Orientador: Fanzi Ahmed Monstafa Dawood / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:33:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Verinaud_LianaMariaCardoso_M.pdf: 4405746 bytes, checksum: 4066d7fdd6cc967a560566e9249c3747 (MD5) Previous issue date: 1991 / Resumo: A partir de massa tumoral, obtida através de remoção cirúrgica, de um Adenocarcinoma Renal estágio IV obeteve-se vários fragmentos que foram submetidos a um processo de extração e polimerização de proteínas associada à membrana. Esse extrato foi denominado de PATT. Uma amostra de tecido renal normal também foi submetida a este processo, recebendo a denominação de PATN. Para efeito de analise comparativa as duas frações, PATT e PATN, foram submetidas: 1 Análise imunoquímica, através de imunodifusão dupla e imunoeletroforese. 2 À análise eletroforética em gel de policacrilamida, na presença de SDS. 3 A uma gel filtração em Sephadex G-100. Através da análise por imunodifusão e imunoeletroforese não foi possível detectar diferenças entre as frações PATT e PATN. Entretanto, análise eletroforética em gel de poliacrilamida na presença de SDS demonstrou a existência de um componente na fração PATT praticamente ausente na fração PATN. ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Mestrado / Imunologia / Mestre em Ciências Biológicas

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-12-11Bitstream added on 2014-06-13T18:55:13Z : No. of bitstreams: 1 leonardi_ep_me_botfm.pdf: 971917 bytes, checksum: 8fbf40d647edcd4650da900b87dfcbb2 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Cirurgias renais como nefrectomias parciais, transplante renal e cirurgia renovascular são situações clínicas que freqüentemente exigem a interrupção transitória do fluxo sanguíneo renal. A hipotermia renal é um dos métodos de preservação da função renal mais eficiente para se proteger as células renais das lesões de isquemia e reperfusão. O objetivo deste estudo foi comparar a técnica de hipotermia renal com gelo e a técnica de resfriamento renal retrógrado de solução salina à 4°C na via excretora. Foram utilizados 24 porcos machos entre 15 e 20 Kg, divididos em 4 grupos. Foram coletadas amostras de sangue e urina no dia anterior ao experimento e no 1° e 5° dia pósoperatório (PO), a fim de se medir creatinina e uréia, e se obter cultura de urina e débito urinário. Todos os animais foram submetidos à nefrectomia direita e, no rim esquerdo, foram aferidas as temperaturas do córtex e medula renal durante 60 minutos. Grupo 1(8): hipotermia retrógrada com solução salina à 4°C por meio de cateter ureteral duplo lúmen com obstrução do pedículo renal; grupo 2 (8): hipotermia com gelo e isquemia renal; grupo 3 (4): apenas isquemia quente e grupo 4 (8): controle. Os animais foram sacrificados no 5° dia e os espécimes cirúrgicos submetidos à análise histológica de microscopia óptica (MO). Todas as culturas de urina foram negativas. No grupo 1, em média, as temperaturas mínimas das camadas medular e cortical foram respectivamente 24,9 e 25,4°C e no grupo 2, foram 6,38 e 5°C. Para as variáveis uréia e creatinina, foi aplicada análise de variância e para a histologia, o teste exato de Fisher. Tanto na comparação entre os grupos 1 e 2, quanto na comparação isolada de cada um deles com o grupo controle, não se encontraram diferenças funcionais e histológicas estatisticamente significativas... / Renal surgeries such as partial nephrectomy, renal transplant and renovascular surgeries are clinical situations which often require the transitory interruption of renal blood flow. The renal hypothermia is one of the methods of renal function preservation which is the most efficient one in order to protect renal cells from lesions of ischemia and reperfusion. In 1975, Ward suggested that 15ºC would be the ideal temperature to cause regional renal hypothermia.(1) Albeit there are several methods of renal hypothermia, it is traditionally obtained by renal cooling involving the kidney with ice slush after the obstruction of the renal artery.(2-4) Nowadays, laparoscopic renal surgeries have developed a lot, which turned it to be an alternative to partial nephrectomy (LPN).(5) The technique of ice slush was reproduced to the laparoscopy, but presents technical difficulties in order to put the bag and to the introduction of the ice, which makes the method difficult to handle. Perfusion of cold solution in the renal artery is not widely used due to the risks of lesions in renal vessels.(6,7) Landman et al proposed a model of retrograde endoscopic intracavitary cold saline perfusion.(8) It is an easy applicable technique and it allows getting a resection area clear free from ice and it avoids the cooling of anatomic structures which involve the surgical area. However, this technique brings doubts about its capacity to produce the ideal temperature in the proximal convoluted tubule, once it cools the renal medulla better than the cortex.(9,10) Manuscript 2 73 This study intends to compare the Landman’s technique with the traditional method of cooling with ice slush and to evaluate the functional alterations of the kidney and the histological alterations of cell brush borders of the proximal convoluted tubules of pigs kidneys.

