Orientador : Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Resumo: Foi avaliado o uso do FSH equino (eFSH) para induzir o desenvolvimento folicular e a ovulacao em eguas durante a fase de transicao de primavera. Vinte e oito eguas, de 3 a 15 anos, foram examinadas durante os meses de agosto e setembro de 2003 com ultra-som por duas semanas antes do inicio do experimento, para determinar se elas estavam em transicao (nenhum foliculo maior que 25 mm e nenhum corpo luteo presente). Apos este periodo, conforme as eguas apresentam pelo menos um foliculo maior ou igual a 25 mm, elas foram distribuidas alternadamente em um dos dois grupos: 1) grupo controle . nao tratado; 2) grupo tratado com 12,5 mg de eFSH, duas vezes ao dia, ate que a maioria dos foliculos maiores que 30 mm alcancassem 35 mm. A atividade folicular de todas as eguas foi acompanhada. Quando a maior parte dos foliculos das eguas tratadas e o foliculo das eguas do grupo controle adquiriram um tamanho pre-ovulatorio (. 35 mm), foram administradas 2.500 UI de hCG, via intravenosa, para induzir a ovulacao. A partir deste momento as eguas foram inseminadas com semen fresco, em dias alternados, ate a ovulacao. Os exames ultra-sonograficos continuaram ate a deteccao das ovulacoes e a recuperacao embrionaria foi realizada sete a oito dias apos a ovulacao. As eguas do grupo tratado apresentaram o primeiro foliculo pre-ovulatorio e ovularam mais cedo do que as eguas nao tratadas (6,57 vs 18 dias). Entretanto, elas levaram mais tempo para a segunda ovulacao (22,36 vs 10,92 dias) apos a coleta de embriao e administracao do luteolitico. O periodo medio de tratamento foi de 4,79 } 1,07 dias e 85,71% das eguas tiveram multiplas ovulacoes. O numero de ovulacoes (5,57 vs 1,0) e de embrioes (2,0 vs 0,69) por egua foi superior para as eguas tratadas em comparacao as eguas controle. Porem, o numero de embrioes por ovulacao, foi similar entre os grupos (0,44 vs 0,69). O padrao de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: Equine FSH (eFSH) was evaluate for inducing follicular development and ovulation in transitional mares. Twenty-eight mares, from three to fifteen years of age, were examined during the months of August and September 2003 with ultrasound for two weeks prior to the start of the experiment to determine transitional characteristics (no larger follicles 25 mm and no corpora lutea present). After this period, as mare obtained a follicle larger or equal to 25 mm, they were assigned to one of two groups: 1) control group . untreated; 2) treated group with 12.5 mg eFSH, two times per day, until at least half of all follicles larger than 30 mm had reached 35 mm. The follicular activity of all mares were accompanied. When most of the follicles of the treated mares and a single follicle of control mares acquired a preovulatory size (. 35 mm), 2.500 IU hCG were administered, intravenously to induce ovulation. From this moment, the mares were inseminated with fresh semen, every other day, until ovulation. Ultrasound exams continued until ovulation detection and the embryo recovery was performed seven to eight days after ovulation. The mares of treated group reached the first preovulatory follicle and ovulated before untreated mares (6.57 vs 18 days). However, they took more time to the second ovulation (22.36 vs 10.92) after the embryo recovery and luteolitic administration. The mean period of treatment were 4.79 } 1.07 days and 85.71% of mares had multiple ovulations. The number of ovulation (5.57 vs 1.0) and embryos (2.0 vs 0.69) per mare were higher for treated mares than control mares. However, the number of embryos per ovulation was similar in both groups (0.44 vs 0.69). The pattern of follicular growth were also different between groups. Eighty-nine percent the embryos from the superovulated mares, were viable after a initial analysis, considering that... (Complete abstract, click electronic address below). / Mestre

