Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-12-11Bitstream added on 2014-06-13T19:58:12Z : No. of bitstreams: 1 couto_eb_me_botfca.pdf: 859715 bytes, checksum: 112956f8c222cc32cb4262cfa4afff81 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Empresa Privada / O psilídeo-de-concha Glycaspis brimblecombei é uma praga originária da Austrália, sendo detectado no Brasil em junho de 2003, na região de Mogi-Guaçu, SP. O ataque da praga causa descoloração das folhas, redução da área fotossintética com conseqüente redução no crescimento e secamento dos ponteiros, podendo levar as árvores à morte após ataques sucessivos. Devido à facilidade de dispersão deste inseto e aos danos causados em plantações de Eucalyptus, é considerada uma das principais pragas do eucalipto.Além do controle biológico com o parasitóide, há relatos de uso de inseticidas químicos e de espécies de eucalipto resistentes ou mesmo imunes ao psilídeo-de-concha. Entretanto, os mecanismos dessa resistência ainda são desconhecidos. A indução de resistência, pela ativação de indutores, como o metil jasmonato (MJ) vem sendo estudado intensamente nos últimos anos, principalmente através da seleção de genótipos com elevada capacidade de expressão de MJ. O presente trabalho teve como objetivo estudar a indução de resistência através da aplicação exógena de metil jasmonato como forma alternativa para o controle do psilídeo-de-concha. O trabalho foi realizado em condições de laboratório, utilizando mudas da espécie Eucalyptus camaldulensis e do clone híbrido de E. grandis x E. camaldulensis (gracam), sendo esses materiais escolhidos por serem altamente suscetíveis à praga. Foram realizados quatro experimentos com aplicacao de diferentes concentracoes de MJ (5, 50 e 500 ÊM) em plantas de eucalipto para avaliar o efeito na preferencia e capacidade de oviposicao dos adultos do psilideo-de-concha. No primeiro experimento verificou-se que as maiores concentracoes afetaram alguns parametros da biologia do psilideo, sendo que a testemunha apresentou maior numero de ovos e, consequentemente, maior numero de adultos produzidos. Nos dois experimentos... / Red gum lerp psyllid Glycaspis brimblecombei is an Australian eucalypt pest, being detected in Brazil in June 2003, in municipality of Mogi-Guacu, SP. The pest causes leaf fall, reduction of photosynthetic area and consequent reduction in plant growth and dieback, could carry the trees death, after successive defoliations. Due to the dispersion rates of this insect and the damages caused in eucalypt plantations, it is considered one of the eucalyptus main pests. The biological control is the main control method used, with parasitoid Psyllaephagus bliteus (Hymenoptera: Encyrtidae). Besides the biological control, there are reports of chemical insecticides applications and resistant eucalyptus species against red gum lerp psyllid. However, factors of this resistance are still ignored. The resistance induction, by elicitors activation, as methyl jasmonate (MJ) has been studied intensely in last years, mostly through the genotypes selection with high expression capacity of MJ. The work was accomplished in laboratory conditions, using young plants of Eucalyptus camaldulensis and of E. grandis x E. camaldulensis (gracam-h) hybrid clone, being these materials chosen due the high susceptibility to the pest. It was accomplished four experiments with application of different MJ concentrations (5, 50 and 500 ÊM) in eucalyptus plants to verify the effect in red gum lerp psyllid adults preference and oviposition capacity. In the first experiment it was verified that the highest concentration affected some psyllid biology parameters, and control treatment presented larger egg number and, consequently, larger number of adults produced. In the two experiments with free chance choice, independently of genetic material, it was observed the insect preference by control plants. As larger MJ concentration, less adults and eggs occurred in the leaves. In relation... (Complete abstract, click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001-12Bitstream added on 2014-06-13T19:37:31Z : No. of bitstreams: 1 frangioni_dss_me_botfca.pdf: 542597 bytes, checksum: 287866285220c5f30edfb16af2d32683 (MD5) / No período de 1998 à 2001, 17 amostras de pimentão ‘Magali-R’ (Capsicum annuum L.) com sintomas de mosaico sistêmico, nanismo, deformação foliar e dos frutos, causando severos danos e perdas econômicas, foram coletadas nas regiões produtoras de Paulínia, Lins, Jacareí, Guaiçara e Lucianópolis, municípios do Estado de São Paulo. Essas amostras foram caracterizadas através de círculo de hospedeiras, DAS-ELISA com o emprego de anticorpo monoclonal contra o CMV-I e CMV-II. Um isolado de cada região foi caracterizado molecularmente, quanto ao subgrupo através da RT-PCR e RFLP com a endonuclease de restrição MspI. As amostras foram inoculadas em plantas indicadoras que reagiram com sintomas típicos do Cucumber mosaic virus (CMV), entre estas, Nicotiana glutinosa demonstrando mosaico sistêmico e ausência de necrose, indicou que os isolados do CMV, em estudo, pertenciam ao subgrupo I. N. glutinosa foi utilizada para manter os isolados, para os testes de ELISA, extração de RNA total e como multiplicadora do vírus para a purificação. Todos os isolados testados no DAS-ELISA reagiram positivamente ao anticorpo monoclonal específico para o CMV-I e negativamente para o CMV-II. Os isolados 1, 3, 4, 15 e 17 foram amplificados com sucesso através da RT-PCR, e produziram um fragmento de 486 pb, tamanho esperado para o subgrupo I. Fragmento que ao ser digerido pela MspI, resultou em duas bandas de 150 e 336 pb, padrão esperado para o CMV-I. O método utilizado na purificação foi eficiente, resultando em uma preparação do CMV purificado, cujo rendimento foi de 40 mg/kg de tecido infectado, permitindo a imunização de galinhas e a produção de um antissoro policlonal específico à partir das gemas dos ovos. O antissoro apresentou alto título em ELISA indireto. A triagem de genótipos de pimentão para a resistência ao CMV... . / During the years 1998 to 2001, 17 samples of sweet peppers ‘Magali- R’ (Capsicum annuum L.) showing systemic mosaic, stunt, leaf and fruit distortion, causing severe damage and economic losses, were collected from Paulínia, Lins, Jacareí, Guaiçara and Lucianópolis, regions of São Paulo