Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Rimonabant is a selective antagonist of the cannabinoid type 1 (CB1) receptor indicated as an adjunct to diet and exercise for the treatment of obese patients (BMI ≥ 30 kg/m2), or overweight patients (BMI > 27 kg/m2) with associated risk factors, such as type 2 diabetes or dyslipidaemia. In the present study, a reversed phase liquid chromatographic method was developed and validated for quantitative analysis of rimonabant in pharmaceutical products, and also a dissolution testing has been developed for coated tablets and capsules. The chromatographic method for determination of rimonabant in pharmaceutical formulations was performed on a Gemini C18 (150 × 4.6 mm i.d., 5 μm) column, with a mobile phase composed of acetonitrile: water (75:25, v/v), which was pumped at a flow-rate of 1 mL min-1 and ultraviolet detection at 215 nm. The analytical assay was validated by evaluating the parameters specificity, linearity, precision, accuracy, robustness, limit of detection and quantification, giving results within the acceptable range as defined by international validation guidelines. The selected conditions for the dissolution testing were 900 mL of 0.15% sodium lauryl sulfate in water as dissolution medium, USP apparatus 2 (paddle), stirring speed of 50 rpm and drug analysis by liquid chromatography. A study was assessed to compare some commercially available drug products, such as film-coated tablets (brand name Acomplia®) and compounded capsules from different suppliers. The physicalchemical tests applied to samples were average weight, content uniformity, active substance assay and dissolution profile, which have showed distinct results. In addition, rimonabant capsules containing different excipients were prepared for evaluation of formulation parameters on in vitro release profile of the drug. / O rimonabanto é um fármaco pertencente à classe dos antagonistas dos receptores canabinóides tipo 1 (CB1) utilizado para o tratamento adjuvante à dieta e aos exercícios físicos de pacientes obesos ou com sobrepeso com fatores de risco associados, tais como diabetes tipo 2 ou dislipidemia. No presente trabalho desenvolveu-se e validou-se método por cromatografia líquida em fase reversa para análise quantitativa de rimonabanto em produtos farmacêuticos, bem como foi desenvolvido ensaio de dissolução para comprimidos revestidos e cápsulas do fármaco. O método cromatográfico para determinação de rimonabanto em formulações farmacêuticas empregou coluna Gemini C18 (150 × 4.6 mm d.i., 5 μm), fase móvel composta de acetonitrila: água (75:25, v/v), eluída na vazão de 1 mL min-1 e detecção no ultravioleta em 215 nm. Foi realizada a validação do procedimento através da avaliação dos parâmetros especificidade, linearidade, precisão, exatidão, robustez, limite de detecção e quantificação, cujos resultados cumpriram os requisitos preconizados internacionalmente. As condições selecionados para o ensaio de dissolução foram 900 mL de lauril sulfato de sódio 0,15% em água como meio, aparato 2 (pá), velocidade de agitação de 50 rpm e quantificação do fármaco por cromatografia líquida. Foi realizado estudo comparativo entre alguns produtos disponíveis comercialmente, entre eles o medicamento de referência (Acomplia®) e cápsulas manipuladas por três farmácias diferentes. Os testes físico-químicos realizados nas amostras foram peso médio, uniformidade de doses unitárias, teor e perfil de dissolução, os quais demonstraram resultados bastante distintos entre os produtos. Paralelamente, cinco formulações contendo diferentes tipos de excipientes foram preparadas para avaliar o efeito desse parâmetro na velocidade de liberação do fármaco in vitro.