Submitted by Maurílio Figueiredo (maurilioafigueiredo@yahoo.com.br) on 2013-03-13T23:43:41Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_EfeitoAtividadeFísica.PDF: 16601664 bytes, checksum: ba849ae4c82fad200b288842f0af918b (MD5) / Approved for entry into archive by Neide Nativa (neide@sisbin.ufop.br) on 2013-03-18T18:24:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_EfeitoAtividadeFísica.PDF: 16601664 bytes, checksum: ba849ae4c82fad200b288842f0af918b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-18T18:24:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_EfeitoAtividadeFísica.PDF: 16601664 bytes, checksum: ba849ae4c82fad200b288842f0af918b (MD5) Previous issue date: 2008 / VII Na hipertensão arterial (HA) ocorre uma inabilidade dos neurônios do bulbo ventrolateral caudal (CVLM) em contrabalancear o aparente aumento da atividade dos neurônios do bulbo ventrolateral rostral (RVLM). Além disso, o aumento da atividade do sistema renina angiotensina (SRA) representa uma importante alteração hormonal que leva à hipertensão, por aumentar o tônus vasomotor simpático e prejudicar a função barorreflexa. A atividade física (AF) de baixa e moderada intensidade tem sido usada no tratamento não farmacológico ou coadjuvante da hipertensão, reduzindo ou restabelecendo as alterações provocadas pelos altos níveis de pressão arterial (PA). O Presente estudo teve como objetivo, avaliar o efeito da AF de natação com ou sem carga, sobre diferentes parâmetros cardiovasculares em ratos com hipertensão renovascular 2 rins 1 clipe (2R1C). Foram utilizados ratos Fischer machos (9 a 11 semanas), pesando entre 150 e 200g. Após quatro dias das cirurgias (SHAM ou 2R1C), sob anestesia com quetamine e xilazina, os ratos foram separados em três grupos experimentais: sedentários (SD), submetidos à atividade física sem carga (SAF 0%) e com carga (SAF 3%). A AF foi realizada em cinco semanas de natação (uma hora por dia, cinco dias por semana) e a pressão arterial média (PAM) foi mensurada semanalmente por pletismografia de cauda. Após 48 horas da última sessão de AF, a PAM e frequência cardíaca (FC) foram monitoradas continuamente (no sistema de aquisição de dados Powerlab) em ratos dos diferentes grupos, anestesiados com uretana. A PAM basal dos ratos 2R1C sedentários foi maior do que a PAM dos ratos SHAM SD e similar a dos ratos 2R1C SAF (0% e 3%). Entretanto, a PAM dos ratos 2R1C SAF 0% e 2R1C SAF 3% também foi semelhante a dos ratos SHAM SD. Reduções na FC basal foram observadas nos grupos 2R1C SAF 0% e 2R1C SAF 3% em relação aos ratos 2R1C SD. A sensibilidade do bradicardia reflexa foi determinada através de alterações na PA induzidas por injeções endovenosas, em bolus, de doses crescentes de fenilefrina. A bradicardia reflexa nos ratos 2R1C SD foi menor em relação aos ratos SHAM SD. No entanto, a AF restaurou a bradicardia reflexa nos ratos 2R1C SAF 0% e, não nos ratos 2R1C SAF 3%. A microinjeção de Ang-(1-7) na CVLM produziu efeito hipotensor similar entre os diferentes grupos SHAM e 2R1C (SD, SAF 0% e SAF 3%). Porém, o antagonista de Ang- (1-7), A-779, microinjetado na CVLM induziu um efeito hipotensivo maior no grupo 2R1C SD. O A-779 na CVLM produziu efeito similar ao da salina nos ratos 2R1C SAF 0% e 2R1C SAF 3% e nos ratos SHAM (SD, SAF 0% e SAF 3%). Além disso, a microinjeção do A-779 na CVLM aumentou a sensibilidade da bradicardia reflexa nos ratos 2R1C SD e 2R1C SAF 3%. A microinjeção do A-779 bloqueou o efeito da Ang-(1-7) por até 15 minutos em todos os grupos experimentais (SD, SAF 0% e SAF 3%) SHAM e 2R1C. A percentagem de redução do peso seco relativo dos rins dos animais 2R1C (SD, SAF 0% e SAF 3%) foi maior que a apresentada pelos ratos SHAM SD. No entanto, a percentagem de redução do peso seco relativo dos rins foi similar entre os animais 2R1C SD e 2R1C SAF 0% e menor nos animais 2R1C SAF 3% comparado à dos 2R1C SD. A análise morfológica cardíaca mostrou que os animais 2R1C SD apresentaram hipertrofia concêntrica, no entanto, nos animais 2R1C SAF 3%, a hipertrofia cardíaca foi excêntrica. A AF aboliu a hipertrofia nos ratos 2R1C SAF 0%. Os níveis séricos de uréia nos ratos SD (SHAM e 2R1C) foram similares, no entanto, a AF (0% e 3%) reduziu estes níveis em ambos os grupos SHAM e 2R1C. Não houve diferença nos níveis séricos de creatinina entre os animais (SD, SAF 0% e SAF 3%) SHAM ou 2R1C. Os animais 2R1C apresentaram cinética dos níveis de lactato diferente e prejudicada em relação aos animais SHAM. Os animais 2R1C SD apresentaram uma menor relação de produção/ remoção do lactato sanguíneo em relação aos animais SHAM (SD, SAF 0% e SAF 3%) e 2R1C (SAF 0% e SAF 3%). Estes dados sugerem que a AF com e sem carga reduzem a PAM e FC basais e restabelecem a reatividade neuronal ao A-779 na CVLM. No entanto, a AF sem carga restaura a sensibilidade da bradicardia reflexa e impede a hipertrofia cardíaca patológica em ratos com hipertensão 2R1C. ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: IX In hypertension, caudal ventrolateral medulla neurons (CVLM) are unable to counteract the increased intrinsic activity of rostral ventrolateral medulla neurons. Besides, the increased activity of renin angiotensin system (RAS) represents an important humoral change that promotes hypertension, raising the sympathetic vasomotor tonus and impairing the baroreflex sensibility. Physical activity of low and moderate intensity has been used associated to a pharmacological treatment as a non pharmacological treatment, reducing or restoring the alterations promoted by the high arterial pressure level (AP). The present study aimed to evaluate the contribution of swimming, with or without load, in different cardiovascular parameters in a rat model of hypertension 2 kidney 1 clip (2K1C). Male Fisher rats (9 to 11 weeks), weighing 150 to 200 g, were used. The surgeries (SHAM or 2K1C) were performed under anesthesia (mixture of ketamine and xilazine). Four days later, rats were separated in three experimental groups: sedentary (SD), submitted to physical activity without (SPA 0%) and with load (SPA 3%). Physical activity was performed during five weeks (one hour per day, five days per week) and the mean arterial pressure (MAP) was measured weekly by tail cuff method. 