Equinodermos são bem conhecidos pelas suas grandes capacidades regenerativas, principalmente em processos mais complexos como a reposição de membros e órgãos. Porém pouco se sabe sobre processos aparentemente mais simples como a cicatrização. Tem sido descrito que um dos principais mecanismos envolvidos neste evento é o remodelamento da matriz extracelular e que existem células responsáveis por isto. Entretanto, vários detalhes do processo e do exato papel destas células ainda não são muito claros. Neste trabalho, foram estudados os estágios do processo de cicatrização em Holothuria grisea Selenka, 1867 (Holothuriidae). A lesão foi induzida através de uma incisão perfurando a parede do corpo do animal até alcançar a cavidade celomática. Através de análises histológicas, foram acompanhadas as mudanças estruturais e os mecanismos celulares que ocorrem no intervalo de doze horas a trinta dias após a injúria. Foi observado que houve um rápido fechamento da ferida através da síntese de novas fibras de colágeno, e que fibroblastos e duas populações de esferulócitos estão envolvidos neste processo. São discutidas as prováveis funções destes tipos celulares e possíveis diferenças funcionais entre os esferulócitos. / Echinoderms are well known by their regenerative capabilities, mostly in complex events such as the reconstruction of internal organs or entire body parts. However, the knowledge on apparently simpler processes such as wound healing is relatively scarce. It has been described that extracellular matrix remodeling is the main mechanism, and it involves participation of different cells populations. However, the specific function of these cell types is still under debate. In this work, the wound healing process in Holothuria grisea Selenka, 1867 (Holothuriidae) was studied. The lesion was made by an incision through the body wall up to the coelomic cavity. The local changes in cell types and the reorganization of the extracellular matrix were accompanied from 12 hours to 30 days after the injury. Soon after the wound, the organism responded with a localized contraction, followed by cell migration and synthesis of new collagen fibers. Four different cell types were observed, including two different types of spherulocytes. The probable functions of these cells are discussed.

Os implantes dentários de titânio comercialmente puro (Ticp) grau 4 e os de titânio-alumínio-vanádio (Ti6Al4V) grau 5, possuem boas propriedades mecânicas. No entanto, algumas situações clínicas com restrição de espessura óssea impedem a utilização dos implantes com 3.75mm de diâmetro tradicionalmente fabricados em titânio 4 e que apresentam resistência mecânica testada em profusão. Como a liga de grau 5 possui superior resistência à tração e à fadiga, este estudo objetiva analisar a resposta óssea do titânio grau 4 e grau 5 em implantes curtos e estreitos através da análise do contato osso-implante (BIC) e da área de neoformação óssea. Para este fim, o presente estudo utilizou 15 coelhos da raça New Zealand, que receberam um total de trinta implantes divididos em suas tíbias direita e esquerda. Os implantes de grau 4 e de grau 5, com dimensões de 3.5x8mm e 2.9x7mm, respectivamente, foram fornecidos pela empresa NEODENT® (Curitiba-Brasil). Neste estudo, dois grupos foram formados, um com implantes de titânio grau 4 e outro com implantes de titânio grau 5, ambos contendo quinze implantes curtos e estreitos. Cortes histológicos foram realizados após duas semanas de osseointegração. Mensurações no analisador de imagens ImageJ foram feitas para verificar o BIC e a área de osso neoformado. Para a análise dos dados estatísticos, utilizou-se o teste t de Student para amostras independentes com nível de significância de p<0.05. Os resultados mostraram que não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos nos dois tipos de análises. A média dos valores de BIC do titânio grau 4 obteve o valor médio mais alto de 56,53%, variando de 95,74% a 9,4%. O grupo de titânio grau 5 apresentou média de 50,63%, variando entre 84,3% e 13,12%. Com base em imagens com fluorescência, realizou-se análise da área óssea. O grupo de titânio grau 5 apresentou valor de 46,3% (variando entre 79% a 14,21%) em fluorescência, número ligeiramente maior do que o verificado no grupo de titânio grau 4 (44,73%, com variância entre 78,93% e 18,36%). Com isso, concluiu-se que implantes de titânio de grau 4 e de grau 5 obtiveram respostas biológicas equivalentes, quando avaliados o BIC e a área óssea neoformada. / Commercially pure titanium implants (Ticp) of degree IV and of titanium-aluminum-vanadium degree V have good mechanical properties. However some clinical situations with limited bone thickness preclude the use of traditionally implants with 3.75mm diameter made from titanium IV and present strength tested in profusion. In addition, degree V alloy shows higher resistance to traction and fatigue, this study aims to analyze the bone response to degree IV and degree V titanium in short and narrow implants with the same surface treatment through the analysis of the bone-to-implant contact (BIC) and the area of the new bone formation. For such purpose, this study used15 New Zealand white rabbits which had a total of thirty implants inserted in their right and left tibiae. Both degree IV and degree V implants, measuring 3.5x8mm and 2.9x7mm, respectively, were provided by dental implant manufacturer NEODENT® (Curitiba-Brazil). The implants were allocated into two distinct groups. Fifteen short and narrow implants of degree IV were utilized in a group, whereas fifteen short and narrow implants of degree V were employed in the other group. Histological sections samples were carried out after a two-week period of osseointegration. Subsequently, measurements were calculated using ImageJ software in order to verify the BIC and the area of the newly grown bone. Analysis of statistical data of independent samples with significance level p<0.05 was carried out via Student\'s t-test. Results showed no statistically substantial difference between both groups regarding both measurement activities. The media values BIC for the degree IV titanium group reached the highest average value of 56,53%, varying from 95,74% to 9,4%. The degree V titanium group averaged 50,63%, oscillating between 84,3% and 13,12%. The bone areas were analyzed based on images with fluorescence. The degree V titanium group reached the percentage of 46,3% (varying from 79% to 14,21%) in fluorescence whereas the degree IV titanium group had a percentage of 44,73% (varying between 78,93% and 18,36%). Therefore, both degree IV and degree V implants had equivalent biological responses based on the analysis of BIC and newly grown bone areas.