Resumo: Os mecanismos luteotróficos e luteolíticos que controlam a função luteal em cadelas têm sido investigados. Este estudo avaliou as concentrações plasmáticas de PGFM e progesterona ao longo da gestação e do diestro, e do estradiol a partir do dia 40 da gestação ou diestro; a produção in vitro de PGF2α através de cultivos de explantes de endométrio, corpo lúteo e placenta, com ou sem estímulo por PDBu; a ocorrência de apoptose nas células luteais; e o envolvimento da enzima caspase-3 na luteólise em cadelas. Foram utilizadas 17 cadelas sem-raça-definida, divididas em dois grupos: diestro e gestação. Foi verificado que a queda das concentrações plasmáticas de progesterona em cadelas é um fenômeno lento e gradativo, que ocorreu a partir do terço inicial da gestação ou do diestro. As concentrações basais de progesterona foram atingidas nos dias 64 e 66 da gestação e diestro, respectivamente. Altas concentrações de PGFM e estradiol foram detectadas na segunda metade do diestro e da gestação. Ocorreu aumento progressivo de PGFM na segunda metade da gestação, e não no diestro, que culminou com um pico préparto. Os cultivos in vitro evidenciaram que o endométrio possui grande capacidade de produção de PGF2α, estimulado ou não por PDBu, superior aos explantes de corpo lúteo e de placenta, e mais pronunciado nos explantes de endométrio de cadelas gestantes comparados aos de cadelas em diestro. As análises histológicas por HE e CEC evidenciaram raras células apoptóticas no corpo lúteo das cadelas gestantes e em diestro, com células luteais íntegras detectadas nos corpos lúteos de cadelas no final da gestação, pós-parto imediato e aos 65 dias do diestro. Material sugestivo de corpus albicans foi evidenciado nos ovários oriundos das cadelas aos 75 e 85 dias do diestro. As concentrações de UAF/μg/ptn de caspase-3 não diferiram entre as... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: Luteotrophic and luteolytic mechanisms that control the luteal function in bitches are being investigated. This study evaluated the PGFM and progesterone plasma concentrations throughout pregnancy and diestrus, and plasma estradiol concentrations from day 40 of pregnancy or diestrus on; the in vitro production of PGF2α from explants of endometrium, corpus luteum and placenta cultures, with or without PDBu stimulation; the occurrence of apoptosis in the luteal cells; and the involvement of the enzyme caspase-3 in the luteolysis in bitches. Seventeen crossbred bitches, divided into 2 groups were used: diestrus and pregnancy. It was observed that the decrease of the plasma progesterone concentrations in bitches is a slow and gradual process, wich happened since the initial third of pregnancy or diestrus. The basal values of progesterone occurred at days 64 and 66 of pregnancy and diestrus, respectively. High plasma concentrations of PGFM and estradiol were detected at the second half of pregnancy, and not of diestrus, and culminate with a pre-partum peak. The in vitro cultures showed that endometrium has a big capacity of PGF2α production, stimulated or not by PDBu, and superior to corpus luteum or placenta explants, and also much more pronounced in the endometrium explants from pregnant compared to diestrus bitches. The histological analysis by HE and CEC showed rare apoptotic cells in the corpus luteum from pregnant and diestrus bitches, with intact luteal cells detected in corpora lutea from bitches in final pregnancy, immediate post-partum period and at 65 days of diestrus. Material suggestive of corpus albicans was evidenced in the ovaries of bitches on days 75 and 85 of diestrus. The concentrations of UAF/μg/ptn of caspase-3 did not differ between pregnant or diestrus bitches, and was also detected in the material suggestive of corpus albicans. / Orientador: Maria Denise Lopes / Coorientador: Mario Binelli / Doutor

