Orientador: Otto Bismarck Fazzano Gadig / Coorientador: Cristiane Schilbach Pizzutto / Banca: Rafael Mendonça Duarte / Banca: Cristiano Schetini de Azevedo / Resumo: O cação-lixa, Ginglymostoma cirratum, é um dos tubarões mais exibidos em Aquários no mundo, porém a taxa de insucesso reprodutivo desta espécie ainda é alta. Considerando a provável mediação olfativa para a sua reprodução e o potencial de enriquecimentos ambientais afetarem positivamente a reprodução de animais sob cuidados humanos, o presente trabalho objetivou avaliar se a utilização de enriquecimento olfativo geraria efeitos na exibição de comportamentos reprodutivos de cação-lixa, bem como se esse efeito seria diferencial de acordo com o sexo. Este trabalho também propôs avaliar a proximidade física como um indicativo de comportamento proceptivo de fêmeas. O estudo foi dividido em três fases (controle - sem enriquecimento; enriquecimento a curto prazo - recém aplicado; enriquecimento a longo prazo - após incorporado na rotina de manejo) e foi realizado em duas instituições com manejos distintos. O enriquecimento utilizado foi manjericão comercial (Ocimum basilicum), inicialmente apresentado na forma de bloco de gelo e, para o estudo a longo prazo, apresentado na forma de extrato. As observações comportamentais ocorreram através da amostragem focal com registro instantâneo, totalizando 120 horas de observação por animal, divididas em dois momentos (ativo e inativo). Os resultados indicam maior atividade relacionada ao período noturno e às sessões de alimentação; maior frequência de ocorrência de comportamentos reprodutivos no período inativo, no sexo masculino e nas fases ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Nurse shark, Ginglymostoma cirratum, is one of the most exhibited sharks in Aquariums in the world, however, the reproductive failure rate of this species continues high. Since there probably is an olfactory mediation for its reproduction and environmental enrichments have a potential positive effect on the reproduction of captive animals, the present study aimed to evaluate whether the use of olfactory enrichment would generate effects in the exhibition of reproductive behaviors of nurse sharks, as well as if this effect would be differential according to sex. This study also proposed to evaluate physical proximity as an indicative of proceptive female behavior. The study was divided in three phases (control - without enrichment, shortterm enrichment - recently applied, long-term enrichment - after being incorporated into the management routine) and was performed in two institutions with distinct husbandry. The enrichment used was commercial basil (Ocimum basilicum), which was initially prepared as an ice block and, for the long-term phase, presented as an extract. The behavioral observations were performed through focal sampling with instantaneous recording, totaling 120 hours of observation per animal, divided into two moments (active and inactive). Results show greater activity related to nocturnal period and feeding sessions; greater frequency of occurrence of reproductive behaviors in the inactive period, with males and during the long-term enriched phase. The proximity... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2008. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-09-11T17:59:41Z No. of bitstreams: 1 2008_ItaOliveiraSilva.pdf: 5056246 bytes, checksum: 673a63b9d3e4bcdb21a31f8ac1fbb04c (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2010-01-26T12:31:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_ItaOliveiraSilva.pdf: 5056246 bytes, checksum: 673a63b9d3e4bcdb21a31f8ac1fbb04c (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-26T12:31:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_ItaOliveiraSilva.pdf: 5056246 bytes, checksum: 673a63b9d3e4bcdb21a31f8ac1fbb04c (MD5) Previous issue date: 2008 / O sagui do cerrado ou mico estrela (Callithrix penicillata) é um primata bem descrito para suas características fisionômicas, mas as características sociais, comportamentais e reprodutivas específicas são pouco conhecidas. Poucos são os trabalhos sobre a ecologia comportamental que abordam a socialidade deste calitriquídeo. Vivendo em um ambiente com marcante variação sazonal de chuvas e seca, com reduzida oferta de recursos, acredita-se que o C. penicillata desenvolveu mecanismos comportamentais flexíveis para a reprodução. Estes mecanismos são particularmente intrigantes, quando se considera o alto custo reprodutivo para fêmeas, um sistema de acasalamento monogâmico, o cuidado da prole estendido e o sistema hierárquico em que fêmeas subordinadas não se reproduzem. Este estudo objetivou investigar os mecanismos de hierarquização social em fêmeas de C. penicillata, com ênfase nos comportamentos sociais, na exploração de recursos alimentares e uso do espaço. Dois grupos de sagüis do cerrado foram observados pelo método de animal focal e registro instantâneo, de janeiro de 2006 a outubro de 2007, em diferentes fases do dia, no Jardim Botânico de Brasília. Foi observado o comportamento alimentar, o comportamento social e o uso do espaço de três fêmeas adultas de cada grupo. No primeiro grupo, duas fêmeas, uma considerada dominante e a outra subordinada, reproduziram. No segundo grupo, somente uma fêmea reproduziu e as relações de dominância foram menos freqüentes e explícitas. Embora a primazia alimentar por parte das fêmeas reprodutoras não tenha sido estatisticamente evidenciada, dominantes utilizaram-se da primazia de acesso a recursos alimentares, realizando maiores taxas de agonismo. Em ambos os grupos ocorreu o cleptoparasitismo em um teste com suplementação artificial com bananas. Embora as fêmeas dos dois grupos, principalmente a do grupo 1, apresentem maiores níveis de agressão, diferenças no perfil hormonal (estrógenos, progesterona e cortisol) não foram observadas, num contexto geral. Reprodutoras, no entanto, possuem maiores níveis de progesterona fecal quando comparadas a não reprodutoras. Sendo assim, as reprodutoras, as quais as demandas da reprodução são maiores, devem adotar estratégias comportamentais diferenciadas para a obtenção de recursos que possam suportar o alto custo reprodutivo. Estas estratégias não se refletem no perfil hormonal e nas freqüências dos comportamentos alimentares, mas sim nos comportamentos sociais e em um uso espacial e temporal flexível dos recursos alimentares oferecidos. Na árvore de goma, o comportamento das fêmeas reprodutoras dentro de um mesmo grupo foi similar, porém a subordinada pareceu variar espaço temporalmente no uso dos recursos como a goma de forma a não disputar o mesmo recurso com a dominante. Além disso, a fêmea reprodutora parece assegurar o consumo da melhor goma a ser consumida por chegar primeiro à arvore e por utilizar preferencialmente os locais da árvore com maior número de escarificações ativas e mais seguras em relação a predadores. Fases de maiores e menores demandas energéticas, devido ao alto custo reprodutivo, não alteram o comportamento das fêmeas na arvore. As fêmeas apresentaram comportamentos e uso do espaço semelhantes em ambas as estações, com exceção de que o comportamento parado foi maior na estação seca. A área de uso parece ser bem delimitada para cada grupo e não parece sofrer variações em função da sazonalidade. Maiores freqüências do comportamento parado na estação seca podem estar relacionadas a fatores como a termoregulação ou a predação. As freqüências para cada um dos comportamentos realizados pelas fêmeas parecem indicar que cada animal possui uma estratégia individual diante das oscilações ambientais e sociais Estudos abordando as relações entre o comportamento de machos e fêmeas, outros aspectos fisiológicos (peso, hemograma, parasitologia) e ainda o grau de parentesco entre os animais de um determinado grupo e entre grupos que utilizam uma mesma área podem auxiliar na complementação dos resultados aqui descritos. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Cerrado or black tufted-ear marmoset (Callithrix penicillata) is a well described primate in terms of its physical characteristics, but its social, behavioral and reproductive characteristics are not well known. There are few studies of this calitrichid concerning its behavioral ecology related to sociality. Living in an environment with striking seasonal climatic variation (rainy and dry periods), with reduced food resources, it is believed that C. penicillata developed flexible behavioral mechanisms for reproduction. These mechanisms are remarkable, considering the high cost of reproduction for females, the monogamous mating system, the extended care of offspring and the hierarchical system wherein subordinate females do not reproduce. The objective of this study was to investigate the mechanisms of social stratification for C. penicillata females, with an emphasis on social behavior, exploration of food resources and use of space. Two groups of black tufted-ear marmosets were observed through the focal animal and instantaneous scan methods, from January 2006 to October 2007, in different moments of the day, in Brasilia’s Botanical Garden. Foraging and social behavior and the use of space by three adult females of each group were observed. In the first group, two females reproduced, one of them considered dominant and the others subordinates. In the second group, only one female reproduced, and the dominance relationship was observed less frequently and seemed less explicit. Despite the fact that the dominant females of both groups, particularly of Group 1, showed high levels of agonistic behavior, no differences in hormonal profile (estrogens, progesterone and cortisol) among individual females were observed. Reproductive females, however, showed higher fecal progesterone levels compared to non-reproductive females. Reproductive females, with high energetic requirements related to reproduction, have to adopt different behavioral strategies to gain the food resources needed. These strategies seem not to reflect on hormonal profile and feeding behavior frequencies, but rather in social behavior and flexible spatial and temporal use of the food resources. On the exudate tree, behaviors of reproductive females within the group were similar, but the subordinate female seemed to vary the use of resources (i.e., gum), in space and through time, in order to decrease the competition for the same resource with the dominant. Moreover, the reproductive female seems to guarantee the use of better gum because she arrives first on the tree and uses preferential sites, with a higher number of active bark scrapings and that may be more protected from predators. Phases of higher or lower energy consumption, due to reproductive costs appear not to change the behavior of females in the exudate tree. Females presented similar behaviors and home range use during both rainy and dry seasons, but “inactive” behavior (i.e., stop) was highest during the dry season. Home range seems well marked for each group and did not vary as a function of seasonality. The highest frequencies of inactive behavior, during the dry season, may be related to factors such as thermoregulation and protection from predators. The behavioral frequencies for each female seem to indicate that each animal presents individual strategies because of environmental and social variations. Studies showing the relations between male and female behaviors, physiological factors (weight, hemogram, parasitology) and genetic relatedness between the animals within and between groups using the same area will help to complement the results described in the present study.