Resumo: Cirurgias renais como nefrectomias parciais, transplante renal e cirurgia renovascular são situações clínicas que freqüentemente exigem a interrupção transitória do fluxo sanguíneo renal. A hipotermia renal é um dos métodos de preservação da função renal mais eficiente para se proteger as células renais das lesões de isquemia e reperfusão. O objetivo deste estudo foi comparar a técnica de hipotermia renal com gelo e a técnica de resfriamento renal retrógrado de solução salina à 4°C na via excretora. Foram utilizados 24 porcos machos entre 15 e 20 Kg, divididos em 4 grupos. Foram coletadas amostras de sangue e urina no dia anterior ao experimento e no 1° e 5° dia pósoperatório (PO), a fim de se medir creatinina e uréia, e se obter cultura de urina e débito urinário. Todos os animais foram submetidos à nefrectomia direita e, no rim esquerdo, foram aferidas as temperaturas do córtex e medula renal durante 60 minutos. Grupo 1(8): hipotermia retrógrada com solução salina à 4°C por meio de cateter ureteral duplo lúmen com obstrução do pedículo renal; grupo 2 (8): hipotermia com gelo e isquemia renal; grupo 3 (4): apenas isquemia quente e grupo 4 (8): controle. Os animais foram sacrificados no 5° dia e os espécimes cirúrgicos submetidos à análise histológica de microscopia óptica (MO). Todas as culturas de urina foram negativas. No grupo 1, em média, as temperaturas mínimas das camadas medular e cortical foram respectivamente 24,9 e 25,4°C e no grupo 2, foram 6,38 e 5°C. Para as variáveis uréia e creatinina, foi aplicada análise de variância e para a histologia, o teste exato de Fisher. Tanto na comparação entre os grupos 1 e 2, quanto na comparação isolada de cada um deles com o grupo controle, não se encontraram diferenças funcionais e histológicas estatisticamente significativas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Renal surgeries such as partial nephrectomy, renal transplant and renovascular surgeries are clinical situations which often require the transitory interruption of renal blood flow. The renal hypothermia is one of the methods of renal function preservation which is the most efficient one in order to protect renal cells from lesions of ischemia and reperfusion. In 1975, Ward suggested that 15ºC would be the ideal temperature to cause regional renal hypothermia.(1) Albeit there are several methods of renal hypothermia, it is traditionally obtained by renal cooling involving the kidney with ice slush after the obstruction of the renal artery.(2-4) Nowadays, laparoscopic renal surgeries have developed a lot, which turned it to be an alternative to partial nephrectomy (LPN).(5) The technique of ice slush was reproduced to the laparoscopy, but presents technical difficulties in order to put the bag and to the introduction of the ice, which makes the method difficult to handle. Perfusion of cold solution in the renal artery is not widely used due to the risks of lesions in renal vessels.(6,7) Landman et al proposed a model of retrograde endoscopic intracavitary cold saline perfusion.(8) It is an easy applicable technique and it allows getting a resection area clear free from ice and it avoids the cooling of anatomic structures which involve the surgical area. However, this technique brings doubts about its capacity to produce the ideal temperature in the proximal convoluted tubule, once it cools the renal medulla better than the cortex.(9,10) Manuscript 2 73 This study intends to compare the Landman's technique with the traditional method of cooling with ice slush and to evaluate the functional alterations of the kidney and the histological alterations of cell brush borders of the proximal convoluted tubules of pigs kidneys. / Orientador: João Luiz Amaro / Coorientador: Oscar Eduardo H. Fugita / Banca: Anuar Ibrahim Mitre / Banca: Fernando Meyer / Mestre

