Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-05-19T13:29:19Z No. of bitstreams: 1 2016_PriscillaCristinePassoniSilva.pdf: 1129443 bytes, checksum: 0ffa6050a8636a0db3b7580ac841dba2 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2016-05-27T15:56:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_PriscillaCristinePassoniSilva.pdf: 1129443 bytes, checksum: 0ffa6050a8636a0db3b7580ac841dba2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-27T15:56:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_PriscillaCristinePassoniSilva.pdf: 1129443 bytes, checksum: 0ffa6050a8636a0db3b7580ac841dba2 (MD5) / Objetivou-se avaliar coletas de embriões consecutivas e protocolos de sincronização estral, em porcas de raças localmente adaptadas, na qualidade embrionária e recuperação de embriões. No Capítulo 2, os animais (n=30), das raças Piau (n=23) e Moura (n=7), foram submetidos a coletas de embriões, 14 foram coletados três vezes, 12 foram coletados duas vezes, e 4 foram coletadas apenas uma vez. No Capítulo 3, as doadoras de embriões Piau (n=9) foram submetidas a protocolos de sincronização de estro, todos os animais passaram nos três protocolos: GP4 = 20 mg da progesterona oral (Altrenogest), 18 dias; GGnRH = 20 mg de Altrenogest, 18 dias, após 104 horas aplicação intramuscular (IM) de 25 μg de GnRH; GeCG+GnRH = 20 mg de Altrenogest (18 dias), 24 horas após, aplicação IM de 1000 UI de eCG, após 80 horas, aplicação IM de GnRH. A partir de 24 horas após a última administração da P4, foi utilizado um cachaço para detecção de estro. A coleta de embriões nos dois experimentos foram realizadas seis dias após a primeira inseminação e todas as estruturas coletas foram analisadas. No capítulo 2, a taxa de recuperação foi similar entre os tratamentos (P>0,05). O número de CL, estruturas totais, embriões viáveis e congeláveis e grau de aderência teve diferença significativa entre os tratamentos (P<0,05). No Capítulo 3 o tempo para a manifestação do estro foi semelhantes entre os tratamentos (P>0,05) O número de CL, folículos anovulatórios, estruturas totais, embriões viáveis, embriões congeláveis e a taxa de recuperação apresentaram diferença significativa entre o GeCG+GnRH e os demais tratamentos (P<0,05). A técnica de coleta de embriões suínos por laparotomia mostra-se eficiente para recuperar embriões de qualidade até a segunda coleta. Todos os protocolos foram eficazes para sincronizar o estro até sete dias em marrãs. No entanto, o protocolo do GeCG+GnRH, não foi eficaz para recuperar embriões e não teve efeitos benéficos na qualidade embrionária. _____________________________________________________________________________ ABSTRACT / This study aimed to evaluate consecutive embryos collections and estrus synchronization protocols in locally adapted breed swines, in the embryos quality and embryos recovery. In Chapter 2, animals (n = 30), of Piau race (n = 23) and Moura race (n = 7) underwent embryos collections, 14 of these animals were collected three times, 12 were collected twice and 4 were collected only once time. In Chapter 3, the Piau embryos donnors (n = 9) were subjected to estrus synchronization protocols. All animals passed in three protocols: GP4 = 20 mg of oral progesterone (Altrenogest), 18 days; GGnRH = 20 mg of Altrenogest, 18 days, after 104 hours intramuscular application (IM) of 25 μg GnRH; GeCG+GnRH = 20 mg of Altrenogest (18 days), after 24 hours, IM administration of 1000 IU eCG, after 80 hours, GnRH IM application. From 24 hours after the last administration of P4, was used a boar to estrus detection. In two experiments, the embryos collection was realized six days after the first insemination and all the collections structures were analyzed. In Chapter 2, the recovery rate was similar between treatments (P>0.05). The number of CL, total structures, viable and freezable embryos and adherence degree, was significant difference between treatments (P<0,05). In Chapter 3, the time for the estrus manifestation was similar between treatments (P>0.05). The number of CL, anovulatory follicles, total structures, viable embryos, freezable embryos and the recovery rate showed a significant difference between the GeCG+GnRH and the other treatments (P<0.05). The pig embryos collection technique by laparotomy appear to be efficient to recover quality embryos until to the twice collection. All protocols were effective for synchronizing the estrus until seven days in gilts. However, the protocol GeCG+GnRH wasn’t effective to recover embryos and hadn’t beneficial effect in embryonic quality.

