do presente estudo foi caracterizar os marcadores qu?micos nos sucos das folhas das duas esp?cies e avaliar as atividades gastroprotetora e anti-inflamat?ria t?pica. Foi realizada caracteriza??o fitoqu?mica por Cromatografia em Camada Delgada (CCD) e Cromatografia L?quida de Ultra Efici?ncia Acoplada a Espectr?metro de Massas (CLUE-EM). A atividade gastroprotetora foi avaliada nos modelos de ?lcera ?guda induzida por etanol e indometacina, j? a secre??o g?strica foi avaliada no modelo de ligadura do piloro, em ratos Wistar. Foi realizado o pr?- tratamento com os sucos nas doses de 125, 250 e 500 mg/kg e a ranitidina (50 mg/kg) por via oral. A atividade anti-inflamat?ria t?pica foi avaliada no modelo de edema de pata induzido por carragenina e edema de orelha induzido por ?leo de crot?n em camundongos Swiss, utilizando formula??es na forma de gel contendo os sucos em diferentes concentra??es (1,25%, 2,5% e 5%) e como f?rmaco padr?o a dexametasona (1mg/g), todos administrados por via t?pica imediatamente ap?s a indu??o. A an?lise por CCD revelou a presen?a de manchas caracter?sticas de flavonoides nos sucos das duas esp?cies, ap?s revela??o com o Reagente Natural A, sendo observado que as duas esp?cies t?m perfil flavono?dico diferente. Na an?lise por CLUE-EM K. brasiliensis apresentou flavonoides glicosilados derivados principalmente da patuletina, enquanto que K. pinnata apresentou flavonoides glicosilados derivados principalmente da quercetina. O pr?-tratamento com o suco das folhas de K. brasiliensis nas doses de 125 mg/kg (P<0,01), 250 mg/kg e 500 mg/kg (P<0,001) e K. pinnata nas doses de 125 mg/kg (P<0,01), 250 mg/k e 500 mg/kg (P<0,001) reduziram significativamente as les?es em compara??o ao controle positivo no modelo de indu??o por etanol. No modelo de indu??o por indometacina o suco das folhas de K. brasiliensis apresentou resultado significativo nas doses de 250 (P<0,05) e 500 mg/kg (P<0,01) e K. pinnata nas doses de 250 e 500 mg/kg (P<0,001). A redu??o das les?es foi acompanhada de aumento do conte?do total de glutationa e redu??o dos n?veis de malondialde?do. Al?m disso, houve redu??o dos n?veis de mieloperoxidase, IL-1? e TNF-?. Tamb?m foi observado efeito citoprotetor na avalia??o histol?gica com H&E e manuten??o da produ??o de muco com PAS, al?m da redu??o da express?o de iNOS e NF-?B p65 e aumento da express?o de ZO-1 por imunohistoqu?mica. Os sucos das folhas das duas esp?cies n?o alteraram a acidez, o pH e o volume do suco g?strico. No modelo de edema de orelha, as formula??es contendo as tr?s concentra??es do suco das folhas de K. brasiliensis reduziram significativamente o edema quando comparadas ao grupo placebo (1,25% P<0,05; 2,5% P<0,01 e 5% P<0,01). Entretanto, apenas a formula??o contendo o suco das folhas de K. pinnata na concentra??o de 5% apresentou resultado significativo (P<0,01). No modelo de edema de pata, as formula??es contendo o suco das folhas de K. brasiliensis nas concentra??es de 1,25 e 2,5% reduziram significativamente (P<0,05) o edema no tempo 4 h. A formula??o na concentra??o de 5% reduziu significativamente o edema nos tempos 1 h (P<0,001), 2 h, 3 h e 4 h (P<0,01). Em rela??o as formula??es contendo o suco das folhas de K. pinnata, a concentra??o de 1,25% reduziu significativamente o edema no tempo 1h (P<0,01) e 2h (P<0,05), na concentra??o de 5% reduziu significativamente no tempo 1h (P<0,05). A diminui??o do edema foi acompanhada da redu??o de miloperoxidase. Concluiu-se que os sucos das duas esp?cies apresentaram atividade gastroprotetora e anti-inflamat?ria t?pica em modelos in vivo, resultados que justificam a utiliza??o popular das esp?cies. / Kalanchoe brasiliensis and Kalanchoe pinnata (Crassulaceae), known as "sai?o" and "coirama", have wide popular use in the treatment