State. These samples were characterized by host range and DAS-ELISA with monoclonal antibodies against CMV I and CMV II. One isolate from each region was also characterized by RT-PCR and RFLP with restriction enzyme MspI. The plants host range revelead the presence of the Cucumber mosaic virus (CMV) in all samples. The symptom reaction in Nicotiana glutinosa was sistemic mosaic without necrosis, indicating that all CMV isolates belongs to subgroup I. The CMV isolates were also propagated and mantained in this host for the ELISA test and total RNA extration. All isolates tested by DAS-ELISA reacted positively with CMV I specific monoclonal antibodies and negatively with CMV II. The isolates 1, 3, 4, 15 e 17 were successfully amplified by the RTPCR and produced a fragment of 486 pb, the expected size for CMV subgroup I. These fragments when digested by MspI produced two bands of 150 and 336 pb, restriction pattern expected for the CMV subgroup I. Purified CMV yielding was 40mg/kg of infected leaves. The method used was efficient to produce a good purified preparation utilized to immunize chickens that produced specific antiserum with high titer. Screening of sweet peppers resistance to CMV showed immunity of AF-97A and tolerance of AF-188, AF-1178, AF-98 A, AF-99 A and AF-136 A. The hybrid progenies Lamuyo, Reinger, Mayata, Mônica, Magali, Mikalor, Esterel, Melody and “All Big” cultivar showed immune plants. These results are promising to sweet pepper breeding for resistance to CMV.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-19Bitstream added on 2014-06-13T19:03:36Z : No. of bitstreams: 1 dabbas_km_dr_jabo.pdf: 775861 bytes, checksum: a48c491be161977f84f0e0e6a52a14a7 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A escaldadura da folha se destaca dentre as principais doenças que acometem a cultura da cana-de-açúcar no Brasil, provocando prejuízos em função da diminuição da produtividade e necessidade de troca precoce dos canaviais, principalmente nas variedades suscetíveis. A doença é causada pela bactéria Xanthomonas albilineans que coloniza o xilema da planta. O principal sintoma da doença é caracterizado por uma faixa clorótica que acompanha a nervura central da folha resultante da ação da fitotoxina albicidina que inibe a replicação de DNA dos cloroplastos. Os métodos de controle se baseiam no uso de variedades resistentes por meio de melhoramento genético. Diante deste fato, o objetivo do trabalho foi estudar os mecanismos moleculares envolvidos no processo de defesa de duas variedades de cana-de-açúcar, uma resistente (SP82-1176) e outra suscetível (SP78-4467), contra a infecção por X. albilineans. Para esta finalidade foi realizado um ensaio experimental seguindo uma cinética de infecção com intervalos de coleta de 6, 48 e 120 horas após a infecção com a fitobactéria. O perfil de expressão gênica foi avaliado por meio da utilização de um macroarranjo contendo 3.575 cDNAs de duas bibliotecas de folha (LV e LR) provenientes do projeto SUCEST. Os dados gerados pelas análises estatísticas evidenciaram que 473 genes foram diferencialmente expressos (induzidos ou reprimidos) na interação entre as variedade, 472 genes durante o tratamento e 994 genes foram diferencialmente expressos ao longo da cinética de infecção. Foi possível identificar genes pertencentes a famílias de fatores de transcrição como WRKY e Myb assim como proteínas envolvidas com processos de detoxificação de espécies reativas de oxigênio como as peroxidaes e outras proteínas relacionadas com mecanismos de defesa. Os dados mostram... / The leaf scald disease is one of the most devastating sugarcane diseases in Brazil, causing losses in terms of decreased productivity and the need for early replacement of sugarcane, especially in susceptible varieties. The disease is caused by the xylem-invading pathogen Xanthomonas albilineans. The main symptom of the disease is characterized by a chlorotic band that accompanies the midrib of the lea,f resulting from the action of albicidin phytotoxin, that inhibits the replication of chloroplast DNA. Leaf scald control methods are based on use of resistant varieties obtained through genetic improvement. The objective of this work was to study the molecular mecanisms involved in defense process against X. albilineans infection, in two sugarcane varieties, resistant (SP82-1176) and susceptible (SP78-4467). For this purpose, a test was conducted following a kinetics of experimental infection with collection intervals of 6, 48 and 120 hours after phytobacteria infection. The gene expression profile was evaluated by using a macroarray containing 3,575 cDNAs from two leaf libraries (LV and LR) from SUCEST. Statistical analysis showed 473 genes differentially expressed (induced or repressed) in the interaction between variety, 472 between treatments and 994 over the kinetics. It was possible to identify genes belonging to families of transcription factor, as well as Myb and WRKY, proteins involved in detoxification processes of reactive oxygen species, such as peroxidase, and other proteins related to defense mechanisms. The data also show that there was induction of genes related to signal transduction along de kinetics of... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Wagner Bettiol / Resumo: A geração de resíduos urbanos aumenta com o passar dos anos e graves problemas de impactos ambientais ocorrem devido ao seu inadequado tratamento e disposição final. A utilização de resíduos urbanos na agricultura destaca-se como uma alternativa viável e por conterem matéria orgânica podem colaborar tanto no controle de doenças da parte aérea das plantas, por indução de resistência sistêmica, como induzir a supressividade aos patógenos habitantes do solo. O crescimento da agricultura orgânica também demanda informações sobre os efeitos de matéria orgânica sobre as doenças de plantas. O presente trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da incorporação de algumas fontes de matéria orgânica ao solo na indução da resistência sistêmica à Ferrugem em mudas de cafeeiro. Os efeitos da incorporação das fontes de matéria orgânica foram avaliados sobre o comportamento das mudas (altura; teor de nitrogênio total foliar; e porcentagem de folhas lesionadas, número de lesões por folha lesionada e esporulação de lesões da Ferrugem), das propriedades químicas do