Apesar dos avanços nos procedimentos de maturação, fecundação e cultivo in vitro a porcentagem de embriões produzidos capazes de se desenvolver até o estágio de blastocisto ainda é reduzida. Segundo Gilchrist et al. (2010) um dos principais fatores que afeta esta taxa de desenvolvimento embrionário é a incompetência do oócito em realizar a maturação. Com o objetivo de aumentar esta eficiência, têm-se estudado a interação entre fatores secretados pelos oócitos e a maturação oocitária. O objetivo deste experimento foi determinar as taxas de clivagem e de desenvolvimento embrionário até blastocisto, a partir de dois procedimentos de adição às gotas de MIV de oócitos desnudos (ODs). Os complexos Cummuli oócitos (CCOs) foram obtidos mediante punção de folículos com diâmetro entre 2 e 8 mm. Os CCOs que apresentaram cummulus compacto e citoplasma homogêneo foram selecionados para maturação e desnudamento. Os CCOs foram maturados em gotas de 50μL de meio de maturação (Meio TCM 199 modificado) sob óleo mineral e incubados a 38,5 oC em estufa com atmosfera de 5% de CO2 em ar e umidade relativa saturada. Aqueles selecionados para serem desnudos, permaneceram em TCM Holding [Meio 199 modificado]. Os oócitos foram desnudos com o auxilio de uma pipeta de vidro estirada em fogo. Os CCOs permaneceram 9 horas em meio de maturação quando foram colocados em cocultivo, respeitando-se a densidade de 0,5 ODs/μL. Parte dos CCOs foram postos nas gotas de maturação onde se encontravam os ODs (Grupo 1) e outra parte recebeu os ODs em suas gotas de maturação (Grupo 2). Os grupos Controle 50μL e Controle 100μL permaneceram em meio de maturação. Todos os grupos, experimentais e controles, permaneceram em maturação por 24 horas. A fecundação com sêmen reaquecido foi realizada durante 20 horas nas mesmas condições atmosféricas da maturação. As estruturas foram cultivadas em SOFm em gotas de 80μL, sob óleo mineral e foram mantidas a 38,3ºC em estufa de cultivo com atmosfera de 5% O2, 5% CO2 , 90% N2 e umidade relativa saturada. As taxas de clivagem foram avaliadas em D2 enquanto as taxas de blastocisto foram avaliadas em D7. Foram realizadas seis repetições. Os resultados foram analisados aplicando-se o teste do Qui-quadrado, para P<0,05. As taxas de clivagem não diferiram entre os grupos (C 100μL: 68,53%; C 50μL: 69,56%; G 1: 66,19%; G 2: 68,05%). Porém comparação das taxas de blastocisto obtidas entre os grupos houve diferença significativa. O grupo 2 mostrou-se superior quando comparado ao grupo controle de 50μL (23,38% e 13,04%, respectivamente).Os demais grupos não diferiram entre si (C 100μL: 14,60%; G1: 18,30%). Os resultados nos permitem concluir que a adição de ODs que secretaram FSOs ao meio de maturação não alterou as taxas de clivagem, mas promoveu maiores taxas de desenvolvimento embrionário ao estágio de blastocisto quando os ODs foram adicionados às gotas que já continham os CCOs. / In vitro maturation of oocytes, fertilization and development of blastocysts has been achieved in several species, however the rate of blastocyst development is still limited. According Gilchrist et al. (2010) this efficiency is limited by the oocyte competence. To improve these results, some research groups have studied the interaction among factors secreted by oocytes and oocyte maturation. The aim of our experiments was to determine