O presente trabalho constou de três estudos. No primeiro estudo, cinco ejaculados de 30 machos foram analisados conforme a manutenção da MOT a 17ºC, sendo classificados em três tipos: MOT <60% nas 72h (EI); MOT ≥60% nas 72h e <60% nas 144h (EII) e MOT ≥60% nas 144h (EIII). Doze machos foram selecionados e distribuídos em três grupos: MAIOR, MÉDIA e MENOR sensibilidade espermática ao resfriamento. Em seguida, foram coletados cinco ejaculados de cada macho, sendo a MOT avaliada a cada 24h, e a integridade da membrana espermática (IM) e de acrossomas normais (NAR) nas 24, 72, 120 e 168h. Machos menos sensíveis ao resfriamento apresentaram menor variação na MOT do período pré- para o pós-seleção. Diferenças entre os machos foram observadas desde as 24 até 168h para MOT, nas 120 e 168h para MI e nas 72 e 168h para NAR. A MOT foi mais afetada que MI e NAR durante o armazenamento do sêmen in vitro. No estudo 2 foi avaliada a possibilidade de reverter a sensibilidade espermática ao resfriamento pela troca de plasma seminal (PS) entre machos com diferente manutenção da MOT a 17ºC. Foram utilizados ejaculados de cinco cachaços selecionados e classificados como: menor (MES) e maior sensibilidade ao resfriamento (MAS). Foram utilizados seis tratamentos, com cinco repetições cada. Nos tratamentos T1 e T3, o sêmen dos machos MES e MAS, respectivamente, foram processados de acordo com o protocolo convencional. Foi efetuada centrifugação (800g por 10 min) e adição do PS (10mL) homólogo para os espermatozóides MES e MAS, respectivamente, nos T2 e T4. Após a centrifugação, foi realizada a troca do PS, sendo que espermatozóides dos machos MES foram expostos ao PS dos machos MAS (T5) e o PS dos machos MES foi adicionado aos espermatozóides dos machos MAS (T6). A MOT foi avaliada a cada 24h, durante sete dias de conservação. NAR e de IM foram avaliados nas 24, 72, 120 e 168h. Diferenças na MOT, entre os machos MES (T1) e MAS (T3), foram observadas após armazenamento de 48h. Não foram observadas alterações em MOT e IM, quando foi efetuada a troca de PS entre os machos MES e MAS. Não foi possível reverter a maior sensibilidade ao resfriamento de espermatozóides suínos, após a ejaculação, com a adição de 10% do PS de machos com sêmen de menor sensibilidade. No terceiro estudo, foi avaliada a fertilidade de sêmen suíno pelo teste de ligação de espermatozóides a um substrato sintético. A MOT e o percentual de espermatozóides ligados (PEL) foram avaliados nas 5, 24, 48 e 72 horas de armazenamento a 17ºC. O PEL foi determinado em soluções contendo 6,25 ou 12,5 milhões de espermatozóides/mL, com ou sem albumina sérica bovina (BSA), preparadas a partir de dois a cinco ejaculados de cada um dos quatro machos. Houve correlação positiva (r=0,33) entre a MOT e o PEL. Os machos diferem quanto à capacidade de ligação de seus espermatozóides ao substrato sintético, a partir de 24 horas de armazenamento do sêmen. Maior percentual de espermatozóides ligados ao substrato sintético é verificado com a inclusão de BSA e com o aumento da concentração espermática.