48 h after the last session of physical activity, the animals were anesthetized (uretana) and MAP and heart hate (HR) were continuously measured (Powerlab system) in different group of rats. Basal MAP levels of 2K1C SD rats were higher than SHAM SD and similar to 2K1C SPA (0% and 3%) rats. However, MAP of 2K1C SPA 0% and 2K1C SPA 3% rats were also similar to SHAM SD rats. Reductions in basal HR were observed in 2K1C SPA 0% and 2K1C SPA 3% groups in comparison to 2K1C SD rats. The bradicardia baroreflex sensibility was determined through alterations in blood pressure (BP) assessed trough i.v. bolus injection of phenylephrine. The baroreflex bradicardia in 2K1C SD was reduced compared to SHAM SD rats. However, physical activity restored the baroreflex bradicardia in 2K1C SPA 0%, but not in 2K1C SPA 3% rats. The hypotension effect produced by microinjection of Ang-(1-7) in the CVLM was similar among all groups SHAM and 2K1C (SD, SPA 0% and SPA 3%). However, the microinjection of a receptor antagonist of Ang-(1-7), A-779, in the CVLM produced a significant hypotensive effect in 2K1C group. A-779 injected in the CVLM produced similar effect on MAP compared to saline in 2K1C SPA 0% and 2K1C SPA 3% and in SHAM (SD, SPA 0% and SPA 3%) rats. Otherwise, the microinjection of A-779 in the CVLM increased the bradicardia baroreflex sensibility in 2K1C SD and 2K1C SPA 3% rats. The microinjection of A-779 blunted the Ang-(1-7) effect in all experimental groups (SD, SPA 0% and SPA 3%) SHAM and 2K1C, for up15 minutes. The percentage of reduction of the dry weight of the kidneys of the animals 2K1C (SD, SPA 0 % and SPA 3 %) was higher than the presented on SHAM SD rats. However, the percentage of reduction of the dry weight of the kidneys of the 2K1C (SD, SPA 0% and SPA 3%) was similar between the 2K1C SD and 2K1C SPA 0% and smaller in 2K1C SPA 3% compared to 2K1C SD animals. The morphological cardiac analysis showed that the 2K1C SD animals presented concentric hypertrophy, however, in the 2K1C SPA 3% animals, the cardiac hypertrophy was eccentric. However, physical activity abolished the hypertrophy in 2K1C SPA 0% rats. Plasma levels of urea in SD, SHAM and 2K1C rats were similar; however, physical activity (0% and 3%) reduced these levels in SHAM and 2K1C rats. There was no differences in plasma levels of creatinina. The 2K1C animals presented an impaired and different kinetic of the lactate in comparison to SHAM groups. The animals 2K1C SD presented a lower production/ removal ratio of blood lactate than SHAM (SD, SPA 0% and SPA 3%) and 2K1C (SPA 0% and SPA 3%) animals. These data suggest that physical activity with and without load reduce basal MAP and HR and restores the neuronal reactivity of the A-779 in the CVLM. However physical activity without load restores the sensibility of bradicardia baroreflex and prevents the cardiac pathological hypertrophy in 2K1C hypertensive rats.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by giuliana silveira (giulianagphoto@gmail.com) on 2016-05-03T19:50:27Z No. of bitstreams: 1 TESE_TratamentoHPβCDAng-(1-7)Reverte.pdf: 6345996 bytes, checksum: 6c9967497280cae13ca3f128df7972bf (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2016-05-04T14:26:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TESE_TratamentoHPβCDAng-(1-7)Reverte.pdf: 6345996 bytes, checksum: 6c9967497280cae13ca3f128df7972bf (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-04T14:27:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE_TratamentoHPβCDAng-(1-7)Reverte.pdf: 6345996 bytes, checksum: 6c9967497280cae13ca3f128df7972bf (MD5) Previous issue date: 2015 / O objetivo do presente estudo foi avaliar o potencial terapêutico da formulação oral de Ang-(1-7), a HPβCD/Ang-(1-7), sobre o processo inflamatório do tecido adiposo branco visceral (TAV) e tecido adiposo marrom (TAM), sobre as vias de sinalização intracelular da insulina e sobre a termogênese adaptativa, na reversão de distúrbios metabólicos da síndrome metabólica (SM), induzidos pela dieta hiperlipídica. Ratos recém-desmamados com 4 semanas de idade, foram submetidas à dieta controle AIN-93 (dieta CT) ou à dieta hiperlipídica (dieta SM) por 7 semanas para indução da SM. Após este período, os grupos foram subdivididos em ratos tratados com HPβCD/Ang-(1-7) ou com ciclodextrina vazia (V) por mais 6 semanas. Ao final das 13 semanas de experimento foram realizadas avaliações biométricas, bioquímicas, Elisa e expressões gênicas por qRT-PCR. Os ratos SM-V apresentaram aumento da expressão de citocinas inflamatórias no TAV retroperitoneal e no TAM, redução da expressão do PPARγ2 no fígado, piora da via intracelular da insulina no fígado, no TAV retroperitoneal e no músculo gastrocnêmico, redução na expressão de PGC1-α, PGC1-β, UCP-2 e UCP-3 no gastrocnêmico e aumento da expressão de UCP-1 no TAM. Esses eventos ocorreram simultaneamente com a elevação da glicemia de jejum, da insulina, do HOMA-IR e do HOMA-ß e com o aumento do peso corporal, do índice de adiposidade, do colesterol total, do