the cleavage and blastocyst rates, from two procedures of addition of denuded oocytes (DOs) to IVM droplets medium. The Cumulli-oocyte complexes (COC) were recovered by aspiration of 2 to 8mm follicles using a 18 G needle. Oocytes with a compact Cumulus cells (CC) and homogeneous cytoplasm were selected for maturation and denudation. The COC were matured in 50 μL drops in TCM199 medium modified under mineral oil at 38.5oC in an humidified atmosphere of 5% CO2 in air. Denuded oocytes were generated by removing CCs from COCs by repeated passage of the oocytes through a fire-pulled glass pipette. The COCs remained 9 hours in IVM when they were placed in co-culture, respecting the density of 0.5 DOs/μL. COCs were randomly allocated into 2 treatment groups during IVM: group 1, COCs were placed into maturation medium droplets in which there were the DOs; group 2, DOs received the COCs into their maturation medium droplet. All groups, experimental and control, remained into IVM medium for 24 hours. Fertilization was performed with frozen-thawed semen and the oocytes were incubated with sperm for 20 hours into the same atmospheric conditions of IVM. The presumptive zigots were in vitro cultured (IVC) in SOFm in an humidified atmosphere 5% O2, 5% CO2 e 90% N2. Cleavage rates were evaluated in D2 while the blastocyst rates were evaluated in D7 after insemination. Six replicates were realized.The results were analyzed applying the chi-square, for P ≤ 0.05. The cleavage rates did not differed among the groups C 100μL: 68.53%; C 50μL: 69.56%; G 1: 66.19%; G 2: 68.05%). However, there was a significant difference on blastocyst rate. Group 2 was better than control group 50μL (23.38% e 13.04%, respectively). The other groups did not differ from each other (C 100μL: 14.60%; G1: 18.30%). In conclusion, the addition of FSOs to maturation medium did not modified the cleavage rates, but promotes more efficiently embryo development rates to the blastocyst stage when DOs are added to the drops that already contained the COCs.

O experimento avaliou o uso do meio TCM-199 suplementado com: SVE, SEE e SFB (meio indefinido); BSA (meio semi-definido) e PVA (meio definido); na presença ou ausência de hormônios (FSH e hCG) na maturação in vitro de oócitos bovinos nas condições do Laboratório de Embriologia e Biotécnicas de Reprodução da UFRGS. Complexos cumuli-oophorus (CCOs), em número total de 1458, foram aleatoriamente distribuídos em doze tratamentos, maturados por 24 h em atmosfera de 5% CO2, em ar e 100% umidade relativa em estufa a 39°C. A fecundação nos doze tratamentos foi realizada mediante exposição dos CCOs maturados aos espermatozóides (1x106/mL), previamente capacitados, durante 20 h. O cultivo foi realizado em fluído sintético de oviduto modificado (SOFaa) acrescido de 10% SVE a 39°C, 100% de umidade relativa do ar e 5% CO2, 5% O2 e 90% N2. Na presença de hormônios os meios indefinidos (SVE: 63,6%, 70/110; SEE: 53,4%, 70/131 e SFB: 56,0%, 75/134) apresentaram maior eficiência em proporcionar suporte à primeira divisão embrionária, em comparação ao meio definido (PVP: 50,6%, 45/89). Os CCOs maturados em meio indefinido suplementado com SVE e hormônios apresentaram maior competência em fecundar e suportar o desenvolvimento embrionário até o estádio de blastocisto após sete dias de cultivo (27,3%, 30/110).