Orientador: Cezinande de Meira / Banca: Sony Dimas Bicudo / Banca: Nei Moreira / Resumo: Com o objetivo de avaliar diferentes protocolos de sincronização de estro em éguas cíclicas da raça Campolina, 46 animais foram divididos em 5 grupos (I, II, III, IV e V); grupo I (10 animais) recebeu uma injeção IM de 2ml de norgestomet (3 mg) + valerato de estradiol (5 mg) e um implante de silicone via SC de norgestomet (3mg) por 9 dias; grupo II (10 animais) recebeu injeção IM de 5 mg de valerato de estradiol + 3mg de norgestomet; grupo III (10 animais) recebeu implante SC de silicone de norgestomet (3mg) por 9 dias; grupo IV (8 animais) recebeu uma injeção IM única de 2ml de norgestomet (3 mg) + valerato de estradiol (5 mg) e um implante via subcutânea de norgestomet + uma injeção IM única de hCG (2.500 UI); grupo V (8 animais) recebeu injeção única de hCG (2.500 UI). Ao término do tratamento (D9), todas as éguas dos 5 grupos receberam uma injeção IM de 7,5 mg de dinoprost-trometamina. Todas as éguas foram submetidas à avaliação ultra-sonográfica de dois dias anteriores ao início do tratamento (D0), objetivando-se a análise retrospectiva dos dois maiores folículos (F1 e F2). Embora não tenha sido constatada diferença (p>0,05) entre os grupos experimentais quanto à freqüência de sincronização, o grupo IV mostrouse eficiente com 100% de sincronização em D15, D16, D17 e D18 após o início do tratamento (D0). Pela avaliação ultra-sonográfica constatou-se que não houve supressão da atividade folicular durante o tratamento nos diferentes grupos experimentais, embora, nos grupos onde se utilizou norgestomet e valerato de estradiol, folículos menores ou iguais a 22 mm estabilizaram seu desenvolvimento durante o tratamento. / Abstract: With the objective of evaluate protocols of estrus synchronization in Campolina ciclic mares, 46 animals were grouped into 5 groups (I, II, III, IV e V); group I (10 animals) was treated with 3 mg norgestomet + 5 mg estradiol valerate intramuscular injection and a subcutaneous implant of norgestomet (3mg) during 9 days; group II (10 animals) received 5 mg of estradiol valerate + 3 mg of norgestomet by intramuscular injection; group III (10 animals) consisted on mares was treated with 3 mg norgestomet + 5 mg estradiol valerate intramuscular injection and a subcutaneous implant of norgestomet during 9 days; group IV (8 animals) was received 3 mg norgestomet + 5 mg estradiol valerate intramuscular injection + intramuscular injection of hCG (2,500 UI) and a subcutaneous implant of norgestomet during 9 days; group V (8 animals) was treated with unique intramuscular injection of hCG (2,500 UI). At progestogen treatment removal (9th. day), all mares from the 5 groups received one intramuscular injection of dinoprost-trometamina (7.5 mg). All mares were daily evaluated by rectal palpation and ultrasound examination for since two days before beginning of the treatment retrospectively measurement of the largest and second largest follicles. The results had demonstrated that even so the frequency of synchronization of estrus has not presented differences between experimental groups (p>0,05), group IV revealed efficiency with 100% of synchronization in D15, D16, D17 and D18 after the beginning of the treatment (D0). The ultra-sonographic evaluation showed even so that there was not suppression of the folicular activity during treatment in the different experimental groups, that in the groups where norgestomet and valerato of estradiol was used follicles equal or minors 22 mm had stabilized its development during the treatment. / Mestre

Orientador: Marco Antonio Alvarenga / Resumo: O presente trabalho objetivou avaliar os efeitos de doses baixas de extrato de pituitária (EPE) ou FSH purificado eqüino (eFSH) no crescimento folicular, taxa de ovulação e de recuperação embrionária em éguas. O experimento foi conduzido de outubro a dezembro de 2004 com a utilização de 27 éguas doadoras e 28 receptoras de embriões da raça Mangalarga Marchador. Após uma colheita de embrião no dia 8 pós-ovulação, as éguas receberam uma injeção de luteolítico e foram alocadas em um de dois grupos experimentais: EPE (n=13) ou eFSH (n=14). Para todas as éguas estudaram-se dois intervalos entre uma colheita de embrião e a ovulação subseqüente, sendo o primeiro o ciclo controle (sem tratamento) e o segundo o ciclo tratado. Em ambos os ciclos ultra-sonografia transretal do útero e dos ovários foi realizada diariamente para acompanhar o desenvolvimento dos dois maiores folículos. Durante o estro as éguas foram inseminadas a cada 48 h com sêmen a fresco do mesmo garanhão e receberam hCG (2.500 UI/IV) mediante a detecção de pelo menos um folículo com 35 a 40 mm de diâmetro. Os tratamentos consistiram em administração de EPE (4 mg/IM/s.i.d.; Grupo EPE) ou eFSH (5 mg/IM/s.i.d.; Grupo eFSH) do dia 8 (dia 0 = ovulação) até o dia anterior à indução das ovulações com hCG. As colheitas de embrião foram realizadas no oitavo dia pós-ovulação e sempre seguidas da administração de luteolítico. O percentual de éguas com mais de uma ovulação foi comparado pelo teste de Fischer e o número médio de ovulações e embriões, bem como os diâmetros foliculares, pelo teste t pareado entre ciclos dentro do mesmo grupo ou pelo teste t não pareado entre grupos diferentes. Uma probabilidade de P<0,05 indica que a diferença foi significativa e uma probabilidade de P=0,05 a P<0,1 indica que a diferença se aproximou da significância estatística... / Abstract: The present study aimed to evaluate the effects of low doses of equine pituitary extract (EPE) or purified equine FSH (eFSH) on follicular growth, ovulation rate and embryo recovery rate in mares. The experiment was conducted from October to December 2004 using 27 donors and 28 recipient mares belonging to the Mangalarga Marchador breed. After an embryo collection attempt on day 8 postovulation, all mares received an injection of luteolytic and were assigned to one of two experimental groups: EPE (n=13) or eFSH (n=14). For all mares two intervals between an embryo collection attempt and the subsequent ovulation were studied. The first served as a control cycle and the second as the treated cycle. In both cycles transrectal ultrasonography of the uterus and ovaries was performed daily to keep track of the two largest follicles. During estrus mares were inseminated every 48 h with fresh semen from a single stallion and received an injection of hCG (2,500 IU/IV) upon detection of at least one follicle of 35 to 40 mm in diameter. The treatments consisted of administration of EPE (4 mg/IM/s.i.d.; Group EPE) or eFSH (5 mg/IM/s.i.d.; Group eFSH) from day 8 (day 0 = ovulation) until the day before the induction of ovulation with hCG. The embryo collections were performed on day 8 post-ovulation and were always followed by administration of luteolytic. The percentage of mares with more than one ovulation was compared by means of Fischer's test and the mean number of ovulations and embryos, as well as follicular diameters, by paired Student's t test between cycles within the same group and by unpaired Student's t test between different groups. A probability of P<0.05 indicates that the difference was significant and a probability... / Mestre

Orientador: Sony Dimas Bicudo / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: André Luis Rios Rodrigues / Resumo: Objetivou-se avaliar a adição de plasma seminal e dos antioxidantes, catalase e Trolox, ao sêmen ovino após sua congelação e descongelação. Constituíram-se quatro grupos, CO (controle - com adição de 200µL PBS), CAT (catalase - 12,5 mg/mL = 8 µL + 162 µL PBS), TRO (Trolox - 100 µMol/ 100 x 106 sptz = 3,4 µL + 166,6 µL PBS), PS ( 60% de plasma seminal em PBS = 200 µL) em que os aditivos foram acrescidos (v/v) na proporção de 1:1, às amostras de sêmen criopreservado de 13 carneiros. Os parâmetros de cinética espermática determinados através da análise computadorizada (CASA), a integridade de membrana avaliada pela combinação das sondas fluorescentes Iodeto de Propídeo e Diacetato de Carboxifluoresceína, bem como a capacitação espermática constatada pelo ensaio da Clortetraciclina não foram influenciados pelo tratamento (P>0,05). A adição de plasma seminal teve um efeito deletério sobre a lipoperoxidação avaliada pela produção de TBARS (substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico), e geração de peróxido de hidrogênio (H2O2) pelo método do Phenol Red de H2O2. O Trolox foi efetivo em controlar a produção de TBARS nos sistema geradores (adição de +FeSO4). Uma vez que a adição de antioxidantes foi benéfica, por prevenir a formação adicional de TBARS e geração de H2O2 no sistema gerador, sua utilização em sêmen ovino após a criopreservação pode ser indicada, principalmente em situações de maior desafio oxidativo. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the addition of the antioxidants, catalase e Trolox, and the seminal plasma in frozen thawed ram semen. Four groups was established, CO (control 200 µL PBS), CAT (catalase - 12,5 mg/mL = 8 µL + 162 µL PBS), TRO (Trolox - 100 µMol/ 100 x 106 sptz = 3,4 µL + 166,6 µL PBS), PS ( 60% of seminal plasma in PBS = 200 µL) added in the proportion of 1:1 (v/v) in cryopreserved semen of 13 rams.The spermatozoa kinematics was determined by CASA, the membrane integrity was determined by the combination of the fluorescent probes Propidium Iodide and Carboxyfluorescein, and the capacitation status was assessed by Chlortetracycline assay. No statistic difference were found for these parameters (P>0,05).The addition of seminal plasma was deleterious on lipid peroxidation analysed by the production of TBARS (thiobarbituric acid reactive species) and on the generation of hydrogen peroxide (H2O2) assessed by Phenol Red assay. An effective effect was found in the production of TBARS in the addition of Trolox in the generation system (addition of +FeSO4). Once the addition of antioxidants were beneficial in prevent de additional generation of TBARS and H2O2 in the generator system, they can be use after the cryopreservation of ram semen, especially in case of oxidative stress. / Mestre

Orientador: Cezinande de Meira / Banca: Sony Dimas Bicudo / Banca: Marco Antonio Alvarenga / Banca: Guilherme de Paula Nogueira / Banca: Júlio César Ferraz Jacob / Doutor

Orientador: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Nereu Carlos Prestes / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: José Antonio Visintin / Banca: Christina Ramires Ferreira / Resumo: Nos eqüideos o primeiro relato de sucesso na clonagem foi em Idaho - EUA, em maio de 2003 com o nascimento de uma mula clonada a partir de células fetais, e desde então esta biotecnologia contabiliza somente 21 eqüideos clonados no mundo. A clonagem em eqüídeos é extremamente difícil, pois os ovócitos não maturam bem in vitro, o que diminui significativamente a disponibilidade de citoplastos receptores de qualidade. Além disso, a dificuldades na obtenção de material em matadouros comerciais, o alto custo de manutenção dos animais em fazendas, bem como as baixas taxas de produção de blastocistos por transferência nuclear (3 a 10%) fazem com que poucos laboratórios se dediquem aos estudos dos processos envolvidos na produção in vitro de embriões de eqüídeos. Sendo assim, este projeto teve como objetivo geral criar no Laboratório de Produção in vitro da FMVZ - UNESP - Botucatu, condições para a produção no Brasil de eqüídeos clonados. No experimento I não foram observadas diferenças significativas (p = 0,661) entre a privação de soro fetal bovino e a confluência na integridade de membrana de fibroblastos eqüinos em cultivo pós-descongelação (>87%). Sob as mesmas condições de cultivo, foram avaliadas as taxas de sincronização do ciclo celular de fibroblastos eqüinos em G0/G1 na tentativa de estabelecer um protocolo de utilização destas células como doadoras de núcleo. As mais altas taxas de células sincronizadas em G0/G1 (> 97%) foram obtidas às 72, 96 e 168 horas após o início da privação de soro fetal bovino a 0,5%. No experimento II a incubação de ovócitos eqüinos em 66g/ml de roscovitine por 24 horas, pré e pós-maturação in vitro, foi eficiente na inibição da meiose, sincronizando o início do processo, permitindo uma melhor programação... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In the equine species, the first reported success of a cloned animal took place in Idaho, USA, in May 2003 when a cloned mule was born. In order to produce this clone fetal cells were used. Since then only 21 cloned horses births were reported. Equine cloning is extremely complicated due to difficulties in oocyte in vitro maturation, wich significantly reduce the availability of good quality oocytes to receive the genetic material of the donor cell. Moreover, the low number of commercial slaughterhouses, the high cost of maintenance of animals in the farms and the low efficiency of the method (3 to 10% blastocyst development) leads to the fact that only a few laboratories around the word are dedicated to study the process involved in horse embryos in vitro production. The main objective of the present experiment was to create, at the In Vitro Fertilization Laboratory from FMVZ - UNESP - Brazil, conditions to produce a equine