of peptic ulcers and cutaneous inflammations. It is worth mentioning that K. pinnata is present in the National List of Plants of Interest of the Unified Health System - RENISUS (2009). Within this context, the objective of the present study was to characterize the chemical markers in the leaf juices of both species and to evaluate the gastroprotective and topical anti-inflammatory activities. Phytochemical characterization was performed by Thin Layer Chromatography (TLC) and Ultra High Performance Liquid Chromatography coupled to Mass Spectrometer (UHPLC- MS). Gastroprotective activity was evaluated in ethanol and indomethacin induced acute ulcer models, whereas gastric secretion was evaluated in the pylorus ligature model in Wistar rats. Pre-treatment was performed with the juices at the doses of 125, 250 and 500 mg/kg and ranitidine (50 mg/kg) orally. The topical anti-inflammatory activity was evaluated in the carrageenan induced paw edema model and croton oil-induced ear edema in Swiss mice using gel formulations containing the juices at different concentrations (1,25%, 2,5% and 5%) and as the standard drug dexamethasone (1mg/g), all administered topically immediately after induction. The TLC analysis revealed the presence of flavonoid stains in the juices of both species after revelation with the Natural Reagent A, being observed that the two species have different flavonoid profiles. In the analysis by UHPLC-MS the K. brasiliensis leaf juice showed glycosylated flavonoids derived mainly from patuletin, while that of K. pinnata presented glycosylated flavonoids derived mainly from quercetin. The pre-treatment with the K. brasiliensis leaf juice at doses of 125 mg/kg (P<0,01), 250 mg/kg and 500 mg/kg (P<0,001) and K. pinnata at doses of 125 mg/kg (P<0,01), 250 mg/kg and 500 mg/kg (P<0,001) significantly reduced the lesions compared to the positive control in the ethanol induction model. In the indomethacin induction model, the K. brasiliensis leaf juice showed significant results at doses of 250 mg/kg (P<0,05) and 500 mg/kg (P<0,01) and K. pinnata at doses of 250 and 500 mg/kg (P<0,001). Reduction of lesions was accompanied by an increase in total glutathione content and reduction of malondialdehyde levels. In addition, levels of myeloperoxidase, IL-1? and TNF-? were reduced. Cytoprotective effect was also observed in histological evaluation with H&E and maintenance of mucus production with PAS, as well as reduction of iNOS and NF-?B p65 expression and increased expression of ZO-1 by immunohistochemistry. Leaf juices from both species did not change the acidity, pH and volume of the gastric juice. In the ear edema model, the formulations containing the three concentrations of the K. brasiliensis leaf juice significantly reduced the edema when compared to the placebo group (1,25% P<0,05, 2,5% P<0,01 and 5% P<0,01). However, only the formulation containing the juice of the K. pinnata leaf juice at 5% concentration showed a significant result (P<0,01). In the paw edema model, the formulations containing the K. brasiliensis leaf juice at concentrations of 1,25 and 2,5% significantly reduced (P<0,05) the edema in the time 4 h. The formulation at 5% concentration significantly reduced edema at 1 h (P <0,001), 2 h, 3 h and 4 h (P <0,01). Regarding the formulations containing the K. pinnata leaf juice, the concentration of 1,25% significantly reduced the edema in the time 1 h (P<0,01) and 2 h (P<0,05), in the concentration of 5% significantly reduced in time 1 h (P<0,05). The decrease in edema was followed by reduction of miloperoxidase. It was concluded that the juices of both species presented gastroprotective and topical anti-inflammatory activity in vivo models, results that justify the popular use of the species.