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias / Made available in DSpace on 2012-10-18T05:11:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / O robalo-peva Centropomus parallelus é uma espécie que apresenta ampla distribuição e que vem despertando interesse na piscicultura marinha. O presente estudo foi realizado com o objetivo de avaliar diferentes doses do análogo do hormônio liberador do hormônio luteinizante (LHRHa) na indução de desova dessa espécie. Os reprodutores foram estocados em quatro tanques (4,8 x 1,8 x 1,2 m) de concreto. Os peixes selecionados foram submetidos a três diferentes doses: 30, 50 e 70 µg de LHRHa por kg, via injeção intramuscular. Obteve-se para os tratamentos taxas de desova de 33%, 50% e 56% e taxas de desovas fertilizadas de 26.6%, 37.5% e 50%, respectivamente, sem diferenças significativas (P>0,05). O número de ovos liberados, de ovos fertilizados e de larvas (em cada desova e por kg de fêmea) foram em média para os três tratamentos de 213.000 (±12.000), 192.000 (±39.000) e 139.400 (± 78.000), respectivamente, não apresentando diferenças significativas entre os tratamentos. Também não houve diferenças quanto aos demais parâmetros avaliados: diâmetros de ovócito (435 µm ± 26) e de ovo (693 µm ± 68), a taxa de fertilização (74,2 % ±36) e de eclosão (59,1 % ±56). Os resultados obtidos demostram que a desova nesta espécie pode ser induzida com LHRHa na dosagem de 30 a 70 µg por kg de peso vivo

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Vegetal / Made available in DSpace on 2012-10-23T03:58:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 250179.pdf: 8676585 bytes, checksum: 19adf306a3a541e829a876d468bb0d69 (MD5) / Dyckia ibiramensis Reitz (Bromeliaceae) é uma espécie endêmica do município de Ibirama/SC, cuja distribuição se restringe a aproximadamente 4 km de extensão nas margens do Rio Itajaí do Norte. Desde 1992, consta na "Lista de Espécies da Flora Ameaçadas de Extinção" na categoria "Em perigo", e no ano de 2005, no Workshop "Revisão da Lista da Flora Brasileira Ameaçada de Extinção" foi incluída na categoria "Criticamente em perigo". Neste contexto, o objetivo deste estudo foi elucidar o modo de reprodução de D. ibiramensis, empregando-se experimentos de polinização manual e análise genética, bem como seu sistema de polinização e sua diversidade e estrutura genética, visando obter informações que auxiliem na elaboração de estratégias de conservação para a espécie. D. ibiramensis possui inflorescências simples e ramificadas com, em média, 58 e 137 flores, respectivamente. Suas flores apresentam formato de sino, corola amarela e sépalas variando de verdes a alaranjadas, e eixo da inflorescência variando de verde até avermelhado. Ocorre a abertura de uma a três flores por dia por indivíduo. A antese se inicia em torno de 7h00 e as flores têm duração de um dia e meio. O volume de néctar acumulado é de 27,75 L flor-1, com pico de produção no início da antese da flor, e a concentração de açúcares totais média é 22,38%. A mamangava Xylocopa (Neoxylocopa) brasilianorum juntamente com o beija-flor Thalurania glaucopis são os principais polinizadores de D. ibiramensis. Os experimentos de sistema reprodutivo indicaram que a espécie possui auto-incompatibilidade, a julgar pela inviabilidade de sementes provenientes dos tratamentos de autopolinização (manual e espontânea) e agamospermia. As estimativas de diversidade e estrutura genética, obtidas a partir de progênies e empregando-se nove locos alozímicos, mostraram que D. ibiramensis possui alta diversidade gênica, baixa endogamia e forte estruturação. A grande quantidade de alelos muito raros e a detecção de alelos fixados sugerem fortes efeitos de deriva genética. As populações que se situam a montante no Rio Itajaí do Norte são as que apresentam maiores índices de variabilidade genética e, possivelmente, constituam o centro de diversidade genética da espécie. As estimativas de taxa de cruzamento multilocos atribuem à espécie sistema misto de reprodução, com predominância de cruzamentos. Somando-se este resultado ao obtido pelos experimentos de biologia reprodutiva, sugere-se que D. ibiramensis apresenta sistema de auto-incompatibilidade parcial. Muitos cruzamentos ocorrem entre rosetas próximas, implicando em cruzamentos biparentais e coeficientes de coancestria, em geral, maiores ou próximos aos esperados para irmãos-completos. A manutenção in loco de todas as populações existentes de D. ibiramensis é extremamente necessária para sua conservação em longo prazo, enquanto a conservação ex situ da espécie deve ser encarada apenas como uma forma complementar àquela in situ.

