Orientador : Fernando Galembeck / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-16T22:35:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rubira_AdleyForti_D.pdf: 7721666 bytes, checksum: 392875c784557abbf2c805ad14625a2d (MD5) Previous issue date: 1988 / Doutorado

Made available in DSpace on 2015-11-11T12:04:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 23.pdf: 6208595 bytes, checksum: 560226dd418c8b7cdf79aa7955f3ab5c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / A detecção precoce das leishmanioses e a rápida instituição do tratamento são de suma importância para os indivíduos e comunidades afetadas, visto que pacientes contribuem para a manutenção do ciclo da doença. Diante das limitações apresentadas pelos métodos tradicionais de diagnóstico, a PCR tem se apresentado como ferramenta promissora para a detecção dos casos. No entanto, perdas de DNA durante o processo de purificação podem afetar mais significativamente o material genético dos parasitos, gerando resultados falso-negativos. Este estudo teve como objetivo desenvolver e avaliar dois protocolos de triplex PCR para investigar possíveis causas de negatividade no diagnóstico molecular das formas visceral (LV) e tegumentar (LT) das leishmanioses. Pares de primers para detecção de um controle interno (gene G3PD) e dois controles externos (DNA genômico de M. pachydermatis e plasmídeo comercial pUC18 foram adaptados a protocolos de PCR convencionais validados para a detecção de L. infantum e L.(V.) braziliensis e duas reações triplex foram otimizadas. Dados de sensibilidade (S), especificidade (E) e eficiência (e) dos novos sistemas foram calculados em 186 amostras de sangue coletadas de cães em áreas endêmicas, utilizando como referência protocolos de PCR e PCR em tempo real (qPCR) consagrados na literatura / A concordância entre os novos testes e os testes de referência foi determinada pelo cálculo do índice de Kappa. A tríplex PCR para o diagnóstico da LV mostrou S = 78.68 por cento, E= 85.29 por cento e e= 81.05 por cento com boa concordância (K = 0.60, p < 0.0001) com o conjunto de resultados PCR/qPCR. Para o diagnóstico da LT observou-se S = 97.29 por cento, E = 79.16 por cento, e = 90.16 por cento, com K = 0.78, (p < 0.0001) indicando excelente nível de concordância entre os testes. As novas ferramentas apresentadas podem ser aplicadas para aumentar a acurácia no diagnóstico das leishmanioses, contribuindo para a rápida implementação do tratamento e, reduzindo a longo prazo os índices de mortalidade e morbidade das leishmanioses

Made available in DSpace on 2016-03-08T14:00:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 daniela_pereira_ioc_dout_2010.pdf: 4935523 bytes, checksum: a1a6007d45d89b72eecfd82e24256149 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / No presente estudo, a metodologia de PCR multiplex seguida de hibridização não radioativa direcionada para a região conservada dos minicículos do kDNA (gênero Leishmania) e para o gene constitutivo cacophony de flebotomíneo (gênero Lutzomyia) foi inicialmente empregada para a avaliação da taxa de infecção natural em flebotomíneos provenientes de diferentes áreas endêmicas de LT e LV do Brasil, as quais apresentam diferentes graus de endemicidade e transmissão para uma ou outra forma da doença. Para a determinação do índice de infecção natural, considerou-se o mínimo de 1 (um) inseto infectado em cada pool positivo. Em Saquarema, foram constituídos polls de Lu. Intermédia (13\2642 / 30\2640) e Lu. Migonei (0\2642 / 3\2640), sendo que nehum grupo de fêmea foi positivo para infecção por Leishmania spp. O mesmo ocorreu em Além Paraíba e Rio Bonito, onde foram coletados exemplares apenas de Lu. Intermédia, totalizando a formação de pools consistindo de 11\2642 / 30\2640 e 8\2642 / 27\2640, respectivamente. No município do Rio de Janeiro foram constituídos polls de Lu. intermedia (27\2642 / 32\2640 ), onde 5/32 (15,6%) grupos de fêmeas forampositivos (dois da localidade Pau da Fome e três de