Métodos in vitro utilizando epitélio intestinal animal são importantes ferramentas para avaliar a permeabilidade de fármacos, propriedade que é um importante parâmetro de biodiosponibilidade. Considerando que o maior objetivo na indústria farmacêutica é desenvolver novos fármacos com boa biodisponibilidade oral, o projeto teve como objetivo padronizar o modelo de permeação com membrana de intestino de rã (Rana catesbeiana) em células de Franz, comparando seus resultados com ensaios de células Caco-2. Os fármacos modelo utilizados foram os antivirais zidovudina e aciclovir. A quantidade de fármaco permeado foi determinada por método de eletroforese capilar para o método com intestino de rã touro e por HPLC-UV para os ensaios com células Caco-2. O parâmetro de permeação foi o coeficiente de permeabilidade aparente (Papp) dos fármacos para ambos modelos experimentais. Para estabelecimento do protocolo experimental dos estudos de permeabilidade intestinal de rã, foi proposto um projeto fracionado 24-1 com 4 ensaios adicionais usando o software Minitab, e as variáveis foram: secção intestinal, pH da solução de Ringer e temperatura. A análise do planejamento experimental feita pela estimativa dos parâmetros da regressão obtidos através dos resultados do modelo fatorial possibilitou a determinação dos coeficientes da equação matemática que definiu a influência das variáveis sobre o coeficiente de permeabilidade aparente dos fármacos. Os efeitos das variáveis pH e temperatura interpretados conjuntamente apresentaram interferência leve, porém as variáveis fármaco e secção intestinal interpretados juntos tiveram interferência importante, mostrando maior permeação dos fármacos através da secção inicial do intestino da rã. Os resultados de Papp foram: para o metoprolol, pelo método das células Caco-2 foi de 28 x 10-6 cm/s, valor que está de acordo com demais dados de células Caco-2 na literatura e o valor obtido com células de Franz que mais se adequada a estes resultados e demais disponíveis provenientes de outras técnicas na literatura, foi de 28,1 x 10-6 cm/s, em uma das condições do planejamento estatístico utilizando segmento final da membrana epitelial da rã. No caso do aciclovir, o resultado de Papp de 0,48 x 10-6 cm/s também obtido em uma das condições envolvendo segmento intestinal final da rã foi exatamente igual a o valor 0,48 x 10 - 6 cm/s, encontrado com células Caco-2 no presente estudo e estão de acordo com outros valores disponíveis na literatura por Trapani e colaboradores, 2004 e também com células Caco-2. Para zidovudina o valor de Papp obtido em uma das condições utilizando segmento intestinal inicial da rã, de 13 x 10-6 cm/s, foi a que mais se assemelhou ao obtido pela técnica de células Caco-2, 13,6 x 10-6 cm/s, e também está de acordo com demais dados da literatura. / There are lots of different in vitro technics in the literature using animal intestinal epithelium to estimate permeability of drugs, property that is an important parameter of bioavailabity. Considering that the main objective of Pharmaceutical Companies is the development of new drugs with good oral bioavailabity, the aim of this work was to standardize the permeability of antivirals using in vitro/ex vivo method of intestinal epithelium of Rana catesbeiana in Franz cells and compare these results to those obtained from studies using Caco-2 cells. Zidovudine and Acyclovir were selected as model drugs. The amount of drug permeated will be determined by the method of capillary electrophoresis for assays using Rana Catesbeiana and HPLC-UV for studies with Caco-2 cells. The permeation parameter determined was the apparent permeability coefficient (Papp) of drugs for both experimental models. To establish the experimental protocol to studies of intestinal permeability of frog, it was proposed a fractional 24-1 design with 4 additional tests using Minitab software and the variables were: intestinal section, pH of Ringer solution and temperature. The analysis of the experimental design made by the estimate of the regression parameters obtained from the factorial model results allowed the determination of the coefficients of the mathematical equation that defines the influence of the variables on the apparent permeability coefficient of acyclovir and zidovudine. The effects of pH and temperature interpreted jointly presented a slight interference, but the variables drug and intes tinal section interpreted together had major interference, showing greater permeation of drugs through the initial section of the intestine of the frog . The results of Papp were: for metoprolol, with the method of Caco-2 cells was 28 x 10-6 cm/s, a value which is consistent with other data of Caco-2 cells provided in the literature and the condition obtained with Franz cells that are most suitable for these and other results obtained from other techniques available in the literature, was 28.1 x 10-6 cm/s, provided with the final intestinal segment using frog epithelial membrane. In the case of acyclovir, the result of Papp of 0.48 x 10-6 cm/s obtained in one condition with final frog intestinal segment was exactly equal to the value of 0.48 x 10-6 cm/s, found with Caco-2 cells in the present study and are in agreement with other values available in the literature for Trapani and colegues, 2004 and also with Caco-2 cells. The Papp value for zidovudine obtained with the initial gut segment of frog, 13 x 10-6 cm /s was which more resembled that obtained by the technique of Caco-2 cells, 13.6 x 10-6 cm/s and is also consistent with other literature data.