Com o avanço da tecnologia e a conseqüente produção de equipamentos mais sofisticados, a microcirurgia vem ganhando cada vez mais espaço no campo da investigação experimental referente a recuperação de nervos periféricos. É sabido que no caso de uma simples secção do nervo, sem perda tecidual, a neurorrafia término-terminal é a técnica mais aconselhável. Porém, em uma situação onde ocorre perda de tecido nervoso ou, quando não se têm mais o coto distal do nervo, outras técnicas devem ser empregadas, mesmo porque, não se pode de forma alguma tracionar o nervo numa tentativa de coaptá-lo novamente. Assim várias técnicas de tubulização utilizando-se de materiais biológicos (vasos, nervos, músculos, pericárdio, veia e músculo combinado, moléculas de adesão, etc) ou não biológicos (tubos de polietileno, silicone, etc) estão sendo testados com resultados ainda insatisfatórios, principalmente sob o ponto de vista funcional. É sabido que em um trauma sem perda tecidual, numa neuropraxia, por exemplo, o nervo recupera espontaneamente de forma satisfatória. É sabido também que em um feixe vásculo-nervoso, o nervo periférico encontra-se em íntimo contato com a adventícia de artérias e veias. A adventícia dos vasos é constituída por tecido conjuntivo frouxo, rico em adipócitos. Assim, em um trauma, os neuritos oriundos do coto proximal do nervo lesado, ficam diretamente em contato com esses adipócitos. Seguindo este raciocínio, e com base em trabalhos anteriores onde foi usada veia preenchida com músculo esquelético a fresco como enxerto, decidimos testar a possibilidade de crescimento axonal por meio de enxerto venoso preenchido por tecido adiposo autólogo. Para tanto foi utilizada a veia jugular externa do rato preenchido com tecido adiposo in natura retirado das adjacências da referida veia, na tentativa de se recuperar o nervo ciático e um de seus ramos, o nervo fibular comum. A certificação do sucesso da recuperação do nervo foi feita por meio da análise dos nervos (Ciático e Fibular Comum), e dos músculos Extensor Longo dos Dedos (EDL) e Tibial Cranial (TC), sempre comparando com os respectivos grupos controles. Técnicas de microcirurgia, microscopia, morfometria, e análise fisiológica (foot print), além da utilização do Laser de Baixa Potência (LBP), foram empregadas nesta investigação. / With technology advance and the resultant production of more sophisticated equipment, microsurgery has been obtaining more attention in the experimental investigation field referred to peripheral nerves repair. It is know that in case of simple nerve section, without tissue loss, the end-to-side-neurorraphy is the most recommended technique. However, in each situation where nerve tissue loss occurs or, when there is no nerve distal stump anymore, other techniques should be used, precisely because the nerve cannot be put on traction to try nerve coaptation. Thus, many tubulization techniques which use biological materials (veins, nerves, muscles, pericardium, veins and muscles combined, adherence molecule) or non-biological materials (polyethylene tubes, silicon, among others) are being tested and the results has been unsatisfactory yet, especially concerning functional point of view. It is known that in trauma without tissue loss, like neuropraxy, for example, the nerve recovers spontaneously in a satisfactory way. It is also known that in a vascular-nervous bundle, the peripheral nerve is very closed to arteries and veins adventitious layer. The vein adventitious is built by weak conjunctive tissue, which is rich in fat cells. Thus, in a trauma, the neurites, derived from proximal stump of injured nerve, have direct contact with the fat cells. Following this argumentation and based on previous works that used vein fulfilled with fresh skeleton muscle as graft, we have decided to test the possibility of axon growth through vein graft fulfilled with autologous fat tissue. To achieve this, it was used rats external jugular vein fulfilled with in natura fat tissue removed from the adjacencies of the referred vein, in a trial to recover the sciatic nerve and one of its branches, the common peroneal nerve. The certification of successful nerve recovering was done through the analysis of nerves (Sciatic and Common Peroneal Nerve) and muscles (Extensor Digitorium Longus - EDL and Tibial Cranial Muscle TC), always comparing them with the respective control groups. Techniques of microsurgery, microscopy, morphometry and physiological analysis (foot print) were employed, besides the use of Low-Power Laser (LPL).