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A method to obtain fourteen enones [EtO2CC(O)C(R2)=C(R1)OR, where R = H, Me; R1 = Pr, Ph, 4-MeOC6H4, 4-MeC6H4, 4-FC6H4, 4-ClC6H4, 4-BrC6H4, 4-NO2C6H4, Fur- 2-yl; R2 = H; R1,R2 = -(CH2)3-, -(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)6-, 3,4-dihydronaphthalen-2-yl] from acylation of acetals with ethyl oxalyl chloride is reported. The cyclocondensation reaction of these substrates with 2,4-dichlorophenyl hydrazine hydrochloride under ultrasound irradiation furnished a series of 1-(2,4-dichlorophenyl)-3-ethylcarboxylate-1Hpyrazoles in 71-92% yields. The pyrazole ester derivatives with R1,R2 = -(CH2)3-, - (CH2)4-, -(CH2)5-, and (CH2)6- suffered hidrolysis reaction in basic media supplied the carboxylic acids (94-97%) which were converted to the corresponding acid chlorides after reaction with thionyl chloride. The reaction of acid chlorides with primary amines (piperidin-1-ylamine, propylamine, 2-morpholino-4-yl-ethylamine, aniline, 4-metoxiphenylamina, 4-nitrophenylamina) led to respective 3-carboxyamide-1-(2,4-dichlorophenyl)-1H-pyrazoles in 85-97% yields. In addition to spectroscopic data the structure of the compounds was studied by X-ray diffraction experiments. Since, the 3-carboxyamide-1-(2,4-dichlorophenyl)-1H-pyrazoles are structurally similar to Rimonabant, a known antagonist of CB1 receptors, binding assays were performed to the cannabinoid receptor CB1. The most promising ligand and candidate to become prototype was the 1-(2,4-dichlorophenyl)-4,5,6,7,8,9-hexahydro-1Hcycloocta[c]pyrazole-3-carboxylicacid-piperidin-1-ylamide which shifted approximately 100% of [3H]Rimonabant in the tests. / Este trabalho descreve um método para obter catorze enonas [EtO2CC(O)C(R2)=C(R1)OR, onde R = H, Me; R1 = Pr, Ph, 4-MeOC6H4, 4-MeC6H4, 4-FC6H4, 4-ClC6H4, 4-BrC6H4, 4-NO2C6H4, Fur-2-il; R2 = H; R1,R2 = -(CH2)3-, -(CH2)4-, - (CH2)5-, -(CH2)6-, 3,4-diidronaftalen-2-il] a partir da acilação de acetais com cloreto de etil oxalila. A reação de ciclocondensação desses substratos com cloridrato de 2,4- diclorofenil hidrazina utilizando irradiação de ultrassom forneceu uma série de 1-(2,4-diclorofenil)-3-etilcarboxilato-1H-pirazóis em 71-92% de rendimento. Os pirazóis sintetizados (R1,R2 = -(CH2)3-, -(CH2)4-, -(CH2)5-, -(CH2)6-) sofreram hidrólise em meio básico conduzindo aos respectivos ácidos carboxílicos (94-97%) os quais foram convertidos aos cloretos de ácido correspondentes após reação com cloreto de tionila. A reação desses cloretos de ácido com aminas primárias (piperidin-1-ilamina, propilamina, 2-morfolin-4-il-etilamina, anilina, 4-metoxifenilamina, 4-nitrofenilamina) conduziram aos respectivos 3-carboxiamida-1-(2,4-diclorofenil)-1H-pirazóis em 85-97% de rendimento. Adicionalmente aos dados espectroscópicos, a estrutura dos compostos foi estudada por experimentos de difração raios-X. Uma vez que os 3-carboxiamida-1- (2,4-diclorofenil)-1H-pirazóis são estruturalmente análogos ao Rimonabanto, um conhecido antagonista dos receptores CB1, foram realizados ensaios de ligação específica desses compostos para o receptor canabinóide CB1. O ligante mais promissor, candidato a protótipo, foi o 3-carboxiamida-1-(2,4-diclorofenil)-N-(piperidin-1-il)-4,5,6,7,8,9-hexaidro-1H-ciclocta[c]pirazol o qual deslocou, aproximadamente, 100% do [3H]Rimonabanto nos ensaio realizados.