LDL e da alanina transferase (ALT). O tratamento com HPβCD/Ang-(1-7) reduziu a expressão das adipocinas pró-inflamatórias do TAV e TAM, normalizou a expressão de PPARγ2 no fígado, melhorou a via intracelular da insulina no fígado, no TAB retroperitoneal e no músculo gastrocnêmico e aumentou a expressão de UCP-3 no músculo gastrocnêmico e a expressão de UCP-1 no TAM, quando comparado ao grupo controle CT-V. Esses eventos impediram o aumento do peso corporal, reduziram o índice de adiposidade e os níveis de colesterol total, além de normalizar a glicemia de jejum, os níveis de insulina, o HOMA-IR, o HOMA-ß, e os níveis de ALT. Nossos dados demonstram a eficácia do tratamento com HPβCD-Ang-(1-7) ao mostrar que essa formulação reverte distúrbios metabólicos da SM em ratos, a partir de alterações benéficas teciduais. ___________________________________________________________________________________ / ABSTRACT : The aim of this study was to evaluate the therapeutic potential of the oral formulation of Ang-(1-7), the HPβCD/Ang-(1-7), on the inflammatory process of visceral white adipose tissue (WAT) and brown adipose tissue (BAT) and on intracellular signaling pathways of insulin and on the adaptive thermogenesis, in reversion of metabolic syndrome (MS) and related disorders induced by high-fat diet. Rats weaned at 4 weeks of age, were subjected to AIN-93 diet control (CT diet) or high fat diet (SM diet ) for 7 weeks for the induction of MS. After this period, the rats were divided into groups treated with HPβCD/Ang- (1-7) or empty cyclodextrin (V) for further six weeks. At the end of the experiment biometric, biochemical, Elisa and qRT-PCR assays were performed. SM-V rats showed increase in inflammatory cytokines expression in the retroperitoneal WAT and BAT, reduction in PPARγ2 expression in the liver, worsening in insulin signaling pathways in the liver, retroperitoneal WAT and gastrocnemius, reduction in PGC1- α, PGC1-β, UCP-2 and UCP-3 expression in gastrocnemius and an increase in UCP-1 expression in the TAM. These events occur simultaneously with the elevation of fasting glucose, insulin, HOMA-IR and HOMA-ß and with increasing the body weight, adiposity index, total cholesterol, LDL and alanine aminotransferase (ALT). Treatment with HPβCD/Ang-(1-7) reduced the inflammatory adipokines expression in retroperitoneal WAT and BAT, normalized PPARγ2 expression in the liver, improved the insulin signaling pathway in the liver, retroperitoneal WAT and gastrocnemius, increased UCP-3 expression in gastrocnemius and increased UCP-1 expression in TAM compared to CT-V group. These events prevented the increase in body weight, reduced adiposity index and total cholesterol, and normalized fasting plasma glucose, insulin, HOMA-IR, HOMA-ß, and ALT. Our data demonstrate the efficacy of HPβCD/Ang-(1-7) treatment and show that this formulation reverses MS and related disorders through of tissue beneficial changes.

Resultados controversos têm sido obtidos em estudos experimentais e clínicos com a infusão de insulina e glicose na lesão isquemia-reperfusão, havendo muito á ser esclarecido sobre os mecanismos deste tratamento. No coração, a insulina tem efeitos sobre a utilização dos substratos, fluxo coronariano, atua como antiinflamatório e, propõem-se efeitos diretos na sobrevivência celular; estes efeitos devem-se a ativação da via fosfatidilinositol 3-cinase (PI3k)-Akt. As interações intracelulares entre os sistemas de sinalização da insulina e da angiotensina-II são muitas, salientando-se a possível importância do cross-talk angiotensina-II/insulina. Apesar da popularidade das preparações em corações isolados no estudo das lesões isquemia-reperfusão, diversos protocolos vêm sendo utilizados quanto a duração da isquemia, dificultanto a escolha do melhor período de isquemia para se testar os efeitos de fármacos sobre a recuperação da função cardíaca. Nesse trabalho objetivamos: determinar o melhor tempo de isquemia para investigar a recuperação funcional e a capacidade de resposta do sistema reninaangiotensina (SRA) tecidual em coração isolado e os efeitos da insulina associada a um inibidor do SRA sobre os mecanismos de cardioproteção à lesão isquemia-reperfusão. No estudo 1 investigamos a recuperação funcional e a capacidade de resposta do SRA tecidual em corações isolados e submetidos a diferentes períodos de isquemia. Os corações foram submetidos a diferentes períodos de isquemia global (20, 25 ou 30 min) e reperfundidos (30 min) com diferentes soluções: Krebs-Henseleit (KH) (grupo KH), KH + angiotensina-I (grupo Angio) ou KH + angiotensina-I + captopril (grupo AC). O índice de contratilidade ventricular (dP/dtmax) e o duplo produto foram reduzidos nos corações expostos à 25 min (~73%) e 30 min de isquemia (~80%) vs 20 min de isquemia. A pressão ventricular diastólica (PVD) e a pressão de perfusão (PP) aumentaram nos corações expostos à 25 min (5,5 e 1,08 vezes, respectivamente) e 30 min de isquemia (6 e 1,10 vezes, respectivamente) vs 20 min de isquemia. A angiotensina-I causou uma diminuição no dP/dtmax e no duplo produto (~85-94%) em todos os períodos isquêmicos, e um aumento na PVD e na PP (6,9 e 1,25 vezes, respectivamente) apenas aos 20 min isquemia. O captopril reverteu parcialmente ou totalmente os efeitos da angiotensina-I sobre a recuperação funcional, somente nos períodos 20 e 25 min de isquemia. Esses dados sugerem que a transição de dano pós-isquêmico leve/moderado para severo ocorre após 20 min de isquemia. Dessa forma, 20 min de isquemia é o melhor período de tempo para se estudar os efeitos de abordagens farmacológicas sobre a recuperação funcional. No