Colônia Juliano Moreira), e Lu. Migonei (8\2642 / 5\2640) com 3/5 (60%) polls de fêmeas positivos (um de Colônia Jmoreira e 2 de Pau da Fome). Os ensaios de hibridização confirmaminfecção por L. (V.) braziliensis nos 8/37 pools positivos, indicando un índice mínimo de infecção natural de cerca de 2% nos flebótomos avaliados. Em Porto Alegre também foram obtidos resultados positivos para infecção por L. (V.) braziliensis em 3/98 (3,1%) grupos de fêmeas de Lu. Neivai e 2/52 correspondentes à Lu. Fischerii (3,8%), representando um índice mínimo de infecção natural de cerca de 0,3% para as duas espécies de flebótomos. Não foram obtidos resultados positivos para os pools de fêmeas de Lu. Migonei (n=28) e Lu. Lanei (n=2) coletados na região. Os resultados de Porto Alegre permitiram confirmar estudos prévios que sugeriram Lu. Neivai como principal vetor de LTA no municipio. Em Corumbá foram formados polls para as espécies Lu. Cruzi (12\2642 / 13\2640) e Lu. Foratinii (6\2642 / 14\2640). Nesse município identificamos infecção por L. Infantum chagasi em 2/13 (15,4%) amostras de fêmeas de Lu. Cruzi e em 1/14 (7,1%) de Lu. Forattinii, representando um índice total de infecção natural de 1,1% (3/27). Os dados obtidos em Corumbá reafirmaram a importância de Lu. Cruzi como principal espécie vetora de LV no município, além de sugerir o papel de Lu. Forattinii como segunda espécie transmissora da doença nesta região. Visando o estudo da estimativa da carga parasitária nos pools de fêmeas que foram positivos pelos ensaios de PRC multiplex-hibridização, padronizamos a metodologia de PRC em tempo real, utilizando o sistema de detecção SYBR Green (para os dois alvos separadamente \2013 cacophony e kDNA), o qual nos permitiu detectar, quantificar e também diferenciar os parasitos no nível de subgênero, através da curva de dissociação dos produtos amplificados dos kDNA. Em relação às amostras provenientes de Corumbá, os polls positivosapresentaram uma quantificação de cerca de 100 parasitos/pool (2 de Lu. Cruzi e 1 de Lu. Foratinii). Além desses, dois novos polls de Lu. Foratinii foram positivos, com cerca de 10 e 1 parasitos cada. Em Porto Alegra, dos 5 pools positivos pela PCR multiplex, 3 foram quantificados com cerca de 100 parasitos (2 Lu. Neivai e 1 Lu fischerii), os outros 2 apresentaram uma média de 10 parasitos (1 lu. Neivai e 1 Lu. Fischeri). As amostras coletadas no Rio de Janeiro apresentaram uma quantidade média de 10 parasitos cada (4 de Lu. Intermedia e 3 de Lu. Migonei), sendo que um polls de Lu. Intermedia positivo pelo diagnóstico qualitativo não pôde ser avaliado quantitativamente. A análise das curvas de dissociação para a determinação dos valores de Tm dos produtos amplificados do kDNA de promastigotas de L. (V.) braziliensis e L. (L.)chagasi, corroboraram os resultados prévios de diagnóstico pelos ensaios de PRC multiplex-hibridização. Investigações diagnósticasque possibilitem a detecção, correta identificação e quantificação de carga parasitária por Leishmania spp na fauna flebotomínea em áreas com notificações de LTA e/ou LVA em humanos ou reservatórios animais, certamente contribuem para uma maior visão do quadro de veiculação das espécies de parasitos nas distintas áreas, fornecendo dados importantes para a compreensão da eco-epidemiologia dessas doenças nas respectivas áreas / In this study, t he multiplex PCR methodology was initially established with the purpose of assessing the natural infection rate in sand flies from different endemic areas of CL and VL in Brazil, which consist of various degrees of endemicity and transmission to all the fo rms of the disease. It is followed by non - radioactive hybridization, focused on the conserved area of kDNA minicircle ( Leishmania ) and the constitutive gene cacophony of sand fly ( Lutzomyia genus ). To determine the rate of natural infection, it was conside red a minimum of one (1) infected insect to each positive pool. In Saquarema, pools of Lu. intermedia (13 ♂ / 30 ♀) and Lu. migonei (0 ♂ / ♀ 3) were identified and no female groups were positive for infection with Leishmania spp. It also occurred in Além Paraíba and Rio Bonito, where there were only collected specimens of Lu. intermedia , leading to the es tablishment of pools, comprising of 11 ♂ / 30 ♀ and 8 ♂ / 27 ♀, respectively. In the district of Rio de Janeiro there were pools of Lu. intermedia (27 ♂ / 32 ♀), in which 5 / 32 (15.6%) females groups were positive (two from Pau da Fome and three from Colo nia Juliano Moreira), as well as 3 / 5 (60%) positive females pools of Lu. migonei (8 ♂ / ♀ 5) (one of them from Colonia Juliano Moreira and the other two from Pau da Fome). Hybridization tests have confirmed the infection by L. (V.) braziliensis in 8 / 37 of the positive pools, indicating a minimum rate of natural infection of approximately 2% of the evaluated sand flies. In Porto Alegre, positive results were also obtained for infection by L. (V.) braziliensis in 3 / 98 (3.1%) females groups of Lu. neivai and 2 / 52 corresponding to Lu. fischerii (3.8%), representing a minimum rate of natural infection of approximately 0.3% for the two species of sand flies. No positive results were obtained for females pools of Lu. migonei (n = 28) and Lu. lanei (n = 2) w hich were collected in the area. The results from Porto Alegre helped to confirm previous studies suggesting Lu.neivai as the district’s main vector of leishmaniasis. In Corumbá, there were obtained pools for the species Lu. cruzi (12 ♂ / 13 ♀) and Lu. for atinii (6 ♂ / 14 ♀). We identified an infection by L. infantum chagasi in 2 / 13 (15.4%) samples from females of Lu. cruzi and 1 / 14 (7.1%) females of Lu. foratinii , representing a total rate of natural infection of 1.1% (3 / 27). The obtained data in Cor umbá reassured the importance of Lu. cruzi as the district’s VL main vector species and also suggested the role of Lu. forattinii as the second disease transmitter species in this area. Aiming at the estimate study of parasite load in positive females poo ls, according to multiplex PCR - hybridization, we standardized the real - time PCR methodology, using SYBR Green detection system (for both targets individually - cacophony and kDNA), which allowed us to detect, quantify and differentiate the level of parasit es in the subgenus by means of kDNA amplified products dissociation curve. Regarding Corumbá’s samples, the positive pools showed an amount of approximately 100 worms / pool (2 Lu. cruzi and 1 Lu. foratinii ). Furthermore, two new Lu. foratinii pools were positive approximately with 10 and 1 parasite respectively. In Porto Alegre, from a total of 5 positive pools, 3 of them were identified according to multiplex PCR in approximately 100 parasites (2 Lu. neivai and 1 Lu.fischerii ) and the other 2 had an av erage of 10 parasites (1 Lu. neivai 1 and Lu. fischerii ). The samples collected in Rio de Janeiro had an average amount of 10 parasites each (4 Lu. Intermedia and 3 Lu migonei ). One of them, which was positive according to qualitative diagnosis, could not be quantitatively evaluated. The analysis of dissociation curves for determining the Tm values of kDNA amplified products of promastigotes of L. (V.) braziliensis and L. (L.) chagasi corroborated the previous results of diagnostic testing by means of PCR multiplex hybridization. Thus, it is important to highlight that diagnostic investigations will certainly contribute to a greater view of the scope of the establishment of parasite species in different areas, providing important data for the understanding of the eco - epidemiology of these diseases. This process allows the detection, proper identification and quantification of parasite burden in Leishmania spp sand fly fauna in areas reporting ACT and / or AVL in humans or animal reservoirs

