Dissertação (mestrado) - Universidade do Vale do Itajaí, Centro de Ciências Tecnológicas da Terra e do Mar. Programa de Mestrado Acadêmico em Ciência e Tecnologia Ambiental. / Made available in DSpace on 2012-10-21T10:36:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 207127.pdf: 1049730 bytes, checksum: 3c09cd426ab30a373edcecf8aff07676 (MD5) / A carcinicultura brasileira vem apresentando produtividade crescente nos últimos anos, sendo a recordista mundial, com uma projeção de 8000 kg/ha/ano em 2005. O incremento no cultivo e o impacto potencial negativo das enfermidades não podem ser negligenciados. As doenças importantes de crustáceos são infecciosas. A presença de um agente infeccioso não implica na presença da enfermidade clínica, mas a detecção da infecção na ausência da enfermidade clínica é suficiente para o caso ser declarado. Em animais aquáticos o hospedeiro e o meio ambiente influenciam de maneira significativa o grau em que uma infecção subclínica poderá tornar-se clínica, ou os animais que sobrevivem a infecção poderão tornar-se veículos do agente por toda a sua vida. A reação em cadeia da polimerase (PCR) pode ser utilizada para a amplificação enzimática de seqüências de ácidos nucléicos que estão presentes em pequeno número, como em amostras ambientais. Permitindo ações de controle e reduzindo seus efeitos negativos. Neste trabalho foram avaliados os potenciais riscos epidemiológicos advindos de falhas estruturais, barreiras e certificação sanitária. Os estabelecimentos avaliados foram os laboratórios produtores de náuplios e pós-larvas e 07 fazendas de camarões no nordeste catarinense na safra compreendida nos meses de outubro de 2002 a julho de 2003. Os modelos utilizados são as duas principais doenças de notificação obrigatória e de maior impacto econômico para o continente americano: a Síndrome de Taura (TSV) e a Doença da Mancha Branca (WSSV). Os protocolos testados para extração de RNA e DNA com resultados eficazes foram: fenol/clorofórmio # álcool isoamilico e sílica/tiocianato de guanidina e método sílica/tiocianato de guanidina e TRIZOL Reagentâ, GibcoBRL; resultado negativo foi com o protocolo DNAzol Reagentâ, GibcoBRL Para os testes de detecção do vírus TSV e WSSV foram utilizados técnicas de biologia molecular nas metodologias descritas na literatura. Não foi detectada reação positiva em nenhuma das amostras analisadas, o que não exclui a possibilidade da ocorrência dos vírus uma vez que são necessários 2 anos de testes consecutivos para ser considerada área livre.

O setor agropecuário responde atualmente por cerca de 9,2% do Produto interno bruto (PIB) brasileiro, sendo que a cana-de-açúcar ocupa cerca de 9% da área cultivada, fato que lhe confere especial relevância com relação ao desenvolvimento nacional. Os dois produtos mais importantes desta cultura são o açúcar e o álcool etílico produzido por fermentação com leveduras. Durante o processo de fermentação alcoólica, o fermento sofre inúmeras reciclagens e interferências externas advindas do caldo, do ambiente e de outras fontes, tornando-se vulnerável à contaminação por outros microrganismos e mesmo leveduras indesejáveis. Métodos de monitoramento microbiológico que possibilitem a discriminação das linhagens de forma rápida e inequívoca, além de baratos, são altamente desejáveis. A utilização de meios diferenciais e seletivos, métodos bioquímicos e análise molecular tem se mostrado eficientes, porém são demorados e dispendiosos. A reação ‘killer’ é um fenômeno descoberto há 40 anos em S. cerevisiae, e resultados satisfatórios já foram obtidos na caracterização de leveduras, considerando-se o perfil de sensibilidade ‘killer’. O padrão de sensibilidade às toxinas killer foi utilizado nesse projeto em leveduras industriais (isoladas de processo fermentativo para produção de etanol). Os dados gerados com os testes de sensibilidade às toxinas Killer geraram polimorfismos entre as linhagens, mesmo em nível intra-específico, validando a metodologia na biotipagem das leveduras. As informações obtidas subsidiam o desenvolvimento de uma metodologia de biotipagem aplicável para o monitoramento microbiológico na indústria sucro-alcooleira, com a seleção de nove leveduras killer contra as quais as leveduras industriais apresentaram um perfil característico de sensibilidade, dependendo do grupo ao qual pertencem (S. cerevisiae ou não Saccharomyces). Finalmente, vale citar que os testes foram corroborados pelos resultados obtidos com a taxonomia clássica e pelos métodos de biologia molecular com reações de PCR (Polymerase Chain Reaction) e RAPD (Random Amplified Polimorphism DNA). / Agriculture is an important sector in the economy of Brazil. The sugar cane occupies 9% of the cultivated area in this country. The most important products from the sugar cane industry are sugar and alcohol, the latest produced by fermentative process by yeasts. During the fermentation the yeast population changes due to the interferences coming from the sugar cane juice or other sources, turning the process susceptible to undesirable contaminations. In this way, fast, reliable and cheap methods for microbiological monitoring can be helpful. Selective culture media, biochemical tests and molecular analyses have been used but they are time-consuming or expensive. The killer phenomenon discovered initially in Saccharomyces cerevisiae have shown interesting results to yeast biotyping. The sensibility pattern to different killer toxins was used to make a "fingerprinting" and successfully separate different strains of yeasts. This method was corroborated by classical taxonomy and molecular biology results (PCR and RAPD-PCR). The results obtained gives support to development of a methodology useful on fermenting microbiologic monitoring with the selection of nine strains of killers yeasts with highly discrimination between industrial bakker yeasts and contaminants of the fermentation process.

