CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Estudos anteriores mostraram que indivÃduos expostos à Leishmania amazonensis apresentam resposta diferenciada em relaÃÃo à produÃÃo de IFNγ. Aqueles com baixa produÃÃo geram uma resposta Th2 e os que apresentam alta produÃÃo desta citocina, desde as primeiras horas de infecÃÃo, uma resposta Th1. Com o objetivo de avaliar o mecanismo de supressÃo induzido por L. amazonensis, foi determinado o perfil e a cinÃtica da expressÃo de quimiocinas e receptores de quimiocinas, como tambÃm de citocinas em culturas de cÃlulas mononucleadas do sangue perifÃrico de indivÃduos sadios, estimuladas com promastigotas vivas de L. amazonensis. A anÃlise semiquantitativa da expressÃo de RNAm das quimiocinas e seus receptores, atravÃs de RT-PCR, e a quantificaÃÃo das citocinas foi determinada por ELISA, apÃs 12 horas, 48 horas e 120 horas de infecÃÃo. Verificaram-se dois padrÃes de resposta em relaÃÃo à secreÃÃo de IFNγ. IndivÃduos com produÃÃo superior a 145,8 pg/mL foram classificados como alto respondedor (AR) e aqueles com produÃÃo inferior, como baixo respondedor (BR). Observou-se no grupo AR o desenvolvimento de uma resposta mista, com predomÃnio de Th1. Esta resposta està associada à expressÃo de quantidades relevantes de MIP-1α (CCL3), RANTES (CCL5), MCP-1(CCL2), IP-10 (CXCL10), IL-8 (CXCL8), CCR1, CCR2 e CXCR3 em 12 e 48 horas de infecÃÃo. IL-12, IL-13 e IL-10 foram observadas em altas concentraÃÃes. Em relaÃÃo ao grupo BR, observou-se diminuiÃÃo da expressÃo de MIP-1α (CCL3), RANTES (CCL5), MCP-1(CCL2), I-309 (CCL1), CCR2, CXCR3 e CCR5 durante todo o perÃodo avaliado e de IP-10 (CXCL10) nas primeiras 48h de infecÃÃo. IL-10 e IL-13 encontravam-se em elevadas concentraÃÃes desde 12h, tendo um pico de produÃÃo com 48h de infecÃÃo. Os resultados sugerem que apÃs 48 horas de exposiÃÃo à o momento em que hà diferenciaÃÃo na expressÃo das molÃculas. IL-10 e IL-13 parecem ter papel relevante na modulaÃÃo da supressÃo de INFγ induzida nos BR por L. amazonensis. / Previous studies have shown that individuals exposed to Leishmania amazonensis respond differentially with regard to interferon gamma (IFN)_ production. Individuals who have a low production of IFN_ develop a Th2 response, while those who produce high amounts of this cytokine during the early stages of infection show the Th1 response. In order to evaluate the mechanism of suppression induced by L. amazonensis, the profile and kinetics of chemokines and theirs receptors were determined, as also the cytokines in the cultures of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from healthy individuals, stimulated with live promastigotes of L. amazonensis. A semiquantitative analysis of mRNA expression for the chemokines and their receptor was performed by RT-PCR, and the cytokines were quantified by ELISA, at 12, 48 and 120 hours after infection. The two patterns of IFN_ response were studied. Individuals with a production higher than 145,8 pg/mL were classified as high responders (HR), and those with lower levels of production were considered as low responders (LR). Individuals in the HR group developed a mixed response, with a predominance of Th1, which was associated with the expression of relevant quantities of MIP-1_, RANTES, MCP-1, IP-10, IL-8, CCR1, CCR2 and CXCR3, within 12 and 48 hours after infection. IL-12, IL-13 and IL-10 were observed in significant quantities. In the LR group, the suppression of expression of MIP-1_, RANTES, MCP-1, I-309, CCR2, CXCR3 and CCR5 during the entire period of study, and that of IP-10 during the first 48 hours of infection, was observed. IL-10 and IL-13 were found in elevated concentrations from 12 hours of infection onwards, with a peak production at 48 hours. These results suggest that the pattern of response apparently is defined around 48 hours of infection. IL-10 and IL-13 appear to exercise a relevant role in the modulation of suppression of IFN_, induced in the LR group by L. amazonensis.