estudo 2 investigamos os efeitos da insulina associada a um inibidor do SRA sobre os mecanismos de cardioproteção à lesão isquemia-reperfusão. Os corações foram submetidos a um período de isquemia global (20 min) e reperfundidos (30 min) com diferentes soluções: KH (grupo KH), KH + angiotensina-I (grupo Angio), KH + angiotensina-I + captopril (grupo AC), KH + insulina (grupo Insulina), KH + insulina + angiotensina-I (grupo IA) e KH + insulina + angiotensina-I + captopril (grupo IAC). Durante a recuperação, o grupo Angio apresentou uma redução de ~24% na pressão ventricular desenvolvida (PVDes) e de ~29% no dP/dtmáx vs período basal, e apresentou um aumento de ~2,7 vezes na PVD vs período basal, estes efeitos foram revertidos parcialmente ou totalmente pelos tratamentos AC, IA e IAC. O grupo Angio apresentou uma redução de ~24% no duplo produto vs período basal, este efeito foi revertido pelo tratamento IA, que também foi maior vs grupos KH e AC. Os grupos Angio e IA apresentaram um aumento de ~20% na PP vs período basal, e todos os grupos (exceto o insulina) foram maiores vs grupo KH; os grupos AC e IAC não diferiram dos grupos Angio e insulina. A Akt fosforilada foi maior nos grupos insulina e IA vs grupos KH (~47% e ~42%, respectivamente) e Angio (~60% e ~55%, respectivamente), os grupos AC e IAC não diferem dos demais. A AMPK fosforilada foi ~31% maior nos grupos insulina, IA e IAC vs grupos KH, Angio e AC. Os níveis de TBA-RS no grupo KH foram ~73% maior vs outros grupos; a quimiluminescência também foi maior (~2,2 vezes) no grupo KH vs outros grupos, e o grupo IA foi ~35% menor vs grupo Angio. A atividade da SOD não foi alterada pelos tratamentos, mas a atividade da catalase foi ~28% maior no grupo KH vs outros grupos (exceto o IA, P = 0,058) e a atividade da GST foi menor no grupo insulina vs grupos Angio e AC (~45% e ~50%, respectivamente). Os grupos Angio, AC e IAC apresentaram uma menor concentração da Cu/ZnSOD vs grupo KH (~40%, ~43% e ~27%, respectivamente), os grupos insulina e IA não diferem do grupo KH. Nenhum dos tratamentos alterou a concentração das enzimas GST e eNOS, os níveis de NOX ou a translocação do GLUT-4. Assim, a insulina ativa a via PI3k-Akt e parece exercer uma melhor regulação do estado redox celular, podendo ainda ativar a AMPK e ambas atuarem sinergicamente para um melhor perfil metabólico do miocárdio. Desse modo, a insulina administrada no inicio da reperfusão opõe-se aos efeitos deletérios da angiotensina-II e exerce um efeito cardioprotetor.

As plaquetas sangüíneas são fragmentos citoplasmáticos, oriundos da ruptura dos megacariócitos, cuja principal função está relacionada à manutenção da integridade vascular. Os nucleotídeos extracelulares, ATP e ADP, bem como a adenosina, têm sido implicados em um grande número de funções fisiológicas: o ADP é o principal fator recrutador de plaquetas, enquanto que o ATP é um inibidor competitivo da agregação induzida por ADP. A adenosina é uma molécula capaz de induzir vasodilatação e inibir a agregação plaquetária. Desta maneira, a manutenção da sinalização purinérgica normal tem se mostrado importante para o tratamento de doenças cardiovasculares. Os nucleosídeos di e trifosfatos circulantes podem ser hidrolisados por membros de várias famílias de ectonucleotidases de membrana e solúveis, incluindo as ecto-nucleosídeo trifosfato difosfoidrolases (E-NTPDases) e ecto-nucleotídeo pirofosfatase/fosfodiesterases (E-NPPs), que em conjunto com a ecto-5’-nucleotidase, levam à formação de adenosina. Na superfície das plaquetas, ambas enzimas, E-NTPDase e ecto-5’-nucleotidase, estão descritas. O sistema renina-angiotensina é o principal regulador da função renal e cardiovascular, desenvolvendo um papel fundamental na homeostasia da pressão arterial e do balanço eletrolítico. A angiotensina II (ANGII) induz fisiologicamente a ativação das plaquetas, possivelmente devido às suas propriedades vasoconstritoras. Os objetivos deste trabalho foram, portanto: 1) caracterizar cineticamente a enzima E-NPP em plaquetas de ratos, utilizando o substrato marcador p-Nph-5’TMP e 2) esclarecer, mesmo que em parte, os possíveis efeitos da ANGII sobre a hidrólise extracelular de nucleotídeos por plaquetas de ratos. No primeiro capítulo deste trabalho, descrevemos uma atividade enzimática em plaquetas de ratos que compartilha as principais características bioquímicas já descritas para as E-NPPs: pH ótimo alcalino; valores de KM e Vmax calculados de aproximadamente 106.22 ± 17.83 μM e 3.44 ± 0.18 nmol p-nitrophenol/min/mg, respectivamente; e dependência de cátions divalentes. Além disso, o AMP inibiu somente a hidrólise do p-Nph-5’TMP. Por outro lado, a azida de sódio, em altas concentrações, a angiotensina II e o cloreto de gadolínio alteraram apenas as hidrólises de ATP ou ADP ou de ambos. No segundo capítulo, mostramos que a ANGII foi capaz de aumentar as hidrólises de ATP, ADP e AMP em plaquetas em todas as doses testadas (5, 50, 500 e 5000 picomóis). Entretanto, nenhuma alteração foi observada com relação à hidrólise do p-Nph-5'TMP. Em adição, observamos um aumento na hidrólise de AMP e uma diminuição na hidrólise de p-Nph-5'TMP em plaquetas de ratos espontaneamente hipertensos (SHR) quando comparados a ratos Wistar normotensos. De maneira geral, esta dissertação traz a caracterização bioquímica da enzima E-NPP na superfície de plaquetas intactas de ratos como sendo parte de um complexo sistema para a hidrólise de nucleotídeos nestes fragmentos citoplasmáticos, podendo, assim, contribuir para o desenvolvimento de terapias antiplaquetárias e para o tratamento de doenças vasculares. Adicionalmente, apresentamos