This dissertation is divided into three parts. The first part aimed to investigate the cannabidiol anxiolytic effect in treatment-naïve individuals with social anxiety disorder through simulation of public speaking. Twenty-four never-treated social anxiety disorder subjects were allocated to receive 0 or 600 mg cannabidiol (CBD; n=12) in a double-blind randomized design. The same number of controls performed the simulation of a public speaking test without receiving any medication. Pretreatment with CBD significantly reduced anxiety, cognitive impairment, and discomfort in speech performance and significantly decreased alertness in their anticipatory speech. The placebo group displayed higher anxiety, cognitive impairment, discomfort, and alertness when compared with controls as assessed with the Visual Analogue Mood Scale (VAMS). The SSPS-N scores showed significant increases during testing of the placebo group that was almost abolished in the cannabidiol group. No significant differences were observed between the cannabidiol and control groups in SSPS-N scores or in cognitive impairment, discomfort, and alertness factors of the VAMS. The second part evaluated healthy subjects\' x y during a public speaking test following a high rimonabant oral dose, to understand better the possible pharmacological approaches for anxiety disorder treatment. Twenty four participants were randomly allocated to receive 0 or 90 mg rimonabant (n=12) in a double-blind design. No significant adverse effects were reported in either group. Participants who received rimonabant showed increased anxiety levels compared to placebo during anticipatory speech and performance measurements. Rimonabant treatment did not affect sedation, cognitive impairment, discomfort, blood pressure, heart rate, self-statements during public speaking, or bodily symptoms scales. Increased anxiety may reflect lower endocannabinoid activity in CB1 receptors and CB1 p \' possible role in modulation of anxiety and anxiety disorders. The third part aimed to monitor cannabinoid blood concentrations during sustained abstinence from chronic daily cannabis smoking. Thirty male chronic daily cannabis smokers resided on a secure clinical research unit for up to 33 days, with blood collected once daily. ?9-tetrahydrocannabinol (THC), 11-hydroxy-THC (11-OH-THC), and 11-nor-9-carboxy-THC (THCCOOH) whole blood concentrations were quantified by two-dimensional gas chromatography-mass spectrometry. Twenty-seven of 30 participants were THC-positive on admission, with a median (range) concentration 1.4 ng/mL (0.3-6.3). THC decreased gradually with only 1 of 11 participants negative at 26 days; 2 of 5 participants remained THC-positive (0.3 ng/mL) for 30 days. 5.0% f p p h TH >=1 0 g/ L f 12 y M 11-OH-THC w 1 1 g/ L w h >=1 0 g/ L 24h THCCOOH detection rates were 96.7 on admission, decreasing slowly to 95.7 and 85.7% on days 8 and 22, respectively; four of 5 participants remained THCCOOH positive (0.6-2.7 ng/mL) after 30 days and one remained positive on discharge at 33 days. THC was quantified in some participants for 30 days, albeit in low concentrations, due to the large cannabinoid body burden from extended exposure / Esta tese é dividida em três partes. A primeira parte consiste em investigar o efeito ansiolítico do canabidiol na ansiedade social através do teste de simulação de falar em público. Vinte e quatro sujeitos com ansiedade social, nunca tratados, receberam placebo ou canabidiol (CBD) 600 mg (n=12) em um estudo randomizado e duplo-cego. O mesmo número de indivíduos saudáveis realizaram o teste de simulação de falar em público sem receber medicação. A administração do CBD reduziu significativamente a ansiedade, sedação física e outros sentimentos e atitudes durante a fase de estresse, e diminui o nível de alerta na fase pré-estresse. O grupo placebo apresentou níveis elevado de ansiedade, sedação física, outros sentimentos e atitudes, e alerta comparado com o grupo controle. A pontuação do SSPS-N evidenciou aumento significativo durante o teste no grupo placebo, enquanto que o CBD reduziu estes níveis. Não houve diferenças significativas entre os grupos CBD e controle na SSPS-N e nos fatores sedação física, outros sentimentos e atitudes e alerta, da