Resumo: O tumor renal é a mais letal das doenças urológicas. É uma doença histologicamente heterogênea, sendo o carcinoma renal de células claras o subtipo histológico mais comum. Embora a nefrectomia e imunoterapia sejam tratamentos bem estabelecidos, aproximadamente 30% dos pacientes tratados são acometidos por metástases. Alterações na expressão gênica e na inativação transcricional, devido ao mecanismo de metilação, são evidentes em células cancerosas. A metilação do DNA é um evento epigenético intimamente relacionado com o silenciamento da expressão gênica, e está envolvida em vários processos, dentre eles, a carcinogênese. Dessa forma, este trabalho teve como objetivos investigar se os genes selecionados, GPC3, CRABP2, KTN1 e ADAM23 apresentam expressão alterada nas amostras tumorais, verificar se a expressão gênica está associada com a progressão tumoral, e analisar o padrão de metilação de ilhas CpGs. Os quatro genes selecionados foram validados pela técnica de PCR em Tempo Real. Para validação desses genes foram utilizadas 35 amostras de carcinoma renal de células claras e 35 amostras de córtex renal normal. Os genes GPC3, CRABP2, KTN1 e ADAM23 apresentaram redução de expressão significativa em amostras de carcinoma renal de células claras quando comparadas ao pool de amostras de córtex renal normal. Observou-se que a redução da expressão do gene ADAM23 está diretamente relacionada com o avanço do estadiamento tumoral. Foi observada uma freqüência elevada de hipermetilação do gene ADAM23, entretanto, não houve associação do padrão de metilação com os dados clínicos. A análise da expressão gênica e dos mecanismos responsáveis pela inativação transcricional dos genes CRABP2, KTN1 e ADAM23, estudados pela primeira vez em carcinoma renal, e GPC3, podem fornecer informações relevantes para o conhecimento e desenvolvimento do carcinoma renal de células claras. / Abstract: The renal tumor, which is the most lethal of urological diseases, is a histologically heterogeneous disease, and the clear cell renal cell carcinoma the most common histological subtype. Although the treatment of nephrectomy and immunotherapy are established, approximately 30% of patients are affected by metastases. Changes in gene expression and transcriptional inactivation, due to the methylation mechanism are evident in cancer cells. The DNA methylation is an epigenetic event closely related to the silencing of gene expression, and is involved in several cases, including the carcinogenesis. The aim of this study was to investigate the gene expression of GPC3, CRABP2, KTN1 and ADAM23, check if gene expression was associated with tumor progression and analyze methylation pattern of CpG island. The four selected genes were validated by the quantitative RT-PCR. Thirty five samples of clear cell renal cell carcinoma and 35 samples of normal renal cortex were used for validation. The genes GPC3, CRABP2, KTN1 and ADAM23 showed significant reduction of expression in samples of clear cell renal cell carcinoma when compared to a pool of samples of normal renal cortex. It was observed that the lower expression of ADAM23 is directly related to the advancement of the tumor staging. Despite the high frequency of hypermethylation of ADAM23, there was no association with the methylation pattern of the clinical data. The analysis of gene expression and the mechanisms responsible for the transcriptional inactivation of genes CRABP2, KTN1 and ADAM23, first studied in clear cell renal cell carcinoma, and GPC3, may provide relevant information for the clear cell renal cell carcinoma understanding and development. / Orientador: Paula Rahal / Coorientador: Paulo Peitl Júnior / Banca: Ana Elizabete Silva / Banca: Andréia Machado Leopoldino / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-19Bitstream added on 2014-06-13T19:53:57Z : No. of bitstreams: 1 pires_lc_me_sjrp.pdf: 2393717 bytes, checksum: a2b9ac8071136c02761c529a8ecaecef (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os dados de seqüência genômicas