alguns resultados demonstrando interações entre os sistemas angiotensinérgico e adenosinérgico de plaquetas de ratos, o que poderá contribuir para o entendimento e o tratamento de doenças cardiovasculares como hipertensão e arteriosclerose. / Platelets are cytoplasmic fragments derived from bone marrow megakaryocytes rupture, whose major role is related to the vascular integrity maintenance. The extracellular nucleotides ATP and ADP as well as adenosine have been implicated in a great number of physiological functions: ADP is the major factor recruiting platelet, whereas ATP has been considered as a competitive inhibitor of ADP-induced platelet aggregation. Adenosine is a molecule able to induce vasodilatation and to inhibit platelet aggregation. Thus, the maintenance of normal purinergic signalling has been showed as an important issue for the treatment of cardiovascular diseases. The nucleoside di and triphosphate can be hydrolyzed by members of several families of membrane-bound or soluble ectonucleotidases, including ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolases (E-NTPDases) and ecto-nucleotide pyrophosphatase/ phosphodiesterases (E-NPPs), that together with an ecto-5’-nucleotidase lead to adenosine formation. On the platelets ecto-surface, both E-NTPDase and ecto-5’-nucleotidase are already described. The renin-angiotensin system is the most important regulator of renal and cardiovascular function developing a fundamental role in the arterial blood pressure homeostasis and in the electrolytic balance. Angiotensin II (ANGII) induces physiologically the platelet activation, probably due to its vasoconstrictors properties. The aims of this study were: 1) to kinetically characterize the enzyme E-NPP from rat blood platelet, using the artificial marker substrate p-Nph-5’TMP and 2) to clarify, even though in part, the effects of ANGII upon extracellular nucleotide hydrolysis by rat platelets ectoenzymes. In the first chapter, we describe an enzymatic activity that shares the major characteristics already described for E-NPPs: optimum alkaline pH; KM and Vmax calculated values of approximately 106.22 ± 17.83 μM and 3.44 ± 0.18 nmol p-nitrophenol/min/mg, respectively; and divalent cation dependence. Besides, AMP inhibited only p-Nph-5’TMP hydrolysis. On the other hand, sodium azide, in high concentrations, ANGII and gadolinium chloride just changed ATP or ADP or both hydrolysis. In the second chapter, we show that ANGII was able to increase ATP, ADP and AMP hydrolysis in platelets from rats in all tested dosis (5, 50, 500 e 5000 picomoles). However, no modification was observed regarding p-Nph-5'TMP hydrolysis. Additionally, we verified an increase on AMP hydrolysis and a reduction on p-Nph-5'TMP hydrolysis in platelets from spontaneously hypertensive rats (SHR) when compared to Wistar normotensive rats. Finally, this work shows the kinetic and biochemistry characterization of an E-NPP enzyme on the intact platelet surface as being part of a complex system for nucleotide hydrolysis that could contribute for the antiplatelet therapies and vascular diseases treatment. In addition, we present some results showing interactions between rat platelet angiotensinergic and adenosinergic systems that could contribute to the understanding and treatment of cardiovascular diseases such as hypertension and atherosclerosis.

A insuficiência cardíaca é uma síndrome clínica com débito cardíaco insuficiente, que configura uma das principais causas de morbidade e mortalidade. O sistema renina-angiotensina-aldosterona (SRAA) tem um papel importante na fisiopatologia da IC, e sua estimulação crônica afeta negativamente o coração por meio da vasoconstrição, retenção de água e sódio, remodelamento cardíaco e fibrose miocárdica. A angiotensina II é um componente ativo do SRAA e sua ação é relevante para a função e estrutura cardiovascular, sendo mediada pelo receptor AT1R. O AT1R é um receptor acoplado à proteína G que medeia a maior parte das ações biológicas do SRAA, no qual a ativação desse receptor capta sinais extracelulares e ativa as vias de transdução de sinal no interior da célula. O AT1R é expresso na maioria dos tecidos e sua ativação pode ocasionar vasoconstrição, retenção de água e a proliferação das células do músculo liso, assim como hipertrofia cardíaca. Estudos realizados em pacientes com IC para avaliar a associação do polimorfismo 1166A>C (rs5186) no gene do receptor tipo 1 da angiotensina II (AGTR1) na insuficiência cardíaca obtiveram resultados conflitantes. Dessa forma, o presente estudo avaliou o polimorfismo 1166A>C no gene do AGTR1 na suscetibilidade e progressão da insuficiência cardíaca em uma coorte de 312 pacientes com IC e em uma amostra de 153 indivíduos da população em geral (doadores de banco de sangue). Os desfechos analisados foram o número de hospitalizações decorrentes da IC e morte por todas as causas. O polimorfismo foi determinado pela reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real. As frequências alélicas e genotípicas do polimorfismo 1166A>C nos pacientes com IC foram semelhantes àquelas dos doadores de banco de sangue. Quanto à progressão da IC, não se observou qualquer diferença estatisticamente significativa na incidência da mortalidade por todas as causas entre os portadores de diferentes genótipos do polimorfismo 1166A>C. Não houve diferença estatisticamente significativa também quanto ao número de hospitalizações nos diferentes genótipos. Assim sendo, os dados obtidos no presente estudo sugerem que o polimorfismo 1166A>C no gene AGTR1 não está associado com a IC ou com a sua progressão.