O trabalho foi realizado, no período de outubro a dezembro de 1996. Foram utilizadas 80 fêmeas híbridas F1, oriundas de cruzamentos de Landrace e Large White distribuídas aleatoriamente em quatro tratamentos: T1 – fornecimento de ração sem glicose e de forma restrita, 2 kg ao dia (duas vezes ao dia); T2 – fornecimento de ração sem glicose e à vontade; T3 – fornecimento de ração com 20% de glicose e de forma restrita, 2 kg ao dia (duas vezes ao dia), e, T4 – fornecimento de ração com 20% de sacarose, à vontade. Como fonte de glicose foi utilizado o açúcar cristal. A ração continha 3.150 kcal/Kg de E.D., 14%, de proteína bruta, 0,65 de lisina, 0,9% de cálcio e 0,45% de fósforo disponível. Todas as fêmeas foram pesadas individualmente ao alojamento e na apresentação do 10 e do 20 estro. Os tratamentos foram aplicados no momento em que as fêmeas manifestaram o 10 estro e terminaram quando estas apresentaram o 20 estro. As fêmeas foram inseminadas artificialmente (IA) no 20 estro e abatidas 28-34 dias após para a contagem do número de ovulações e número de embriões viáveis. Foram analisados, os dados referentes à taxa de prenhez, a taxa de sobrevivência embrionária e a taxa de retorno ao estro. A taxa de ovulação das fêmeas do T4 foi superior aquelas das fêmeas dos T1 e T3 (respectivamente 17,80; 15,26; 15,60) (p0,01). T4 foram diferentes quanto ao número de embriões viáveis daquelas do T1 (1,94 a mais; p0,03), do T2 (1,27 a mais; p0,05) e do T3 (3,6 a mais; p0,01). Na análise do contraste ração restrita (T1 e T3) vs. ração à vontade (T2 e T4), foi observada um aumento do número de ovulações (15,38 vs 17, 34, respectivamente; p<0,01) e também no número de embriões viáveis (11,52 vs 13,64, respectivamente; p<0,04). As fêmeas que receberam ração com açúcar (T3 e T4) não diferiram (p>0,05) dos que receberam ração sem açúcar (T1 e T2), nas variáveis estudadas. O arraçoamento à vontade, independente da adição de sacarose, foi efetivo no aumento do número médio de ovulações e número médio de embriões viáveis. Apesar do maior número de ovulações, a taxa de sobrevivência embrionária não foi diferente entre os tratamentos. As taxas de prenhez e retorno ao estro também não apresentaram diferenças as fêmeas dos diferentes tratamentos.

Este trabalho teve três objetivos principais: a) Estabelecer valores de referência para os parâmetros bioquímicos e hematológicos do jundiá cultivado em açude; b) Determinar a CL50 da cipermetrina ao jundiá, bem como verificar o efeito nos parâmetros sangüíneos; c) Determinar as características físicas e químicas do sêmen do jundiá. Os animais foram obtidos de açudes de um Produtor de Peixes em Rolante, RS e conduzidos ao Laboratório do ICBS, UFRGS, onde permaneceram em tanques de 500l. O sangue era obtido por punção do vaso caudal através de seringa descartável, transferidos a tubos com e sem EDTA 10%, e os testes bioquímicos e hematológicos realizados no HCPA. Para a avaliação da CL50 da cipermetrina no jundiá grupos (n ≥10) de animais foram tratados com a exposição a 8 diferentes concentrações de cipermetrina (ppm) (0:controle; 0,08; 0.1; 0,12; 0,16; 0,2; 0,24; 0,36). Os peixes foram observados após 24, 48, 72 e 96h do início do tratamento para avaliar o percentual de mortalidade. No estudo do estresse metabólico, grupos (n ≥6) receberam os tratamentos: ausência de exposição ao pesticida (controle) e duas doses (0.08 e 0.12 ppm) de cipermetrina. Foram feitas coletas de sangue antes, após 2, 4 e 8 dias da aplicação do pesticida para análise no HCPA. Para o estudo do sêmen, este foi obtido em diferentes períodos durante as 4 estações. A densidade espermática foi medida pela técnica do espermatócrito e pela contagem microscópica. A duração da motilidade espermática foi observada num microscópio, usando para interpretação uma escala arbitrária variando de 0 a 5. Parte do sêmen foi centrifugado para a obtenção do fluido seminal, o qual foi imediatamente congelado a –200C até análise no HCPA Com a concentração 0,12 ppm as variações bioquímicas foram incrementadas e já se observaram alterações nos movimentos e no equilíbrio. Em estações de aqüicultura, produtores podem realizar avaliação periódica em uma pequena população de seus peixes, quantificando o grau de estresse metabólico. Esses indicadores de estresse podem ser precocemente detectados apesar da aparência exterior e comportamentos normais dos peixes. A técnica para a medida da densidade espermática através do espermatócrito apresentou correlação com a contagem celular por microscópio, com a vantagem de ser mais simples, rápida e econômica. As características que foram encontradas no sêmen parecem ser bons indicadores da qualidade espermática e podem auxiliar na seleção de machos doadores de gametas de alta qualidade em sistemas de cultivo deste peixe.