O setor agropecuário responde atualmente por cerca de 9,2% do Produto interno bruto (PIB) brasileiro, sendo que a cana-de-açúcar ocupa cerca de 9% da área cultivada, fato que lhe confere especial relevância com relação ao desenvolvimento nacional. Os dois produtos mais importantes desta cultura são o açúcar e o álcool etílico produzido por fermentação com leveduras. Durante o processo de fermentação alcoólica, o fermento sofre inúmeras reciclagens e interferências externas advindas do caldo, do ambiente e de outras fontes, tornando-se vulnerável à contaminação por outros microrganismos e mesmo leveduras indesejáveis. Métodos de monitoramento microbiológico que possibilitem a discriminação das linhagens de forma rápida e inequívoca, além de baratos, são altamente desejáveis. A utilização de meios diferenciais e seletivos, métodos bioquímicos e análise molecular tem se mostrado eficientes, porém são demorados e dispendiosos. A reação ‘killer’ é um fenômeno descoberto há 40 anos em S. cerevisiae, e resultados satisfatórios já foram obtidos na caracterização de leveduras, considerando-se o perfil de sensibilidade ‘killer’. O padrão de sensibilidade às toxinas killer foi utilizado nesse projeto em leveduras industriais (isoladas de processo fermentativo para produção de etanol). Os dados gerados com os testes de sensibilidade às toxinas Killer geraram polimorfismos entre as linhagens, mesmo em nível intra-específico, validando a metodologia na biotipagem das leveduras. As informações obtidas subsidiam o desenvolvimento de uma metodologia de biotipagem aplicável para o monitoramento microbiológico na indústria sucro-alcooleira, com a seleção de nove leveduras killer contra as quais as leveduras industriais apresentaram um perfil característico de sensibilidade, dependendo do grupo ao qual pertencem (S. cerevisiae ou não Saccharomyces). Finalmente, vale citar que os testes foram corroborados pelos resultados obtidos com a taxonomia clássica e pelos métodos de biologia molecular com reações de PCR (Polymerase Chain Reaction) e RAPD (Random Amplified Polimorphism DNA). / Agriculture is an important sector in the economy of Brazil. The sugar cane occupies 9% of the cultivated area in this country. The most important products from the sugar cane industry are sugar and alcohol, the latest produced by fermentative process by yeasts. During the fermentation the yeast population changes due to the interferences coming from the sugar cane juice or other sources, turning the process susceptible to undesirable contaminations. In this way, fast, reliable and cheap methods for microbiological monitoring can be helpful. Selective culture media, biochemical tests and molecular analyses have been used but they are time-consuming or expensive. The killer phenomenon discovered initially in Saccharomyces cerevisiae have shown interesting results to yeast biotyping. The sensibility pattern to different killer toxins was used to make a “fingerprinting” and successfully separate different strains of yeasts. This method was corroborated by classical taxonomy and molecular biology results (PCR and RAPD-PCR). The results obtained gives support to development of a methodology useful on fermenting microbiologic monitoring with the selection of nine strains of killers yeasts with highly discrimination between industrial bakker yeasts and contaminants of the fermentation process.