A amplificação gênica pode ser compreendida como um mecanismo de regulação de expressão protéica em Leishmania. A exposição a concentrações não letais de diferentes drogas isoladamente, como o metotrexato, a primaquina, cloroquina e antimônio levam à amplificação de regiões específicas como as localizadas no cromossomo 6 e no cromossomo 23. Essas linhagens tornam-se resistentes a estas drogas e eventualmente apresentam resistência cruzada a outras. A terbinafina é uma substância sintética utilizada como antifúngico que age pela inibição da esqualeno epoxidase impedindo a síntese de ergosterol, componente da membrana celular de Leishmania. A exposição do parasita à terbinafina leva à amplificação da região H. A fragmentação da região H permitiu delimitar a resistência a 2,8 kb; fragmento T1. Por mutagênese insercional o gene de resistência à terbinafina foi definido e nomeado HTBF. A proteína codificada pelo HTBF possui uma extremidade N-terminal hidrofílica e C-terminal hidrofóbica com quatro alfa-hélices sendo, supostamente, uma proteína integral de membrana. Possui semelhança com a proteína Yip de Saccharomyces cerevisiae, que participa do transporte vesicular do retículo endoplasmático para o complexo de Golgi. O gene HTBF foi detectado em linhagem sensível de L. major e de outras espécies de Leishmania e seu transcrito em linhagens sensíveis e resistentes de L. major. Levantou-se a hipótese de se tratar de locus de resistência a múltiplas drogas já que as regiões amplificadas, mesmo que induzidas por uma determinada droga, podem levar a resistência a outras. A co-transfecção do gene de resistência ao antimonial MRPA no transfectante portador do HTBF levou à diminuição em até cinco vezes da capacidade de resistência ao antimônio. Apesar dos genes de resistência amplificarem juntos na região H, foi constatado que possuem ação contrária. Sendo que a terbinafina interfere na integridade da membrana celular, levantou-se hipótese na qual a resistência envolveria o mecanismo de reparo de membrana. A perda do fenótipo de resistência pela falta de cálcio sugerindo a inativação desse mecanismo é um fenômeno previsto corroborando a hipótese. / Gene amplification can be recognized as a protein regulation mechanism in Leishmania. Exposure to non-lethal concentrations of different drugs in isolated manner, such as, methotrexate, primaquine, chloroquine and antimony drives the amplification of specific regions. Examples for amplified regions are contained in chromosomes six and 23. The strains become resistant to these drugs and eventu-ally to other drugs as well. Terbinafine is a synthetic substance used as an antifungal agent. Its mechanism of action is by squalene epoxidase inhibition, blocking ergosterol synthesis, a cell membrane component in Leishmania. Parasite exposure to terbinafine elicits H region amplification. H region fragmentation allowed resistance delimitation to 2.8kb, T1 fragment. By insertional mutagenesis terbinafine resistance gene was defined and termed HTBF. HTBF coded protein has a hydrophilic N-terminal and a hydrophobic C-terminal containing four alpha-helixes, putatively, an integral membrane protein. It possesses homology to Saccharomyces cerevisiae Yip protein, which takes part in the vesicular transport from the endoplasmic reticulum to Golgi apparatus. HTBF gene was detected in sensitive L. major strains and other Leishmania species and its transcript was detected in both resistant and sensitive L. major strains. We raised the hypothesis of a multiple drug resistance locus, since amplified regions induced by one drug could elicit resistance to a second drug. Co-transfection of MRPA to the HTBF transfectant led to a five-fold decrease to antimonial resistance level. Even though these resistance genes amplify together in the H region, they have antagonizing mechanisms of action. Since terbinafine action disrupts membrane integrity, we raised a hypothesis in which resistance involves enhancement of membrane repair machinery. Loss of phenotype caused by the lack of calcium suggests the inactivation of this machinery is a predicted phenomenon, corroborating the hypothesis.

A amplificação gênica pode ser compreendida como um mecanismo de regulação de expressão protéica em Leishmania. A exposição a concentrações não letais de diferentes drogas isoladamente, como o metotrexato, a primaquina, cloroquina e antimônio levam à amplificação de regiões específicas como as localizadas no cromossomo 6 e no cromossomo 23. Essas linhagens tornam-se resistentes a estas drogas e eventualmente apresentam resistência cruzada a outras. A terbinafina é uma substância sintética utilizada como antifúngico que age pela inibição da esqualeno epoxidase impedindo a síntese de ergosterol, componente da membrana celular de Leishmania. A exposição do parasita à terbinafina leva à amplificação da região H. A fragmentação da região H permitiu delimitar a resistência a 2,8 kb; fragmento T1. Por mutagênese insercional o gene de resistência à terbinafina foi definido e nomeado HTBF. A proteína codificada pelo HTBF possui uma extremidade N-terminal hidrofílica e C-terminal hidrofóbica com quatro alfa-hélices sendo, supostamente, uma proteína integral de membrana. Possui semelhança com a proteína Yip de Saccharomyces cerevisiae, que participa do transporte vesicular do retículo endoplasmático para o complexo de Golgi. O gene HTBF foi detectado em linhagem sensível de L. major e de outras espécies de Leishmania e seu transcrito em linhagens sensíveis e resistentes de L. major. Levantou-se a hipótese de se tratar de locus de resistência a múltiplas drogas já que as regiões amplificadas, mesmo que induzidas por uma determinada droga, podem levar a resistência a outras. A co-transfecção do gene de resistência ao antimonial MRPA no transfectante portador do HTBF levou à diminuição em até cinco vezes da capacidade de resistência ao antimônio. Apesar dos genes de resistência amplificarem juntos na região H, foi constatado que possuem ação contrária. Sendo que a terbinafina interfere na integridade da membrana celular, levantou-se hipótese na qual a resistência envolveria o mecanismo de reparo de membrana. A perda do fenótipo de resistência pela falta de cálcio sugerindo a inativação desse mecanismo é um fenômeno previsto corroborando a hipótese. / Gene amplification can be recognized as a protein regulation mechanism in Leishmania. Exposure to non-lethal concentrations of different drugs in isolated manner, such as, methotrexate, primaquine, chloroquine and antimony drives the amplification of specific regions. Examples for amplified regions are contained in chromosomes six and 23. The strains become resistant to these drugs and eventu-ally to other drugs as well. Terbinafine is a synthetic substance used as an antifungal agent. Its mechanism of action is by squalene epoxidase inhibition, blocking ergosterol synthesis, a cell membrane component in Leishmania. Parasite exposure to terbinafine elicits H region amplification. H region fragmentation allowed resistance delimitation to 2.8kb, T1 fragment. By insertional mutagenesis terbinafine resistance gene was defined and termed HTBF. HTBF coded protein has a hydrophilic N-terminal and a hydrophobic C-terminal containing four alpha-helixes, putatively, an integral membrane protein. It possesses homology to Saccharomyces cerevisiae Yip protein, which takes part in the vesicular transport from the endoplasmic reticulum to Golgi apparatus. HTBF gene was detected in sensitive L. major strains and other Leishmania species and its transcript was detected in both resistant and sensitive L. major strains. We raised the hypothesis of a multiple drug resistance locus, since amplified regions induced by one drug could elicit resistance to a second drug. Co-transfection of MRPA to the HTBF transfectant led to a five-fold decrease to antimonial resistance level. Even though these resistance genes amplify together in the H region, they have antagonizing mechanisms of action. Since terbinafine action disrupts membrane integrity, we raised a hypothesis in which resistance involves enhancement of membrane repair machinery. Loss of phenotype caused by the lack of calcium suggests the inactivation of this machinery is a predicted phenomenon, corroborating the hypothesis.

Submitted by Geyciane Santos (geyciane_thamires@hotmail.com) on 2015-07-29T13:47:39Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Vânia Cristina Ribeiro Brilhante.pdf: 447163 bytes, checksum: 5374102907554be85557bd94f255ce52 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-29T19:31:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Vânia Cristina Ribeiro Brilhante.pdf: 447163 bytes, checksum: 5374102907554be85557bd94f255ce52 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-29T19:50:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Vânia Cristina Ribeiro Brilhante.pdf: 447163 bytes, checksum: 5374102907554be85557bd94f255ce52 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-29T19:50:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Vânia Cristina Ribeiro Brilhante.pdf: 447163 bytes, checksum: 5374102907554be85557bd94f255ce52 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The inappropriate use of antimicrobials is a determinant factor for the spread of bacterial resistance. The emergence of bacterial resistance represents, worldwide, a public health problem. Several countries have used strategies such as restriction policies to make more rational use, particularly in hospitals where the use is more prevalent. The aim of this study was to evaluate the degree of knowledge of basic principles of antibiotic therapy and role Commission on Hospital Infection Control of doctors in the state of Pará. This study was conducted through questionnaires completed by physicians, pediatricians and surgeons who work in emergency rooms in hospitals of Belem city and the metropolitan region, of Pará State, who have urgent and emergency care, during the period September 2009 to February 2010. 468 questionnaires were returned, of which 235 physicians, 120 pediatricians and 113 of surgeons. The prescription of 7 days duration corresponded to 56.9% among clinicians, which was the most prescribed antibiotic was azithromycin (35.7%) and 64% among pediatricians whose antimicrobial was prescribed amoxicillin. Antibiotic prophylaxis was 51.3% during induction, showing that nearly half, inappropriately prescribe prophylaxis. Of the 113 surgeons, only 30% follow the guidelines of the Commissions of Infection Control to the prescription of antibiotics post-operatively and cefazolin is the most prescribed antibiotic (47%), followed by ceftriaxone (23%). The CBC influences the prescription of antibiotics in 98.4% of surgeons, 93.6% among clinicians and 81.6% among pediatricians and difficulty of follow-up was an important factor for 286 physicians. Factors such as family pressure and volume of visits did not show an influence on prescription. Asymptomatic bacteriuria is treated with 66% of clinicians, 50.4% of surgeons and 71.7% of pediatricians, as well as over 50% of all specialties treat the symptoms of dysuria and fever, no microbiological confirmation of infection. The standardization of antimicrobials exists in 83.3% and only 24 physicians responded that the Pharmacy and Therapeutics Committee is responsible for the standardization of antimicrobial, and 20.4% do not know strategies for rational use in their hospital. The antibiotics most frequently prescribed by pediatricians was amoxicillin (44%), followed by azithromycin (31%), but the time was inappropriate prescribing among clinicians. Mismatches occurred between surgeons with regard to antibiotic prophylaxis and duration. Only 30% of surgeons following the guidelines of the Commission on Hospital Infection Control, and cefazolin is the most prescribed antibiotic (47%), followed by ceftriaxone in 23%. Regarding the request of cultures only 43% do so before prescribing. The use of inappropriate empirical therapy was found to be cause of mortality in patients with bacteremia caused urinary tract. This study has, among its limitations, the fact that based on these data, which contain a considerable degree of uncertainty, through the bias of information. Data collection was performed at two hospitals with high volume of visits to emergency rooms. It was found difficult to compare the data because both the national and the international literature are relatively rare in studies with the same goals and same design. In conclusion, the study clearly demonstrated that, in Belem, the doctors working in emergency rooms, compared to the basic principles of antimicrobial therapy should be updated in order to unnecessary treatment of viral infections and asymptomatic bacteriuria, and Commission on Hospital Infection Control should be more active with respect to policies of antimicrobials. / O uso inadequado de antimicrobianos é fator determinante para disseminação da resistência bacteriana. Esta emergência de resistência bacteriana representa, mundialmente, um problema de saúde pública. Vários países têm usado como estratégias políticas de restrição para tornar o uso mais racional, principalmente em hospitais onde o uso é mais prevalente. O objetivo deste estudo foi avaliar o grau de conhecimento de princípios básicos de antibioticoterapia e do papel da CCIH por médicos no Estado do Pará. Este estudo foi realizado através de questionários respondidos por médicos clínicos, pediatras e cirurgiões, que atuam em urgência e emergência em hospitais de Belém e região metropolitana do Estado do Pará, que possuem atendimento de urgência e emergência no período de Setembro de 2009 a Fevereiro de 2010. Foram respondidos 468 questionários, sendo 235 de médicos clínicos, 120 de médicos pediatras e 113 de médicos cirurgiões. A prescrição de duração de 7 dias correspondeu a 56,9% entre os clínicos, onde antimicrobiano mais prescrito foi a azitromicina (35,7%) e 64% entre os pediatras cujo antimicrobiano mais prescrito foi a amoxicilina. A antibioticoprofilaxia foi de 51,3% durante a indução anestésica, demonstrando que quase a metade, prescrevem inadequadamente a profilaxia. Dos 113 cirurgiões, apenas 30% seguem as orientações da CCIH para a prescrição de antimicrobianos no pós operatório e a cefazolina é o antibiótico mais prescrito (47%), seguido do ceftriaxone (23%). O hemograma influencia na prescrição de antibiótico em 98,4% entre os cirurgiões, 93,6% entre os clínicos e 81,6% entre os pediatras, e a dificuldade de acompanhamento ambulatorial foi fator importante para 286 médicos. Fatores como a pressão da família e volume de atendimentos não mostraram ser influentes na prescrição. A bacteriúria assintomática é tratada por 66% dos clínicos, 50,4% dos cirurgiões e 71,7% dos pediatras, assim como mais de 50% de todas as especialidades tratam os sintomas de disúria e febre, sem confirmação microbiológica de infecção. A padronização de antimicrobianos existe em 83,3% e apenas 24 médicos responderam que a Comissão de Farmácia e Terapêutica é responsável pela padronização dos antimicrobianos, sendo que 20,4% desconhecem estratégias voltadas para o uso racional em seu hospital. O antimicrobiano mais prescrito entre os pediatras foi a amoxacilina (44%), seguido de azitromicina (31%), entretanto o tempo de prescrição foi inadequado entre os clínicos. As inadequações entre os cirurgiões ocorreram em relação a antibioticoprofilaxia e duração desta. Apenas 30% dos cirurgiões seguem as orientações da CCIH, e a cefazolina é o antibiótico mais prescrito (47%), seguido do ceftriaxone em 23%. Em relação a solicitação de culturas apenas 43% o fazem antes da prescrição. O uso de terapia empírica inapropriada foi encontrado como sendo causa de mortalidade em pacientes com bacteremia originada no trato urinário. O presente estudo tem, entre suas limitações, o fato de basear-se em dados referidos, os quais encerram um considerável grau de incerteza, através do viés da informação. A coleta de dados foi realizada em dois hospitais com grande volume de atendimentos em urgência e emergência. Encontrou-se dificuldade em comparar os dados obtidos pelo fato de tanto a literatura nacional quanto a internacional serem relativamente escassas em trabalhos com os mesmos objetivos e o mesmo delineamento. Em conclusão, o estudo demonstrou claramente que, em Belém, os médicos que atuam em urgência e emergência, em relação aos princípios básicos de terapia antimicrobiana devem ser atualizados, visando o tratamento desnecessário de infecções virais e bacteriúria assintomática, e as CCIH’s devem estar mais atuantes no que diz respeito a políticas de antimicrobianos.

Submitted by Stephany Silva (stephany.silva@cpqam.fiocruz.br) on 2016-09-15T13:08:03Z No. of bitstreams: 1 2007lima-acmbq.pdf: 1544921 bytes, checksum: ae126424db02c7461aa6c0afea13e250 (MD5) / Approved for entry into archive by Adagilson Silva (adagilson@cpqam.fiocruz.br) on 2016-09-15T13:34:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007lima-acmbq.pdf: 1544921 bytes, checksum: ae126424db02c7461aa6c0afea13e250 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-15T13:34:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007lima-acmbq.pdf: 1544921 bytes, checksum: ae126424db02c7461aa6c0afea13e250 (MD5) Previous issue date: 2007 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / A pesquisa de lesão estrutural do cérebro em pacientes com crise epiléptica e epilepsia é fundamental no diagnóstico e tratamento da síndrome epiléptica. O objetivo do estudo foi determinar freqüência e associação entre características clínicas e presença de lesões estruturais do encéfalo detectadas no exame de ressonância magnética, com o status e as formas clínicas da epilepsia. Avaliou-se o perfil clínico dos pacientes e das lesões estruturais do encéfalo na imagem por ressonância magnética em 140 pacientes com epilepsia ou crise epiléptica, encaminhados para exame de ressonância magnética e catalogados por demanda espontânea, desde outubro de 2003 até janeiro de 2005. O estudo foi do tipo caso-controle com casos prevalentes. A idade variou de um a 59 anos (mediana de 15,0 anos), sendo 51,6 por cento do gênero masculino. A crise epiléptica foi focal em 55 por cento, a freqüência mensal de até 10 crises foi registrada em 77,6 por cento e o exame neurológico foi normal em 64,2 por cento dos pacientes. Epilepsia farmacoresistente foi identificada em 76,3 por cento e crise epiléptica única em 15,7 por cento. A imagem por ressonância magnética foi anormal em 72,8 por cento dos pacientes. O lobo temporal foi local para 50,5 por cento das alterações. As mais encontradas foram: anormalidades no hipocampo (41,1 por cento); malformações do desenvolvimento cortical (19.6 por cento); isquemia (5,8 por cento); tumor (6,8 por cento); cavernoma(2,9 por cento); facomatose (4,9 por cento); cicatriz (4,9 por cento); inflamatório (4,9 por cento); outras (8,8 por cento). A alteração estrutural na imagem de ressonância magnética foi mais presente entre os pacientes com epilepsia focal e farmacorresistente, sendo o lobo temporal a região com mais alterações. Os pacientes com tumor cerebral apresentaram mais CE focal e a atrofia do córtex cerebral foi alteração freqüente na IRM de pacientes com epilepsia farmacorresistente. Os pacientes com idade maior de 15 anos, número mensal maior de crises e epilepsia sintomática apresentaram maior risco para CE focal e aqueles com crise epiléptica única apresentaram mais CE generalizada. O risco para epilepsia farmacorresistente foi maior entre os pacientes com anormalidades no exame de ressonância magnética, antecedente pessoal e exame neurológico anormais (AU)