Visual Analogue Mood Scale (VAMS). A segunda parte do estudo avaliou a ansiedade em indivíduos saudáveis que receberam alta dose oral de rimonabanto e submetidos ao teste de simulação de falar em público, para melhor entendimento do possível mecanismo farmacológico para tratamento de transtornos de ansiedade. Vinte e quatro sujeitos saudáveis receberam placebo ou rimonabanto 90 mg (n=12) em um randomizado e duplo-cego. Não foi observado efeitos adversos significativo em ambos grupos. O grupo rimonabanto apresentou maiores níveis de ansiedade na fase pré-estresse e durante o estresse. Não houve diferença significativa quanto aos demais fatores avaliados entre os grupos. O aumento na ansiedade após administração do rimonabanto pode-se ao fato de haver diminuição no sistema endocanabinóide nos receptores CB1 e a possível modulação na ansiedade clínica e patológica. A terceira parte objetivou quantificar canabinóides no sangue total em usuários crônicos de cannabis durante abstinência supervisionada. Trinta usuários crônicos de cannabis, do sexo masculino, permaneceram no centro de pesquisa por até 33 dias, com coleta de sangue uma vez ao dia. ?9-tetrahidrocanabinol (THC), 11-hidróxi-THC (11-OH-THC) e 11-nor-9-carbóxi-THC (THCCOOH) foram quantificados no sangue por meio da cromatografia gasosa-espectrometria de massa bidimensional. Vinte e sete de 30 usuários foram positivos para THC no ingresso do estudo, com concentração mediana (variação) de 1.4 ng/mL (0.3-6.3). Níveis de THC diminuíram gradativamente com somente 1 de 11 participantes negativo no dia 26; 2 de 5 indivíduos permaneceram positivos para THC (0.3 g/ L p 30 5 0% j TH >=1 0 g/ L p 12 ç mediana de 11-OH-TH f 1 1 g/ L g >=1 0 g/ L pó 24h. A taxa de detecção de THCCOOH foi 96.7% no ingresso, diminuindo gradativamente para 95.7 e 85.7% nos dias 8 e 22, respectivamente; 4 de 5 sujeitos permaneceram positivo para THCCOOH (0.6-2.7 ng/mL) após 30 dias e um permaneceu positivo no 33º dia. Foi detectado THC em alguns indivíduos por 30 dias, porém em baixas concentrações, devido a extensa eliminação do canabinóide em decorrência da exposição crônica

This dissertation is divided into three parts. The first part aimed to investigate the cannabidiol anxiolytic effect in treatment-naïve individuals with social anxiety disorder through simulation of public speaking. Twenty-four never-treated social anxiety disorder subjects were allocated to receive 0 or 600 mg cannabidiol (CBD; n=12) in a double-blind randomized design. The same number of controls performed the simulation of a public speaking test without receiving any medication. Pretreatment with CBD significantly reduced anxiety, cognitive impairment, and discomfort in speech performance and significantly decreased alertness in their anticipatory speech. The placebo group displayed higher anxiety, cognitive impairment, discomfort, and alertness when compared with controls as assessed with the Visual Analogue Mood Scale (VAMS). The SSPS-N scores showed significant increases during testing of the placebo group that was almost abolished in the cannabidiol group. No significant differences were observed between the cannabidiol and control groups in SSPS-N scores or in cognitive impairment, discomfort, and alertness factors of the VAMS. The second part evaluated healthy subjects\' x y during a public speaking test following a high rimonabant oral dose, to understand better the possible pharmacological approaches for anxiety disorder treatment. Twenty four participants were randomly allocated to receive 0 or 90 mg rimonabant (n=12) in a double-blind design. No significant adverse effects were reported in either group. Participants who received rimonabant showed increased anxiety levels compared to placebo during anticipatory speech and performance measurements. Rimonabant treatment did not affect sedation, cognitive impairment, discomfort, blood pressure, heart rate, self-statements during public speaking, or bodily symptoms scales. Increased anxiety may reflect lower endocannabinoid activity in CB1 receptors and CB1 p \' possible role in modulation of anxiety and anxiety disorders. The third part aimed to monitor cannabinoid blood concentrations during sustained abstinence from chronic daily cannabis