clone. With this aim, five experiments were performed. In Experiment I no statistic differences (p = 0.661) were observed with the utilization of serum starvation or culture until confluence on viability of equine fibroblasts cultured after thawing (>87%). With the attempt of establishing a protocol to use these cells as nuclear donors, the cell cycle of equine fibroblasts were studied under the same conditions. The higher rates of cell cycle synchronization in G0/G1 (> 97%) were obtained 72, 96 and 168 hours after the beginning of serum starvation (0.5% fetal calf serum). In the Experiment II, the incubation of equine oocytes with 66g/ml of roscovitine during 24 hours, pre- and post- in vitro maturation, was efficient in inhibit meiosis, allowing a better organization of the nuclear transfer procedure. The meiosis blockage showed to be fully reversible after the removal of the roscovitine when nuclear maturation rates were compared with non-exposed oocytes (p = 0,714 for expanded COC and p = 0,275 for compact COC). / Doutor

Orientador: Ciro Moraes de Barros / Banca: Mário Binelli / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Resumo: Objetivou-se com o presente estudo avaliar, em vacas Nelore no período pós-parto inicial, se o aumento farmacológico nas concentrações plasmáticas de estradiol no período pré-ovulatório e/ou "priming" de progesterona (P4) precedendo a ovulação, induzida por tratamentos hormonais, seriam capazes de diminuir a liberação de PGF2 induzida pela administração de ocitocina e, conseqüentemente, evitar a lise prematura do corpo lúteo formado após a primeira ovulação. Vacas Nelore lactantes (n = 30) foram divididas aleatoriamente em 3 Grupos: RTB/GPE (n = 10), RTB/GPE/eCG (n = 10) e RTB/GPG/eCG (n = 10). Em estágio aleatório (D-8, 40 a 70 dias pós-parto), os animais do grupo RTB (remoção temporária do bezerro, 48 h antes do início dos tratamentos)/GPE (GnRH - Prostaglandina - Benzoato de Estradiol) receberam 50 g de um análogo do GnRH (lecirelina, IM, Gestran plus ). Sete dias mais tarde (D-1) os animais receberam injeção de um agente luteolítico (250 g de d-cloprostenol, IM, Prolise ) e no dia 0 (D0) foi administrado 1,0 mg de benzoato de estradiol (BE, IM, Estrogin ). No grupo RTB/GPE/eCG os animais, além de serem tratados com o protocolo GPE, receberam 400 UI de eCG (IM, Novormon ), logo após a administração do agente luteolítico (D-1). No grupo RTB/GPG/eCG, os animais foram tratados de acordo com o protocolo RTB/GPE/eCG, exceto que no lugar do BE foi administrada uma segunda dose de GnRH (50 g de lecirelina, IM) no D0. Em todos os animais foram realizados exames ultra-sonográficos dos ovários (Aloka SSD-500, probe de 7,5 MHZ) e coletas sanguíneas nos dias das aplicações hormonais, com a finalidade de classificar os grupos de acordo com a presença ou ausência de altas concentrações de P4 ("priming" de P4) antes da ovulação do folículo dominante. O desafio com ocitocina (OT, 50 UI, IV, Univet )... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The purpose of the present study was to evaluate, in early postpartum anestrus of Nelore cows, if the increase of estradiol plasma concentrations in pre-ovulatory period and/or high concentrations of progesterone (P4) preceding ovulation (P4 priming), induced by hormonal treatment, reduces endogenous releasing of PGF2 and, consequently, prevents premature lysis of corpus luteum formed after ovulation. Nelore lactating cows (40 to 70 d postpartum, n = 30), were randomly divided into 3 Groups: GPE (n = 10), GPE/eCG (n = 10) and GPG/eCG (n = 10). At random stage of the estrous cycle (D-8), the animals of GPE group (GnRH - Prostaglandin - Estradiol Benzoate) were treated with a GnRH agonist (50 g lecirelin, IM, Gestran Plus ). Seven days later (D-1) the cows received a luteolytic dose of PGF2a (250 g d-cloprostenol, IM, Prolise ), and on day 0 (D0) 1.0 mg of estradiol benzoate (EB, IM, Estrogin ). Cows from GPE/eCG group received the GPE treatment associated with 400 IU of eCG (IM, Novormon ) on D-1, right after PGF2a administration. The GPG/eCG group was similar to GPE/eCG, except that EB was replaced with a second dose of GnRH (50 g lecirelin, IM). Ovarian ultrasonography