O objetivo do presente trabalho foi avaliar, por meio de uma abordagem metaanalítica, quais os principais fatores relacionados ao peso corporal e ao ganho de peso na recria da novilha que influenciam a taxa de prenhez aos 18 meses. Para tanto, foram utilizados, de forma agregada, dados de 1.398 novilhas de corte, provenientes de seis experimentos. As informações relacionadas à metodologia e aos resultados de cada trabalho foram tabuladas em planilha do Microsoft Excel, constituindo a sistematização dos dados. As variáveis independentes analisadas foram: peso aos sete meses (P7M), ganho de peso diário dos sete aos doze meses (GPD7-12), peso aos doze meses (P12M), o ganho de peso diário dos doze aos quinze meses (GPD12-15), peso aos quinze meses (P15M), ganho de peso diário dos quinze aos dezoito meses (GPD15-18), ganho de peso diário dos sete aos dezoito meses (GPD7-18), peso aos dezoito meses (P18M). A variável resposta foi a taxa de prenhez (TP). O P18M e o GPD7-18 apresentaram alta correlação (r= 0,681 e r= 0,857) com a TP (p<0,05), além de uma alta correlação entre si (r= 0,981, p<0,05). As demais variáveis apresentaram baixa correlação com a TP. O peso ao início do acasalamento e o ganho de peso dos sete aos dezoito meses são as variáveis mais importantes na determinação da taxa de prenhez em novilhas acasaladas ao sobreano no outono. De acordo com os resultados obtidos, o peso ao desmame e as variáveis relacionadas aos pesos e ao ganho de peso nas etapas intermediárias da recria não são bons indicadores na determinação da taxa de prenhez. Altas taxas de prenhez podem ser obtidas desde que o ganho de peso na recria seja suficiente para que novilha atinja o peso mínimo aos 18 meses, independente do momento em que ocorre esse ganho. / The purpose of this research was to evaluate, through a meta-analysis approach, the main factors related to body weight and weight gain of rearing heifers which affect pregnancy rate at 18 months. Therefore, it had been used, in an aggregate form, data from 1,398 beef heifers deriving from six experiments. Information regarding the methodology and results of each of the experiments were tabulated in Microsoft Excel spreadsheet, making the systematic data. Independent variables analyzed were: weight at seven months-old (W7M), daily weight gain from seven to twelve months old (DWG7- 12), weight at twelve months-old (W12M), daily weight gain from twelve to fifteen months old (DWG12-15), weight at fifteen months-old (W15M), daily weight gain from fifteen to eighteen months old (DWG15-18), daily weight gain from seven to eighteen months old (DWG7-18), weight at eighteen months (W18M). The response-variable was pregnancy rate (PR). W18M and DWG7- 18 showed high correlation (r= 0.681 e r= 0.857) with PR (p<0.05) and between themselves (r= 0.981, p<0.05). The other variables showed low correlation with PR. Weight at first mating and daily weight gain from seven to eighteen months old are the most important variables affecting pregnancy rate of heifers mated at 18 months old in the autumn. According with the obtained results, weaning weight and variables related to weight gain in the post-weaning period are not the appropriate indicators to predict pregnancy rate. Higher pregnancy rates can be obtained whereas enough post-weaning weight gain and minimum weight at first mating are reached, irrespective of when this gain are obtained.

Sendo o tamanho corporal uma importante variável nos sistemas de produção pecuária no Brasil, analisaram-se os desempenhos de machos e fêmeas da raça Hereford, de diferentes tamanhos corporais, desde a desmama ao abate dos machos e ao primeiro parto nas fêmeas. Os animais foram classificados em escalas de FRAME, sendo 1, 2 e 3 chamados posteriormente de Pequenos, Médios e Grandes, respectivamente. As avaliações mensais foram capazes de mostrar diferenças de desenvolvimento e desempenho tanto em machos quanto em fêmeas em determinadas épocas do ano. As variáveis analisadas nas fêmeas foram peso e condição corporal durante todo o trabalho, variação de peso, altura da garupa, taxa de prenhez e idade ao primeiro parto. Nos machos, por sua vez, as variáveis analisadas, da desmama ao abate, foram peso, altura da garupa, variação de peso, peso de abate e características de carcaça, além do peso dos cortes comerciais e seus rendimentos. As diferenças encontradas entre as fêmeas Pequenas, Médias e Grandes, existentes em alguns parâmetros avaliados não foram capazes de afetar a taxa de prenhez aos 14 meses de idade. As diferenças de tamanhos corporais afetaram a idade à concepção, sendo as Pequenas e Médias mais jovens, porém as relações entre tamanho corporal e desempenho reprodutivo de fêmeas não ficaram totalmente evidenciadas, provavelmente pela pequena diferença entre tamanhos corporais dos animais do rebanho avaliado. Nos machos, foram determinadas diferenças de desempenho e desenvolvimento com magnitudes variadas conforme a época do ano. As diferenças de peso oscilaram em 30kg entre grupos. O tamanho corporal afetou o peso de abate, peso de carcaça quente e de alguns cortes comerciais. As diferenças encontradas, embora por vezes significativas, podem estar atribuídas à proximidade de tamanho dos grupos. Esta proximidade de tamanhos, apenas um a dois pontos na escala BIF, não permitiu observar maiores diferenças. / As the body size an important variable in livestock production systems in Brazil, analyzed the performance of males and females of Hereford, of different body sizes, from weaning to slaughter the males and in females at first calving. The animals were classified into FRAME scales, with 1, 2 and 3 later called the Small, Medium and Large, respectively. The monthly evaluations were able to show differences in development and performance in both males and females in at certain times of the year. The variables analyzed were in females weight and body condition during the whole experiment, changes in weight, hip height, pregnancy rate and age at first birth. In males, in turn, the variables analyzed, from weaning to slaughter, weight, hip height, weight variation, slaughter weight and carcass traits, along with the weight of retail cuts and their income. The differences between females Small, Medium and Large, in certain parameters were not able to affect the pregnancy rate at 14 months of age. Differences in body size affected the age at conception, and the Small and Medium younger, but the relationships between body size and reproductive performance of females were not fully observed, probably due to the small difference between body sizes of animals in the herd assessed. In males, were certain differences in performance and development with magnitudes varied depending on the season. The weight differences between groups ranged in 30kg. The body size affect the slaughter weight, hot carcass weight and some commercial cuts. The differences found, although sometimes significant, can be attributed to the proximity of group size. This proximity of sizes, just two points on a scale BIF, not allowed to observe major differences.