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2017-02-21T17:09:23Z No. of bitstreams: 1 Sandro Ricardo da Costa.pdf: 720379 bytes, checksum: 054515c8a5c3b3fc9ff3150fc0b86e14 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-21T17:09:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sandro Ricardo da Costa.pdf: 720379 bytes, checksum: 054515c8a5c3b3fc9ff3150fc0b86e14 (MD5) Previous issue date: 2012-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The technique of use of gonadotrophin releasing hormone (GnRH) in the reproduction of amphibians can be used to control spawning throughout the year, avoiding production delays resulting from the seasonality of the reproductive cycle. The objective was to study the induced breeding of bullfrog Lithobates catesbeianus using different types and dosages of GnRH to the optimization of the hormone and the consequent reduction in operating costs in commercial production. Breeders (average weight 650 g) were previously prepared, and conditioned to an average temperature of 26°C, submitted to a photoperiod of 15 hours of light. We tested three different hormone treatments; treatment 1 (T1) with 5 μg Etilamid hydrated acetate, treatment (T2) 2.5 μg Etilamid hydrated acetate and treatment 3 (T3) with 0.8 μg of Buserelin acetate, divided in three experimental groups. For each treatment, three applications were made at intervals of 12 hours hormones application in females and a single one for males. After the hormone treatment was done the extrusion of eggs in females and spermiation in males fertilized eggs hydrated with water at neutral pH. All males responded to the hormones applied resulting in a "pool of sperm" used to fertilize the females. Females of treatments T1 and T2 ovulated in its entirety and there was a failure only in T3. From the first and second trials, it could be detected that the dosages of 2.5 μg Etilamid hydrated acetate and 0.8 μg Buserelin acetate are more technically and economic viable for induced breeding of bullfrog. The average weight of spawning was 92.8 and 93.7 g respectively. The fertilization rate was estimated from the percentage of eclosion, with rates of fertilization rates average with 84.2 % (T2) and 60.3 % (T3). Based on the results, we conclude that the reduction in usual dosages for Etilamid hydrated acetate and the use of Buserelin acetate were efficient on ovulation and spermiation in bullfrogs, but it is necessary to adjust the dosage of Buserelin acetate as well to get a better improvement through environmental control and breeder maturation conditions in further experiments. / A técnica de uso de hormônios liberadores da gonadotrofina (GnRH) na reprodução de anfíbios pode ser usada para controlar as desovas ao longo do ano, evitando atrasos na produção decorrente da sazonalidade do ciclo reprodutivo. Objetivou-se estudar a reprodução induzida da rã touro Lithobates catesbeianus, utilizando diferentes tipos e dosagens do GnRH visando à otimização do hormônio e conseqüente redução nos custos operacionais na produção comercial. Os reprodutores (peso médio de 650 g) foram previamente preparados, sendo climatizados à temperatura média de 26° C, e submetidos a fotoperíodo de 15h luz. Foram testados três diferentes tratamentos hormonais, sendo o tratamento um (T1) com 5 μg/rã de acetato de Etilamida hidratado, o tratamento dois (T2) 2,5 μg/rã de acetato de Etilamida hidratado e o tratamento três (T3) com 0,8 μg/rã de acetato de Busserelina, divididos em três fases experimentais. Em cada tratamento foram feitas três aplicações de hormônios com intervalo de 12 h nas fêmeas, e apenas uma aplicação nos machos. Após o tratamento hormonal foi feita a extrusão dos óvulos nas fêmeas e espermiação nos machos, fecundando e hidratando os ovos com água de pH neutro. Todos os machos responderam aos hormônios aplicados resultando em um ―pool espermático‖, usado na fertilização das fêmeas. As fêmeas dos Tratamentos T1 e T2 ovularam em sua totalidade havendo uma abstenção apenas no T3. Nas primeira e segunda fase experimental, foi detectado que as dosagens de 2,5 μg/rã de acetato de Etilamida hidratado e 0,8 μg/rã de acetato de Busserelina foram mais tecnicamente e economicamente viáveis para indução à reprodução da rã touro. A média no peso das desovas foi de 92,8 e 93,7 g, respectivamente. A taxa de fecundação foi estimada na porcentagem de eclosão das larvas, com índices de fecundação com medias no T2 com 84,2 % e 60,3 % no T3. Com base nos resultados, é possível concluir que houve eficiência com a redução das dosagens usuais para o acetato de Etilamida hidratado e também houve eficiência com o uso do acetato de Busserelina na ovulação e espermiação de rãs, porém se faz necessário ajuste de dosagens para acetato de Busserelina bem como uma melhor adequação entre as condições de controle ambiental e maturação dos reprodutores, afim de melhorar os índices de fecundação em novos experimentos.