humanas depositados em bancos públicos têm fornecido uma oportunidade sem precedentes para pesquisadores decifrarem a funcionalidade do genoma humano. Essas informações são extremamente valiosas na prevenção, diagnóstico e tratamento do câncer. O Cancer Genome Anatomy Project (CGAP), o Gene Expression Omnibus (GEO), o Genome Data Mining (GDM) e o Babelomics funtional analysis of genome-scale experiments representam quatro importantes ferramentas para o estudo da genética funcional. O objetivo do presente trabalho foi o de explorar bancos de dados públicos para selecionar e validar a expressão de genes relacionados com o desenvolvimento e a progressão de carcinoma renal de células claras (CRcc). Utilizando ferramentas de bioinformática foi analisada a expressão gênica diferencial entre duas bibliotecas de SAGE elaboradas a partir de tecidos renais normais e de CRcc. Os resultados obtidos demonstraram alterações na expressão de genes participantes de importantes vias metabólicas. Baseando-se nessas análises, os genes CDK7, CLDN1, CSTB, EPC2 e ZNF706 foram selecionados e a expressão gênica diferencial desses foi avaliada por PCR em tempo real em 35 amostras de pacientes portadores de CRcc em diferentes estágios de progressão da doença e 1 amostra metastática. Paralelamente, utilizando-se a metodologia de RaSH foram elaboradas bibliotecas subtrativas entre o tecido neoplásico e o tecidos normal, sendo selecionados os genes MATR3 e PITPNB. O ZNF706 apresentou super expressão em relação aos tecidos normais, nas amostras tumorais analisadas independentemente do grau de evolução tumoral. O mesmo comportamento foi apresentado pelo gene CSTB, sendo que os maiores níveis de expressão foram observados nas amostras de estágio III de progressão tumoral. O gene CDK7 apresentou níveis de expressão dependente do grau de evolução da... / The data of human genomic sequences available in public database have provided an unpredictable opportunity for researchers to decipher the utility of human genome. This information is extremely valuable in prevention, diagnosis and cancer treatment. The Cancer Genome Anatomy Project (CGAP), the Gene expression Omnibus (GEO), the Genome Data Mining (GDM) and the Babelomics Functional Analysis of Genome-Scale Experiments do represent four important tools for functional genetics studies. This work aimed to explore public database to select and validate expression of genes related to development and progression of Clear Cell Renal Cell Carcinoma (ccRCC). The differential gene expression of two SAGE libraries from normal renal tissues and ccRCC was analyzed using bioinformatics tools. The results showed altered gene expression pattern in genes that participate in important metabolic pathways. Based on these analysis, the genes CDK7, CLDN1, CSTB, EPC2 and ZNF706 were selected and their differential gene expression was evaluated by Real Time PCR in 35 tissue samples from patients with ccRCC in different stages of disease progression and one metastatic sample. Simultaneously through RaSH methodology were elaborated subtractive libraries between normal and neoplasic tissues so the genes MATR3 and PITPNB were selected. The ZNF706 presented over expression in tumor tissues independent of tumor progression grade. The same behavior was presented by CSTB where the higher expression levels were observed in samples from stage IV of tumor progression. The CDK7 gene presented expression levels dependent of disease evolution grade where the lowers levels were in stages I, II, III and presented over expression in samples from stage IV and retroperitoneal metastasis. This result shows a clear relationship between CDK7 expression and the aggressiveness of ccRCC and suggests that this gene... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-18Bitstream added on 2014-06-13T19:12:52Z : No. of bitstreams: 1 valsechi_mc_me_sjrp_parcial.pdf: 574533 bytes, checksum: a4733296b652ce8ac3b0aa3af78e4e48 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-16T10:37:46Z: valsechi_mc_me_sjrp_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-01-16T10:38:34Z : No. of bitstreams: 1 000590383.pdf: 1465270 bytes, checksum: 6abb1c740c0eb28b1d1eb0e5696f75a3 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O tumor renal é a mais letal das doenças urológicas. É uma doença histologicamente heterogênea, sendo o carcinoma renal de células claras o subtipo histológico mais comum. Embora a nefrectomia e imunoterapia sejam tratamentos bem estabelecidos, aproximadamente 30% dos pacientes tratados são acometidos por metástases. Alterações na expressão gênica e na inativação transcricional, devido ao mecanismo de metilação, são evidentes em células cancerosas. A metilação do DNA é um evento epigenético intimamente relacionado com o silenciamento da expressão gênica, e está envolvida em vários processos, dentre eles, a carcinogênese. Dessa forma, este trabalho teve como objetivos investigar se os genes selecionados, GPC3, CRABP2, KTN1 e ADAM23 apresentam expressão alterada nas amostras tumorais, verificar se a expressão gênica está associada com a progressão tumoral, e analisar o padrão de metilação de ilhas CpGs. Os quatro genes selecionados foram validados pela técnica de PCR em Tempo Real. Para validação desses genes foram utilizadas 35 amostras de carcinoma renal de células claras e 35 amostras de córtex renal normal. Os genes GPC3, CRABP2, KTN1 e ADAM23 apresentaram redução de expressão significativa em amostras de carcinoma renal de células claras quando comparadas ao pool de amostras de córtex renal normal. Observou-se que a redução da expressão do gene ADAM23 está diretamente relacionada com o avanço do estadiamento tumoral. Foi observada uma freqüência elevada de hipermetilação do gene ADAM23, entretanto, não houve associação do padrão de metilação com os dados clínicos. A análise da expressão gênica e dos mecanismos responsáveis pela inativação transcricional dos genes CRABP2, KTN1 e ADAM23, estudados pela primeira vez em carcinoma renal, e GPC3, podem fornecer informações relevantes para o conhecimento e desenvolvimento do carcinoma renal de células claras. / The renal tumor, which is the most lethal of urological diseases, is a histologically heterogeneous disease, and the clear cell renal cell carcinoma the most common histological subtype. Although the treatment of nephrectomy and immunotherapy are established, approximately 30% of patients are affected by metastases. Changes in gene expression and transcriptional inactivation, due to the methylation mechanism are evident in cancer cells. The DNA methylation is an epigenetic event closely related to the silencing of gene expression, and is involved in several cases, including the carcinogenesis. The aim of this study was to investigate the gene expression of GPC3, CRABP2, KTN1 and ADAM23, check if gene expression was associated with tumor progression and analyze methylation pattern of CpG island. The four selected genes were validated by the quantitative RT-PCR. Thirty five samples of clear cell renal cell carcinoma and 35 samples of normal renal cortex were used for validation. The genes GPC3, CRABP2, KTN1 and ADAM23 showed significant reduction of expression in samples of clear cell renal cell carcinoma when compared to a pool of samples of normal renal cortex. It was observed that the lower expression of ADAM23 is directly related to the advancement of the tumor staging. Despite the high frequency of hypermethylation of ADAM23, there was no association with the methylation pattern of the clinical data. The analysis of gene expression and the mechanisms responsible for the transcriptional inactivation of genes CRABP2, KTN1 and ADAM23, first studied in clear cell renal cell carcinoma, and GPC3, may provide relevant information for the clear cell renal cell carcinoma understanding and development.