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-12-07Bitstream added on 2014-06-13T20:13:39Z : No. of bitstreams: 1 demathe_a_me_araca.pdf: 2358844 bytes, checksum: fdcc52e0c514449bd205dcc6b6b02ad2 (MD5) / O papilomavírus humano (HPV) está associado à um amplo espectro de lesões em humanos e tem sido associado à carcinogênese oral. Uma das metodologias mais sensíveis e especifica para sua detecção é a reação em cadeia de polimerase (PCR). O objetivo deste estudo foi investigar a presença do DNA do HPV em carcinoma epidermóide de lábio e correlacioná-la com fatores de risco, características clínicas, anatomopatológicas e sobrevida dos pacientes estudados. A presença do DNA do HPV foi investigada através da nested PCR em 30 amostras parafinadas de carcinoma epidermóide de lábio. O DNA viral foi detectado em 43,33% (13/30) das amostras. A presença do DNA do vírus foi relacionada com: idade, sexo, etnia, graduação histológica, etilismo, tabagismo, exposição freqüente à radiação solar, estadiamento clínico e sobrevida livre de doença e nenhuma correlação entre a presença do DNA viral e os parâmetros avaliados foi observada. Estes resultados sugerem que HPV não teve participação no processo de carcinogênese dos carcinomas epidermóides de lábio estudados. / Human papillomavirus (HPV) is associated with a wide spectrum of lesions in humans and has been related to the oral carcinogenesis. The most sensitive and specific methodology for its detection is the polymerase chain reaction (PCR). The aim of this study was to investigate HPV DNA presence in lip squamous cell carcinoma and to correlate it with demographic, clinicalpathologic characteristics and survival data. HPV DNA was investigated by nested PCR in 30 paraffin-embedded tissues of lip squamous cell carcinomas. HPV DNA was detected in 43,33% (13/30) of samples. Presence of viral DNA was not associated with the following factors: age, sex, race, histologic grade, etilism, tabagism, history of solar radiation exposition, clinical staging and survival of the patients. This results suggest that HPV is not related to the lip squamous cell carcinomas carcinogenesis.

Resumo:Existem poucos relatos de alterações neurológicas em cães com leishmaniose visceral, com ou sem a participação de outros agentes etiológicos oportunistas. O presente estudo teve por objetivo pesquisar, por PCR em Tempo Real, a presença de DNA de Leishmania sp. no encéfalo de cães naturalmente acometidos por leishmaniose visceral (LV). Foram avaliados 24 cães com LV, dos quais dois eram assintomáticos e dois possuíam também sintomas neurológicos. Ocorreu a amplificação do DNA de Leishmania sp. no encéfalo de 23/24 (95,8%) cães. A carga parasitária variou de 2 a 16.964 amastigotas/mL com mediana de 116 parasitos/mL e média e desvio padrão de 1.166 ± 3.546 parasitos/mL. A média de parasitos nos cães com LV com alterações neurológicas, nos animais sintomáticos sem alterações neurológicas e nos assintomáticos foi, respectivamente, 2.010, 1.119 e 772 parasitos/mL. Estes resultados demonstram que o parasito tem capacidade de penetrar no tecido nervoso e deve contribuir para o desenvolvimento das lesões neurológicas / Abstract:There are few reports of neurological disorders in dogs with visceral leishmaniasis, with or without the participation of other opportunistic agents. The aim fo the present study was to investigate, by Real Time PCR, the presence of Leishmania sp. in the brain of dogs naturally affected by visceral leishmaniasis (VL). We evaluated 24 dogs with VL, of whom two were asymptomatic and two had also neurological symptoms. DNA was amplified in the brain of 23/24 (95.8%) dogs. The parasite load ranged from 2-16964 amastigotes/mL with a median of 116 parasites/mL and mean and standard deviation of 1166 ± 3546 parasites/mL. The average number of parasites in dogs with VL with neurological disorders, in dogs without neurological alterations and in asymptomatic dogs were, respectively, 2010, 1119 and 772 parasites/mL. These results demonstrate that the parasite has the ability to penetrate into the nervous system and should contribute to the development of neurological lesions / Orientador:Mary Marcondes / Banca: Wagner Luis Ferreira / Banca: Márcia Dalastra Laurenti / Mestre