Métodos in vitro utilizando epitélio intestinal animal são importantes ferramentas para avaliar a permeabilidade de fármacos, propriedade que é um importante parâmetro de biodiosponibilidade. Considerando que o maior objetivo na indústria farmacêutica é desenvolver novos fármacos com boa biodisponibilidade oral, o projeto teve como objetivo padronizar o modelo de permeação com membrana de intestino de rã (Rana catesbeiana) em células de Franz, comparando seus resultados com ensaios de células Caco-2. Os fármacos modelo utilizados foram os antivirais zidovudina e aciclovir. A quantidade de fármaco permeado foi determinada por método de eletroforese capilar para o método com intestino de rã touro e por HPLC-UV para os ensaios com células Caco-2. O parâmetro de permeação foi o coeficiente de permeabilidade aparente (Papp) dos fármacos para ambos modelos experimentais. Para estabelecimento do protocolo experimental dos estudos de permeabilidade intestinal de rã, foi proposto um projeto fracionado 24-1 com 4 ensaios adicionais usando o software Minitab, e as variáveis foram: secção intestinal, pH da solução de Ringer e temperatura. A análise do planejamento experimental feita pela estimativa dos parâmetros da regressão obtidos através dos resultados do modelo fatorial possibilitou a determinação dos coeficientes da equação matemática que definiu a influência das variáveis sobre o coeficiente de permeabilidade aparente dos fármacos. Os efeitos das variáveis pH e temperatura interpretados conjuntamente apresentaram interferência leve, porém as variáveis fármaco e secção intestinal interpretados juntos tiveram interferência importante, mostrando maior permeação dos fármacos através da secção inicial do intestino da rã. Os resultados de Papp foram: para o metoprolol, pelo método das células Caco-2 foi de 28 x 10-6 cm/s, valor que está de acordo com demais dados de células Caco-2 na literatura e o valor obtido com células de Franz que mais se adequada a estes resultados e demais disponíveis provenientes de outras técnicas na literatura, foi de 28,1 x 10-6 cm/s, em uma das condições do planejamento estatístico utilizando segmento final da membrana epitelial da rã. No caso do aciclovir, o resultado de Papp de 0,48 x 10-6 cm/s também obtido em uma das condições envolvendo segmento intestinal final da rã foi exatamente igual a o valor 0,48 x 10 - 6 cm/s, encontrado com células Caco-2 no presente estudo e estão de acordo com outros valores disponíveis na literatura por Trapani e colaboradores, 2004 e também com células Caco-2. Para zidovudina o valor de Papp obtido em uma das condições utilizando segmento intestinal inicial da rã, de 13 x 10-6 cm/s, foi a que mais se assemelhou ao obtido pela técnica de células Caco-2, 13,6 x 10-6 cm/s, e também está de acordo com demais dados da literatura. / There are lots of different in vitro technics in the literature using animal intestinal epithelium to estimate permeability of drugs, property that is an important parameter of bioavailabity. Considering that the main objective of Pharmaceutical Companies is the development of new drugs with good oral bioavailabity, the aim of this work was to standardize the permeability of antivirals using in vitro/ex vivo method of intestinal epithelium of Rana catesbeiana in Franz cells and compare these results to those obtained from studies using Caco-2 cells. Zidovudine and Acyclovir were selected as model drugs. The amount of drug permeated will be determined by the method of capillary electrophoresis for assays using Rana Catesbeiana and HPLC-UV for studies with Caco-2 cells. The permeation parameter determined was the apparent permeability coefficient (Papp) of drugs for both experimental models. To establish the experimental protocol to studies of intestinal permeability of frog, it was proposed a fractional 24-1 design with 4 additional tests using Minitab software and the variables were: intestinal section, pH of Ringer solution and temperature. The analysis of the experimental design made by the estimate of the regression parameters obtained from the factorial model results allowed the determination of the coefficients of the mathematical equation that defines the influence of the variables on the apparent permeability coefficient of acyclovir and zidovudine. The effects of pH and temperature interpreted jointly presented a slight interference, but the variables drug and intes tinal section interpreted together had major interference, showing greater permeation of drugs through the initial section of the intestine of the frog . The results of Papp were: for metoprolol, with the method of Caco-2 cells was 28 x 10-6 cm/s, a value which is consistent with other data of Caco-2 cells provided in the literature and the condition obtained with Franz cells that are most suitable for these and other results obtained from other techniques available in the literature, was 28.1 x 10-6 cm/s, provided with the final intestinal segment using frog epithelial membrane. In the case of acyclovir, the result of Papp of 0.48 x 10-6 cm/s obtained in one condition with final frog intestinal segment was exactly equal to the value of 0.48 x 10-6 cm/s, found with Caco-2 cells in the present study and are in agreement with other values available in the literature for Trapani and colegues, 2004 and also with Caco-2 cells. The Papp value for zidovudine obtained with the initial gut segment of frog, 13 x 10-6 cm /s was which more resembled that obtained by the technique of Caco-2 cells, 13.6 x 10-6 cm/s and is also consistent with other literature data.