Devido à sua peculiar estrutura mineralizada, o tecido ósseo ainda representa um dos desafios para os estudos em bioengenharia regenerativa. Nesse sentido, estratégias realizadas envolvendo o sistema de liberação de drogas através de polímeros bioreabsorvíveis apontam resultados promissores. Esse projeto teve como objetivo empregar PLGA [poli (ácido lático-co-glicólico)] carregado com sinvastatina (SIN) em defeitos ósseos críticos criados em osso parietal de ratos. Foi realizado um defeito de 5.0 mm de diâmetro no osso parietal esquerdo, sendo que no grupo controle (C) foi deixado apenas o coágulo sanguíneo. O grupo experimental foi subdividido como segue: no subgrupo (M), uma membrana de PLGA foi colocada recobrindo o defeito ósseo, de modo que as bordas ultrapassaram a borda do defeito. No outro subgrupo (MSI), microesferas de PLGA 50/50 contendo sinvastatina a 2,5% foram depositadas no interior do defeito, sendo posteriormente recobertas pela membrana de PLGA; no grupo (MSS) foram colocadas microesferas de PLGA sem sinvastatina para avaliar o efeito osteocondutor das microesferas. Os animais foram sacrificados em dois períodos 30 e 60 dias após a cirurgia e as calotas removidas e processadas para análise morfológica em microscopia de luz, microscopia eletrônica de transmissão e varredura, imuno-histoquímica para análise da expressão de OPN (osteopontina), BSP (sialoproteína óssea) e OSAD (osteoaderina) e análise imunocitoquímica da distribuição ultra estrutural da proteína OPN. Os resultados observados mostraram que a formação do novo osso iniciou-se pelas margens do defeito e também pela área central em grupos tratados. A análise da regeneração nos defeitos tratados com SIN mostrou uma disposição ordenada das fibrilas colágenas e uma matriz com aspecto de tecido ósseo em fase mais madura. O estudo mostra que a regeneração do tecido pode ser acelerada e que a matriz neorformada é depositada de forma mais organizada pela liberação gradual da SIN. / Due to its unique mineralized structure, bone regeneration is still a challenge. Numerous strategies had been proposed during the past years, drug delivery system using polymeric scaffolds is a promising strategy. The aim of this study was to employ PLGA [poly (lactide-co-glycolic acid)] loaded with simvastatin(SIN) in bone defects created in rat calvaria. Bone defects with 5.0 mm diameter was created in the left side of the calvarias. In Control group (C) their defects were filled only with blood clot. The experimental group was subdivided. In subgroup (M), a PLGA membrane was covered the defect. In the other subgroup (MSI), PLGA microspheres loaded with 2.5% simvastatin filled the defect over the blood clot inside the defect and subsequently covered with PLGA membrane, another group was criated to evaluet the osteoconductor potencial of microesphers without the (SIN), the MSS group. The animals were sacrificed in 30, 60 after surgery, and the calvarias were removed and processed for light and transmission and scanning electron microscopy analyzes, Osteopontin (OPN), Osteoadherin (OSAD), Bone sialoprotein (BSP) imunnolabeling and immunocytochemical analyzes of the ultrastructural distribution of osteopontin in the neoformed bone. The in vivo experiment revealed that the microspheres containing simvastatin significantly enhanced the disposition of collagen fibrils in immature bone and bone formation in the rabbit calvaria critical size defect.

O metabolismo ósseo é influenciado por fatores endócrinos, genéticos, de crescimento, sistema RANK/RANKL/OPG, além de uma variedade de moléculas regulatórias, como as citocinas. Citocinas têm sido implicadas na patogênese de doenças ósseas, no entanto, ainda pouco se sabe sobre os mecanismos envolvidos na interação entre o sistema ósseo e imunológico no processo de reparo ósseo. O objetivo deste estudo foi caracterizar o papel de TNF-&#x3B1; e IL-10 no reparo ósseo alveolar em condições homeostáticas (controle [C]) e infecciosas (alveolite experimental [A]) pós exodontia em camundongos C57Bl/6 (WT), TNFp55KO e IL-10KO. Após a cirurgia nos grupos infectados foi induzida a alveolite por meio de isquemia do alvéolo e uma suspensão de secreção purulenta. As maxilas foram coletadas em 0h, 7, 14 e 21 dias após a extração do incisivo superior para análises histológica, histomorfométrica e molecular (RealTimePCR). Na análise histomorfométrica foram quantificados os parâmetros coágulo, células inflamatórias, fibras, fibroblastos, vasos sanguíneos, matriz óssea, osteoblastos, osteoclastos, e outros espaço do líquido intersticial e medula óssea. Na análise molecular (RealTimePCR) foram quantificados a expressão de fatores de crescimento, marcadores ósseos e de matriz extracelular, citocinas e quimiocinas envolvidos no processo. Os dados obtidos foram submetidos ao teste OneWay ANOVA seguido do teste de comparação múltipla de Tukey. Os resultados demonstraram que nos camundongos WT-C houve a formação inicial de coágulo (0 hora) com início da expressão de BMP2, BMP4, BMP7, TGFb1 and VEGFa que tiveram aumento gradativo com pico em 7 dias. A expressão de TNF-&#x3B1; e IL10 também tiveram seus picos aos 7 dias em paralelo com contagem de leucócitos, associado com a expressão de CCL2, CCL5 e