Plantas medicinais são utilizadas tradicionalmente pela população para a prevenção e tratamento da úlcera gástrica. A úlcera gástrica é uma patologia heterogênea de etiologia multifatorial. É uma doença que acomete pessoas em todo mundo tendo como consequência a elaboração de fármacos com a finalidade de amenizar os sintomas e possibilitar a cura. Entretanto, o tratamento prolongado com os recursos terapêuticos disponíveis pode ocasionar vários efeitos colaterais. Extrato de folhas de Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers. (Crassulaceae) é utilizado pela população para o tratamento de problemas gástricos. Esta espécie está incluída na Relação Nacional de Plantas com Interesse ao SUS (RENISUS). Com a finalidade de investigar a atividade antiúlcera foram ensaiados dois modelos de lesões gástricas em animais. No modelo de indução por etanol acidificado, o extrato bruto de K. pinnata apresentou diminuição das lesões gástricas em 74% na dose de 200 mg/kg (p<0.05) e de 98% (p<0.01) na dose de 400 mg/kg. A fração acetato de etila, quando experimentada nas doses de 100 mg/kg, 200 mg/kg e 400 mg/kg, exibiu significante redução nas lesões gástricas (p<0.001), em 77%, 95% e 96%, respectivamente. O ensaio com a fração aquosa também mostrou gastroproteção visualizada pela diminuição das úlceras gástricas em 69% e 91% nas doses de 200 mg/kg (p<0.05) e 400 mg/kg (p<0.01), respectivamente. Em modelo de indução por ácido acético não houve diferença estatística na redução da lesão gástrica nas doses (100 mg/kg, 200 mg/kg e 400 mg/kg) analisadas de extrato bruto de K. pinnata, após 7 dias de tratamento. No entanto, foi observado uma tendência na redução da lesão gástrica nas doses de 200 mg/kg e 400 mg/kg. Células polimorfonucleares, células mononucleares, fibroblastos e matriz extracelular foram quantificadas pela técnica de estimativa de volume celular, para verificação do processo de cicatrização. Foi constatado que nas doses de 200 mg/kg e 400 mg/kg ocorreu uma redução da fração de volume ocupada por leucócitos polimorfonucleares, favorecendo a promoção do reparo da mucosa gástrica. Paralelamente aos estudos farmacológicos, foi efetuada a padronização do extrato e frações, a obtenção do perfil cromatográfico por Cromatografia em Camada Delgada (CCD) do extrato bruto e frações (clorofórmica, acetato de etila e aquosa) e também por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) das frações acetato de etila e aquosa. O cromatograma resultante da fração acetato de etila evidenciou dois picos de maior intensidade e o perfil cromatográfico da fração aquosa apresentou um composto majoritário. Os compostos majoritários foram isolados e caracterizados como pertencentes à classe dos flavonoides. Quercitrina foi isolada da fração acetato de etila e quercetina 3-O-&#945;-L-arabinopiranosil (1&#8594;2) &#945;- L-ramnopiranosídeo foi isolada em ambas as frações. Os resultados da quantificação de flavonoides, da quantificação de substâncias fenólicas e da atividade antioxidante estão em consonância com os resultados biológicos apresentados, sugerindo uma possível relação dos flavonoides presentes no extrato com a atividade gastroprotetora e com a facilitação da cicatrização de úlceras gástricas. / Traditionally medicinal plants have been used to prevent and to treat gastric ulcer. Gastric ulcer is a heterogeneous disease of mutifactorial etiology. This illness affects a considerable number of people in the world. The clinical importance about this pathology resulted in the development of pharmaceutical products. However, these pharmaceutical products are not completely effective and produce many adverse effects. Extract of leaves of Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers. (Crassulaceae) is often used for treating gastric ulcer by the population. K. pinnata is included in RENISUS. So, two distinct ulcer models in rats were performed. For this were realized two distinct ulcer models in rats. In acidified