smoking. Thirty male chronic daily cannabis smokers resided on a secure clinical research unit for up to 33 days, with blood collected once daily. ?9-tetrahydrocannabinol (THC), 11-hydroxy-THC (11-OH-THC), and 11-nor-9-carboxy-THC (THCCOOH) whole blood concentrations were quantified by two-dimensional gas chromatography-mass spectrometry. Twenty-seven of 30 participants were THC-positive on admission, with a median (range) concentration 1.4 ng/mL (0.3-6.3). THC decreased gradually with only 1 of 11 participants negative at 26 days; 2 of 5 participants remained THC-positive (0.3 ng/mL) for 30 days. 5.0% f p p h TH >=1 0 g/ L f 12 y M 11-OH-THC w 1 1 g/ L w h >=1 0 g/ L 24h THCCOOH detection rates were 96.7 on admission, decreasing slowly to 95.7 and 85.7% on days 8 and 22, respectively; four of 5 participants remained THCCOOH positive (0.6-2.7 ng/mL) after 30 days and one remained positive on discharge at 33 days. THC was quantified in some participants for 30 days, albeit in low concentrations, due to the large cannabinoid body burden from extended exposure / Esta tese é dividida em três partes. A primeira parte consiste em investigar o efeito ansiolítico do canabidiol na ansiedade social através do teste de simulação de falar em público. Vinte e quatro sujeitos com ansiedade social, nunca tratados, receberam placebo ou canabidiol (CBD) 600 mg (n=12) em um estudo randomizado e duplo-cego. O mesmo número de indivíduos saudáveis realizaram o teste de simulação de falar em público sem receber medicação. A administração do CBD reduziu significativamente a ansiedade, sedação física e outros sentimentos e atitudes durante a fase de estresse, e diminui o nível de alerta na fase pré-estresse. O grupo placebo apresentou níveis elevado de ansiedade, sedação física, outros sentimentos e atitudes, e alerta comparado com o grupo controle. A pontuação do SSPS-N evidenciou aumento significativo durante o teste no grupo placebo, enquanto que o CBD reduziu estes níveis. Não houve diferenças significativas entre os grupos CBD e controle na SSPS-N e nos fatores sedação física, outros sentimentos e atitudes e alerta, da Visual Analogue Mood Scale (VAMS). A segunda parte do estudo avaliou a ansiedade em indivíduos saudáveis que receberam alta dose oral de rimonabanto e submetidos ao teste de simulação de falar em público, para melhor entendimento do possível mecanismo farmacológico para tratamento de transtornos de ansiedade. Vinte e quatro sujeitos saudáveis receberam placebo ou rimonabanto 90 mg (n=12) em um randomizado e duplo-cego. Não foi observado efeitos adversos significativo em ambos grupos. O grupo rimonabanto apresentou maiores níveis de ansiedade na fase pré-estresse e durante o estresse. Não houve diferença significativa quanto aos demais fatores avaliados entre os grupos. O aumento na ansiedade após administração do rimonabanto pode-se ao fato de haver diminuição no sistema endocanabinóide nos receptores CB1 e a possível modulação na ansiedade clínica e patológica. A terceira parte objetivou quantificar canabinóides no sangue total em usuários crônicos de cannabis durante abstinência supervisionada. Trinta usuários crônicos de cannabis, do sexo masculino, permaneceram no centro de pesquisa por até 33 dias, com coleta de sangue uma vez ao dia. ?9-tetrahidrocanabinol (THC), 11-hidróxi-THC (11-OH-THC) e 11-nor-9-carbóxi-THC (THCCOOH) foram quantificados no sangue por meio da cromatografia gasosa-espectrometria de massa bidimensional. Vinte e sete de 30 usuários foram positivos para THC no ingresso do estudo, com concentração mediana (variação) de 1.4 ng/mL (0.3-6.3). Níveis de THC diminuíram gradativamente com somente 1 de 11 participantes negativo no dia 26; 2 de 5 indivíduos permaneceram positivos para THC (0.3 g/ L p 30 5 0% j TH >=1 0 g/ L p 12 ç mediana de 11-OH-TH f 1 1 g/ L g >=1 0 g/ L pó 24h. A taxa de detecção de THCCOOH foi 96.7% no ingresso, diminuindo gradativamente para 95.7 e 85.7% nos dias 8 e 22, respectivamente; 4 de 5 sujeitos permaneceram positivo para THCCOOH (0.6-2.7 ng/mL) após 30 dias e um permaneceu positivo no 33º dia. Foi detectado THC em alguns indivíduos por 30 dias, porém em baixas concentrações, devido a extensa eliminação do canabinóide em decorrência da exposição crônica