Orientador: Cáris Maroni Nunes / Banca: Elisa San Martin Mouriz Savani / Banca: Valéria Marçal Félix de Lima / Resumo: A leishmaniose visceral é uma doença em franca expansão no Brasil e que tem a participação de algumas espécies animais na manutenção de seu ciclo. Este trabalho objetivou investigar a presença de Leishmania spp. em morcegos de área endêmica para leishmaniose visceral e investigar a participação destes animais como possíveis reservatórios desta zoonose. Avaliou-se a presença de DNA dos parasitas, por meio da PCR, em amostras de baço e pele de 375 quirópteros originários de 19 cidades do Estado de São Paulo, Brasil, áreas endêmicas e com transmissão intensa para leishmaniose visceral. A amplificação de kDNA de Leishmania spp. por PCR foi positiva em 4,53% dos quirópteros, sendo que a maior positividade foi observada em amostras de baço (94,1%) e dois animais foram positivos tanto para amostras de pele como de baço; a presença de DNA do gene SSU 18S rRNA de Trypanosoma spp., também investigada, foi positiva em 4,53% das amostras sendo 23,5% positivas somente na amostra de baço, 76,5% somente na amostra de pele. Um animal apresentou positividade tanto para Leishmania spp. como para Trypanosoma spp. Os resultados indicam a ocorrência de Leishmania spp. em quirópteros da área endêmica para leishmaniose visceral, indicando a possibilidade de serem reservatórios desta zoonose / Abstract: Visceral leishmaniasis is a disease with increasing incidence in Brazil and that has some animal species contributing to its maintenance. This study aimed at investigating the presence of Leishmania spp. in bats from an endemic area for visceral leishmaniasis, in order to assess its participation as possible potential reservoirs for this zoonosis. We collected spleen and skin samples of 375 bats from 19 cities in the State São Paulo, Brazil, areas of intense visceral leishmaniasis transmission. kDNA Leishmania ssp. amplification by PCR was positive in 4.53% bats and a higher positivity was seen in spleen samples (94.1%); two bats were positive for both skin and spleen samples. Trypanosoma spp. genomic DNA amplification was also investigated and 4.53% of the samples were positive, 23.5% of these were positive only for spleen, 76.5% for skin. One bat was positive for both Leishmania spp. and Trypanosoma spp. DNA amplification. These results demonstrate the occurrence of Leishmania spp. in bats from endemic area for visceral leishmaniasis, indicating the possibility of these being reservoirs of this zoonosis / Mestre

Orientador: Antonio Carlos Paes / Resumo: Um protocolo de coleta, extração e amplificação de ácidos nucléicos (ANs) utilizando a técnica de PCR em tempo real para detecção de Mycobacterium bovis (M. bovis) e/ou Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) foi testado em 60 linfonodos provenientes de bovinos. Desses 60, 30 foram provenientes de bovinos suspeitos de tuberculose bovina (TBb), outros 30 apresentavam lesões nodulares classificadas como adenite pelo Serviço de Inspeção Federal (SIF), na linha de abate. Os resultados obtidos demonstraram que dos 30 linfonodos coletados suspeitos de TBb, 24 (80%) foram confirmados positivos para M. bovis e/ou M. tuberculosis e seis (20%) foram confirmados negativos. Dos 30 linfonodos com a presença de lesões nodulares do tipo adenite, 13 (43,33%) foram positivos para TBb e 17 (56,66%) foram negativos para TBb. Não há um teste diagnóstico rápido e preciso para detecção da TBb, diante disso o presente estudo desenvolveu um método de diagnóstico para a TBb baseado em PCR em tempo real com análise da fluorescência do corante SYBR Green. Estes resultados indicaram que o PCR em tempo real foi específico e sensível para a detecção e identificação dos dois alvos selecionados para detectar a TBb, com melhores resultados para o DNA genômico, quando comparado com o RNA ribossômico. O teste padronizado de qPCR para o diagnóstico da TBb permitiu uma maior