CXCL1. Nos períodos seguintes houve uma diminuição inflamatória e o aumento de marcadores osteoblásticos/osteogênicos. A indução da alveolite experimental em WT-A resultou no aumento marcante na expressão de TNF-&#x3B1;, acompanhada por uma maior expressão de CXCL1 e CCL5, contagem aumentada de leucócitos e diminuição na expressão de IL-10 que só atingiu seu pico aos 14 dias, além de proeminente infiltrado leucocitário e tecido de granulação, bem como evidências histológicas de atraso no reparo ósseo. O impacto negativo da alveolite foi atenuado nos camundongos TNFp55KO, caracterizado por um reparo adequado, diminuição no número de leucócitos e osteoclastos em relação aos WTA. Por outro lado, um atraso no reparo foi observado nos animais IL10KO, evidenciado por uma menor densidade de osteoblastos e de matriz óssea do que o respectivo controle. Em conclusão, os resultados mostraram que ambas citocinas interferem no reparo ósseo alveolar por meio de mecanismos que envolvem o controle da migração de células inflamatórias e modulação de quimiocinas e a expressão de marcadores osteogênicos, uma vez que a ausência de IL-10 está associada a uma maior atividade inflamatória e reabsorção óssea concomitante com menor formação ósseo, já a deficiência de TNF-&#x3B1; afeta o recrutamento de leucócitos e a cinética de reparo óssea alveolar em condições homeostáticas e infecciosas. / Bone metabolism is influenced by endocrine, genetic and growth factors, RANK/RANKL/OPG system, besides a variety of regulatory molecules, such as cytokines. Cytokines have been implicated in pathogenesis of bone diseases, however, little is known about the mechanisms involved in the interaction between skeletal and immune system in the bone repair process. The objective of this study was characterized the role of TNF-&#x3B1; and IL-10 in alveolar bone repair under homeostatic (control [C]) and infectious (experimental alveolitis [A]) conditions in C57Bl/6 (WT), TNFp55KO and IL-10KO mice. After surgery, in infectious groups was induced by ischemia alveolitis the well and a suspension of pus. The maxillas were collected at 0h, 7, 14 and 21 days after extraction of the maxillary incisor for histologic, histomorphometric and molecular (RealTimePCR). In histomorphometric analysis parameters were measured clot, inflammatory cells, fibers, fibroblasts, blood vessels, bone matrix, osteoblast, osteoclast, and other space - the interstitial fluid and bone mar row. Molecular analysis (RealTimePCR) were quantified the expression of growth factors, bone markers and extracellular matrix, cytokines and chemokines involved in the process. The data were submitted to the OneWay ANOVA test followed by Tukey\'s multiple comparison test. The results showed that in WT-C initial clot formation (0 hours) with early expression of BMP2, BMP4, BMP7, and TGFb1 VEGFa who had gradual increase peaking in 7 days. The expression of TNF-&#x3B1; and IL10 also peaked at 7 days in parallel with leukocyte count, associated with CCL2, CCL5 and CXCL1. In late periods there were decrease of inflammation and markers osteoblastic / osteogenic increased. Induction of experimental alveolitis in WT resulted in a marked increase in expression of TNF-&#x3B1; accompanied by increased expression of CXCL1 and CCL5, increased leukocyte count and decreased of IL10 expression that peaked at 14d, besides prominent leukocyte infiltration and granulation tissue, as well as histological evidence of delayed bone repair. Negative impact of alveolitis was attenuated in TNFp55KO mice, characterized by appropriate repair rate, decreased of the number of leukocytes and osteoclasts that WT-A. On the other hand, a lessened repair was observed in IL10KO animals, evidenced by lower density of the density of osteoblasts and bone matrix than respective control. In conclusion, the results show that both cytokines interferes in alveolar bone repair through mechanisms that involve the control of inflammatory cell migration and modulation of chemokines and osteogenic markers expression, since that the absence of IL-10 is associated with higher inflammatory activity and bone resorption concomitant with lower bone formation, while the deficiency of TNF-&#x3B1;a affect the recruitment of leukocytes and the kinetics of alveolar bone healing both in homeostatic and infectious conditions.

Dentre os fatores relacionados à capacidade superior de regeneração in vitro de Solanum peruvianum, está a presença do alelo dominante Rg1. O gene RG1, envolvido na formação de gemas caulinares a partir de raízes e outros explantes, foi mapeado no cromossomo 3 entre os genes BETA-CAROTENE HYDROXYLASE (CrtR-b) e PHYTOENE SYNTHASE (PSY1). Variações alélicas também são conhecidas para genes CrtR-b e PSY1. white flower (wf) é o alelo de CrtR-b que produz pétalas brancas e yellow flesh (r) é o alelo de PSY1 que produz frutos amarelos. Os alelos wf e Rg1 com r foram introgredidos na cultivar Micro-Tom (Solanum lycopersicum L). Através da transferência sequencial de explantes de SIM para MB e de RIM para SIM, verificou-se que MT-Rg1 reduz o tempo necessário para a indução de gemas em um dia (6 dias em SIM para MT), devido a redução no tempo necessário para a aquisição de competência em um dia (2 