Apesar dos avanços nos procedimentos de maturação, fecundação e cultivo in vitro a porcentagem de embriões produzidos capazes de se desenvolver até o estágio de blastocisto ainda é reduzida. Segundo Gilchrist et al. (2010) um dos principais fatores que afeta esta taxa de desenvolvimento embrionário é a incompetência do oócito em realizar a maturação. Com o objetivo de aumentar esta eficiência, têm-se estudado a interação entre fatores secretados pelos oócitos e a maturação oocitária. O objetivo deste experimento foi determinar as taxas de clivagem e de desenvolvimento embrionário até blastocisto, a partir de dois procedimentos de adição às gotas de MIV de oócitos desnudos (ODs). Os complexos Cummuli oócitos (CCOs) foram obtidos mediante punção de folículos com diâmetro entre 2 e 8 mm. Os CCOs que apresentaram cummulus compacto e citoplasma homogêneo foram selecionados para maturação e desnudamento. Os CCOs foram maturados em gotas de 50μL de meio de maturação (Meio TCM 199 modificado) sob óleo mineral e incubados a 38,5 oC em estufa com atmosfera de 5% de CO2 em ar e umidade relativa saturada. Aqueles selecionados para serem desnudos, permaneceram em TCM Holding [Meio 199 modificado]. Os oócitos foram desnudos com o auxilio de uma pipeta de vidro estirada em fogo. Os CCOs permaneceram 9 horas em meio de maturação quando foram colocados em cocultivo, respeitando-se a densidade de 0,5 ODs/μL. Parte dos CCOs foram postos nas gotas de maturação onde se encontravam os ODs (Grupo 1) e outra parte recebeu os ODs em suas gotas de maturação (Grupo 2). Os grupos Controle 50μL e Controle 100μL permaneceram em meio de maturação. Todos os grupos, experimentais e controles, permaneceram em maturação por 24 horas. A fecundação com sêmen reaquecido foi realizada durante 20 horas nas mesmas condições atmosféricas da maturação. As estruturas foram cultivadas em SOFm em gotas de 80μL, sob óleo mineral e foram mantidas a 38,3ºC em estufa de cultivo com atmosfera de 5% O2, 5% CO2 , 90% N2 e umidade relativa saturada. As taxas de clivagem foram avaliadas em D2 enquanto as taxas de blastocisto foram avaliadas em D7. Foram realizadas seis repetições. Os resultados foram analisados aplicando-se o teste do Qui-quadrado, para P<0,05. As taxas de clivagem não diferiram entre os grupos (C 100μL: 68,53%; C 50μL: 69,56%; G 1: 66,19%; G 2: 68,05%). Porém comparação das taxas de blastocisto obtidas entre os grupos houve diferença significativa. O grupo 2 mostrou-se superior quando comparado ao grupo controle de 50μL (23,38% e 13,04%, respectivamente).Os demais grupos não diferiram entre si (C 100μL: 14,60%; G1: 18,30%). Os resultados nos permitem concluir que a adição de ODs que secretaram FSOs ao meio de maturação não alterou as taxas de clivagem, mas promoveu maiores taxas de desenvolvimento embrionário ao estágio de blastocisto quando os ODs foram adicionados às gotas que já continham os CCOs. / In vitro maturation of oocytes, fertilization and development of blastocysts has been achieved in several species, however the rate of blastocyst development is still limited. According Gilchrist et al. (2010) this efficiency is limited by the oocyte competence. To improve these results, some research groups have studied the interaction among factors secreted by oocytes and oocyte maturation. The aim of our experiments was to determine the cleavage and blastocyst rates, from two procedures of addition of denuded oocytes (DOs) to IVM droplets medium. The Cumulli-oocyte complexes (COC) were recovered by aspiration of 2 to 8mm follicles using a 18 G needle. Oocytes with a compact Cumulus cells (CC) and homogeneous cytoplasm were selected for maturation and denudation. The COC were matured in 50 μL drops in TCM199 medium modified under mineral oil at 38.5oC in an humidified atmosphere of 5% CO2 in air. Denuded oocytes were generated by removing CCs from COCs by repeated passage of the oocytes through a fire-pulled glass pipette. The COCs remained 9 hours in IVM when they were placed in co-culture, respecting the density of 0.5 DOs/μL. COCs were randomly allocated into 2 treatment groups during IVM: group 1, COCs were placed into maturation medium droplets in which there were the DOs; group 2, DOs received the COCs into their maturation medium droplet. All groups, experimental and control, remained into IVM medium for 24 hours. Fertilization was performed with frozen-thawed semen and the oocytes were incubated with sperm for 20 hours into the same atmospheric conditions of IVM. The presumptive zigots were in vitro cultured (IVC) in SOFm in an humidified atmosphere 5% O2, 5% CO2 e 90% N2. Cleavage rates were evaluated in D2 while the blastocyst rates were evaluated in D7 after insemination. Six replicates were realized.The results were analyzed applying the chi-square, for P ≤ 0.05. The cleavage rates did not differed among the groups C 100μL: 68.53%; C 50μL: 69.56%; G 1: 66.19%; G 2: 68.05%). However, there was a significant difference on blastocyst rate. Group 2 was better than control group 50μL (23.38% e 13.04%, respectively). The other groups did not differ from each other (C 100μL: 14.60%; G1: 18.30%). In conclusion, the addition of FSOs to maturation medium did not modified the cleavage rates, but promotes more efficiently embryo development rates to the blastocyst stage when DOs are added to the drops that already contained the COCs.