acurácia e significativa redução do tempo de diagnóstico em relação aos métodos tradicionais de identificação da TBb. / Abstract: A protocol for the collection, extraction and amplification of nucleic acids (ANs) using a PCR technique for detection of Mycobacterium bovis (M. bovis) and / or Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) was tested on 60 bovine-derived lymph nodes. . Of these 60, 30 were included in cattle suspected of having bovine tuberculosis (TBb), another 30 had sclerias classified as adenites by the Federal Inspection Service (SIF), at the slaughter line. The results showed that the 30 lymph nodes with suspected TBb, 24 (80%) were confirmed positive for M. bovis and / or M. tuberculosis and six (20%) were confirmed negative. Of the 30 lymph nodes with adenitis nodular lesions, 13 (43.33%) were positive for TBb and 17 (56.66%) were negative for TBb. TBB, together with the present study for a diagnostic method for TBB, is a real-time test with SYBR Green dye fluorescence analysis. Results compared with real-time PCR were specific and sensitive for the identification and identification of the two targets selected to detect a TBb, with samples obtained for genomic DNA, when observed with ribosomal RNA. The standardized qPCR test for the diagnosis of tuberculosis allowed for greater accuracy and a significant reduction in diagnosis time in relation to TBb identification parameters. / Doutor

A leishmaniose tegumentar é uma zoonose que ocorre endemicamente em 88 países, caracterizando-se como um grave problema de saúde pública nos países tropicais e subtropicais. Estima-se que o número de pessoas infectadas por Leishmania seja de cerca de 12 milhões e que ocorram entre 700 mil a 1,2 milhões de novos casos anualmente. O Brasil apresenta a maior prevalência de leishmaniose tegumentar na América, sendo que já foram identificadas seis espécies como causadoras de leishmanise tegumentar: Leishmania (Leishmania) amazonensis, Leishmania (Viannia) braziliensis, Leishmania (Viannia) guyanensis, Leishmania (Viannia) lainsoni, Leishmania (Viannia) naiffi, Leishmania (Viannia) shawi. Apesar de termos diferentes espécies causadoras de leishmaniose tegumentar no Brasil e com diferentes formas clínicas, a discriminação das espécies de Leishmania responsáveis por determinada lesão ainda é um desafio. Utilizando as técnicas qPCR, HRM e PCR multiplex, com pares de oligonucleotídeos contruídos e direcionados para o gene alvo hsp70, propomos uma alternativa para os ensaios utilizados atualmente para a identificação de Leishmania e diferenciação dos subgêneros Leishmania e Viannia em cultura de promastigota. A identificação do subgênero Leishmania obtida nos nossos resultados em amostras de cepas referência e em amostras de isolados de pacientes com suspeita de leishmaniose tegumentar atendidos no Instituto de Infectologia Emílio Ribas, correspondem ao obtido por PCR-RFLP direcionada para o alvo kDNA com a enzima de restrição HaeIII realizada num estudo anterior. No entanto, este estudo permitiu a identificação do subgênero em apenas um passo, o que contribui para a redução do tempo, custo e manuseio de amostras. Diante desses resultados, sugere-se a validação da técnica em DNA de amostras de amastigotas de lesões tegumentares de pacientes diagnosticados com esta doença / The cutaneous leishmaniasis is a zoonotic disease that is endemic in 88 countries, characterized as a serious public health problem in tropical and subtropical countries. It is estimated that the number of people infected by Leishmania to be about 12 million, occurring between 700 thousand to 1.2 million new cases annually. Brazil has the highest prevalence of cutaneous leishmaniasis in America and six species have been identified as causes of cutaneous leishmaniasis: Leishmania (Leishmania) amazonensis, Leishmania (V.) braziliensis, Leishmania (V.) guyanensis, Leishmania (V.) lainsoni, Leishmania (V.) naiffi, Leishmania (V.) shawi. Although we have different species that