As plaquetas sangüíneas são fragmentos citoplasmáticos, oriundos da ruptura dos megacariócitos, cuja principal função está relacionada à manutenção da integridade vascular. Os nucleotídeos extracelulares, ATP e ADP, bem como a adenosina, têm sido implicados em um grande número de funções fisiológicas: o ADP é o principal fator recrutador de plaquetas, enquanto que o ATP é um inibidor competitivo da agregação induzida por ADP. A adenosina é uma molécula capaz de induzir vasodilatação e inibir a agregação plaquetária. Desta maneira, a manutenção da sinalização purinérgica normal tem se mostrado importante para o tratamento de doenças cardiovasculares. Os nucleosídeos di e trifosfatos circulantes podem ser hidrolisados por membros de várias famílias de ectonucleotidases de membrana e solúveis, incluindo as ecto-nucleosídeo trifosfato difosfoidrolases (E-NTPDases) e ecto-nucleotídeo pirofosfatase/fosfodiesterases (E-NPPs), que em conjunto com a ecto-5’-nucleotidase, levam à formação de adenosina. Na superfície das plaquetas, ambas enzimas, E-NTPDase e ecto-5’-nucleotidase, estão descritas. O sistema renina-angiotensina é o principal regulador da função renal e cardiovascular, desenvolvendo um papel fundamental na homeostasia da pressão arterial e do balanço eletrolítico. A angiotensina II (ANGII) induz fisiologicamente a ativação das plaquetas, possivelmente devido às suas propriedades vasoconstritoras. Os objetivos deste trabalho foram, portanto: 1) caracterizar cineticamente a enzima E-NPP em plaquetas de ratos, utilizando o substrato marcador p-Nph-5’TMP e 2) esclarecer, mesmo que em parte, os possíveis efeitos da ANGII sobre a hidrólise extracelular de nucleotídeos por plaquetas de ratos. No primeiro capítulo deste trabalho, descrevemos uma atividade enzimática em plaquetas de ratos que compartilha as principais características bioquímicas já descritas para as E-NPPs: pH ótimo alcalino; valores de KM e Vmax calculados de aproximadamente 106.22 ± 17.83 μM e 3.44 ± 0.18 nmol p-nitrophenol/min/mg, respectivamente; e dependência de cátions divalentes. Além disso, o AMP inibiu somente a hidrólise do p-Nph-5’TMP. Por outro lado, a azida de sódio, em altas concentrações, a angiotensina II e o cloreto de gadolínio alteraram apenas as hidrólises de ATP ou ADP ou de ambos. No segundo capítulo, mostramos que a ANGII foi capaz de aumentar as hidrólises de ATP, ADP e AMP em plaquetas em todas as doses testadas (5, 50, 500 e 5000 picomóis). Entretanto, nenhuma alteração foi observada com relação à hidrólise do p-Nph-5'TMP. Em adição, observamos um aumento na hidrólise de AMP e uma diminuição na hidrólise de p-Nph-5'TMP em plaquetas de ratos espontaneamente hipertensos (SHR) quando comparados a ratos Wistar normotensos. De maneira geral, esta dissertação traz a caracterização bioquímica da enzima E-NPP na superfície de plaquetas intactas de ratos como sendo parte de um complexo sistema para a hidrólise de nucleotídeos nestes fragmentos citoplasmáticos, podendo, assim, contribuir para o desenvolvimento de terapias antiplaquetárias e para o tratamento de doenças vasculares. Adicionalmente, apresentamos alguns resultados demonstrando interações entre os sistemas angiotensinérgico e adenosinérgico de plaquetas de ratos, o que poderá contribuir para o entendimento e o tratamento de doenças cardiovasculares como hipertensão e arteriosclerose. / Platelets are cytoplasmic fragments derived from bone marrow megakaryocytes rupture, whose major role is related to the vascular integrity maintenance. The extracellular nucleotides ATP and ADP as well as adenosine have been implicated in a great number of physiological functions: ADP is the major factor recruiting platelet, whereas ATP has been considered as a competitive inhibitor of ADP-induced platelet aggregation. Adenosine is a molecule able to induce vasodilatation and to inhibit platelet aggregation. Thus, the maintenance of normal purinergic signalling has been showed as an important issue for the treatment of cardiovascular diseases. The nucleoside di and triphosphate can be hydrolyzed by members of several families of membrane-bound or soluble ectonucleotidases, including ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolases (E-NTPDases) and ecto-nucleotide pyrophosphatase/ phosphodiesterases (E-NPPs), that together with an ecto-5’-nucleotidase lead to adenosine formation. On the platelets ecto-surface, both E-NTPDase and ecto-5’-nucleotidase are already described. The renin-angiotensin system is the most important regulator of renal and cardiovascular function developing a fundamental role in the arterial blood pressure homeostasis and in the electrolytic balance. Angiotensin II (ANGII) induces physiologically the platelet activation, probably due to its vasoconstrictors properties. The aims of this study were: 1) to kinetically characterize the enzyme E-NPP from rat blood platelet, using the artificial marker substrate p-Nph-5’TMP and 2) to clarify, even though in part, the effects of ANGII upon extracellular nucleotide hydrolysis by rat platelets ectoenzymes. In the first chapter, we describe an enzymatic activity that shares the major characteristics already described for E-NPPs: optimum alkaline pH; KM and Vmax calculated values of approximately 106.22 ± 17.83 μM and 3.44 ± 0.18 nmol p-nitrophenol/min/mg, respectively; and divalent cation dependence. Besides, AMP inhibited only p-Nph-5’TMP hydrolysis. On the other hand, sodium azide, in high concentrations, ANGII and gadolinium chloride just changed ATP or ADP or both hydrolysis. In the second chapter, we show that ANGII was able to increase ATP, ADP and AMP hydrolysis in platelets from rats in all tested dosis (5, 50, 500 e 5000 picomoles). However, no modification was observed regarding p-Nph-5'TMP hydrolysis. Additionally, we verified an increase on AMP hydrolysis and a reduction on p-Nph-5'TMP hydrolysis in platelets from spontaneously hypertensive rats (SHR) when compared to Wistar normotensive rats. Finally, this work shows the kinetic and biochemistry characterization of an E-NPP enzyme on the intact platelet surface as being part of a complex system for nucleotide hydrolysis that could contribute for the antiplatelet therapies and vascular diseases treatment. In addition, we present some results showing interactions between rat platelet angiotensinergic and adenosinergic systems that could contribute to the understanding and treatment of cardiovascular diseases such as hypertension and atherosclerosis.

Made available in DSpace on 2018-08-01T21:35:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_12340_Dissertação_João Marcos Lira de Melo.pdf: 1377215 bytes, checksum: 6a580a7f42211627bcef208e1b7e259a (MD5) Previous issue date: 2018-03-18 / O ácido rosmarínico (AR) é o componente químico de plantas muito utilizadas no meio medicinal, como alecrim, salvia, entre outras. Sua capacidade antioxidante é estudada como uma via alternativa natural para o tratamento de diversas doenças, mas o seu efeito sobre o sistema renina angiotensina (SRA) no modelo de Parkinson no sistema nervoso central ainda é pouco conhecido. Diante disso, o presente estudo tem como objetivo averiguar a influência do AR sobre o SRA no tronco encefálico de camundongos da linhagem C57bl/6 afetados pela toxina MPTP. Os animais foram tratados com a toxina MPTP (30 mg/Kg) para indução da doença de Parkinson, sendo que um grupo recebeu a toxina e o outro além do MPTP foi administrado o AR na dose 20 mg/Kg, via oral por 14 dias. Animais controle foram divididos em um grupo CON, outro grupo recebeu somente AR na dose 20 mg/Kg (grupo AR). A avaliação do peso dos órgãos dos animais demonstrou alteração significativa no peso do fígado e alterações histomorfométricas nos rins. A expressão proteica das proteínas antioxidantes (SOD e catalase) não demonstrou diferenças significativas entres os grupos. Não foi observadas diferenças entres os grupos na expressão da ECA1. Observou-se uma redução significativa na expressão do receptor AT2 no grupo MPTP, e houve um aumento significativo no grupo MPTP/AR. Estes resultados mostram um efeito protetor antioxidante e regulador do AR sobre o SRA. Dessa forma os resultados evidenciam que o AR pode ser uma via de estudo promissora para a busca de novos meios de tratamentos para doenças que alteram o sistema renina angiotensina.