ethanol model, the crude extract from leaves of K. pinnata showed a protection of about 74% (p<0.05) at the dose of 200 mg/kg and 98% (p<0.01) at the dose of 400 mg/kg. Significant inhibition (p<0.001) of gastric ulcer by 77%, 95% and 96% was observed in pretreatment with ethyl acetate fraction at all the doses (100 mg/kg, 200 mg/kg and 400 mg/kg), respectively. The aqueous fraction reduced gastric lesions about 69% (p<0.05) and 91% (p<0.01) at the doses of 200 mg/kg and 400 mg/kg (p<0.01), respectively. In acid acetic model a statistic difference in reduction of gastric ulcer for all doses of the crude extract, after 7 days of treatment, wasn\'t observed. Nevertheless, the tendency about healing ulcer was verified for doses of 200 mg/kg and 400 mg/kg. Polymorphonuclear cells, mononuclear cells, fibroblasts and extracellular matrix were quantified by the technique of volume estimation to detect healing effects on gastric ulcer. These doses of 200 mg/kg and 400 mg/kg reduced the volume fraction occupied by polymorphonuclear cells. This fact contributes to healing of gastric ulcer. In parallel with the pharmacological studies, the standardization of the extract and fractions was made. The chemical analysis was performed through TLC (thin layer chromatography) and HPLC (high-performance liquid chromatography). The HPLC assay showed the presence of two major components in ethyl acetate fraction and one major presence of a component in aqueous fraction. These compounds were isolated and identified as flavonoids. Quercitrin was isolated from ethyl acetate fraction and quercetin 3-O-&#945;-L-arabinopyranosyl (1&#8594;2) &#945;-L-rhamnopyranoside was identified in the both fractions. The results of flavonoid quantification, phenolic quantification and antioxidant activity are probably correlated with the pharmacologic activity presented. These results suggest that the flavonoids present in the extract can promote gastroprotection and facilitate the healing of gastric ulcer.

Plantas medicinais são utilizadas tradicionalmente pela população para a prevenção e tratamento da úlcera gástrica. A úlcera gástrica é uma patologia heterogênea de etiologia multifatorial. É uma doença que acomete pessoas em todo mundo tendo como consequência a elaboração de fármacos com a finalidade de amenizar os sintomas e possibilitar a cura. Entretanto, o tratamento prolongado com os recursos terapêuticos disponíveis pode ocasionar vários efeitos colaterais. Extrato de folhas de Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers. (Crassulaceae) é utilizado pela população para o tratamento de problemas gástricos. Esta espécie está incluída na Relação Nacional de Plantas com Interesse ao SUS (RENISUS). Com a finalidade de investigar a atividade antiúlcera foram ensaiados dois modelos de lesões gástricas em animais. No modelo de indução por etanol acidificado, o extrato bruto de K. pinnata apresentou diminuição das lesões gástricas em 74% na dose de 200 mg/kg (p<0.05) e de 98% (p<0.01) na dose de 400 mg/kg. A fração acetato de etila, quando experimentada nas doses de 100 mg/kg, 200 mg/kg e 400 mg/kg, exibiu significante redução nas lesões gástricas (p<0.001), em 77%, 95% e 96%, respectivamente. O ensaio com a fração aquosa também mostrou gastroproteção visualizada pela diminuição das úlceras gástricas em 69% e 91% nas doses de 200 mg/kg (p<0.05) e 400 mg/kg (p<0.01), respectivamente. Em modelo de indução por ácido acético não houve diferença estatística na redução da lesão gástrica nas doses (100 mg/kg, 200 mg/kg e 400 mg/kg) analisadas de extrato bruto de K. pinnata, após 7 dias de tratamento. No entanto, foi observado uma tendência na redução da lesão gástrica nas doses de 200 mg/kg e 400 mg/kg. Células polimorfonucleares, células mononucleares, fibroblastos e matriz extracelular foram quantificadas pela técnica de estimativa de volume celular, para verificação do processo de cicatrização. Foi constatado que nas doses de 200 mg/kg e 400 mg/kg ocorreu