cause cutaneous leishmaniasis in Brazil and with different clinical forms, discrimination against Leishmania species responsible for certain injury is still a challenge. Using the techniques qPCR, HRM and multiplex PCR with oligonucleotide engineer to the target gene hsp70, propose an alternative to the currently used assays for Leishmania identification and Leishmania and Viannia subgenus differentiation in parasite promastigote culture. The identification of Leishmania subgenus obtained in our results with parasite promastigote culture of reference strains samples and isolates in patients with suspected tegumentary leishmaniasis attended at the Institute of Infectious Diseases Emilio Ribas, corresponded to that obtained by PCR-RFLP directed to the target kDNA with HaeIII restriction enzyme carried out in a previous study. However, this review allowed the identification of the subgenus in just one step, contributing to the reduction of time, cost and handling of samples. Given these results, we suggest the validation of this technique in DNA of amastigote samples from tegumentary lesions of patients diagnosed with this disease

A leishmaniose tegumentar é uma zoonose que ocorre endemicamente em 88 países, caracterizando-se como um grave problema de saúde pública nos países tropicais e subtropicais. Estima-se que o número de pessoas infectadas por Leishmania seja de cerca de 12 milhões e que ocorram entre 700 mil a 1,2 milhões de novos casos anualmente. O Brasil apresenta a maior prevalência de leishmaniose tegumentar na América, sendo que já foram identificadas seis espécies como causadoras de leishmanise tegumentar: Leishmania (Leishmania) amazonensis, Leishmania (Viannia) braziliensis, Leishmania (Viannia) guyanensis, Leishmania (Viannia) lainsoni, Leishmania (Viannia) naiffi, Leishmania (Viannia) shawi. Apesar de termos diferentes espécies causadoras de leishmaniose tegumentar no Brasil e com diferentes formas clínicas, a discriminação das espécies de Leishmania responsáveis por determinada lesão ainda é um desafio. Utilizando as técnicas qPCR, HRM e PCR multiplex, com pares de oligonucleotídeos contruídos e direcionados para o gene alvo hsp70, propomos uma alternativa para os ensaios utilizados atualmente para a identificação de Leishmania e diferenciação dos subgêneros Leishmania e Viannia em cultura de promastigota. A identificação do subgênero Leishmania obtida nos nossos resultados em amostras de cepas referência e em amostras de isolados de pacientes com suspeita de leishmaniose tegumentar atendidos no Instituto de Infectologia Emílio Ribas, correspondem ao obtido por PCR-RFLP direcionada para o alvo kDNA com a enzima de restrição HaeIII realizada num estudo anterior. No entanto, este estudo permitiu a identificação do subgênero em apenas um passo, o que contribui para a redução do tempo, custo e manuseio de amostras. Diante desses resultados, sugere-se a validação da técnica em DNA de amostras de amastigotas de lesões tegumentares de pacientes diagnosticados com esta doença / The cutaneous leishmaniasis is a zoonotic disease that is endemic in 88 countries, characterized as a serious public health problem in tropical and subtropical countries. It is estimated that the number of people infected by Leishmania to be about 12 million, occurring between 700 thousand to 1.2 million new cases annually. Brazil has the highest prevalence of cutaneous leishmaniasis in America and six species have been identified as causes of cutaneous leishmaniasis: Leishmania (Leishmania) amazonensis, Leishmania (V.) braziliensis, Leishmania (V.) guyanensis, Leishmania (V.) lainsoni, Leishmania (V.) naiffi, Leishmania (V.) shawi. Although we have different species that cause cutaneous leishmaniasis in Brazil and with different clinical forms, discrimination against Leishmania species responsible for certain injury is still a challenge. Using the techniques qPCR, HRM and multiplex PCR with oligonucleotide engineer to the target gene hsp70, propose an alternative