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A esquistossomose ainda à um problema de saÃde pÃblica no Brasil, amplamente disseminada nas regiÃes sudeste e nordeste. O diagnÃstico laboratorial dessa doenÃa à realizado principalmente atravÃs de mÃtodos diretos que detectam os ovos nas fezes, atravÃs da microscopia e por mÃtodos indiretos, que se baseiam na determinaÃÃo e identificaÃÃo de antÃgenos, anticorpos e fragmentos especÃficos de DNA que estÃo associados à infecÃÃo por Schistosoma mansoni. Nesse estudo, objetivamos avaliar a reaÃÃo em cadeia da polimerase (PCR) para diagnÃstico da esquistossomose mansoni, em indivÃduos da localidade de Planalto do Cajueiro, uma Ãrea de baixa endemicidade, em Maranguape- CearÃ. Realizamos o mÃtodo de ELISA, para detecÃÃo de anticorpos IgG contra antÃgenos de verme adulto de S. mansoni, e a coproscopia, pelos mÃtodos de Kato-Katz e de Lutz, para detecÃÃo de ovos de S. mansoni e de outros parasitos. Diante dos resultados obtidos nesses mÃtodos, selecionamos 56 amostras de fezes, dentre as 125 analisadas, que compuseram os seguintes grupos: Grupo I - ELISA reativo/Outros parasitos (+) ; Grupo II- ELISA reativo/Outros parasitos (-); Grupo III- ELISA nÃo reativo/ Outros parasitos (+) ; Grupo IV-ELISA nÃo reativo/Outros parasitos (-); Grupo V- ELISA Reativo/Coproscopia para S. mansoni (+). Os parÃmetros da PCR seguiram o protocolo de Pontes et al., 2002. Do Grupo I, 02 das 10 amostras foram positivas na PCR; do Grupo II, 04 das 10 amostras foram positivas na PCR e no Grupo III, 01 das 07 amostras foi positiva no PCR. Dentre as 10 amostras do Grupo IV, 01 amostra foi positiva no PCR e no Grupo V, 13 das 19 amostras foram positivas no PCR. Dos 39 indivÃduos que apresentavam reatividade pelo ELISA, o exame parasitolÃgico, realizado pela tÃcnica de rotina, mÃtodo de Kato-Katz, foi positivo em 06 amostras e a PCR em 19 amostras. Ao comparar os resultados obtidos no Grupo V, com o mÃtodo de Kato-Katz, observa-se que este detectou 06 indivÃduos, enquanto PCR detectou 13. Ao compararmos PCR ao mÃtodo do Gradiente SalÃnico, observa-se que o Gradiente SalÃnico detectou 09 indivÃduos, enquanto PCR detectou 11. Ao compararmos PCR ao HelmintexÂ, verificamos que o Helmintex detectou 10, enquanto PCR detectou 08 amostras. Diante disso, concluÃmos que a PCR à mais uma ferramenta importante para melhorar a sensibilidade na detecÃÃo do parasito nas fezes, sendo indispensÃvel à associaÃÃo dos vÃrios mÃtodos disponÃveis, com intuito de alcanÃar o diagnÃstico real da doenÃa. / Schistosomiasis is still a public health problem in Brazil. The infection is widespread in southeast and northeast. The laboratorial diagnosis of schistosome infection has been based on direct coproscopic examination and by indirect methods for detection of antigen, antibodies and specific DNA fragments that are associated with Schistosoma mansoni infection. The aim of the present study was to evaluate polymerase chain reaction (PCR) designed for detection of Schistosoma mansoni DNA in individuals from a low endemic area in Cearà state. The study was conducted in the Planalto do Cajueiro, Maranguape, CearÃ, Brazil. In the laboratory performed the ELISA for detection of IgG antibodies against adult worms antigen of S. mansoni, and stool examinations (Kato-Katz, Lutz, Saline gradient and Helmintex methods), considering the results obtained, for distribution of 56 stool samples selected among the 125 examined, in the following groups: Group I - ELISA reactive / Others parasites (+ ), Group II- ELISA reactive / Others parasites (-), Group III- ELISA non reactive / Others parasites (+), Group IV- ELISA non reactive / Others parasites (-), Group V- ELISA reactive / Coproscopic examination S. mansoni (+).The PCR was carried out according to a protocol described by Pontes et al.