Apesar dos avanços nos procedimentos de maturação, fecundação e cultivo in vitro a porcentagem de embriões produzidos capazes de se desenvolver até o estágio de blastocisto ainda é reduzida. Segundo Gilchrist et al. (2010) um dos principais fatores que afeta esta taxa de desenvolvimento embrionário é a incompetência do oócito em realizar a maturação. Com o objetivo de aumentar esta eficiência, têm-se estudado a interação entre fatores secretados pelos oócitos e a maturação oocitária. O objetivo deste experimento foi determinar as taxas de clivagem e de desenvolvimento embrionário até blastocisto, a partir de dois procedimentos de adição às gotas de MIV de oócitos desnudos (ODs). Os complexos Cummuli oócitos (CCOs) foram obtidos mediante punção de folículos com diâmetro entre 2 e 8 mm. Os CCOs que apresentaram cummulus compacto e citoplasma homogêneo foram selecionados para maturação e desnudamento. Os CCOs foram maturados em gotas de 50μL de meio de maturação (Meio TCM 199 modificado) sob óleo mineral e incubados a 38,5 oC em estufa com atmosfera de 5% de CO2 em ar e umidade relativa saturada. Aqueles selecionados para serem desnudos, permaneceram em TCM Holding [Meio 199 modificado]. Os oócitos foram desnudos com o auxilio de uma pipeta de vidro estirada em fogo. Os CCOs permaneceram 9 horas em meio de maturação quando foram colocados em cocultivo, respeitando-se a densidade de 0,5 ODs/μL. Parte dos CCOs foram postos nas gotas de maturação onde se encontravam os ODs (Grupo 1) e outra parte recebeu os ODs em suas gotas de maturação (Grupo 2). Os grupos Controle 50μL e Controle 100μL permaneceram em meio de maturação. Todos os grupos, experimentais e controles, permaneceram em maturação por 24 horas. A fecundação com sêmen reaquecido foi realizada durante 20 horas nas mesmas condições atmosféricas da maturação. As estruturas foram cultivadas em SOFm em gotas de 80μL, sob óleo mineral e foram mantidas a 38,3ºC em estufa de cultivo com atmosfera de 5% O2, 5% CO2 , 90% N2 e umidade relativa saturada. As taxas de clivagem foram avaliadas em D2 enquanto as taxas de blastocisto foram avaliadas em D7. Foram realizadas seis repetições. Os resultados foram analisados aplicando-se o teste do Qui-quadrado, para P<0,05. As taxas de clivagem não diferiram entre os grupos (C 100μL: 68,53%; C 50μL: 69,56%; G 1: 66,19%; G 2: 68,05%). Porém comparação das taxas de blastocisto obtidas entre os grupos houve diferença significativa. O grupo 2 mostrou-se superior quando comparado ao grupo controle de 50μL (23,38% e 13,04%, respectivamente).Os demais grupos não diferiram entre si (C 100μL: 14,60%; G1: 18,30%). Os resultados nos permitem concluir que a adição de ODs que secretaram FSOs ao meio de maturação não alterou as taxas de clivagem, mas promoveu maiores taxas de desenvolvimento embrionário ao estágio de blastocisto quando os ODs foram adicionados às gotas que já continham os CCOs. / In vitro maturation of oocytes, fertilization and development of blastocysts has been achieved in several species, however the rate of blastocyst development is still limited. According Gilchrist et al. (2010) this efficiency is limited by the oocyte competence. To improve these results, some research groups have studied the interaction among factors secreted by oocytes and oocyte maturation. The aim of our experiments was to determine the cleavage and blastocyst rates, from two procedures of addition of denuded oocytes (DOs) to IVM droplets medium. The Cumulli-oocyte complexes (COC) were recovered by aspiration of 2 to 8mm follicles using a 18 G needle. Oocytes with a compact Cumulus cells (CC) and homogeneous cytoplasm were selected for maturation and denudation. The COC were matured in 50 μL drops in TCM199 medium modified under mineral oil at 38.5oC in an humidified atmosphere of 5% CO2 in air. Denuded oocytes were generated by removing CCs from COCs by repeated passage of the oocytes through a fire-pulled glass pipette. The COCs remained 9 hours in IVM when they were placed in co-culture, respecting the density of 0.5 DOs/μL. COCs were randomly allocated into 2 treatment groups during IVM: group 1, COCs were placed into maturation medium droplets in which there were the DOs; group 2, DOs received the COCs into their maturation medium droplet. All groups, experimental and control, remained into IVM medium for 24 hours. Fertilization was performed with frozen-thawed semen and the oocytes were incubated with sperm for 20 hours into the same atmospheric conditions of IVM. The presumptive zigots were in vitro cultured (IVC) in SOFm in an humidified atmosphere 5% O2, 5% CO2 e 90% N2. Cleavage rates were evaluated in D2 while the blastocyst rates were evaluated in D7 after insemination. Six replicates were realized.The results were analyzed applying the chi-square, for P ≤ 0.05. The cleavage rates did not differed among the groups C 100μL: 68.53%; C 50μL: 69.56%; G 1: 66.19%; G 2: 68.05%). However, there was a significant difference on blastocyst rate. Group 2 was better than control group 50μL (23.38% e 13.04%, respectively). The other groups did not differ from each other (C 100μL: 14.60%; G1: 18.30%). In conclusion, the addition of FSOs to maturation medium did not modified the cleavage rates, but promotes more efficiently embryo development rates to the blastocyst stage when DOs are added to the drops that already contained the COCs.