Resumo: Os dados de seqüência genômicas humanas depositados em bancos públicos têm fornecido uma oportunidade sem precedentes para pesquisadores decifrarem a funcionalidade do genoma humano. Essas informações são extremamente valiosas na prevenção, diagnóstico e tratamento do câncer. O Cancer Genome Anatomy Project (CGAP), o Gene Expression Omnibus (GEO), o Genome Data Mining (GDM) e o Babelomics funtional analysis of genome-scale experiments representam quatro importantes ferramentas para o estudo da genética funcional. O objetivo do presente trabalho foi o de explorar bancos de dados públicos para selecionar e validar a expressão de genes relacionados com o desenvolvimento e a progressão de carcinoma renal de células claras (CRcc). Utilizando ferramentas de bioinformática foi analisada a expressão gênica diferencial entre duas bibliotecas de SAGE elaboradas a partir de tecidos renais normais e de CRcc. Os resultados obtidos demonstraram alterações na expressão de genes participantes de importantes vias metabólicas. Baseando-se nessas análises, os genes CDK7, CLDN1, CSTB, EPC2 e ZNF706 foram selecionados e a expressão gênica diferencial desses foi avaliada por PCR em tempo real em 35 amostras de pacientes portadores de CRcc em diferentes estágios de progressão da doença e 1 amostra metastática. Paralelamente, utilizando-se a metodologia de RaSH foram elaboradas bibliotecas subtrativas entre o tecido neoplásico e o tecidos normal, sendo selecionados os genes MATR3 e PITPNB. O ZNF706 apresentou super expressão em relação aos tecidos normais, nas amostras tumorais analisadas independentemente do grau de evolução tumoral. O mesmo comportamento foi apresentado pelo gene CSTB, sendo que os maiores níveis de expressão foram observados nas amostras de estágio III de progressão tumoral. O gene CDK7 apresentou níveis de expressão dependente do grau de evolução da... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The data of human genomic sequences available in public database have provided an unpredictable opportunity for researchers to decipher the utility of human genome. This information is extremely valuable in prevention, diagnosis and cancer treatment. The Cancer Genome Anatomy Project (CGAP), the Gene expression Omnibus (GEO), the Genome Data Mining (GDM) and the Babelomics Functional Analysis of Genome-Scale Experiments do represent four important tools for functional genetics studies. This work aimed to explore public database to select and validate expression of genes related to development and progression of Clear Cell Renal Cell Carcinoma (ccRCC). The differential gene expression of two SAGE libraries from normal renal tissues and ccRCC was analyzed using bioinformatics tools. The results showed altered gene expression pattern in genes that participate in important metabolic pathways. Based on these analysis, the genes CDK7, CLDN1, CSTB, EPC2 and ZNF706 were selected and their differential gene expression was evaluated by Real Time PCR in 35 tissue samples from patients with ccRCC in different stages of disease progression and one metastatic sample. Simultaneously through RaSH methodology were elaborated subtractive libraries between normal and neoplasic tissues so the genes MATR3 and PITPNB were selected. The ZNF706 presented over expression in tumor tissues independent of tumor progression grade. The same behavior was presented by CSTB where the higher expression levels were observed in samples from stage IV of tumor progression. The CDK7 gene presented expression levels dependent of disease evolution grade where the lowers levels were in stages I, II, III and presented over expression in samples from stage IV and retroperitoneal metastasis. This result shows a clear relationship between CDK7 expression and the aggressiveness of ccRCC and suggests that this gene... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Paulo Peitl Junior / Coorientador: Paula Rahal / Banca: Raphael Bessa Parmagiani / Banca: Sônia Maria Oliani / Mestre