Resumo não disponível

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-03-14T17:53:06Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 729222 bytes, checksum: 9e0fad759a68ba07f6ac8df51dd3195f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-14T17:53:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 729222 bytes, checksum: 9e0fad759a68ba07f6ac8df51dd3195f (MD5) Previous issue date: 2016-07-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O aumento do uso da inseminação artificial (IA) em equinos com sêmen congelado necessita de estudos que possibilitem a melhora da qualidade dos espermatozoides criopreservados e diminua a variabilidade individual entre os garanhões quanto à congelabilidade dos ejaculados. Isto porque as taxas de fertilidade obtidas com o sêmen equino criopreservado são inferiores àquelas obtidas com o sêmen fresco e refrigerado dessa espécie e ao sêmen bovino criopreservado. Este estudo visou verificar a ação de diferentes crioprotetores adicionados ao diluente além da eficácia da solução coloidal Equicoll-SmallTM na filtragem do sêmen equino pós-descongelamento no intuito de se obter uma população espermática com menor concentração de patologias e com maior número de características favoráveis à fecundação. Foram utilizados quatro garanhões da raça Mangalarga Marchador, hígidos e com históricos reprodutivos normais. Após o descongelamento, as amostras de sêmen foram submetidas ou não à centrifugação com o Equicoll-SmallTM, e avaliadas por meio de sondas fluorescentes através da citometria de fluxo. A maioria dos parâmetros espermáticos mostrou melhora após a centrifugação em camada única (SLC) com o Equicoll-SmallTM (P<0,05). No pós-descongelamento as amostras de sêmen criopreservadas em diluentes com o crioprotetor glicerol mostraram piores resultados comparadas às amostras de sêmen criopreservadas em diluentes com outros crioprotetores (DMFA e DG) em relação à integridade de membrana plasmática e organização da bicamada lipídica (P<0,05). O uso do coloide propiciou a recuperação de uma população espermática com melhor integridade de membrana, maior organização da bicamada lipídica, menor potencial mitocondrial e menor integridade acrossomal (P<0,05). O rendimento espermático médio foi de 6,95 % (±0,91 %). Diante dos resultados obtidos, concluiu-se que o uso de diluentes com os crioprotetores DMFA e DG mostraram ser mais eficazes em manter a viabilidade espermática in vitro em comparação ao diluente com o crioprotetor glicerol no pós-descongelamento. Além disso, o uso do Equicoll-SmallTM se mostrou eficaz na obtenção de uma população espermática viável, principalmente nas amostras de sêmen com maior porcentagem de crioinjúrias, porém seu rendimento espermático (concentração espermática final inseminante) pode ser um fator limitante para o uso desta técnica como rotina. / The use of artificial insemination (AI) in horses with frozen semen requires efforts to increase the quality of cryopreserved spermatozoa and decrease individual variability among stallions as theirs ejaculates freezeability. This is because of fertility rates obtained from cryopreserved stallion semen are lower than those obtained with fresh and cooled semen of this species and of cryopreserved bovine semen. This study aimed to verify the action of different cryoprotectants added to the diluent in addition to the effectiveness of the colloidal solution Equicoll-SmallTM, in filtering the stallion semen post-thawing in order to obtain a sperm population with lower concentrations of pathologies and with more favorable fertilization characteristics. Four healthy stallions of Mangalarga Marchador breed with normal reproductive historic were used. After thawing the semen samples were subjected or not to centrifugation with Equicoll-SmallTM and evaluated by fluorescent dyies via flow cytometry. Most sperm parameters showed improvement after Single Layer Centrifugation (SLC) with Equicoll-SmallTM (p<0.05). After thawing the treatment with glycerol showed worse results compared to others cryoprotectants (dimethylformamide and dimethylformamide+glycerol) in relation to the integrity of the plasma membraneand organization of the lipid bilayer (P<0.05). SLC recovered a sperm population with better membrane integrity, better organization of the lipid bilayer, lower mitochondrial potential and lower acrosomal integrity (P<0.05). The average of the sperm yield was 6.95% (±0.91%). Based on these results, it is concluded that the treatments with dimethylformamide and dimethylformamide + glycerol are shown to be more effective in maintaining the sperm viability in vitro when compared to the glycerol after thawing. In addition, it was concluded that the SLC with Equicoll-SmallTM is effective in obtaining a viable sperm population, especially in those samples that show more cryoinjuries, but its sperm yield can be a limiting factor for the technique.