(2002) . Group I, 02 of 10 samples were positive in PCR; Group II, 04 of 10 samples were positive by PCR and in Group III, 01 of 07 samples were positive in PCR. Among the 10 samples of Group IV, 01 was positive in PCR and Group V, 13 of 19 samples were positive in PCR. Among the 39 individuals who showed reactivity by ELISA, 06 samples were positive in coproscopic examination and PCR was reactive in 19 samples. Comparing the results in Group V, with the Kato-Katz, this method detected 06 individuals, while PCR detected 13 individuals were positive. By comparing the PCR of Saline gradient, it is observed that the Saline gradient detected 09 individuals, while PCR detected 11. When comparing PCR to HelmintexÂ, we found that the Helmintex detected 10, while PCR detected 08 samples. We conclude that PCR is an important tool to improve the sensitivity in detecting S. mansoni infection in low endemic areas. We emphasize that is very important associate the exams in order to achieve the real diagnosis of the disease.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / Queijo de Coalho à um dos produtos lÃticos mais consumidos no Nordeste do Brasil. No estado do CearÃ, sua produÃÃo à considerada tradicional e apresenta bastante significÃncia econÃmica e social. O queijo de Coalho à tradicionalmente feito com leite cru, o que representa um risco em potencial para a saÃde do consumidor, devido à possibilidade de veiculaÃÃo de microrganismos patogÃnicos. O processo de pasteurizaÃÃo do leite, alÃm de destruir os microrganismos patogÃnicos, reduz tambÃm as bactÃrias Ãcido lÃticas (BAL) que sÃo os microrganismos responsÃveis pelas propriedades sensoriais dos alimentos fermentados. AlÃm do mais, a substituiÃÃo das BAL endÃgenas por fermento lÃtico comercial tem levado a perdas nas propriedades sensoriais do queijo. Este trabalho teve por objetivo identificar, pela tÃcnica da ReaÃÃo em Cadeia da Polimerase (PCR), BAL dos gÃneros Lactococcus e Lactobacillus, previamente identificadas bioquimicamente, isoladas de leite, massa de queijo e queijos de Coalho artesanais produzidos no estado do CearÃ. Os 44 isolados selecionados apresentavam propriedades tecnolÃgicas de interesse para fabricaÃÃo de queijo de Coalho como: capacidade de acidificar o leite, baixa atividade proteolÃtica, capacidade de produÃÃo de aroma e capacidade de tolerÃncia ao NaCl na concentraÃÃo de 3%. As PCR identificaram 20,4% dos isolados como Lactococcus lactis subsp. lactis e 27,3% como Lactobacillus paracasei. Nenhum isolado de Lactobacillus plantarum teve sua identificaÃÃo confirmada pela tÃcnica molecular. Ao todo, 47,7% dos isolados foram confirmados pela PCR, assegurando que estes microrganismos podem ser usados na fabricaÃÃo de queijo de Coalho a partir de leite pasteurizado, mantendo as caracterÃsticas sensoriais tÃpicas deste produto. Este estudo mostra a importÃncia da implantaÃÃo de tÃcnicas moleculares aumentando a qualidade e a eficiÃncia na identificaÃÃo de microrganismos. / Coalho Cheese is one of the dairy products more consumed in Northeast of Brazil. In Cearà state, its fabrication is traditional and has social and economic importance. Traditionally, it is made with raw milk, which represents potential risk for consumers health due to the possibility of foodborne pathogens transmission. The milk pasteurization process eliminates pathogenic microorganisms, but also reduces the lactic acid bacterias (LAB) â the microorganism responsible for sensorial characteristics of fermented foods. Moreover, the substitution of indigenous LAB by commercial lactic ferment has led to losses in the sensorial properties of the cheese. This work aimed to identify, by Polymerase Chain Reaction (PCR), LAB of the genus Lactococcus and Lactobacillus, previously biochemical identified, isolated from milk, curd and traditional Coalho cheeses produced in the state of CearÃ. The forty-four strains selected presented interesting technological properties for the Coalho cheese manufacture: ability to acidify the milk, low proteolytic activity, ability to produce flavor and ability to tolerate 3% NaCl. The PCR identified 20,4% of the isolates as Lactococcus lactis subsp. lactis and 27,3% as Lactobacillus paracasei. No one Lactobacillus plantarum was identified by the molecular technique employed. A total of 47.7% of the isolates were confirmed by PCR, assuring that these microorganisms can be used for Coalho cheese manufacture made from pasteurized milk, preserving the typical characteristics of this product. This work shows the relevance of molecular approaches, increasing the quality and efficiency in the microorganisms identification.