uma redução da fração de volume ocupada por leucócitos polimorfonucleares, favorecendo a promoção do reparo da mucosa gástrica. Paralelamente aos estudos farmacológicos, foi efetuada a padronização do extrato e frações, a obtenção do perfil cromatográfico por Cromatografia em Camada Delgada (CCD) do extrato bruto e frações (clorofórmica, acetato de etila e aquosa) e também por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) das frações acetato de etila e aquosa. O cromatograma resultante da fração acetato de etila evidenciou dois picos de maior intensidade e o perfil cromatográfico da fração aquosa apresentou um composto majoritário. Os compostos majoritários foram isolados e caracterizados como pertencentes à classe dos flavonoides. Quercitrina foi isolada da fração acetato de etila e quercetina 3-O-&#945;-L-arabinopiranosil (1&#8594;2) &#945;- L-ramnopiranosídeo foi isolada em ambas as frações. Os resultados da quantificação de flavonoides, da quantificação de substâncias fenólicas e da atividade antioxidante estão em consonância com os resultados biológicos apresentados, sugerindo uma possível relação dos flavonoides presentes no extrato com a atividade gastroprotetora e com a facilitação da cicatrização de úlceras gástricas. / Traditionally medicinal plants have been used to prevent and to treat gastric ulcer. Gastric ulcer is a heterogeneous disease of mutifactorial etiology. This illness affects a considerable number of people in the world. The clinical importance about this pathology resulted in the development of pharmaceutical products. However, these pharmaceutical products are not completely effective and produce many adverse effects. Extract of leaves of Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers. (Crassulaceae) is often used for treating gastric ulcer by the population. K. pinnata is included in RENISUS. So, two distinct ulcer models in rats were performed. For this were realized two distinct ulcer models in rats. In acidified ethanol model, the crude extract from leaves of K. pinnata showed a protection of about 74% (p<0.05) at the dose of 200 mg/kg and 98% (p<0.01) at the dose of 400 mg/kg. Significant inhibition (p<0.001) of gastric ulcer by 77%, 95% and 96% was observed in pretreatment with ethyl acetate fraction at all the doses (100 mg/kg, 200 mg/kg and 400 mg/kg), respectively. The aqueous fraction reduced gastric lesions about 69% (p<0.05) and 91% (p<0.01) at the doses of 200 mg/kg and 400 mg/kg (p<0.01), respectively. In acid acetic model a statistic difference in reduction of gastric ulcer for all doses of the crude extract, after 7 days of treatment, wasn\'t observed. Nevertheless, the tendency about healing ulcer was verified for doses of 200 mg/kg and 400 mg/kg. Polymorphonuclear cells, mononuclear cells, fibroblasts and extracellular matrix were quantified by the technique of volume estimation to detect healing effects on gastric ulcer. These doses of 200 mg/kg and 400 mg/kg reduced the volume fraction occupied by polymorphonuclear cells. This fact contributes to healing of gastric ulcer. In parallel with the pharmacological studies, the standardization of the extract and fractions was made. The chemical analysis was performed through TLC (thin layer chromatography) and HPLC (high-performance liquid chromatography). The HPLC assay showed the presence of two major components in ethyl acetate fraction and one major presence of a component in aqueous fraction. These compounds were isolated and identified as flavonoids. Quercitrin was isolated from ethyl acetate fraction and quercetin 3-O-&#945;-L-arabinopyranosyl (1&#8594;2) &#945;-L-rhamnopyranoside was identified in the both fractions. The results of flavonoid quantification, phenolic quantification and antioxidant activity are probably correlated with the pharmacologic activity presented. These results suggest that the flavonoids present in the extract can promote gastroprotection and facilitate the healing of gastric ulcer.