dias para MT). Foram obtidos 30 possiveis recombinantes advindos do cruzamento Rg1/rg1 Wf/wf x rg1/rg1 wf/wf, baseados nas características de pétala branca (efeito do alelo wf) e maior ramificação (efeito do alelo Rg1). Todos os possíveis recombinantes foram testados in vitro quanto à capacidade de formar gemas caulinares em SIM e raízes em RIM. Com isso, 7 linhagens recombinantes foram confirmadas e utilizadas para o mapeamento fino da região na qual o gene RG1 está localizado no cromossomo 3. Para o mapeamento foram testados marcadores do tipo CAPS e SCAR, sendo utilizado o DNA genômico extraído de S. pennellii, S. peruvianum, Micro- MsK, MT, MT-Rg1, MT-wf e das 7 linhagens recombinantes, constatando-se que alguns marcadores moleculares desenhados para S. pennellii podem ser utilizados para S. peruvianum. Estas análises também evidenciaram que o segmento de introgressão de MT-Rg1 está entre o marcador P5 e o gene CrtR-b, totalizando 136 genes, entre os quais GRAS 10 destacou-se como principal candidato para a função gênica de Rg1. Complementarmente, foi realizada a análise de RNA-Seq (plataforma SOLiD) para a identificação de genes diferencialmente expressos entre MT e MT-Rg1. Com isso, observou-se que existem mais genes regulados negativamente do que positivamente durante a aquisição de competência. Devido ao grande número de genes diferencialmente expressos, alguns parâmetros foram utilizados para classificar os genes que poderiam ser quantificados por qRT-PCR em um experimento de regeneração in vitro. Entre os 361 genes classificados, 5 foram selecionados para a quantificação de sua expressão. Destes 5 genes, GRAS 10 e Serine/threonine protein phosphatase 7 foram os que apresentaram-se mais positivamente expressos e aparentemente são os que estão mais intimamente ligados a fase de aquisição de competência. Como existem muitos genes GRAS, foi feita uma árvore filogenética para posicioná-lo e identificar genes homólogos a ele. Com base na análise filogenética foi possível identificar o gene GRAS 10 como homológo ao gene SCL8 já identificado em Arabidopsis. Porém, pouco se sabe a respeito de SCL8. Desse modo, ainda é necessário confirmar a identidade do gene RG1, o que possibilitará a compreensão do processo de aquisição de competência. / The dominat allele Rg1 is related to the greater in vitro regeneration capacity of Solanum peruvianum L. The Rg1 gene is required for shoot formation from roots and others explants and was mapped on chromosome 3 between BETA-CAROTENE HYDROXYLASE (CrtR-b) and PHYTOENE SYNTHASE (PSY1) genes. Allelic variants are also known for the genes CrtR-b and PSY1. white flower (wf) is the allele of CrtR-b that produces white petals and yellow flesh (r) is the allele of PSY1 that produces yellow fruits. The alleles wf and Rg1 with r were introgressed into the Micro-Tom cultivar (Solanum lycopersicum L). Through the sequential transfer of explants from SIM to BM and RIM to SIM, we found that MT-Rg1 reduces the time required for the induction of shoots in one day (6 days on SIM for MT), due the reduction of the time required for competence acquisition in one day (2 days to MT). It was obtained 30 putative recombinants from crossing Rg1/rg1 Wf/wf x rg1/rg1 wf/wf. The recombinant lines were scored based on the presence of white petals (wf allele\'s effect) and increased shoot branching (Rg1 allele\'s effect). All putative recombinant lines were tested in vitro for their capability to form shoots in SIM and roots in RIM. Thus, 7 recombinant lines were selected and used to fine mapping the region where RG1 gene is located. CAPS and SCAR markers designed to S. pennellii were tested to fine-mapping, using as template genomic DNA samples from S. pennellii, S. peruvianum, Micro-MsK, MT, MT-Rg1, MT-wf and the 7 recombinant lines. These results confirmed that the molecular markers designed for S. pennellii can be successfully used for S. peruvianum. These analyzes also suggest that the introgressed segment of MT-Rg1 is located between the P5 marker and the CrtR-b gene. Within this region, there are 136 genes, including the GRAS 10 gene whichis the main candidate to RG1 gene function. In addition, we performed RNA-Seq analysis (SOLiD platform) to identify genes differentially expressed in MT and MT-Rg1. It was observed more down-regulated than up-regulated genes in the competence acquisition stage. Due to the large number of differentially expressed genes, some parameters were used for selection of genes that would have their expression validated by qRT-PCR in an in vitro regeneration test. Five genes among 361 genes differentialy expressed were selected to test their expression. Of these 5 genes, GRAS 10 and Serine / threonine protein phosphatase 7 were the most up-regulate genes and showed to be closely related to the stage of competence acquisition. Since there are many GRAS genes, we performed a phylogenetic analysis to identify homologous genes. Based on the phylogenetic analysis, GRAS 10 was identified as homologous to SCL8, a gene already identified in Arabidopsis. However, little is known about SCL8. Thus, it is still necessary to confirm the RG1 gene identity. This approach will provide a better understanding of competence acquisition process.