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-28T17:29:52Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1101547 bytes, checksum: 22262285235154782cb907f89229e0d2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-28T17:29:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1101547 bytes, checksum: 22262285235154782cb907f89229e0d2 (MD5) Previous issue date: 2017-02-17 / Com este estudo objetivou-se avaliar o perfil proteômico total e diferencial do plasma seminal de garanhões da raça Mangalarga Marchador, que apresentam variações na motilidade espermática do sêmen após descongelamento, visando identificar proteínas candidatas a marcadores de congelabilidade. Foram utilizados quatro garanhões de fertilidade comprovada, divididos em dois grupos, com dois animais em cada grupo: T1: alta congelabilidade (n= 4 ejaculados) e T2: baixa congelabilidade (n= 4 ejaculados), sendo cada tratamento composto por dois ejaculados de cada garanhão. As análises físicas do sêmen foram realizadas antes e após a criopreservação espermática. Os grupos estudados foram divididos pós-descongelamento pela avaliação da motilidade espermática total. O perfil protéico do plasma seminal foi obtido por eletroforese bidimensional, as análises de imagem dos géis foram realizadas pelo programa ImageMaster 2D Platinum 6.0 (GE Healtcare ® ) e a identificação das proteínas foi por espectrometria de massas usando MALDI-TOF/TOF, com o software Mascot Daemon para a busca em banco de dados. A validação das proteínas identificadas entre os tratamentos foi realizada pelo programa SCAFFOLD (95%). Os dados foram analisados pela ANOVA com 5 % de probabilidade de erro, correlações simples de Pearson e análise de regressão linear. Observou-se diferença (p<0,05) em relação à motilidade espermática total do sêmen fresco e pós-descongelamento. No perfil protéico identificou-se 5 famílias de proteínas (HSP-1, HSP-2, CRISP-3, Calecreína e Albumina sérica). Destas famílias, algumas proteínas se apresentaram com diferenças em abundância (p<0,05) entre os grupos estudados, em que quatro destas podem ser consideradas possíveis candidatas a marcadores de congelabilidade (HSP-1: spot 175; HSP-2: spot 39; CRISP-3: spot 66 e 166). Conclui-se então que os garanhões da raça Mangalarga Marchador apresentam variação individual ao processo de criopreservação do sêmen e possuem possíveis proteínas candidatas a marcador de congelabilidade para raça. / This study aimed to evaluate the total and differential proteomic profile of the seminal plasma of stallions of Mangalarga Marchador breed that presented variations in sperm motility after thawing, intending to identify candidate proteins as freezability markers. Four proven fertility stallions were used and splited in two groups with two animals in each group: T1: high freezability (n= 4 ejaculates) and T2: low freezability (n= 4 ejaculates) with two ejaculates of each stallion in each treatment. Semen analysis were made before and after criopreservation. The studied groups were divided after thawing by the evaluation of total sperm motility. The protein profile of the seminal plasma was obtained by bidimensional electrophoresis. The analyses of the images of the gels were performed by the ImageMaster 2D Platinum 6.0 (GE Healtcare ® ) program and the proteins identification were made by the mass spectrometry using MALDI-TOF/TOF with the software Mascot Daemon for database search. The validation of identified proteins between treatments was performed by SCAFFOLD (95%) program. The data were analyzed by ANOVA, Pearson's simple correlations and linear regression analysis with 5 % of error probability. Differences were observed (p<0.05) in relation to total sperm motility of fresh and after thawing semen. At protein profile, 5 protein families (HSP-1, HSP-2, CRISP-3, Kallikrein and Serum albumin) were identified. Of these families some proteins presented differences in abundance (p<0.05) between studied groups in which four of them can be considered as possible markers candidates of semen freezability (HSP-1: spot 175; HSP-2: spot 39; CRISP-3: spot 66 and 166). It can be concluded that stallions of Mangalarga Marchador breed present individual variation to semen cryopreservation process and have possible proteins as markers candidates of semen freezability.