were performed (Aloka 500 SSD with a 7.5 MHZ transducer) and blood samples were collected at the days of hormones administration, in order to classify the groups based upon the presence or absence of progesterone (P4 priming), before ovulation. All animals were challenged with oxitocin (OT, 50 IU, IV, Univet ) 6, 9, 12, 15 and 18 days after BE (RTB/GPE and RTB/GPE/eCG groups) or GnRH (RTB/GPG/eCG group) administration and blood samples were collected before and 30 minutes after oxitocin challenge. Moreover, the calves were removed from the cows, during 48 h before the beginning of the treatments. ANOVA was used to estimate the effect of treatment, P4 priming and interactions in the discrete (Complete abstract, click electronic address below) / Mestre

Orientador: Frederico Ozanan Papa / Resumo: O presente trabalho teve os objetivos: avaliar laboratorialmente o sêmen congelado de asininos através do Hamilton Thorne (HTMA); determinar os indices de fertilidade do sêmen criopreservado em jumentas e éguas e verificar a resposta uterina das jumentas perante o sêmen "in-natura", diluente e congelado. No experimento 1 as amostras de sêmen, foram criopreservados em dois criotubos: meio macrotubo - 2,5 mL (M) ou palheta - 0,5 mL (P) com diluente MP50 e dez formulações de crioprotetores: 1= 2% DMSO e 2% DF; 2= 3% DF; 3= 2% MF e 2% de Glicerol; 4= 2% dimetil acetamida e 2% de glicerol; 5= 3% metil formamida; 6= 3% de dimetil acetamida; 7= 3% glicerol e 2% dimetil acetamida; 8= (Specific Patogen Free) 3% glicerol e 2% dimetil formamida; 9= 3% Dimetil sulfóxido e 2% glicerol; 10= 1% etilieno glicol + 3% dimetil sulfóxido e 1% dimetil formamida. As comparações realizadas entre os 2 tipos de envase, meio macrotubo e palhetas, não demonstraram superioridade (P>0,05) entre si, não havendo interação com as formulações utilizadas, nos parâmetros analisados. Para as características de motilidade total foi verificado que os tratamentos M4, P4 e P6 foram superiores ao M7 e P5 (P<0,05) a avaliação da motilidade progressiva mostrou qua a formulação M4 se distingüiu exclusivamente do M7 (P<0,05). O estudo da linearidade (LIN), apontou diferença exclusivamente entre os tratamentos M3 e M6 (P<0,05). Os valores obtidos de VCL (velocidade real), de VAP (velocidade do trajeto espermático) e de VSL (velocidade retílinea) proporcionaram resultados semelhantes entre os tratamentos (P>0,05). Na avaliação da membrana plasmática pela fluorescência, foi encontrado maior valor para o tratamento P6, que diferiu significativamente de P5 e M7, além disso o tratamento P4 se diferenciou de P5 (P<0,05)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: The current paper aimed at conducting laboratoty tests in order to evaluate the frozen semen of the asinines, determining the fertility rate of semen cryopreserved in female donkeys and mares and also verifying the uterine response of female donkeys to the "in natura", MP50 extender and frozen semen. In experiment 1, the semen samples were cryopreserved in two cryotubes: half macro tube 2.5 mL (M) or pallets - 0.5 mL (P) with MP50 diluting and ten formulations of cryoprotectors: 1= 2% DMSO and 2% DF; 2= 3% DF; 3= 2% MF and 2% of glycerol; 4= 2% dimethyl acetamide and 2% of glycerol; 5= 3% methyl formamide; 6= 3% of dimethyl acetamide; 7= 3% glycerol and 2% dimethyl acetamide; 8= (Specific Patogen Free) 3% glycerol and 2% dimethyl formamide; 9= 3% dimethyl sulfoxide and 2% glycerol; 10= 1% ethylene glycol + 3% dimethyl sulfoxide and 1% dimethyl formamide. The comparisons made between the two types of packing, did not show superiority (P>0.05) between themselves, and there was no interaction with the used formulations within the analyzed parameters. Regarding the characteristic total motility, it has been verified that the M4, P4 and P6 treatments were superior to the M7 and P5 (P<0,05). The evaluation of the progressive motility showed that the M4 formulation differed exclusively from the M7 (P<0,05). The linearity study demonstrated difference particularly between the M3 and M6 treatments (P<0,05). The values of real velocity, sperm direction velocity and linear velocity did not show similar results between the treatments (P>0,05). Concerning the evaluation of the plasma membrane by fluorescence, a higher value was found for the P6 treatment, which differed significantly from the P5 and M7. Moreover, the P4 treatment was different form the P5 (P<0,05). The other comparisons made... (Complete abstract, click electronic address below). / Mestre