substrato (pH e condutividade elétrica) e da atividade microbiana do substrato (hidrólise do diacetato de fluoresceína - FDA). A indução de resistência sistêmica à Ferrugam foi estudada bioquimicamente por meio da atividade da peroxidase e da polifenoloxidase em tecido foliar de plantas desenvolvidas em substratos com o lodo de esgoto e com o composto de lixo em condições de casa de vegetação. As fontes de matéria orgânica foram o lodo de esgoto, o composto de lixo urbano, a cama de aves e os estercos de suíno, de bovino e de ovino. As fontes de matérias orgânicas incorporadas ao substrato aumentaram o teor de nitrogênio foliar total e não induziram a resistência sistêmica à Ferrugem do cafeeiro. As outras variáveis estudadas tiveram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: The urban wastes production increases with the years and environmental impacts occur due to its inadequate treatment and final disposition. The standardized utilization of urban wastes in agriculture stand out as a viable alternative, apart from organic matters applied in the soil may control foliar diseases of plants for induction of systemic resistance and induction of supressiviness to soil pathogens. Also, the increase of organic agriculture requests information about the effects of organic materials in plant disease. The objective of this work was to evaluate possible effects of organic materials in the systemic resistance induction for coffee orange rust in seedlings. The effects of incorporating the organic matter sources into soil were evaluated over the conduct of seedlings (plant height; foliar total nitrogen; and infected leaves percentage by plant, number of lesions by lesioned leaf and lesions esporulation of rust), chemical properties of substrate (pH and eletrical conductivity) and of substrate microbial activity (fluorescein diacetate hydrolysis - FDA). The systemic resistance induction to coffee orange rust was studied by through biochemical assay of activity of peroxidase and polyphenoloxidase in the foliar tissue of the plants developed in the sewage sludge and with waste compost in greenhouse conditions. The organic matter sources were sewage sludge, waste compost, swine, bovine, sheep manures and the chicken litter. The organic matter sources were incorporated to substrate increased the foliar total nitrogen and didn't affect the systemic resistance induction for coffee orange rust. The other variables studied had distinct conducts according to the type and concentration of the organic matter sources. The sewage sludge and waste compost interfere in the primary and secundary metabolisms of the plants modifying the activity of the peroxidade and polyphenoloxidase indicating the participation in the resistance to the disease. / Doutor

Orientador: Edson Luiz Lopes Baldin / Coorientador: André Luiz Lourenção / Banca: Arlindo Leal Boiça Junior / Banca: José Djair Vendramim / Banca: Rodrigo Neves Marques / Banca: Pedro Takao Yamamoto / Resumo: O algodoeiro Gossypium spp. se destaca como uma importante fonte de recursos renováveis, produzindo a fibra de origem vegetal mais consumida pela indústria têxtil mundial. Para a maioria dos países produtores de algodão, o ataque de insetos-praga como o pulgão Aphis gossypii Glover (Hemiptera: Aphididae), é considerado um dos principais fatores de redução de produtividade na cultura. O inseto pode ocasionar danos diretos às plantas de algodão, por meio da sucção contínua de seiva, além de indiretos, devido ao favorecimento de fumagina e transmissão de vírus. O controle desse afídeo tem sido realizado principalmente através de aplicações sucessivas de inseticidas, o que têm acelerado a seleção de populações resistentes aos ingredientes ativos. Dentre as táticas alternativas ao manejo químico, o uso de cultivares resistentes se destaca como uma valiosa estratégia para o manejo integrado de pragas (MIP). O objetivo deste trabalho foi caracterizar possíveis categorias de resistência de genótipos de algodão frente ao ataque do pulgão A. gossypii, por meio de ensaios de casa de vegetação e laboratório. Inicialmente, foi realizado um screening com 78 genótipos de algodão, a partir do qual, foram selecionados 15 materiais para ensaios de capacidade de infestação e determinação do número acumulado diário de afídeos (CAD). Posteriomente, esses genótipos selecionados foram também avaliados por meio de ensaios de antixenose e de antibiose. Na última etapa, realizou-se um ensaio com EPG (... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abrastract: Cotton, Gossypium spp., stands out as an important source of renewable resources, producing the most consumed vegetal fiber by the world textile industry. For most cotton producing countries, the attack of pest insects, such as the aphid Aphis gossypii Glover (Hemiptera: Aphididae), is considered one of the main productivity reducing factors in the crop. This insect can cause direct damages to cotton plants through of the continuous sucking of sap as well as indirect damages by favoring sooty mold and transmitting the virus. The control of this aphid has been done mainly through successive applications of insecticides, which have accelerated the selection of populations that are resistant to the active ingredients. Among the alternative strategies of the chemical management, the utilization of resistant cultivars is considered valuable for integrated pest management (IPM). The purpose of this work was characterize possible resistance categories of cotton genotypes against an attack of the aphid A. gossypii through greenhouse and laboratory assays. Initially, a screening was carried out with 78 cotton genotypes, and 15 materials were selected for infestation ability assays and determination of the cumulative aphid-day number (CAD). Posteriorly, these selected genotypes were also evaluated by antixenosis assays and antibiosis. In the last step, an assay with EPG (Electrical Penetration Graph) was carried out using four cotton carrier genotypes from different resistance categories besides the chemical analysis of tannins of these materials to establish correlations. In the infestation ability assay, genotypes G. hirsutum punctatum, IAC PV010-1664 and Acala 4-42 were the least colonized ones, indicating the occurrence of antixenosis and/or antibiosis. Based on the antixenosis assay, genotypes Deltapine Smooth Leaf (7.82 aphids) and Variedade Reba= BTK-12 (8.54 aphids) were significantly ... / Doutor

Orientador: Edson Luiz Lopes Baldin / Banca: Andre Luiz Lourenção / Banca: José Paulo Gonçalves Franco da Silva / Resumo: A couve-de-folhas, Brassica oleracea (L.) var. acephala, de grande importância nutricional para a alimentação humana, sofre limitação de seu cultivo pelo ataque de insetos-praga como a mosca-branca, Bemisia tabaci biótipo B (Genn.) (Hemiptera: Aleyrodidae), que ocasiona danos diretos e indiretos às plantas, podendo comprometer a produtividade no campo. O controle químico é o método mais utilizado para o manejo deste inseto, porém, características como elevado potencial reprodutivo, capacidade de adaptação a condições adversas e grande número de hospedeiros fazem com que o método químico não atinja a eficiência desejada. Em razão disto, métodos alternativos como o uso de plantas resistentes é considerado uma estratégia com reconhecida eficiência no manejo integrado de pragas (MIP). Neste trabalho, 32 genótipos de couve-de-folhas foram avaliados sob o ataque de B. tabaci biótipo B, visando caracterizar possíveis tipos de resistência (antixenose e antibiose) contra este inseto. Numa primeira etapa, foram realizados ensaios de antixenose (com e sem chance de escolha) a fim de avaliar a colonização e a oviposição nos diferentes materiais. Nesse mesmo estudo a coloração das folhas foi também determinada, visando estabelecer correlações. Posteriormente, foi realizado ensaio de desempenho biológico, com 13 genótipos mais promissores (primeira etapa) a fim de caracterizar a ocorrência de antibiose. Com base nos resultados obtidos, os genótipos HS-20, OE e VA foram os menos atrativos a... / Abstract: Collard green, Brassica oleracea (L.) var. acephala, which is of great nutritional importance for human consumption, is endangered by the attack of insect pests such as the whitefly, Bemisia tabaci biotype B (Genn.) (Hemiptera: Aleyrodidae), which causes direct and indirect damages to plants, and may compromise productivity in the field. The chemical control is the most used method for the management of this insect, however, characteristics such as high reproductive potential, adaptability to adverse conditions and large number of hosts cause the chemical method does not achieve the desired efficiency. Because of this, alternative methods such as the use of resistant plants is considered a strategy with recognized efficiency in integrated pest management (IPM). In this work, 32 genotypes of leaf collard green were evaluated under the attack of B. tabaci biotype B, aiming to characterize possible types of resistance (antioxenose and antibiosis) against this insect. In a first step, antixenosis tests were performed (with and without a choice) in order to evaluate the colonization and oviposition in the different materials. In this same study, the leaf color was also determined, aiming to establish correlations. Subsequently, a biological performance test was performed, with 13 more promising genotypes (first stage) in order to characterize the occurrence of antibiosis. Based on the results obtained, genotypes HS-20, OE and VA were the least attractive to adults of the whitefly, indicating expression of antixenosis to this insect. The VE and J genotypes were the least oviposited both in the free choice and the absence of choice assays... / Mestre

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-05-10T16:53:01Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 6078357 bytes, checksum: 26dd06f3cc777f1681a5e8f5d8395eab (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-10T16:53:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 6078357 bytes, checksum: 26dd06f3cc777f1681a5e8f5d8395eab (MD5) Previous issue date: 2002-03-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Avaliaram-se a resistência de berinjela ‘Embú’ controle e transgênica, contendo a região codante do gene orizacistatina, às espécies Meloidogyne incognita, M. javanica e M. arenaria. Foi verificado que a berinjela transgênica foi altamente suscetível a M. incognita, M. arenaria e M. javanica, assim como a berinjela controle as espécies M. incognita e M. javanica com grande número de galhas e número de ovos. Portanto, a transgênese não afetou a resposta de berinjela ‘Embú’ aos nematóides avaliados. A resistência às espécies de pulgões (Myzus persicae e Macrosiphum euphorbiae) e lagartas (Mechanitis polymnia e Mechanitis lysimnia) também foi avaliada. Trabalhou-se com uma geração de M. persicae e de M. euphorbiae para elaboração de tabelas de vida. Foram detectados efeitos significativos das linhagens da planta quanto às características (Ro - taxa líquida de reprodução, rm - razão infinitesimal de aumento populacional e λ - razão finita de aumento populacional) estudadas, exceto para tempo de geração (T). O efeito da espécie de pulgão foi significativo para todas as características, enquanto que o efeito da interação entre linhagem da planta e espécie de pulgão não foi significativo para nenhuma das características. Conclui-se que o ciclo biológico de M. persicae e M. euphorbiae foi alterado, sendo que Ro, rm e λ foram menores nas plantas transgênicas. Para o teste de resistência à lagartas, foram avaliados a área foliar consumida, o número de indivíduos e sua mortalidade, nas fases de desenvolvimento (da lagarta até a fase adulta). Não foram observadas significâncias para as características (duração do período pupal, e mortalidade larval e pupal) avaliadas, à exceção da duração larval. Em relação à área foliar consumida pelas lagartas, observou-se que não houve diferença entre as linhagens da planta e na interação entre linhagem e espécie da lagarta, porém houve diferença em todos os parâmetros avaliados (área foliar total e diária consumida em centímetros quadrado e em porcentagem) quando analisada as espécies de lagarta. Assim, as plantas transgênicas utilizadas não apresentam atividade sobre a mortalidade e duração das fases larval e pupal de Mechanitis polymnia e M. lysimnia. Atividade genotóxica de extratos de berinjela transgênicos utilizados como alimento na dieta de larvas de Drosophila melanogaster, na forma de extratos de frutos in natura e aquecidos em banho-maria a 45oC foi avaliada pelo SMART (somatic mutation and recombination test). Em berinjela ‘Embú’, foram incorporados os genes das construções pRGG hpt, pOZC6 e pCLDO04541, chamados de HPT-1, OZC-2 e SW5-3, respectivamente. Foram realizados dois experimentos independentes nos quais foram testados os mesmos frutos de cada linhagem in natura. No experimento II foram acrescentados os mesmos frutos aquecidos e mais dois frutos: OZC-4 e SW5-5. Além desses, diluiu-se o triturado do fruto OZC-2 a uma concentração de 25%. Em cada experimento também foram incluídos um controle positivo (Ciclofosfamida) e um negativo (água). Em ambos experimentos, resultados positivos foram observados para o controle positivo e em algum dos tratamentos com berinjela transgênica in natura e aquecidos. Por comparação das progênies obtidas no SMART, observou que ocorreu recombinação em alta frequência. Frações de todos os frutos liofilizados das plantas transgênicas e controle, utilizados no SMART, foram mantidos a –80oC e foram, posteriormente, utilizados para detecção de Agrobacterium tumefaciens. Após a rehidratação dos tecidos, com água destilada e estéril, esses foram plaqueados, sob condições assépticas, e avaliado o crescimento de bactérias e sua natureza pelo teste ketolactose. Dos seis frutos utilizados (Berinjela controle, HPT-1; OZC-2, SW5-3, OZC-4, SW5-5) foram isoladas 10 colônias de bactérias, apenas dos fruto SW5-3 e SW5-5. Dessas, 5 colônias foram identificadas pelo teste Ketolactose como Agrobacterium tumefaciens. À luz dos resultados, conclui-se que apesar das evidências de que extrato de berinjela induziu a recombinação somática em D. melanogaster, a ausência de dados na literatura acerca da aplicação deste teste na caracterização de efeitos genótoxicos, advindos dos produtos dos transgenes, sugere que outros estudos devem ser conduzidos, para determinar o(s) agente(s) indutor(es) de recombinação, inclusive aqueles advindos de bactérias residentes nos tecidos de frutos transformados e de possíveis situações de estresses de natureza biótica ou abiótica. / Control and transgenic eggplants for the orizacystatin gene were evaluated as for resistance to nematode species Meloidogyne incognita, M. javanica, and M. arenaria. Transgenic eggplants were highly susceptible to M. incognita, M. arenaria, and M. javanica, as well as the control eggplants were to M. incognita and M. javanica, with high number of galls and eggs produced in the roots. Therefore, the transgenesis did not affect the response of ‘Embú’ eggplant to the nematodes evaluated. The resistance to species of aphids (Myzus persicae and Macrosiphum euphorbiae) and butterfly larvae (Mechanitis polymnia and Mechanitis lysimnia) was also evaluated. For elaboration of life tables, a generation of Myzus persicae and Macrosiphum euphorbiae was used. Significant effects of plant lines were detected for the parameters studied (Ro - net reproductive rate, rm - intrinsic rate of population increase e λ - finite rate of population increase), except for generation time (T). The effect of aphid species was significant for all parameters evaluated, whereas the effect of interaction between plant line and aphid species was not significant for the parameters analyzed. It can be concluded that the biological cycle of M. persicae and M. euphorbiae was alterated, since Ro, rm and λ were smaller in the transgenic plants. For the resistance test to butterfly larvae, consumed leaf area, individual number and mortality were evaluated during the different stages of its development (from larval to adult stage). Significant differences for the parameters evaluated (time period of pupal stage and larval and pupal mortality) were not observed, with exception of time period of larval stage. In relation to consumed leaf area by the larvae, it was observed no difference between the plant lines and no interaction between the plant lines and larvae species; however, differences in all parameters evaluated (total and daily leaf area consumed) were observed depending on larvae species. Thus, the transgenic plants analized did not have any influence on the mortality and time period of larval and pupal stages of Mechanitis polymnia and M. lysimnia. The genotoxic activity of fruit extracts (in natura and preheated at 45 o C) from transgenic eggplants, used as food in the diet of Drosophila melanogaster larvae, was evaluated by the somatic mutation and recombination test (SMART). The T-DNAs from the constructs pRGG hpt [containing the genes hygromycin phosphotransferase (hpt) and β -glucuronidase (uidA), pOZC6 [containing the genes orizacystatin (ozc), uidA, and neomycin phosphotransferase II (nptII), and pCLDO04541 [containing the genes npt and Sw5], were incorporated into eggplant cv. Embú, called of HPT-1, OZC-2 and SW5-3, respectively. Two independent experiments were performed, in which the same fruits from each line were tested in natura. In the experiment II, it was added the same preheated fruits and additional two fruits: OZC-4 and SW5-5. Besides, the triturated from the fruit OZC-2 was diluted to a concentration of 25%. It was also included, in each experiment, a positive (Cyclophosphamide) and a negative (water) control. In both experiments, positive results were observed for the positive control and also in some treatments with transgenic eggplant in natura and preheated. Comparing the progenies obtained in the SMART, it was verifyed the occurrence of recombination at high frequency. Fractions of all lyophilized fruits from transgenic and control plants, used in the SMART, were kept at –80oC, and then utilized for the detection of Agrobacterium tumefaciens. After re-hydration of the tissues, with sterile destilled water, they were plaqued, under asseptic conditions, and the bacterial growth and nature were evaluated by the ketolactose test. Among six fruits analized (control, HPT-1, OZC-2, SW5-3, OZC-4, and SW5-5), bacterial colonies (total of 10) were isolated only from SW5-3 and SW5-5 fruits. Five colonies were identifyed by the ketolactose test as Agrobacterium tumefaciens. Despite evidences that extracts from transgenic eggplant induced somatic recombination in D. melanogaster, it can be concluded that the absence of data in the literature, concerning the application of SMART in the characterization of genotoxic effects of transgenic products, suggests that other studies need to be accomplished, aiming to determine the inductive agent(s) of recombination, including those from bacteria resident in transformed fruit tissues and from possible situations of stress of biotic and abiotic nature. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-05T19:13:28Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1057121 bytes, checksum: bf75cf6f735caaf7d72e5ad8a513b28f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-05T19:13:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1057121 bytes, checksum: bf75cf6f735caaf7d72e5ad8a513b28f (MD5) Previous issue date: 2005-08-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A maioria dos genes de resistência (genes R) clonados codifica para proteínas R que contêm um domínio C-terminal rico em repetições do aminoácido leucina (domínio LRR), um domínio central conservado contendo sítios de ligação a nucleotídeos trifosfatados (domínio NBS) e um domínio N-terminal variável (TIR ou não-TIR). O domínio LRR provavelmente está envolvido no reconhecimento de proteínas do patógeno produzidas durante o processo de infecção. O domínio NBS está relacionado com a hidrólise de nucleotídeos trifosfatados e participa de uma sinalização celular necessária à resposta de resistência da planta. A região N-terminal variável pode conter um domínio com similaridade com a proteína ao Toll de Drosophila e Interleucina de mamíferos (TIR) ou ainda um domínio não-TIR, como coiled-coil (CC), ambos aparentemente envolvidos com sinalização celular. Ao contrário do observado em culturas agronômicas, existem poucos trabalhos de caracterização de genes de resistência em árvores, especialmente em Eucalyptus. Estudos de caracterização do transcriptoma desta planta, como parte do projeto Genolyptus (http://genolyptus.ucb.br), resultaram na identificação de várias etiquetas de sequências de genes expressos (ESTs) com similaridade a genes R e genes envolvidos em resposta de defesa. Desta forma, este trabalho teve por objetivos: 1) sequenciar completamente oito cDNAs de eucalyptus pré- selecionados por possuírem similaridade com genes envolvidos em resistência a doenças em diferentes espécies vegetais, como linho e Populus e ao gene Rar1 envolvido em resposta de defesa; 2) identificar clones BACs de E. grandis vcorrespondentes a cada um desses cDNAs, visando a futura determinação desses genes; e 3) sequenciar parcialmente pelo menos um clone BAC visando determinar a estrutura completa de pelo menos um gene similar a gene R. A caracterização dos cDNAs revelou que a maioria dos clones possuem sequências incompletas de genes R. Foram identificados onze clones BACs (insertos variando de 20 a 280 kb) correspondentes a esses genes e um deles foi selecionado (BAC 143 F-12, inserto de 90 kb) para construção de uma biblioteca shotgun, visando a caracterização parcial de seu inserto. As sequências parciais de 917 subclones desta biblioteca foram agrupadas em 14 contíguos sendo que nove apresentaram similaridade com genes conhecidos. Dois contíguos mostraram similaridade com genes que codificam proteínas da classe TIR-NBS-LRR e os demais a genes que codificam para fosfatidilinositol 3-quinases putativas, poligalacturonase e a poliproteínas putativas (retrotransposons do grupo Ty1-copia). Análises mais detalhadas dos contíguos com sequências similares a genes R revelaram que um deles contém a ORF completa de um gene da classe TIR-NBS-LRR e o outro contém um gene truncado com domínios TIR-NBS e parte de um domínio LRR. Esses resultados sugerem que este BAC seja derivado de uma região genômica de E. grandis que contém um agrupamento de genes TIR-NBS-LRR. Futuros estudos de mapeamento genético poderão determinar se a sequência desse BAC co- localiza com genes de resistência em E. grandis. / Several resistance genes (R genes) have been isolated from various plant species in the last decade. These R genes can be categorized into several distinct classes based on their predicted protein structures. The largest class falls into the NBS-LRR class, which encodes a nucleotide site domain and a leucine-rich repeat (LRR) domain. NBS-LRR R genes can be further subdivided into toll and interleukin-1 (TIR) and non-TIR classes based on the presence of a TIR domain at the N-terminus of the protein. In contrast to agronomic cultures, there are few resistance genes characterized in woody plants, especially in Eucalyptus. Transcript characterization studies of this tree, as part of Genolyptus Project (http://genolyptus.ucb.br), have identified several expressed sequence tags (ESTs) similar to R genes and disease resistance response genes. Therefore, this work aimed to: (1) completely sequence eight pre- selected eucalyptus cDNAs with similarity to R genes from flax and Populus and to resistance response Rar1 gene from barley; (2) identify E. grandis BAC clones corresponding to these cDNAs, seeking future R gene genomic organization studies; and (3) partially sequence at least one BAC clone to determine the complete structure of al least one resistance gene analog. The sequencing results showed that the majority of the cDNAs analyzed are truncated, representing incomplete sequences of R genes analogs. Eleven BAC clones were identified (inserts varying from 20 to 280 kb) that correspond to these cDNAs and one (BAC 143F12, 90 kb insert) was characterized by shotgun sequencing. Partial sequences obtained from 917 BAC subclones were viigrouped in 14 contigs. Nine contigs showed similarity to known genes. Two contigs were similar to TIR-NBS-LRR genes and the others to putative phosphatidylinositol 3-kinase, polygalacturonase and putative polyproteins (Ty1-copia group retrotransposons). Detailed analysis of the contigs similar to R genes demonstrated that one has a complete ORF of a TIR-NBS-LRR gene and the other has one TIR-NBS pseudogene with truncated LRR domain. These results suggest that the insert of this BAC is derived from a Eucalyptus grandis genomic region that contains a cluster of TIR-NBS-LRR genes. Future genetic mapping studies will elucidate if these BAC inserts co-localize with known R genes in Eucalyptus.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-06T14:03:32Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1133771 bytes, checksum: 640defa7d0749c719bdf5d760421654a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-06T14:03:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1133771 bytes, checksum: 640defa7d0749c719bdf5d760421654a (MD5) Previous issue date: 2007-07-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Para isso foram usadas três estrategias. Inicialmente, palavras-chave correspondentes a termos relacionados aos mecanismos de resistência de plantas a patógenos foram identificadas na literatura e utilizadas como “iscas” para a mineração dos dados. Com o auxílio de ferramentas disponíveis na plataforma de bioinformática do PBGC, foram identificadas ESTs (Expressed Sequence Tags) relacionadas a cada uma destas palavras. Outra estrategia utilizada foi a busca por similaridades entre algumas sequências públicas envolvidas com a resistência do cafeeiro a doenças com as sequências do PBGC, por meio do programa BLAST. Utilizou-se, também, o Electronic Northern, uma ferramenta desenvolvida pelo Laboratório de Genômica e Expressão (LGE). A mineração, usando as três estrategias, identificou 14.060 sequências do PBGC. Essas sequências apresentaram similaridade com proteínas conhecidamente relacionadas com o processo de defesa da planta contra doenças como, por exemplo, quitinase, proteína quinase, citocromo P450, proteína de resistência a doenças, proteína relacionada com patogênese, proteínas com domínio LRR e NBS, proteínas induzidas por hipersensibilidade, entre outras. Os processos biológicos com os quais essas sequências estão envolvidas incluíram metabolismo, transporte, regulação da transcrição, enovelamento de proteínas, biossíntese entre outros. A análise global baseada em ontologia de função molecular das sequências obtidas mostrou que os genes estão envolvidos com metabolismo, resposta a estímulos externos, diferenciação celular, ligação a ácidos nucleicos, ligação a nucleotídeos, resposta de defesa, apoptose entre outras. Visando verificar o envolvimento destas sequências com a resistência do cafeeiro a ferrugem foram desenhados 40 primers para amplificar algumas das sequências mineradas. Os primers foram desenhados com o programa computacional Primer3 e a estabilidade desses foi verificada por meio do programa PrimerSe/ect. Diferentes concentrações dos componentes da reação de PCR foram analisadas. Utilizando as condições de reação e amplificação otimizadas, os 40 primers foram testados em 12 genótipos resistentes e 12 susceptíveis a Hemi/eia vastatrix, fungo causador da ferrugem. Vinte e nove destes 40 primers resultaram em bandas únicas e bem definidas, sendo um polimórfico. Este trabalho permitiu obter, até o momento, um marcador molecular polimórfico entre os indivíduos resistentes e susceptíveis. Esse marcador, denominado CARF 005, amplifica uma região do DNA que corresponde a uma ORF parcial de Coffea arabica que codifica uma proteína de resistência a doenças. / For that, three strategies were used. Initially, keywords related to the plants resistance mechanism to pathogens were searched in scientific literature and used as drivers for data mining. Using the available tools at the PBGC bioinformatics platform, ESTs (Expressed Sequence Tags) related to each one of these words were identified. The search for similarities between some published sequences and sequences from the PBGC, by using the BLAST program was another strategy. The Electronic Northern, a tool developed by the Laboratório de Genômica e Expressão (LGE), was also used. Those strategies allowed the identification of 14,060 sequences of the PBGC. These sequences were similar to proteins known to be related to de plant disease defense process, for instance chitinase, kinase protein, cytochrome P450, disease resistance protein, pathogenesis related protein, LRR and NBS proteins, hypersensibility induced protein among others. The biological processes with witch these sequences are involved included metabolism, transport, transcription regulation, protein folding, biosynthesis and others. The ontology-based global analysis for molecular function showed that the genes are involved with metabolism, external stimulus response, cellular differentiation, nucleic acid binding, nucleotide binding, defense response, apoptosis and others. Aiming to verify the involvement of these sequences with the coffee tree resistance to leaf rust, 40 primers were designed to amplify the mined sequences. The primers were synthesized using the computational program Primer3 and their stability was tested by the program PrimerSelect. Different PCR conditions were tested. Using optimized reaction and amplification conditions, those 40 primers were tested in 12 resistant and 12 susceptible genotypes to Hemileia vastatrix, fungus that causes coffee leaf rust. Twenty nine of those resulted in unique and sharp bands, and only one of these was polymorphic. The 40 primers permitted to find one molecular marker polymorphic between the resistant and susceptible genotypes. This marker amplifies a region of the DNA which corresponds to a Coffea Arabica ORF for disease resistance protein.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-29T18:34:52Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1000132 bytes, checksum: f8825fd96a75440247eb51ddedd55c61 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-29T18:34:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1000132 bytes, checksum: f8825fd96a75440247eb51ddedd55c61 (MD5) Previous issue date: 2016-02-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Dois experimentos (Exp. 1 e Exp. 2) foram conduzidos em condições de campo para determinar o desenvolvimento da brusone em espigas, bem como a performance fisiológica e produtiva das cultivares BR-18 (moderadamente resistente) e Guamirim (suscetível) inoculadas com Pyricularia oryzae e tratadas (+F) ou não (‒F) com o fungicida epoxiconazole (13,3%) + pyraclostrobina (5%). Relativo a Guamirim ‒F, BR-18 ‒F (efeito da resistência) resultou em redução de 44 e 64% na incidência final e severidade final, respectivamente, no Exp. 1, e 3 e 49%, respectivamente, no Exp. 2. Para a Guamirim +F (efeito do fungicida) houve redução de 65 e 77% na incidência final e severidade final, respectivamente, no Exp. 1, e 64 e 95%, respectivamente, no Exp. 2. Similarmente, houve redução maior que 75 % na taxa temporal de progresso no tratamento combinando a aplicação do fungicida e resistência de hospedeiro. Resultados obtidos na análise de regressão indicaram que a severidade encontrada nas espigas e folhas durante o período de 10-14 dias após a antese (daa) proporcionou uma maior perda de produtividade comparado a severidade encontrada aos 18-22 daa, e que a severidade da brusone nas espigas possui maior efeito negativo comparado a severidade encontrada nas folhas. Relativo a Guamirim ‒F, houve aumento de 0.3 e 16 % na produtividade dos grãos para BR-18 ‒F, 20 a 61% para Guamirim +F e 26 e 83% para BR-18 +F nos Exp. 1 e Exp. 2, respectivamente. Os tratamentos envolvendo aplicação do fungicida e cultivar resistente manteve a integridade das folhas (baseado em HAD, HLAI, HAA e HRI) e performance fotossintética (baseado em Fv/Fm, Fm, Y(II), e Y(NPQ)) das espigas e folhas em relação ao tratamento cultivar Guamirim ‒F. Em conclusão, os resultados do presente estudo sugerem que a integração do tratamento com fungicida e resistência de cultivar como prática de manejo para o controle da brusone em espigas. Adicionalmente, dois experimentos foram conduzidos em condições de casa de vegetação para avaliar as alterações associadas com a produção e particionamento de fotoassimilados entre a espiga e a folha bandeira em plantas de trigo infectadas com P. oryzae. Ambos experimentos foram inoculados aos 10 e 20 daa com suspensão de esporos de P. oryzae. Os resultados demonstraram uma redução dos parâmetros de fluorescência da clorofila a (Fm, Fv/Fm YII and Y(NO)) em folhas bandeiras e espigas infectadas associada a menor concentração de clorofila a + b, carotenoides e redução da capacidade de fixação do CO2 pela RuBisCO em folhas bandeiras infectadas. Em folhas bandeiras e grãos obtidos de espigas infectadas, houve redução na concentração de açúcares solúveis com um aumento da razão da concentração de hexoses sobre sacarose em folhas bandeiras. Em folhas bandeiras, houve menor atividade da sacarose fosfato sintase (SPS) e menor expressão do gene sacarose sintase associadas ao aumento da expressão e atividade das invertases. Estas alterações relacionadas a síntese e degradação da sacarose sugerem uma condição dreno dos tecidos foliares infectados. No estágio final de infecção ocorreu uma redução da concentração de amido nos grãos e aumento da sua concentração em folhas bandeiras. Adicionalmente, houve redução na atividade e expressão da ADP-glicose pirofosforilase associada com a menor expressão dos genes β- e α-amilase em folhas bandeiras e espigas. Em conclusão, os efeitos negativos da brusone na qualidade e produtividade dos grãos em trigo podem ser associados com alterações na produção e particionamento de carboidratos durante o processo de formação dos grãos. / Two field experiments (Exp. 1 and Exp. 2) were carried out to evaluate the spike blast development as well as the physiological performance and grain yield of wheat cultivars BR-18 (partially resistant) and Guamirim (susceptible) inoculated with Pyricularia oryzae and treated or untreated with the fungicide 13.3% epoxiconazole + 5% pyraclostrobin. Relative to Guamirim-untreated, BR-18-untreated (resistance alone) led to 44 and 64% control of final incidence and severity, respectively, in Exp. 1, and 3 and 49% control, respectively, in Exp. 2. Guamirim-treated (fungicide alone) led to 65% control of incidence and 77% control of severity in Exp. 1, and 64% control of incidence and 95% control of severity in Exp. 2. Similarly, there was reduction higher than 75 % in the temporal rate of spike blast progress when host resistance and fungicide were combined. Results from regression analyses indicated that spike and leaf blast severity at 10-14 days after anthesis resulted in greater yield losses (highest negative slope) than severity at 18 to 22 days after anthesis, and that spike blast severity had a greater negative effect on yield than leaf blast severity. Relative to Guamirim-untreated, there was a 0.3 and 16% increase in mean yield for BR-18-untreated (resistance alone), 20 and 61% increase for Guamirim treated (fungicide alone), and 26 and 83% for BR-18 treated (moderate resistance + fungicide) in Exp. 1 and 2, respectively. By virtue of their effects on blast severity, fungicide application and cultivar resistant resulted in higher measures of leaf health (mean HAD, HLAI, HAA and HRI) and photosynthetic performance (based on F v /F m , F m , Y(II), and Y(NPQ)) of both spikes and leaves than the untreated susceptible reference treatment. Results from this study suggesting that the integration of these strategies may be the best approach for managing spike blast and useful for future efforts to develop crop loss models and management guidelines for wheat blast. Additionally, two experiments were carried out in greenhouse conditions to assess the changes associated with photoassimilates production and their partitioning in source-sink relationship on flag leaves and spikes of wheat plants infected with Pyricularia oryzae. Flag leaves and spikes were inoculated at 10 days after anthesis (daa) (Exp. 1) and at 20 daa (Exp. 2) with a conidial suspension of P. oryzae. There was an impairment on chlorophyll a fluorescence parameters (analyzed by F m , F v /F m YII and Y(NO)) on the infected flag leaves and spikes coupled with reduced concentrations of chlorophyll a + b and carotenoids as well as lower capacity of CO 2 fixation by RuBisCO in the infected flag leaves. In these leaves and grains obtained from the infected spikes, there were lower concentration of soluble sugars and an increase on the hexoses to sucrose ratio on the flag leaves. In the infected flag leaves, there was a lower sucrose phosphate synthase (SPS) activity and lower expression of sucrose synthase (Susy) gene coupled with higher expression and activity of acid invertases. These alterations, associated with synthase and degradation of sucrose, suggestss a status sink in the infected flag leaves. At advanced stages of fungal infection, the concentration of starch was reduced on grains whereas on the infected flag leaves its concentration was kept elevated. There were reduction on the activity of ADP-glucose pyrophosphorylase and on the expression of ADP-glucose pyrophosphorylase genes and down regulation of β- and α-amylase expression at late stages of fungal infection on flag leaves and spikes. In conclusion, the greatest effect of blast on both grains quality and yield can be associated with alterations in the production and partitioning of carbohydrates during the grain filling process.