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-09-14T12:41:04Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 458239 bytes, checksum: c400c6d608275e591265a2aa4b550255 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-14T12:41:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 458239 bytes, checksum: c400c6d608275e591265a2aa4b550255 (MD5) Previous issue date: 2016-05-09 / O objetivo deste trabalho foi estudar aspectos morfológicos e moleculares do endométrio de marrãs gestantes de raça Piau e linhagem Comercial durante o período embrionário. Foram usadas 27 marrãs distribuídas em três grupos conforme o cruzamento: G1 (n=9): fêmeas de linhagem Comercial x macho de linhagem Comercial; G2 (n=9): fêmeas da raça Piau x macho de linhagem Comercial e G3 (n=9): fêmeas da raça Piau x macho da raça Piau. Cada grupo foi dividido em três subgrupos baseado na idade gestacional ao momento do abate (sete, 15 e 30 dias de gestação). Logo após o abate, o útero e os ovários de cada fêmea foram removidos e mensurados. Amostras de endométrio de cada fêmea foram obtidas para a avaliação histológica e expressão gênica de sete genes (HIF1α, FGF9, ANG1, TEK, VEGFA, ANGPT1 e ANGPT2). A taxa de ovulação se apresentou superior em marrãs do grupo G1 em comparação às marrãs dos grupos G2 e G3 (p<0,05). Aos sete e 15 dias, o peso do útero gestante e número de embriões foram superiores em marrãs do grupo G1 em relação à fêmeas dos grupos G2 e G3 (p<0,05), porém, ao 30° dia de gestação não houve diferença entre as marrãs de todos os grupos (p>0,05). O comprimento uterino total foi maior em marrãs do grupo G1 na idade de sete dias (p<0,05) e o número de glândulas endometriais teve diferença entre os animais dentro de cada grupo com comportamento decrescente conforme período gestacional (p<0,05). Na análise molecular, as marrãs dos grupos G1 e G2 apresentaram maior expressão dos genes HIF1α e ANGPT1 aos 15 dias de gestação quando comparados às marrãs do grupo G3. Já, o gene FGF9 foi mais expresso em marrãs do grupo G1 que em fêmeas do grupo G3 aos 30 dias de gestação (p<0,05). Os resultados observados sugerem que expressão da angiogênese no endométrio durante a fase embrionária da gestação em suínos, bem como características do desenvolvimento uterino e taxa de ovulação são influenciadas pelo genótipo do animal. / The aim was to study morphological and molecular traits from endometrium of pregnant Piau breed and Commercial line gilts and relationship with pre-natal use during the embryonic stage. Were used 27 gilts distributed in three groups: G1: Commercial line females x Commercial line male (n=9); G2: Piau breed females x Commercial line male (n=9) and G3: Piau breed females x Piau breed male (n=9). Each group was divided in three subgroups based on the pregnancy age out slaughter (7, 15 and 30d). After slaughter, the uterus and ovaries were removed and taken biometric measures. Endometrial samples were collected for histological and molecular analysis (HIF1α, FGF9, ANG1, TEK, VEGFA, ANGPT1 and ANGPT2 genes). The ovulation rate was higher in G1 group that G2 and G3 group (p<0.05). At Day 7 and 30 of gestation, the uterine weight and number embryos were higher in G1 group than G2 and G3 group (p<0.05), but at 30 Day of gestation there were no difference among groups (p>0.05). The uterine length was superior in G1 group at Day 7 of gestation and G1 group (p<0.05) and the endometrial glands had difference within each group with decreasing as gestation progress (p<0.05). In the molecular analysis, G1 and G2 groups had more expression of HIF1α and ANGPT1 genes at 15 Day that G3 group. FGF9 gene was upregulated in G1 at 30 Day (p<0.05) that G3 group. These results suggest that angiogenesis expression in endometrial tissue during the embryonic stage in pigs, as well as uterine development traits and ovulation rate are influenced by animal genotype.