Orientador: José Buratini Júnior / Resumo: Estudos recentes indicam o envolvimento do FGF-8 no controle do desenvolvimento folicular. O FGF-8 ativa preferencialmente o FGFR-3c e o FGFR-4, cuja expressão em folículos antrais ainda não foi determinada. No presente estudo, avaliou-se a expressão do FGFR-3c e -4 em células da teca e da granulosa de folículos antrais bovinos. e testou-se a hipótese de que a expressão destes genes é regulada durante o desenvolvimento fo!icular antral bovino. Ovários bovinos foram obtidos em matadouro local, folículos maiores que 5mm foram dissecados e medidos, células da teca e da granulosa foram separadas e o RNA total extraído. As concentrações de estradiol e de progesterona do fluido folicular foram determinadas por radioimunoensaio. Folículos com progesterona acima de 100ng/mL foram considerados atrésicos e excluídos da análise. Os folícu!.os restantes foram agrupados de acordo com a concentração de estradiol como se segue: (a) <5; (b) 5-20; (c) >20100; e (d) >100ng/mL. Além disso, os folículos foram divididos em três grupos de acordo com o tamanho: (a) 5-7; (b) 8-10 e (c) >10mm. Folículos inteiros entre 2 e 4mm de diâmetro foram incluídos na análise da expressão do FGFR-4. A expressão do FGFR-3c e FGFR-4 foi examinada por RT-PCR semiquantitativo com iniciadores espécie-específicos. O RT-PCR semiquantitativo foi validado pela escolha de números de ciclos de PCR e quantidade de RNA dentro da fase linear da curva de amplificação. A intensidade das bandas foi analisada por densitometria computadorizada. Em células da granulosa, houve correlação positiva entre a expressão do FGFR-3c e a concentração de estradiol no fluido folicular, em sintonia com níveis mais altos de RNAm em grupos com maiores concentrações de estradiol, e também aumentou com o diâmetro folicular. Em células da teca, a expressão do FGFR-3c também foi detectada,...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Recent studies indicate the involvement of FGF-8 in the control of follicular development. FGF-8 preferentially activates FGFR-3c and FGFR-4, although the expression of these receptors has not been investigated in bovine antral follicles yet. In the present work, FGFR-3c and -4 gene expression was assessed in theca and granulosa cells from bovine antral follicles and the hypothesis that FGFR-3c and -4 gene expression is regulated during antral follicle development in cattle was tested. Bovine ovaries were obtained at a local abattoir, follicles greater than 5mm in diameter were dissected and measured, granulosa and theca cells were separated, and total RNA extracted. Estradiol and progesterone concentrations were measured in the follicular fluid by RIA. Follicles with progesterone levels above 100ng/mL were considered atretic and excluded from the analysis. Remaining follicles were grouped according to estradiol concentration as follows: (a) <5; (b) 5-20; (c) >20-100; and (d) >100ng/mL. In addition, follicles were divided into three groups according to size: (a) 57; (b) 8-10 and (c) >10mm. Whole follicles at 2-4mm in diameter were included in the analysis of FGFR-4 gene expression. FGFR-3c and FGFR-4 gene expression was examined by semi-quantitative RT-PCR using bovine specific primers. Semiquantitative RT-PCR was validated by choosing number of PCR cycles and amount of RNA within the linear range of the amplification curve. Band intensities were analyzed by computerized densitometry. In granulosa cells, FGFR-3c expression was positively correlated with estradiol concentration in the follicular fluid in agreement with higher mRNA levels in groups with higher estradiol concentrations, and also increased with follicle size. In theca cells, FGFR-3c gene expression was also detected but did not change with follicle size or estradiol concentration. For FGFR-4, gene expression was restrict...(Complete abstract click eletronic access below) / Doutor