O trabalho constou de 3 experimentos com a finalidade de avaliar a influência de três diluentes sobre a motilidade e integridade da membrana espermática e de dois diluentes sobre o desempenho de fêmeas inseminadas com sêmen armazenado, no máximo, por 48h. Nos experimentos I e II, as doses de sêmen de 100 e 80 mL, contendo 3 e 2,5 bilhões de espermatozóides, respectivamente, foram mantidas sob resfriamento a 17ºC por um período de 144h. No experimento III os diluentes utilizados foram o BTS e Androhep® Enduraguard™. Os parâmetros de avaliação da qualidade do sêmen foram os percentuais de motilidade (Mot) e de membranas íntegras (MI), no experimento I, e Mot no experimento II. No experimento III, foram avaliados as taxas de retorno ao estro (TRE), de parto (TP), de parto ajustada (TPA), número de leitões nascidos totais (NT), nascidos vivos (NV), natimortos (NM) e mumificados (MM). Foram coletados 5 ejaculados de 5 machos para o experimento I e 3 a 18 ejaculados de 18 machos para os experimentos II e III. No experimento III, foram inseminadas 882 fêmeas com ordem de parto entre 1 e 8. No experimento I foram comparados três diluentes: BTS (T1); Androhep® Enduraguard™ (T2) e Androhep® (T3). Houve uma diminuição (P<0,05) na Mot do T1 em relação ao T2 e T3 já nas 48h. Quanto à MI, T1 e T3 apresentaram percentuais médios superiores (P<0,05) ao T2. No experimento II, foram comparados dois diluentes: BTS (T1) e Androhep® Enduraguard™ (T2). Não houve diferença (P>0,05) para Mot entre T1 e T2, em nenhum momento de avaliação. No experimento III foram avaliados dois diluentes: BTS (T1) e Androhep® Enduraguard™ (T2). Não houve diferença (P>0,05) na TRE, TP, TPA, NT, NV, NM e MM entre os tratamentos. Apesar do sêmen diluído em BTS ter apresentado motilidade inferior aos outros dois diluentes, no experimento I, isto não ocorreu no experimento II. O desempenho das fêmeas inseminadas com sêmen armazenado até 48h não foi influenciado pelo diluente utilizado (BTS ou Androhep® Enduraguard™).

A técnica de transferência nuclear é uma ferramenta que possibilita a produção de embriões clones que podem ser utilizados tanto na clonagem reprodutiva, proporcionando o nascimento de produtos, como modelo para o estudo de diversos mecanismos fisiológicos durante o desenvolvimento embrionário. Este trabalho teve como objetivos a otimização da técnica de clonagem no Laboratório de Embriologia e Biotécnicas de Reprodução (FAVET, UFRGS), avaliar a taxa de sucesso da clonagem interespécie, e testar e eficiência da utilização de oócitos vitrificados como citoplasmas receptores para a reconstrução dos embriões clones, sendo realizado em três etapas. A primeira teve por objetivo o estabelecimento da técnica de clonagem, bem como sua otimização nas nossas condições, dando condições para que os experimentos subseqüentes pudessem ser realizados. Para isto foram realizados experimentos in vitro comparando diferentes meios de manipulação, sistemas de ativação química, meios de cultivo e fontes protéicas no cultivo dos embriões, e células oriundas de diferentes origens e animais como doadores de núcleo. Os resultados obtidos in vitro alcançaram taxas de 64,7% de clivagem e de 19,5% de blastocistos. Um grupo de embriões foi transferido para receptoras (n=24), e foram observadas 54,2% de prenhezes aos 35 dias, 8,3% de prenhezes aos 260 dias e 4,2% de nascimentos. Os resultados obtidos in vitro alcançaram taxas de 64,7% de clivagem e de 19,5% de blastocistos. Um grupo de embriões foi transferido para receptoras (n=24), e foram observadas 54,2% de prenhezes aos 35 dias, 8,3% de prenhezes aos 260 dias e 4,2% de nascimentos.A segunda parte dos experimentos teve por objetivo a produção de clones interespécies utilizando o citoplasma bovino como receptor para células ovinas, caprinas e suínas. As taxas de clivagem nos grupos NTSCi ovino (60,3%), caprino (68,4%) e suína (57,1%) não diferiram dos grupos controles NTSC bovino. A taxa de blastocisto observada nos embriões NTSCi ovinos (10,3%) foram semelhantes às taxas observadas no grupo NTSC bovino (12,7%). No grupo NTSCi caprino, 5,3% dos embriões chegaram ao estádio de blastocisto, enquanto que no grupo NTSCi suíno não houve desenvolvimento até o estádio de blastocisto. Na terceira parte do trabalho, experimentos visando a utilização de oócitos vitrificados imaturos com citoplasma receptor foram realizados. Foram submetidos a maturação 764 complexos cumuli-oócitos vitrificados, e 73,0% destes foram recuperados após o desnudamento e 46,8% apresentavam corpúsculo polar, taxas significativamente inferiores às observadas nos oócitos não vitrificados (91,4% e 65,8%, respectivamente). As taxas de sobrevivência após a micromanipulação (77,8%), taxa de fusão (82,1%) e de sobrevivência após a ativação (79,9%) do grupo vitrificado não apresentaram diferença significativa com o grupo controle não vitrificado. As taxas de blastocistos também não apresentaram diferença entre os grupos vitrificado e não vitrificado (16,7% e 23,4%) respectivamente. Em resumo, os resultados deste trabalho demonstraram que oócitos bovinos frescos ou vitrificados, nas nossas condições estabelecidas, foram capazes de suportar o desenvolvimento de embriões clones bovinos até o estádio de blastocisto ou a termo, e proporcionam citoplasmas compatíveis para o desenvolvimento de embriões clones interespécie até o estádio de blastócito. / Somatic cell nuclear transfer (NTCS) procedures is a valuable tool for the production of clone embryos for use in reproductive cloning, by providing the birth of live animals, and for use as a research model, allowing the study of physiologic mechanisms during the embryonic development. This work aimed to optimize cloning procedures at the Embryology and Reproductive Technology Laboratory (FAVET, UFRGS), to evaluate the success rate of interspecies cloning, and to test the effectiveness of vitrified oocytes as recipient cytoplasm for embryo reconstruction, being carried out in three stages. The first stage was focused on the establishment of the cloning technique and the optimization of procedures and conditions in the lab so that the subsequent experiments could be accomplished. Thus, in vitro experiments were performed to compare different manipulation media, chemical activation systems, manipulating media, source of protein supplementation to the embryo culture media, and distinct cell types and genotypes. The mean cleavage and blastocyst rates obtained after conditions were optimized were 64.7% and 9.5%, respectively. Pregnancy rates on Days 35 and 260 of gestation and calving rate at term following the transfer of a group of embryos to synchronous recipient cows (n=24) were 54.2%, 8.3% and 4.2%, respectively. The second stage of the study evaluated the success rate of the production of interspecies clones (NTSCi) using the bovine oocyte as recipient cytoplasm for transferred nuclei from ovine, caprine or porcine cells. Cleavage rates using ovine (60.3%), caprine (68.4%) and porcine (57.1%) nuclei did not differ from controls (bovine nuclei). Blastocyst rates observed for NTSCi embryos using ovine nuclei (10.3%) were similar to those observed in the bovine NTSC group (12.7%). The NTSCi-caprine group reached a 5.3% blastocyst rate, whereas no development to the blastocyst stage was observed when using porcine cells as nucleus donor. In the third stage of this work, experiments evaluated the efficiency of vitrified bovine oocytes as recipient cytoplasms for cloning by TNCS. Following vitrification and warming, 764 cumulus-oocyte complexes were in vitro-matured. A total of 73.0% was recovered after cumulus removal, with 46.8% presenting visible polar bodies, which were significantly lower than rates observed in non-vitrified oocytes (91.4% and 65.8%, respectively). However, survival rates following micromanipulation (77.8%), fusion rates (82.1%) and survival after activation (79.9%) of oocytes were not different from the control group (non-vitrified oocytes). In addition, blastocyst rates did not differ between vitrified and non-vitrified groups (16.7% and 23.4%, respectively). In summary, results from this study demonstrated that fresh or vitrified bovine oocytes, under our optimized conditions, were able to support development of bovine clone embryos to the blastocyst stage or to term, and provided a compatible cytoplasm for the development of interspecies clone embryos to the blastocyst stage.