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do laser de baixa intensidade (LBI), na regeneração de defeitos de tamanho críticos preenchidos com osso autógeno ou Bio-Oss® associados à membrana colágena. O estudo foi conduzido em 120 defeitos críticos (5 mm) em calvárias de ratos machos (Rattus norvegicus, albinus, Wistar), pesando entre 250 a 300g, divididos em 12 grupos experimentais (n=10): 1) Grupo C (Controle coágulo sanguíneo); 2) Grupo M (membrana colágena- BioGide®); 3) L (laser de baixa intensidade, GaAlAs, 808 nm, 100 mW, 6J, 210 J/cm2); 4) Grupo OA (osso autógeno); 5) Grupo OA/L (osso autógeno + LBI) 6) Grupo OA/M (osso autógeno + membrana colágena); 7) Grupo L/M (LBI + membrana colágena); 8) Grupo OA/L/M (osso autógeno + LBI + membrana colágena); 9) Grupo BO (Bio-Oss®); 10) Grupo BO/M ( Bio-Oss® + membrana colágena) 11) Grupo BO/L (Bio-Oss®+ LBI); 12) Grupo BO/L/M (Bio-Oss® + LBI + membrana colágena). Aos 30 dias pós-operatórios os animais foram sacrificados e após o processamento tecidual, foram realizadas análises histológica, histométrica e estatística. Os dados foram submetidos ao teste paramétrico ANOVA, seguido pelo teste de Tukey (p<0,05). As variáveis analisadas foram: área de osso neoformado (AON) e área de partículas residuais (APR). Todos os grupos apresentaram maiores quantidades de AON quando comparados ao grupo C (9,96% ± 4,49%). Quando o LBI foi associado aos biomateriais apresentou diferença estatística signicativa somente no grupo BO/L (48,57% ± 28,22%, p < 0,05). Menor APR foi encontrada nos grupos irradiados pelo LBI, com diferença estatística significativa para o grupo BO/L (16,74% ± 15,25%, p < 0,05). O LBI possui efeito positivo na regeneração óssea de DTC, e embora na análise estatística tenha apresentado diferença significante somente quando aplicado sobre o Bio-Oss®, na análise histomorfométrica foi possível observar formação óssea em extensões variadas nos demais grupos. / The purpose of the study was to evaluate the effect of low-level laser therapy (LLLT) on guided bone regeneration of critical size defects filled with autogenous bone or Bio- Oss® associated with the collagen membrane. The study was conducted in 120 critical size defects (5mm) in male rats (Rattus norvegicus, albinus, Wistar),weighing between 250 and 300g, divided into 12 experimental groups (n = 10): 1) Group C (control only blood clot); 2) Group M (collagen membrane- BioGide®); 3) Group LLLT (low-level laser therapy, GaAlAs, 808 nm, 100 mW, 6J, 210 J/cm2); 4) Group AB (autogenous bone); 5) Group AB/LLLT (autogenous bone + LLLT); 6) Group AB/M (autogenous bone + collagen membrane); 7); Group LLLT/M (LLLT + collagen membrane) 8) Group AB/LLLT/M (autogenous bone + LLLT + collagen membrane); 9) Group BO (Bio-Oss®); 10) Group BO/M (Bio-Oss® + collagen membrane) 11) Group BO/LLLT (Bio-Oss® + LLLT), 12) Group BO/LLLT/M Bio- Oss® + LLLT + collagen membrane). The animals were killed 30 days postoperatively. After tissue processing, bone regeneration was evaluated by histomorphometric and statistical analysis was performed (Tukey test, p<0,05). The variables analyzed were the area of newly formed bone (NFB) and residual particle area (RPA). All groups presented greater amounts of AON when compared to group C (9,96% ± 4,49%). When LBI was associated with biomaterials, it showed a significant statistical difference only in the BO/L group (48,57% ± 28,22%, p<0,05). Smaller APR was found in the groups irradiated by LBI, with a significant statistical difference for BO/L group (16,74% ± 15,25%, p<0,05). LBI has a positive effect on bone regeneration of DTC, and although in the statistical analysis it presented significant difference only when applied on Bio-Oss®, in the histomorphometric analysis it was possible to observe bone formation in varied extensions in the other groups.

Tem sido proposto que a Fibrina Rica em Plaquetas e Leucócitos (L-PRF) pode estimular a neoformação óssea e melhorar a incorporação de enxertos ósseos. Este estudo avaliou a cicatrização de defeitos de tamanho crítico (DTCs) criados em calvária de ratas com osteoporose induzida por ovariectomia e tratados com L-PRF associada ou não a enxerto ósseo bovino (XENO). 32 ratas foram divididas em 4 grupos (n=8): C, PRF, XENO e PRF-XENO. Todos os animais foram submetidos a um procedimento de ovariectomia bilateral no início do estudo. Após 3 meses, DTCs de 5 mm de diâmetro foram criados na calvária dos animais. No grupo C, o defeito foi preenchido apenas com coágulo sanguíneo. Nos grupos PRF e XENO, os defeitos foram preenchido com 0,02 mL de L-PRF e 0,02 mL de XENO, respectivamente. No grupo PRF-XENO o defeito foi preenchido com uma mistura de 0,02 mL de PRF e 0,02 mL de XENO. Todos os animais foram submetidos à eutanásia aos 30 dias pós-operatórios. Foram realizadas análises histomorfométrica, microtomográfica e imunohistoquímica. Os dados obtidos foram estatisticamente analisados (ANOVA, Tukey, p < 0,05). O Grupo PRF-XENO apresentou maior quantidade de osso neoformado (ON) quando comparado ao Grupo XENO, bem como maiores expressões de Fator de Crescimento Endotelial Vascular (VEGF), Osteocalcina (OCN) e Proteína Morfogenética Óssea (BMP)-2/4 (p < 0,05). O Grupo PRF apresentou maior quantidade de ON e maiores expressões de VEGF, OCN, BMP-2/4 e Fator de transcrição relacionado a Runt 2 (RUNX-2) quando comparado ao Grupo C (p < 0,05). Conclui-se que a L-PRF pode favorecer a neoformação óssea de DTCs e potencializar a cicatrização de XENO em ratas com osteoporose induzida por ovariectomia. / It has been proposed that Platelet Rich Fibrin and Leukocyte (L-PRF) can stimulate bone neoformation and improve bone graft incorporation. This study evaluated the healing of critical caliber defects (CSDs) created in the calvaria of rats with osteoporosis induced by ovariectomy and treated with L-PRF associated or not with bovine bone graft (XENO). 32 rats were divided into 4 groups (n = 8): C, PRF, XENO and PRF-XENO. All animals underwent a bilateral ovariectomy procedure at the start of the study. After 3 months, CDSs of 5 mm diameter were created in calvaria of the animals. In group C, the defect was filled only with blood clot. In the PRF and XENO groups, the defects were filled with 0.02 mL of L-PRF and 0.02 mL of XENO, respectively. In the PRF-XENO group the defect was filled with a mixture of 0.02 mL of PRF and 0.02 mL of XENO. All animals were submitted to euthanasia at 30 postoperative days. Histomorphometric, microtomographic and immunohistochemical analyzes were performed. The data were statistically analyzed (ANOVA, Tukey, p < 0.05). The PRF-XENO group presented higher amount of neoformed bone (NB) when compared to the XENO group, as well as higher expression of Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF), Osteocalcin (OCN) and Bone Morphogenetic Protein (BMP -2/4 (p < 0.05). The PRF group presented higher amounts of NB and higher expression of VEGF, OCN, BMP-2/4 and Runt-related transcription factor 2 (RUNX-2) when compared to the group C (p <0.05). It can be concluded that L-PRF can improve bone neoformation in CSDs and potentiates the healing of XENO in rats with osteoporosis induced by ovariectomy.