Orientador: Benedito de Oliveira Filho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T11:00:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Teixeira_SimoneAparecida_M.pdf: 11013825 bytes, checksum: 8435b211df8f9b2d75e3e1cc42b1ace7 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Uma interação entre o sistema renina-angiotensina-aldosterona e o óxido nítrico (NO) foi inicialmente observada por Ribeiro et al. (1992) quando verificaram que na hipertensão experimental causada pela inibição da síntese do NO por análogos da L-arginina, a elevação da pressão arterial era evitada pelo tratamento concomitante com losartan, um antagonista competitivo dos receptores do tipo I de angiotensina II, verificando-se também que os níveis de atividade da renina plasmática se encontravam elevados. No entanto, os resultados obtidos por outros autores sobre tal atividade são um tanto controversos. Ao longo do presente trabalho de tese são mostrados os resultados obtidos sobre o desenvolvimento e padronização de um método para quantificar a atividade da enzima conversora de angiotensina I (ECA) tecidual proveniente de órgãos de ratos. Posteriormente, esta metodologia foi aplicada para avaliar o efeito do tratamento crônico com um inibidor da NOS em ratos (L-NAME, 20 mg/animal/dia, durante 1, 2, 4 e 8 semanas, v.o.) sobre a atividade da ECA proveniente de homogenatos de fígado, pulmão, coração e rim. Ratos tratados com L-NAME mostraram valores de pressão arterial média elevados enquanto que o grupo de animais tratados prévia e simultaneamente com o inibidor competitivo da ECA, o maleato de enalapril, não desenvolveram hipertensão. A atividade da ECA medida em homogenatos de coração, fígado e pulmão não mostrou nenhuma diferença significante entre os grupos tratado e não tratado (controle) a qualquer tempo, mas uma queda na atividade da ECA renal foi observada após 8 semanas de tratamento com L -NAME. Estes resultados sugerem que a ativação do sistema renina-angiotensina-aldosterona decorrente da inibição da NOS não é acompanhada por aumento da atividade de ECA tecidual em ratos. Mecanismos de retroalimentação negativa poderiam explicar a diminuição observada na atividade da ECA renal após um período de 8 semanas de tratamento com L-NAME / Abstract: An interaction between the renin-angiotensin-aldosterone system and nitric oxide (NO) was initially observed by Ribeiro et aI. (1992) when they verified that in experimental hypertension caused by NO synthesis blockade, the raise in arterial pressure could be prevented by concomitant treatment with losartan, a competitive type I angiotensin II receptor antagonist and that plasma renin activity was also increased. However, reports by other investigators have not always confirmed the latter observation. The present work describes the development and standardization of a method for the in vitro quantification of angiotensin I converting enzyme (ACE) activity in rat organs. The method was used to evaluate ACE activity in liver, lung, heart and kidney homogenates from rats treated chronically with the NO synthase (NOS) inhibitor L-NAME (20 mg/animal/day, orally, for 1,2,4 or 8 weeks). L-NAME-treated rats developed hypertension while the animals previously and simultaneously treated with enalapril maleate, a competitive ACE inhibitor, did not. The ACE activities of heart, liver and lung homogenates were not significantly different between the treated and non-treated groups at any time, but a significant decrease in renal ACE activity was observed in the L-NAME treated animals after eight weeks of treatment. These results suggest that activation of the renin-angiotensin-aldosterone system in rats as a result of chronic NOS inhibition is not accompanied by an increase in tissular ACE activity. Negative feed-back mechanisms could explain the decrease in renal ACE activity observed after eight weeks of treatment with L-NAME / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Paula Schmidt Azevedo Gaiolla / Resumo: Introdução: A influência do ácido retinoico (AR) sobre o coração é bastante relevante, ocorrendo durante a embriogênese, diferenciação e desenvolvimento cardíaco. Estudos experimentais mostram que o AR pode induzir hipertrofia excêntrica com melhora da função cardíaca em coração de ratos sadios, e também reduzir a hipertrofia, modulando o sistema renina angiotensina aldosterona (SRAA), em animais hipertensos. Pouco se sabe sobre os efeitos do AR em coração de humanos. Pacientes portadores de acne fazem uso de um tipo de AR que é o 13- cis-AR, também chamado de isotretinoína e por isso possibilitam o estudo do papel do AR em humanos. Estudo prévio mostrou que com 2 meses de uso do 13-cis-AR houve remodelação cardíaca. Entretanto, não se sabe sobre os mecanismos ou se essas alterações são reversíveis. Objetivos: Portanto, os objetivos desse trabalho foram de comparar a avaliação morfofuncional cardíaca e variáveis do SRAA entre pacientes em uso de isotretinoína com um grupo controle. Adicionalmente, avaliar se as alterações são reversíveis em pacientes em uso de isotretinoína. Casuística e Métodos: Foram estudados 35 adolescentes e adultos jovens, com idade entre 14 e 23 anos, do sexo masculino, sendo 20 deles em uso de isotretinoína oral, na dose de 0,5 mg/kg/dia a 0,75 mg/kg/dia, acompanhados no ambulatório de dermatologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu (FMBUNESP), aos 6 meses de tratamento. Os outros 15 pacientes foram convidados na comunidade ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Background: The influence of retinoic acid (RA) in the heart is very relevant, occurring during the embryogenesis, differentiation and cardiac development. Experimental studies shown that RA induces excentric hypertrophy, with improvement of cardiac function in heart of healthy rats. In addition, it was observed that RA regulates renin angiotensin aldosterone system (RAAS), a regulatory system involved in blood pressure, volume homeostasis and cardiac hypertrophy. There is a lack of information about the role of RA on cardiac remodeling in adult humans. Otherwise there are patients with Acne that uses 13- cis-RA, also called isotretinoin, and this population allow the investigation of cardiac remodeling and RA treatment. In fact, previously study shown that the use of 13-cis-RA, for acne, for 2 months induced cardiac remodeling, however, no one knows if these changes are persistent and reversible. Objectives: the objectives of these study is to compare the cardiac morphofunctional evaluation and RASS variables in patients using isotretinoin and in control group. Additionally, evaluate if these changes are reversible in isotretinoin group. Casuistic and Methods: Study1: 35 young men, between 14 to 23 years, 20 in use of 13-cis-RA, in the dose of 0,5 mg/kg/day to 0,75 mg/kg/day, from dermatology clinic of São Paulo State University (FMB-UNESP), at 6 months of treatment. The others 15 patients had mild acne only with topic treatment. Morphofunctional evaluation, tissular Doppler... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Doctor en Biotecnología Molecular / El sistema renina-angiotensina (SRA) consiste en una serie de péptidos que circulan por el torrente sanguíneo, señalizando a través de varios receptores de membrana acoplados a una proteína G. Dentro de éstos, el receptor AT2 (AT2R) es uno de los más importantes dado que se encarga de apagar las señales intracelulares encendidas por otros receptores del SRA. Esta acción la ejecuta mediante la activación de proteínas fosfatasas que desfosforilan sustratos proteicos río abajo de estos receptores, impidiendo de esta manera su sobreactivación. Aunque el SRA se describió inicialmente como un regulador de la presión arterial, actualmente se sabe que también participa en el desarrollo de diversas enfermedades, entre ellas el cáncer. Durante el desarrollo de esta enfermedad, algunos receptores del SRA promueven la adquisición del fenotipo cancerígeno, mientras que el AT2R antagoniza estos efectos, impidiendo su avance. Sin embargo, en la etapa de metástasis aún se desconocen los mecanismos moleculares por los cuales AT2R podría inhibir dicho proceso. Nuestros estudios previos han identificado una nueva vía promotora de la migración, invasión y metástasis compuesta por las proteínas caveolina-1, Rab5 y Rac-1 (vía CAV1/Rab5/Rac-1). Esta vía promueve metástasis en el cáncer de mama, colon y melanoma. Su activación ocurre cuando el primer componente de la vía, CAV1 es fosforilada en Y14 (p-Y14-CAV1), lo cual promueve la activación secuencial de las GTPasas río abajo Rab5 y Rac-1 y que en última instancia promueven la migración celular. Diversas investigaciones sugieren que la fosforilación de CAV1 en Y14 podría estar controlada por la actividad del AT2R. Considerando que el AT2R actúa activando fosfatasas, se postuló en esta tesis que este receptor inhibe la migración, invasión y metástasis dependiente de la vía CAV1/Rab5/Rac-1, promoviendo la desfosforilación de CAV1 en Y14 mediante la activación de alguna proteína fosfatasa. Todos estos antecedentes permiten formular la siguiente hipótesis de trabajo: “La activación del AT2R inhibe la vía de señalización CAV1/Rab5/Rac-1, disminuyendo la migración, invasión y potencial metastásico de células tumorales de melanoma murino B16F10 y de mama MDA-MB-231. Para probar esta hipótesis se utilizaron las líneas celulares de cáncer de melanoma B16F10 y de mama MDA-MB-231, dado que ellas si bien utilizan la vía CAV1/Rab5/Rac-1 para migrar, difieren en la expresión del AT2R, convirtiéndolas en buenos modelos para estudiar su efecto sobre esta vía transduccional. Estas células se estimularon con el agonista específico del AT2R CGP42112, de origen sintético, para evaluar sus efectos sobre la migración, invasión y metástasis. Los resultados obtenidos en este trabajo muestran que: • De las células estudiadas, solo las de cáncer de melanoma expresan el AT2R. • La activación del AT2R con CGP42112 inhibió la migración y metástasis de las células de cáncer de melanoma, mientras que solo disminuyó la migración de células de cáncer de mama cuando se sobreexpresó el AT2R. • Este efecto anti-migratorio en el modelo de melanoma se atribuyó a la inhibición de la vía CAV1/Rab5/Rac-1 debido a que la activación del AT2R disminuyó los niveles de pY14-CAV1 y, consecuentemente, los niveles Rab5 y Rac-1 activos. • Finalmente la disminución de los niveles de pY14-CAV1 generado por la estimulación del AT2R con el agonista específico se puede explicar por el aumento en la actividad de PTP1B, fosfatasa responsable de la desfosforilación de este residuo. Se concluye que AT2R inhibe la migración de células tumorales de melanoma mediante la inhibición de la vía CAV1/Rab5/Rac-1. / The renin-angiotensin system (RAS) includes several peptides that circulate in the bloodstream and signal through G protein coupled receptors. The AT2 receptor (AT2R) plays a key role for such peptides because its activation quenches intracellular signaling and does so by activing phosphatases. Although the RAS was initially described as a regulator of blood pressure, it has recently implicated in the development of noncomunicable chronic diseases like cancer. While some RAS receptors promote acquisition of the transformed phenotype, AT2R it is thought to predominantly antagonize such effects. However, the molecular mechanisms of AT2R participation in meastasis have not yet been defined. Studies from our research group have identified a new pathway that promotes migration, invasion and metastasis. This pathway involves the proteins Caveolin-1 (CAV1), Rab5 and Rac-1 (via CAV1/Rab5/Rac-1) and has been shown to promote metastasis in melanoma, breast and colon cancer cells. Activation of this pathway is triggered by CAV1 phosphorylation Y14 (pY14-CAV1), which then promotes the sequential activation of the downstream GTPases Rab5 and Rac-1 to promote cell migration and invasion Some reports suggest that CAV1 phosphorylation on Y14 may be modulated by the activity of AT2R. Considering that AT2R works activating