to the currently used assays for Leishmania identification and Leishmania and Viannia subgenus differentiation in parasite promastigote culture. The identification of Leishmania subgenus obtained in our results with parasite promastigote culture of reference strains samples and isolates in patients with suspected tegumentary leishmaniasis attended at the Institute of Infectious Diseases Emilio Ribas, corresponded to that obtained by PCR-RFLP directed to the target kDNA with HaeIII restriction enzyme carried out in a previous study. However, this review allowed the identification of the subgenus in just one step, contributing to the reduction of time, cost and handling of samples. Given these results, we suggest the validation of this technique in DNA of amastigote samples from tegumentary lesions of patients diagnosed with this disease

Orientador: Semiramis Guimarães Ferraz Viana / Resumo: Os centros de educação infantil destacam-se como ambientes para a promoção do desenvolvimento social e cultural da criança em idade pré-escolar, garantindo a oportunidade de uma vida mais saudável, inclusive pela possibilidade de uma alimentação adequada na infância. Entretanto, esses ambientes apresentam características epidemiológicas que favorecem a transmissão de patógenos incluindo os parasitas intestinais. O presente estudo transversal foi conduzido com crianças com idade variando de nove a 71 meses atendidas em EMEI do município de Itapetininga, SP, e teve como objetivos: (1) estimar a frequência de parasitas intestinais, (2) avaliar a diversidade genética de isolados de Giardia duodenalis e (3) avaliar o estado nutricional das crianças, segundo parâmetros antropométricos e dietéticos. De 140 crianças formalmente autorizadas a participar do estudo, 105 forneceram amostra de fezes, 108 tiveram os questionários preenchidos e 131 foram submetidas à avaliação antropométrica. Para a pesquisa de enteroparasitas, as amostras de fezes foram processadas pelos métodos de centrifugo-sedimentação e flutuação com sulfato de zinco. A avaliação do perfil nutricional incluiu parâmetros antropométricos (escore -Z para os índices peso/idade, peso/estatura, estatura/peso e IMC) e dietéticos (análise do cardápio quanto aos valores de macronutrientes). Para a detecção e caracterização moleculares de isolados de Giardia, o DNA extraído das amostras de fezes (oito amostras positivas e 97 amo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The centers of early childhood education stand out as environments to promote the social and cultural development of pre-school children, providing the opportunity for a healthy life, including the possibility of an adequate diet in childhood. In contrast, these environments present epidemiological characteristics that favor the transmission of pathogens including intestinal parasites. The present cross-sectional study was conducted with children ranging in age from 9 to 71 months attending the EMEI in the city of Itapetininga, State of São Paulo, and had the following objectives: (1) to estimate the frequency of intestinal parasites; (2) to evaluate the genetic diversity of isolates of Giardia duodenalis and (3) to evaluate the nutritional status of children according to anthropometric and dietary parameters. Out of 140 children who were formally authorized to participate in the study, 105 provided a stool sample, 108 had completed questionnaires and for 131, weight and height measurements were obtained for anthropometric evaluation. For the study of enteroparasites, the stool samples were processed by centrifugation-sedimentation and zinc sulfate flotation methods. Nutrition profile evaluation included anthropometric parameters (Z-score for weight /age, weight/height, height/weight and BMI) and dietary (macronutrient values). For the detection and molecular characterization of Giardia duodenalis isolates, DNA extracted from faeces samples (eight positive samples and 97 samp... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre