Dissertation (Ph.D.) -- University of Texas Southwestern Medical Center at Dallas, 2008. / Vita. Bibliography: p.116-124

Furthermore, ACS patients with a high N-terminal pro-B-type natriuretic peptide (NT-proBNP) and a high ROCK activity on admission had a five-fold risk to experience a cardiovascular event, when compared to those with low NT-proBNP and low ROCK activity. In addition, patients with high NT-proBNP and high ROCK activity were also more likely to die or experience a cardiovascular event at two years when comparing to those with high NT-proBNP and low ROCK activity. / In both ACS and CHF study cohorts, all the clinical parameters were recorded and analyzed. / In the first part of this thesis, 176 ACS patients and 51 control subjects were studied. All The patients were enrolled between December 2007 and May 2009 and followed up till 15th March 2010 (mean: 15.4+/-7.6 months, from 0.5 month to 27.5 months). The main outcome measures were all cause mortality, readmission with ACS or congestive heart failure (CHF) at 2 years from presentation. Altogether, there were 23 deaths (13.1%),33 readmissions with ACS (18.8%) and 13 admissions with CHF (7.4%) within 2 years. / Recent studies have shown that ROCK may playa pivotal role in cardiovascular diseases such as vasospastic angina, ischemic stroke, heart failure and metabolic syndrome via its involvement in regulation of vascular tone, endothelial dysfunction, inflammation, and remodeling. Indeed, inhibition of ROCK by statins or other selective inhibitors leads to upregulation and activation of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) and reduction of vascular inflammation and atherosclerosis. In this thesis, we hypothesized that ROCK activity is increased in a selected population of patients with acute coronary syndrome (ACS) and congestive heart failure (CHF) and that ROCK activity is able to predict long-term clinical outcomes in these two populations. / Rho/rho-kinase (ROCK) is a serine-threonine protein kinase, which is one of the first immediate downstream targets of RhoA and expressed ubiquitously. ROCK is involved in many cellular functions, such as, cell growth, migration, apoptosis via actin cytoskeleton organization, and gene expression. They regulate cell contraction through serine-threonine phosphorylation of adducin, ezrin-radixin-moesin proteins, LIM kinase, myosin light chain phosphatase, and Sodium-Hydrogen ion (Na/H) exchanger. / The main findings are: ROCK activity was increased in ST elevation myocardial infarction (STEMI), non-STEMI (NSTEMI) and unstable angina (UA) groups when comparing with disease controls and healthy controls. On multivariate analysis, heart failure symptom on presentation, LDL-C level, and number of diseased coronary vessels were independent predictors of ROCK activity in ACS patients. / The ROCK activity in CHF patients was significantly higher than that of the disease control and normal control groups. New York Heart Association (NYHA) class, low left ventricular ejection fraction (LVEF) and high creatinine were independent predictors of the baseline ROCK activity in CHF. In terms of long-term heart failure mortality, ROCK activity was not an independent predictor. However, combining ROCK activity and NT-proBNP provided an incremental value in predicting long-term heart failure mortality over NT-proBNP alone. / Thus, increased ROCK activity is likely involved in cardiovascular diseases and further studies would be helpful to elucidate the potential role of ROCK activity inhibition in cardiovascular diseases. / We also recruited a group of 178 patients with CHF. All the patients were enrolled between December 2007 and January 2009 and followed up until 1st February 2010 (mean: 14.4+/-7.2 months, from 0.5 month to 26 months) or until the occurrence of cardiac death. Forty-five patients died (25.3%) within 2 years follow up. / Dong, Ming. / Adviser: Cheuk Man Yu. / Source: Dissertation Abstracts International, Volume: 73-04, Section: B, page: . / Thesis (Ph.D.)--Chinese University of Hong Kong, 2011. / Includes bibliographical references (leaves 140-164). / Electronic reproduction. Hong Kong : Chinese University of Hong Kong, [2012] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Electronic reproduction. [Ann Arbor, MI] : ProQuest Information and Learning, [201-] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Abstract also in Chinese.

INTRODUÇÃO: Vários estudos têm mostrado a importância da Rho quinase na modulação da contração do músculo liso, hiperresponsividade das vias aéreas e inflamação. Entretanto, os efeitos do tratamento crônico com um inibidor específico desta via não haviam sido previamente investigados. MÉTODOS: No presente estudo, foram avaliados os efeitos do tratamento crônico com Y-27632, um inibidor altamente seletivo Rho quinase, sobre a hiperresponsividade das vias aéreas, a ativação do estresse oxidativo, o remodelamento da matriz extracelular, a inflamação eosinofílica e a expressão de citocinas em um modelo animal de inflamação crônica das vias aéreas. As cobaias foram submetidas a sete inalações com ovalbumina ou solução salina (duas vezes por semana durante quatro semanas). Inalações com o inibidor da Rho quinase (Y-27632; 1mM) foram realizadas 10 min antes de cada exposição ao antígeno, começando na quinta inalação. Setenta e duas horas após a 7ª inalação, a avaliação da mecânica pulmonar foi realizada e o óxido nítrico exalado foi coletado. Os pulmões foram então removidos e a análise histológica foi realizada utilizando morfometria. RESULTADOS: O tratamento com Y-27632 em animais sensibilizados reduziu o óxido nítrico exalado, as respostas máximas de resistência e elastância do sistema respiratório, o número de eosinófilos, o conteúdo colágeno e fibras elásticas, o número de células positivas para IL-2, IL-4, IL-5, IL-13, iNOS, MMP -9, TIMP-1, TGF-, NFkappa B e IFN-, e o conteúdo de 8-iso-PGF2 em relação ao grupo não tratado (p<0,05). Houve correlação positiva entre as respostas funcionais e os marcadores de inflamação, remodelamento e ativação da via de estresse oxidativo avaliados. CONCLUSÕES: A ativação da vida da Rho quinase contribui para a potencialização da hiperresponsividade, inflamação, processo de remodelamento da matriz extracelular e ativação do estresse oxidativo. Estes resultados sugerem que os inibidores da Rho quinase podem ser uma ferramenta farmacológica em potencial para o controle da asma / INTRODUCTION: Several studies have shown the importance of Rho-kinase in the modulation of smooth muscle contraction, airway hyperresponsiveness and inflammation. However, the effects of chronic treatment with a specific inhibitor of this pathway had not been previously investigated. METHODS: We evaluated the effects of chronic treatment with Y-27632, a highly selective Rho-kinase inhibitor, on airway hyperresponsiveness, oxidative stress activation, extracellular matrix remodeling, eosinophilic inflammation and cytokines expression in an animal model of chronic airway inflammation. Guinea pigs were submitted to seven ovalbumin or saline exposures (twice a week for four weeks). Rho-kinase inhibitor (Y-27632; 1mM) was aerosolized 10 min before each antigen exposure, beginning at the 5th inhalation. Seventy-two hours after the 7th inhalation, pulmonary mechanics evaluation was performed and exhaled nitric oxide was collected. Lungs were removed and histological analysis was performed using morphometry. RESULTS: Treatment with Y-27632 in sensitized animals reduced exhaled nitric oxide, maximal responses of resistance and elastance of respiratory system, eosinophils, collagen and elastic fibers content, IL-2, IL-4, IL-5, IL-13, iNOS, MMP-9, TIMP-1, TGF-, NFkappa B and IFN- positive cells, and 8-iso-PGF2 content compared to the non-treated group (P<0.05). There were positive correlations among the functional responses and the markers of inflammation, remodeling and oxidative stress pathway activation evaluated. CONCLUSIONS: Rho-kinase pathway activation contributes to the potentiation of the hyperresponsiveness, inflammation, extracellular matrix remodeling process and oxidative stress activation. These results suggest that Rho-kinase inhibitors may be a potential pharmacological tool for controlling asthma

INTRODUÇÃO: A relevância do parênquima pulmonar distal na fisiopatologia da asma tem sido intensamente enfatizada. Vários estudos sugerem a inibição da Rho quinase como uma intervenção benéfica e promissora na asma. Entretanto, não há estudos anteriores que avaliaram os efeitos destes inibidores na modulação da mecânica do parênquima pulmonar e suas alterações histopatológicas em um modelo animal de inflamação pulmonar alérgica crônica. OBJETIVO: Avaliar a inibição da Rho quinase (Y-27632) na modulação da responsividade, inflamação, remodelamento da matriz extracelular e ativação do estresse oxidativo no parênquima pulmonar de cobaias com inflamação pulmonar alérgica crônica. MÉTODOS: As cobaias receberam sete inalações de ovalbumina (1-5 mg / ml; grupo OVA) ou salina (grupo SAL) ao longo de quatro semanas. A partir da quinta inalação, os animais do grupo Rho quinase foram submetidos a inalação com Y-27632, 10 minutos antes de cada inalação com OVA ou SAL. Setenta e duas horas após a sétima inalação, os animais foram anestesiados e exanguinados, e das tiras do tecido pulmonar foram realizadas a mecânica oscilatória, sob condições basais e após o desafio de ovalbumina (0,1%). Após a mecânica, as fatias de pulmão foram submetidas a análise histológica por meio da morfometria. RESULTADOS: A inibição de Rho quinase nos animais expostos à ovalbumina atenuou a elastância e a resistência tecidual, o número de eosinófilos, a expressão de IL-2, IL-4, IL-5, IL-13, TIMP-1, MMP-9, TGF-, IFN-g, NF-kB e iNOS e o conteúdo de 8-iso-PGF2, fibras elásticas, fibras colágenas e actina em comparação com o grupo OVA (P<0,05). CONCLUSÃO: A inibição da Rho quinase contribui para o controle da capacidade de responsividade do parênquima pulmonar, da inflamação eosinofílica, das respostas Th1/Th2, ao controle do remodelamento da matriz extracelular em um modelo animal de inflamação pulmonar alérgica crônica. Podendo ser considerada uma futura ferramenta farmacológica para o tratamento de doenças pulmonares crónicas. / RATIONALE: Previous studies with Rho-kinase inhibitors suggest a beneficial influence of these drugs in asthma. The relevance of distal lung tissue in functional asthmatic impairment has been intensely emphasized. There have not been any previous studies evaluating the effects of these inhibitors on the modulation of distal lung mechanics and histopathological alterations in an animal model of chronic pulmonary inflammation. OBJECTIVE: To evaluate if Rho-kinase inhibition (Y- 27632) modulates distal lung responsiveness, inflammation, extracellular matrix remodeling and oxidative stress activation in guinea pigs with chronic allergic inflammation. METHODS: Guinea pigs received seven inhalations of ovalbumin (1-5 mg/ml; OVA group) or saline (SAL group) over 4 wk. From the 5th inhalation, the Rho-kinase group animals were submitted to Y-27632 inhalation 10 min before each inhalation with OVA or SAL. Seventy-two hours after the seventh inhalation, the animals were anesthetized and exsanguinated, and oscillatory mechanics of the lung tissue strips were performed under the baseline condition and after the ovalbumin challenge (0.1%). Afterwards, the lung slices were submitted to morphometry. RESULTS: The Rho-kinase inhibition in the ovalbumin-exposed animals attenuated the tissue elastance and resistance, eosinophils, the IL-2, IL-4, IL-5, IL-13, TIMP-1, MMP-9, TGF-, IFN-g, NF-kB, iNOS-positive cells and the 8-iso-PGF2, elastic, collagen and actin content compared with the OVA group (P<0.05). CONCLUSION: Rho-kinase inhibition contributes to the control of distal lung responsiveness and the eosinophilic and Th1/Th2 responses to the control of extracellular matrix remodeling in an animal model of chronic allergic inflammation. It may be considered a future pharmacological tool for the treatment of chronic pulmonary diseases.

INTRODUÇÃO: A relevância do parênquima pulmonar distal na fisiopatologia da asma tem sido intensamente enfatizada. Vários estudos sugerem a inibição da Rho quinase como uma intervenção benéfica e promissora na asma. Entretanto, não há estudos anteriores que avaliaram os efeitos destes inibidores na modulação da mecânica do parênquima pulmonar e suas alterações histopatológicas em um modelo animal de inflamação pulmonar alérgica crônica. OBJETIVO: Avaliar a inibição da Rho quinase (Y-27632) na modulação da responsividade, inflamação, remodelamento da matriz extracelular e ativação do estresse oxidativo no parênquima pulmonar de cobaias com inflamação pulmonar alérgica crônica. MÉTODOS: As cobaias receberam sete inalações de ovalbumina (1-5 mg / ml; grupo OVA) ou salina (grupo SAL) ao longo de quatro semanas. A partir da quinta inalação, os animais do grupo Rho quinase foram submetidos a inalação com Y-27632, 10 minutos antes de cada inalação com OVA ou SAL. Setenta e duas horas após a sétima inalação, os animais foram anestesiados e exanguinados, e das tiras do tecido pulmonar foram realizadas a mecânica oscilatória, sob condições basais e após o desafio de ovalbumina (0,1%). Após a mecânica, as fatias de pulmão foram submetidas a análise histológica por meio da morfometria. RESULTADOS: A inibição de Rho quinase nos animais expostos à ovalbumina atenuou a elastância e a resistência tecidual, o número de eosinófilos, a expressão de IL-2, IL-4, IL-5, IL-13, TIMP-1, MMP-9, TGF-, IFN-g, NF-kB e iNOS e o conteúdo de 8-iso-PGF2, fibras elásticas, fibras colágenas e actina em comparação com o grupo OVA (P<0,05). CONCLUSÃO: A inibição da Rho quinase contribui para o controle da capacidade de responsividade do parênquima pulmonar, da inflamação eosinofílica, das respostas Th1/Th2, ao controle do remodelamento da matriz extracelular em um modelo animal de inflamação pulmonar alérgica crônica. Podendo ser considerada uma futura ferramenta farmacológica para o tratamento de doenças pulmonares crónicas. / RATIONALE: Previous studies with Rho-kinase inhibitors suggest a beneficial influence of these drugs in asthma. The relevance of distal lung tissue in functional asthmatic impairment has been intensely emphasized. There have not been any previous studies evaluating the effects of these inhibitors on the modulation of distal lung mechanics and histopathological alterations in an animal model of chronic pulmonary inflammation. OBJECTIVE: To evaluate if Rho-kinase inhibition (Y- 27632) modulates distal lung responsiveness, inflammation, extracellular matrix remodeling and oxidative stress activation in guinea pigs with chronic allergic inflammation. METHODS: Guinea pigs received seven inhalations of ovalbumin (1-5 mg/ml; OVA group) or saline (SAL group) over 4 wk. From the 5th inhalation, the Rho-kinase group animals were submitted to Y-27632 inhalation 10 min before each inhalation with OVA or SAL. Seventy-two hours after the seventh inhalation, the animals were anesthetized and exsanguinated, and oscillatory mechanics of the lung tissue strips were performed under the baseline condition and after the ovalbumin challenge (0.1%). Afterwards, the lung slices were submitted to morphometry. RESULTS: The Rho-kinase inhibition in the ovalbumin-exposed animals attenuated the tissue elastance and resistance, eosinophils, the IL-2, IL-4, IL-5, IL-13, TIMP-1, MMP-9, TGF-, IFN-g, NF-kB, iNOS-positive cells and the 8-iso-PGF2, elastic, collagen and actin content compared with the OVA group (P<0.05). CONCLUSION: Rho-kinase inhibition contributes to the control of distal lung responsiveness and the eosinophilic and Th1/Th2 responses to the control of extracellular matrix remodeling in an animal model of chronic allergic inflammation. It may be considered a future pharmacological tool for the treatment of chronic pulmonary diseases.

INTRODUÇÃO: Vários estudos têm mostrado a importância da Rho quinase na modulação da contração do músculo liso, hiperresponsividade das vias aéreas e inflamação. Entretanto, os efeitos do tratamento crônico com um inibidor específico desta via não haviam sido previamente investigados. MÉTODOS: No presente estudo, foram avaliados os efeitos do tratamento crônico com Y-27632, um inibidor altamente seletivo Rho quinase, sobre a hiperresponsividade das vias aéreas, a ativação do estresse oxidativo, o remodelamento da matriz extracelular, a inflamação eosinofílica e a expressão de citocinas em um modelo animal de inflamação crônica das vias aéreas. As cobaias foram submetidas a sete inalações com ovalbumina ou solução salina (duas vezes por semana durante quatro semanas). Inalações com o inibidor da Rho quinase (Y-27632; 1mM) foram realizadas 10 min antes de cada exposição ao antígeno, começando na quinta inalação. Setenta e duas horas após a 7ª inalação, a avaliação da mecânica pulmonar foi realizada e o óxido nítrico exalado foi coletado. Os pulmões foram então removidos e a análise histológica foi realizada utilizando morfometria. RESULTADOS: O tratamento com Y-27632 em animais sensibilizados reduziu o óxido nítrico exalado, as respostas máximas de resistência e elastância do sistema respiratório, o número de eosinófilos, o conteúdo colágeno e fibras elásticas, o número de células positivas para IL-2, IL-4, IL-5, IL-13, iNOS, MMP -9, TIMP-1, TGF-, NFkappa B e IFN-, e o conteúdo de 8-iso-PGF2 em relação ao grupo não tratado (p<0,05). Houve correlação positiva entre as respostas funcionais e os marcadores de inflamação, remodelamento e ativação da via de estresse oxidativo avaliados. CONCLUSÕES: A ativação da vida da Rho quinase contribui para a potencialização da hiperresponsividade, inflamação, processo de remodelamento da matriz extracelular e ativação do estresse oxidativo. Estes resultados sugerem que os inibidores da Rho quinase podem ser uma ferramenta farmacológica em potencial para o controle da asma / INTRODUCTION: Several studies have shown the importance of Rho-kinase in the modulation of smooth muscle contraction, airway hyperresponsiveness and inflammation. However, the effects of chronic treatment with a specific inhibitor of this pathway had not been previously investigated. METHODS: We evaluated the effects of chronic treatment with Y-27632, a highly selective Rho-kinase inhibitor, on airway hyperresponsiveness, oxidative stress activation, extracellular matrix remodeling, eosinophilic inflammation and cytokines expression in an animal model of chronic airway inflammation. Guinea pigs were submitted to seven ovalbumin or saline exposures (twice a week for four weeks). Rho-kinase inhibitor (Y-27632; 1mM) was aerosolized 10 min before each antigen exposure, beginning at the 5th inhalation. Seventy-two hours after the 7th inhalation, pulmonary mechanics evaluation was performed and exhaled nitric oxide was collected. Lungs were removed and histological analysis was performed using morphometry. RESULTS: Treatment with Y-27632 in sensitized animals reduced exhaled nitric oxide, maximal responses of resistance and elastance of respiratory system, eosinophils, collagen and elastic fibers content, IL-2, IL-4, IL-5, IL-13, iNOS, MMP-9, TIMP-1, TGF-, NFkappa B and IFN- positive cells, and 8-iso-PGF2 content compared to the non-treated group (P<0.05). There were positive correlations among the functional responses and the markers of inflammation, remodeling and oxidative stress pathway activation evaluated. CONCLUSIONS: Rho-kinase pathway activation contributes to the potentiation of the hyperresponsiveness, inflammation, extracellular matrix remodeling process and oxidative stress activation. These results suggest that Rho-kinase inhibitors may be a potential pharmacological tool for controlling asthma

Thesis (Ph. D.)--Virginia Commonwealth University, 2007. / Prepared for: Dept. of Physiology. Bibliography: leaves 158-171. Available online via the Internet.

INTRODUÇÃO: Indivíduos com asma possuem infiltração aumentada de células inflamatórias, produção de quimiocinas e hiperresponsividade de vias aéreas. Estes apresentam níveis aumentados de interleucina (IL)-17, importante na regulação da expressão de mediadores inflamatórios e recrutamento de células inflamatórias, outra característica é aumento da atividade da proteína Rho-quinase em suas vias aéreas. A modulação da IL-17 e da proteína Rho-quinase pode ser promissora para o tratamento desta doença. OBJETIVO: Estudar os efeitos dos tratamentos realizados com anticorpo neutralizador anti-IL17 e do inibidor da Rho-quinase, associados ou não, em camundongos com inflamação pulmonar alérgica crônica. MÉTODOS: Foram utilizados 64 camundongos BALB/c, divididos em 8 grupos (8 animais por grupo): SAL (solução salina); OVA (ovoalbumina), SAL-RHOi (salina e inibidor de Rho-quinase), OVA - RHOi (ovoalbumina e inibidor de Rho-quinase), SAL - anti-IL17 (salina e anti-IL17), OVA - anti-IL17 (ovoalbumina e anti-IL17), SAL - RHOi - anti-IL17 (salina, anti-IL17 e inibidor de Rho-quinase), OVA - RHOi - anti-IL17 (ovoalbumina, anti-IL17 e inibidor de Rho-quinase). O protocolo de sensibilização e indução da inflamação pulmonar por ovoalbumina teve duração de 28 dias. O Anti-IL17A (clone 50104 - 7,5 ug por dose) foi administrado via intraperitoneal e inibidor de Rho-quinase (Y-27632) intranasal (10 mg/kg), 1h antes de cada desafio com ovoalbumina (22, 24, 26 e 28 dias). RESULTADOS: Houve um aumento na resistência do sistema respiratório e na elastância, nos marcadores inflamatórios CD4+, CD8+, ROCK1 e ROCK2, IL-1-beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-13, IL-17, TNFalfa, em vias sinalizadoras NF-kappaB, FOXP-3 e células dendríticas, em marcadores de remodelamento MMP9, MMP12, TIMP1, iNOS, TGF-beta, no conteúdo de isoprostano, decorina, biglicano, fibronectina e fibras colágenas e na expressão gênica de VAChT, IL-17 e arginase, no grupo OVA em comparação com o grupo controle. O tratamento dos animais sensibilizados, de forma individualizada ou a associação dos dois, atenuou estas respostas quando comparados ao grupo sensibilizado com ovoalbumina e não tratado (p < 0,05). O tratamento do inibidor de Rho-quinase associado ao anti-IL17 gerou potencialização do controle da resposta de hiperresponsividade à metacolina, assim como nas vias aéreas a redução do número de células positivas TNF-alfa, IL-4, IL-5 e nos septos alveolares o número de células positivas IL-4, IL-5, TGF-beta, FOXP3, ROCK1 e ROCK2 (p < 0,05). CONCLUSÃO: O tratamento com anti-IL17 associado ao inibidor da Rho-quinase modula a hiperresponsividade das vias aéreas, inflamação, e remodelamento e estresse oxidativo em animais com inflamação pulmonar alérgica crónica / RATIONALE: Individuals with asthma have increased infiltration of inflammatory cells, chemokines production, and airway hyperresponsiveness. Asthmatics have elevated levels of interleukin (IL)-17, which plays an important role in regulating the expression of inflammatory mediators and recruitment of inflammatory cells, these individuals also have increased Rho-kinase protein activity in their airways. The modulation of IL-17 and Rho-kinase protein may be promising for the treatment of this disease. OBJECTIVE: To study the effects of anti-IL17 neutralizing antibody and Rho-kinase inhibitor treatments, associated or not, on mice with chronic allergic lung inflammation. METHODS: Were used 64 BALB/c mice, divided into eight groups (n=8 in each group): SAL (saline-instilled); OVA (exposed-ovalbumin); SAL-RHOi (saline and Rho-kinase inhibitor), OVA-RHOi (exposed-ovalbumin and Rho-kinase inhibitor); SAL - anti-IL17 (saline and anti-IL17), OVA - anti-IL17 (exposed-ovalbumin and anti-IL17); SAL - RHOi -anti-IL17(saline, Rho-kinase inhibitor and anti-IL17), OVA - RHOi - anti-IL17 (exposed-ovalbumin, anti-IL17 and Rho kinase inhibitor). The protocol for sensitization and induction of pulmonary inflammation by ovalbumin has the duration of 28 days. The Anti-IL17A neutralizing antibody (clone 50104-7.5 ug per dose) was administered via the intraperitoneal, and Rho-kinase inhibitor (Y-27632) intranasal (10 mg/kg), 1h before each ovalbumin challenge (22, 24, 26 and 28 day). RESULTS: There was an increase in respiratory system resistence and elastance, in the positive cells evaluated CD4+, CD8+, ROCK1 and ROCK2, IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-13, IL-17, TNFalpha, TGF-beta, MMP9, MMP12, TIMP1 and isoprostane, decorin, biglican, fibronectin, collagen fibers content, signaling pathways NF-kappaB, FOX-P3, dendrict cells and gene expression of VAChT, IL-17 and arginase in the OVA group compared to the control group. Treatment of the sensitized animals with the Rho-kinase inhibitor or with the anti-IL17 or with the combination of the two, attenuated these responses when compared to the ovalbumin-sensitized and untreated group (p < 0,05). The treatment of the anti-IL17 associated Rho-kinase inhibitor generated potentiation of the hyper responsiveness response to methacholine, as well as in the airways the reduction of the number of TNF-alpha, IL-4, IL-5 positive cells and in the alveolar septa the number of IL-4, IL-5, FOXP3, TGF-beta, ROCK1 and ROCK2 (p < 0.05). CONCLUSION: Anti-IL17 treatment associated with the Rho-kinase inhibitor modulates airway hyperresponsiveness, inflammation, remodeling and oxidative stress in animals with chronic allergic pulmonary inflammation

INTRODUÇÃO: Indivíduos com asma possuem infiltração aumentada de células inflamatórias, produção de quimiocinas e hiperresponsividade de vias aéreas. Estes apresentam níveis aumentados de interleucina (IL)-17, importante na regulação da expressão de mediadores inflamatórios e recrutamento de células inflamatórias, outra característica é aumento da atividade da proteína Rho-quinase em suas vias aéreas. A modulação da IL-17 e da proteína Rho-quinase pode ser promissora para o tratamento desta doença. OBJETIVO: Estudar os efeitos dos tratamentos realizados com anticorpo neutralizador anti-IL17 e do inibidor da Rho-quinase, associados ou não, em camundongos com inflamação pulmonar alérgica crônica. MÉTODOS: Foram utilizados 64 camundongos BALB/c, divididos em 8 grupos (8 animais por grupo): SAL (solução salina); OVA (ovoalbumina), SAL-RHOi (salina e inibidor de Rho-quinase), OVA - RHOi (ovoalbumina e inibidor de Rho-quinase), SAL - anti-IL17 (salina e anti-IL17), OVA - anti-IL17 (ovoalbumina e anti-IL17), SAL - RHOi - anti-IL17 (salina, anti-IL17 e inibidor de Rho-quinase), OVA - RHOi - anti-IL17 (ovoalbumina, anti-IL17 e inibidor de Rho-quinase). O protocolo de sensibilização e indução da inflamação pulmonar por ovoalbumina teve duração de 28 dias. O Anti-IL17A (clone 50104 - 7,5 ug por dose) foi administrado via intraperitoneal e inibidor de Rho-quinase (Y-27632) intranasal (10 mg/kg), 1h antes de cada desafio com ovoalbumina (22, 24, 26 e 28 dias). RESULTADOS: Houve um aumento na resistência do sistema respiratório e na elastância, nos marcadores inflamatórios CD4+, CD8+, ROCK1 e ROCK2, IL-1-beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-13, IL-17, TNFalfa, em vias sinalizadoras NF-kappaB, FOXP-3 e células dendríticas, em marcadores de remodelamento MMP9, MMP12, TIMP1, iNOS, TGF-beta, no conteúdo de isoprostano, decorina, biglicano, fibronectina e fibras colágenas e na expressão gênica de VAChT, IL-17 e arginase, no grupo OVA em comparação com o grupo controle. O tratamento dos animais sensibilizados, de forma individualizada ou a associação dos dois, atenuou estas respostas quando comparados ao grupo sensibilizado com ovoalbumina e não tratado (p < 0,05). O tratamento do inibidor de Rho-quinase associado ao anti-IL17 gerou potencialização do controle da resposta de hiperresponsividade à metacolina, assim como nas vias aéreas a redução do número de células positivas TNF-alfa, IL-4, IL-5 e nos septos alveolares o número de células positivas IL-4, IL-5, TGF-beta, FOXP3, ROCK1 e ROCK2 (p < 0,05). CONCLUSÃO: O tratamento com anti-IL17 associado ao inibidor da Rho-quinase modula a hiperresponsividade das vias aéreas, inflamação, e remodelamento e estresse oxidativo em animais com inflamação pulmonar alérgica crónica / RATIONALE: Individuals with asthma have increased infiltration of inflammatory cells, chemokines production, and airway hyperresponsiveness. Asthmatics have elevated levels of interleukin (IL)-17, which plays an important role in regulating the expression of inflammatory mediators and recruitment of inflammatory cells, these individuals also have increased Rho-kinase protein activity in their airways. The modulation of IL-17 and Rho-kinase protein may be promising for the treatment of this disease. OBJECTIVE: To study the effects of anti-IL17 neutralizing antibody and Rho-kinase inhibitor treatments, associated or not, on mice with chronic allergic lung inflammation. METHODS: Were used 64 BALB/c mice, divided into eight groups (n=8 in each group): SAL (saline-instilled); OVA (exposed-ovalbumin); SAL-RHOi (saline and Rho-kinase inhibitor), OVA-RHOi (exposed-ovalbumin and Rho-kinase inhibitor); SAL - anti-IL17 (saline and anti-IL17), OVA - anti-IL17 (exposed-ovalbumin and anti-IL17); SAL - RHOi -anti-IL17(saline, Rho-kinase inhibitor and anti-IL17), OVA - RHOi - anti-IL17 (exposed-ovalbumin, anti-IL17 and Rho kinase inhibitor). The protocol for sensitization and induction of pulmonary inflammation by ovalbumin has the duration of 28 days. The Anti-IL17A neutralizing antibody (clone 50104-7.5 ug per dose) was administered via the intraperitoneal, and Rho-kinase inhibitor (Y-27632) intranasal (10 mg/kg), 1h before each ovalbumin challenge (22, 24, 26 and 28 day). RESULTS: There was an increase in respiratory system resistence and elastance, in the positive cells evaluated CD4+, CD8+, ROCK1 and ROCK2, IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-13, IL-17, TNFalpha, TGF-beta, MMP9, MMP12, TIMP1 and isoprostane, decorin, biglican, fibronectin, collagen fibers content, signaling pathways NF-kappaB, FOX-P3, dendrict cells and gene expression of VAChT, IL-17 and arginase in the OVA group compared to the control group. Treatment of the sensitized animals with the Rho-kinase inhibitor or with the anti-IL17 or with the combination of the two, attenuated these responses when compared to the ovalbumin-sensitized and untreated group (p < 0,05). The treatment of the anti-IL17 associated Rho-kinase inhibitor generated potentiation of the hyper responsiveness response to methacholine, as well as in the airways the reduction of the number of TNF-alpha, IL-4, IL-5 positive cells and in the alveolar septa the number of IL-4, IL-5, FOXP3, TGF-beta, ROCK1 and ROCK2 (p < 0.05). CONCLUSION: Anti-IL17 treatment associated with the Rho-kinase inhibitor modulates airway hyperresponsiveness, inflammation, remodeling and oxidative stress in animals with chronic allergic pulmonary inflammation

Multiple modulating genes and environmental factors have been implicated in the pathogenesis of high-altitude pulmonary edema (HAPE). However, at the present time, there exists an incomplete understanding of the molecular mechanisms and pathways which underlie constitutional susceptibility. Genome-wide measurements of gene expression in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were performed using microarray technology. Comparison of gene expression profiles of HAPE-susceptible and resistant individuals resulted in the identification of several previously undescribed candidate genes. RhoA and Rho-kinase (ROCK), regulators of vascular smooth muscle contraction, were differentially regulated in the HAPE-susceptible cohort, as compared to both HAPE-resistant patients with acute mountain sickness (AMS+) and healthy controls (p=0.0014; p=0.0020). Furthermore, biological pathways involving RhoA and Rho-kinase were strongly upregulated in subjects with HAPE. These findings represent the first description of the RhoA/Rho-kinase signaling pathway in HAPE. Currently, few pharmacologic therapies have been demonstrated to be effective in the prevention and treatment of HAPE. The results of this study provide early evidence that Fasudil, a selective Rho-kinase inhibitor, may represent a novel therapeutic intervention effective in the prevention and/or treatment of high-altitude pulmonary edema.