O grande número de cirurgias ósseas reconstrutivas impulsiona o desenvolvimento de novos biomateriais. Neste contexto, a doxiciclina, um isômero estrutural da tetraciclina, já tem sido pesquisada há várias décadas, sendo sua aplicabilidade local, na Odontologia, direcionada ao tratamento de periodontites e peri-implantites. No entanto, estudos recentes, mostraram que a mesma possui a propriedade de inibir a osteoclastogênese, além das demais já conhecidas, como antibacteriana, imunossupressora e anti-inflamatória. Assim sendo, o objetivo deste estudo foi avaliar a aplicação local da doxicilina, na forma de gel tendo como base o natrosol, na regeneração óssea, associada ou não ao osso bovino particulado (Bio-Oss), através de um estudo quantitativo e qualitativo em defeitos de tamanho crítico na calvária de ratos. Para isso foi utilizado um total de 40 ratos, os quais foram aleatoriamente divididos em 5 grupos, com 8 animais cada, de acordo com o tratamento recebido: CS (coágulo sanguíneo); NAT (natrosol); DOX (gel de doxiciclina a 10 %); BO (Bio-Oss); BODOX (Bio-Oss associado à doxiciclina). 4 animais de cada grupo foram submetidos à eutanásia às 4 e 8 semanas de pós-operatório. Na análise tomográfica (TCCB), a média da densidade na região do defeito foi calculada como uma porcentagem em relação à densidade do osso nativo. Enquanto na análise histomorfométrica, a área de osso neoformado (AON) foi calculada como uma porcentagem da área total (AT). Os valores obtidos foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e ao teste de Tukey (p<0,05). Os resultados mostraram que a média percentual da densidade tomográfica na região do defeito, ao final das 8 semanas, foi estatisticamente maior no grupo BO (47,8183%) quando comparada ao DOX (41,3580%), NAT (31,3870%) e CS (31,0045%) e semelhante ao BODOX (46,5909%). E quanto à neoformação óssea, o grupo DOX (38,7875%) apresentou a maior média de formação óssea, apesar de estatisticamente semelhante aos grupos BODOX (33,1345%), BO (23,8915%) e NAT (22,5271%), e estatisticamente maior que CS (14,1250%). Dentro dos limites deste estudo, observa-se que o gel de doxiciclina a 10% teve um bom efeito no preenchimento de defeitos ósseos em calvária de ratos, e sua associação com partículas de osso bovino (Bio-Oss) mostrou melhor comportamento como arcabouço para a regeneração óssea. / The large number of reconstructive bone surgeries drives the development of new biomaterials. In this context, doxycycline, a structural isomer of tetracycline, has been researched for several decades, and its local application in dentistry is directed to the treatment of periodontitis and peri-implantitis. However, recent studies have shown that it has the feature of inhibiting osteoclastogenesis, in addition to those well-known features such as antibacterial, anti-inflammatory, anti-collagenase and immunosuppressive. Therefore, the aim of this study was to evaluate the local application of doxycycline in the form of gel based on the natrosol, in bone regeneration, with or without the particulate bovine bone (Bio-Oss), through a quantitative and qualitative study critical defects in rat calvaria. Therefore, 40 rats were randomly divided into 5 groups with 8 animals each, according to the treatment received: CS (blood clot); NAT (natrosol); DOX (10% doxycycline gel); BO (Bio-Oss); BODOX (Bio-Oss associated with doxycycline). Four animals from each group were euthanized at 4 and 8 weeks postoperatively. In tomographic analysis (CBCT), mean density in the region of the defect was calculated as a percentage relative to the native bone density. While in histomorphometric analysis, the newly formed bone area (NFBA) was calculated as a percentage of the total area (TA). The valuesobtained underwent analysis of variance (ANOVA) and Tukey's test (p<0.05) when ANOVA suggested statistical difference. The results showed the mean percentage of tomographic density in the region of the defect at the end of 8 weeks was higher for BO (47.8183%) when compared to DOX (41.3580%), NAT (31.3870% ) and CS (31.0045%) and similar to BODOX (46.5909%). Regarding new bone formation, the DOX group (38.7875%) had the highest mean bone formation, although statistically similar to BODOX groups (33.1345%), BO (23.8915%) and NAT (22.5271 %) and statistically higher than CS (14.1250%). Within the limits of this study, it is observed that the gel doxycycline 10% had a good effect in filling bone defects in rat calvaria, and its association with particles of bovine bone (Bio-Oss) showed better behavior as a framework for bone regeneration. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O objetivo deste estudo foi estabelecer cultura primária de células derivadas da granulação óssea (GO) de seres humanos para determinar seu padrão de crescimento in vitro e determinar os efeitos biológicos de três membranas reabsorvíveis feitas de colágeno (BioGide®, GenDerm®, CollaTape®) em culturas de fibroblastos gengivais humanos (FGH) e células da granulação óssea (GO). Foram coletadas amostras de tecido ósseo presente no alvéolo de cicatrização de dois pacientes adultos saudáveis sistemicamente com indicação de cirurgia periodontal regenerativa pela técnica do enxerto ósseo em neoformação. Imediatamente após a coleta, as amostras foram transportadas ao laboratório de cultura de células para estabelecimento da cultura primária. As células foram cultivadas em atmosfera úmida, contendo 5% CO2 a 37oC. A curva de crescimento das células foi determinada por meio de contagem de células viáveis. Após a caracterização da curva de crescimento, foram realizadas a caracterização da amostra por meio de determinação da atividade de fosfatase alcalina e de mineralização. Posteriormente, os efeitos de três diferentes tipos de membranas colágenas sobre a proliferação de células GO e FGH foram investigados por meio do teste MTT. As amostras foram divididas em oito grupos: (1) células FGH em meio DMEM (C-FGH); (2) células FGH em meio DMEM condicionado com membrana GenDerm (GD-FGH); (3) células FGH em meio DMEM condicionado com membrana BioGide (BG-FGH); (4) células FGH em meio DMEM condicionado com membrana ColaTape (CT-FGH); (5) células GO em meio DMEM (C-GO); (6) células GO em meio DMEM condicionado com membrana GenDerm (GD-GO); (7) células GO em meio DMEM condicionado com membrana BioGide (BG-GO); (8) células GO em meio DMEM condicionado com membrana CollaTape (CT-GO). O teste de proliferação celular mostrou que houve aumento significativo (p< 0.05; ANOVA para medidas repetidas) do número de células vitais presentes na cultura nos dias 3 (90,8%), 5 (132,50%), 7 (137,50%) e 10 (227,50%) em relação ao controle (dia 0). Foram observadas atividade de fosfatase alcalina e de mineralização in vitro. Houve aumento do número de células FGH e GO viáveis em todos os grupos (p< 0.05; ANOVA para medidas repetidas). Houve maior efeito proliferativo nas células FGH e GO nos grupos GD e CT, com diferenças estatisticamente significantes entre os grupos (p< 0.05; Mann Whitney) apenas no período de 96 horas. Esses achados sugerem que as células GO apresentam alta atividade de proliferação e síntese, sendo compatíveis com células de linhagem osteoblástica. Duas membranas colágenas testadas exerceram maior ação proliferativa tardia sobre osteoblastos, indicando sua eficácia na regeneração dos tecidos periodontais. / The aim of this study was to establish primary culture of cells derived from human bone granulation tissue (GO) in order to determine its growth pattern in vitro and the biological effects of three absorbable collagen membranes (BioGide®, GenDerm®, CollaTape®) in human gingival fibroblasts (FGH) and human bone granulation (GO) cell cultures. Samples of bone tissue present at healing sockets of two systemically healthy adults with indication of periodontal regenerative therapy by the newly forming bone were collected. Immediately after, samples were transported to the laboratory of cell culture to the establishment of primary cultures. Cells were cultivated in humid atmosphere with 95% CO2 at 37oC. Cells growth pattern were determined by counting of viable cells. After characterization of growth pattern, samples were characterized according to alkaline phosphatase activity and mineralization detected by alizarin red. Afterwards, the effects of three different types of collagen membranes on GO and FGH cells were investigated by MTT test. Samples were divided into eight groups: (1) FGH cells in DMEM (C-FGH); (2) FGH in DMEM conditioned by GenDerm® membrane (GD-FGH); (3) FGH in DMEM conditioned with BioGide® (BG-FGH); (4) FGH in DMEM conditioned by CollaTape® (CT-FGH); (5) GO cells in DMEM (C-GO); (6) GO cells in DMEM conditioned by GenDerm® (GD-GO); (7) GO cells in DMEM conditioned by BioGide® (BG-GO); (8) GO cells in DMEM conditioned by CollaTape® (CT-GO). Cell proliferation test showed a significant (p< 0.05; ANOVA for repeated measures) increase in the number of vital cells present in the culture at days 3 (90.8%), 5 (132.50%), 7 (137.50%) and 10 (227.50%) compared to control (dia 0). It was observed alkaline phosphatase activity and mineralization in vitro. There was an increase in the number of FGH and GO viable cells at all groups (p< 0.05; ANOVA for repeated measures). Greater proliferative effect at FGH and GO cells at GD and CT groups, with significant differences between groups (p< 0.05; Mann Whitney) only at 96 hs. Two of the collagen membranes tested exerted greater late proliferative effects on osteoblasts, suggesting its efficacy in the regeneration of periodontal tissues.